骨髓间充质干细胞的主要表面标志
骨髓间充质干细胞形态
骨髓间充质干细胞形态
骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）是一类来源于骨髓的多能干细胞，具有广泛的应用前景。
BM-MSCs具有多向分化潜能，可以分化为成骨
细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种细胞类型，因此在组织工程、再生
医学、免疫治疗等领域有着广泛的应用。
BM-MSCs的形态特征是细胞体积较大，呈梭形或星形，细胞质丰富，核浆比例低，核染色质较少，细胞质内含有丰富的细胞器，如线粒体、内质网、高尔基体等。
此外，BM-MSCs表面具有多种细胞表面标志物，如CD29、CD44、CD73、CD90等，同时不表达CD34、CD45
等造血干细胞标志物。
BM-MSCs的分离和培养需要特定的培养基和条件。
目前常用的培养
基包括DMEM/F12、α-MEM等，通常添加10%的胎牛血清或人血清，以及一定浓度的抗生素和抗真菌剂。
在培养过程中，需要控制细胞密
度和培养时间，以保证细胞的生长和分化。
BM-MSCs的应用前景非常广泛。
在组织工程领域，BM-MSCs可以
用于修复骨、软骨、肌肉等组织缺损，同时也可以用于修复心肌、神
经等组织缺损。
在再生医学领域，BM-MSCs可以用于治疗糖尿病、
肝病、肾病等疾病。
在免疫治疗领域，BM-MSCs可以用于治疗自身
免疫性疾病、移植排斥等疾病。
总之，BM-MSCs是一类非常有前途的干细胞，具有广泛的应用前景。
随着技术的不断进步和研究的深入，相信BM-MSCs将会在更多的领
域得到应用。
人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达
人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达目的：系统研究人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）体外成骨诱导分化过程中成骨相关基因的表达变化。
方法：应用密度梯度离心法分离hBMSCs，取第2代细胞通过流式检测及多向诱导分化方法进行干细胞鉴定；应用RT-PCR法对hBMSCs在体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达进行检测。
结果：第2代hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90，具有成脂和成骨分化潜能。
成骨相关基因在诱导早期部分表达，中期均有表达，基因表达大部分在14天达高峰，与矿化相关的基因表达在21天达高峰。
结论：hBMSCs体外成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达，其表达时序与成骨细胞生理发育基本相似。
Abstracts:ObjectiveTo investigate the osteogenic related genes expression during in vitro osteogenic differentiation of human bone mesenchymal stem cells (hBMSCs).MethodshBMSCs were isolated by density gradient centrifugation. Surface markers and cell cycle were analyzed by flow cytometry. The multiple differentiation potential of hBMSCs were identified using in vitro osteogenic and adipogenic induction. The osteogenic related genes expression of hBMSCs at different induction time point were evaluated by semiquantitative RT-PCR analysis.ResultsThe hBMSCs were derived from bone marrow and expressed CD44 and CD90, markers of mesenchymal stem cell. The second passage of hBMSCs showed adipogenic and osteogenic differentiation potential. During the osteogenic induction process,hBMSCs expressed part of osteogenic related genes in early stage, and all of them in middle stage.The peak expression of most of genes were on the 14th day, and the mineralization associated genes on the 21st day. ConclusionsThe osteogenic related gene expression of hBMSCs shows a dynamic progress during in vitro osteogenic induction, which is consistent with in vivo development of osteoblast.Key words:hBMSCs;in vitro differentiation;osteogenic genes;expression pattern骨缺损的修补和重建是修复重建外科临床面临的常见问题。
骨髓间充质干细胞 骨形成标志物
骨髓间充质干细胞骨形成标志物骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类具有多向分化潜能和自我更新能力的干细胞，在体内广泛存在于骨髓、脂肪组织、胎盘等多个组织中。
它们不仅可以分化为骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞等成骨细胞，还具有抗炎、免疫调节、创伤修复等多种生物学功能。
因此，MSCs在组织工程、再生医学和临床治疗等领域具有广阔的应用前景。
骨形成标志物是用来评估骨形成过程中相关细胞活性和功能的指标。
常用的骨形成标志物有碱性磷酸酶（ALP）、骨骼特异性碱性磷酸酶（BALP）、骨钙素（OCN）、骨形态发生蛋白（BMP）等。
这些标志物的表达水平可以反映骨细胞的分化和骨形成的程度。
研究表明，MSCs具有较高的骨形成潜能。
在适当的诱导条件下，MSCs可以分化为成骨细胞，并表达一系列骨形成标志物。
碱性磷酸酶是成骨细胞常见的表面标志物，其在骨细胞分化过程中起到重要的催化作用。
BALP是碱性磷酸酶的骨骼特异性亚型，其表达水平可以直接反映成骨细胞的分化程度。
OCN是一种由成骨细胞合成和分泌的蛋白质，是成骨细胞功能活性的重要指标。
BMP是促进骨细胞分化和骨形成的重要因子，在MSCs向骨细胞分化过程中起到关键的调控作用。
研究发现，MSCs在体外培养条件下，通过特定的生长因子和细胞因子的刺激，可以诱导其向成骨细胞分化，并表达骨形成标志物。
例如，将MSCs培养在含有骨形成相关因子（如BMP-2、BMP-7等）的培养基中，可以明显促进MSCs向成骨细胞分化，并增强其表达骨形成标志物的能力。
MSCs还具有抗炎和免疫调节的功能。
炎症反应是骨损伤和骨疾病发生发展的重要环节，而MSCs可以通过抑制炎症因子的产生和调节免疫细胞的活性，减轻炎症反应，促进骨修复和再生。
研究表明，MSCs分泌的细胞因子能够抑制炎症介质的产生和释放，减轻炎症反应，促进受损组织的修复。
同时，MSCs还可以调节免疫细胞的活性，抑制免疫反应的过度，减少免疫介导的骨破坏，并促进骨形成。
临床研究用人间充质干细胞质量评价
临床研究用人间充质干细胞质量评价一、引言人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。
在众多疾病的治疗中，MSCs 都展现出了巨大的潜力。
然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。
本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。
二、MSCs的质量评价标准1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。
纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。
2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。
3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。
因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。
4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。
例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。
同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。
三、MSCs质量评价的方法1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。
2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。
3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs 的纯度和活性。
4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。
5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。
6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。
四、结论人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。
通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。
骨髓间充质干细胞研究与应用概况
骨髓间充质干细胞研究与应用概况于雷;高俊玲【摘要】骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMSCs)是当下热点研究对象之一。
1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞,但研究因为条件原因未能深入。
后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究,发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群,在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长;1987年,又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。
培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。
于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell,MSC)。
【期刊名称】《华北理工大学学报：医学版》【年(卷),期】2018(020)002【总页数】5页(P164-168)【关键词】骨髓间充质干细胞;肺纤维化;缺血性脑卒中【作者】于雷;高俊玲【作者单位】[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;【正文语种】中文【中图分类】R329.2骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells，BMSCs)是当下热点研究对象之一。
1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞，但研究因为条件原因未能深入。
后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究，发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群，在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长；1987年，又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。
培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。
于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell，MSC)。
银屑病患者骨髓间充质干细胞表面标志表达情况研究
经流 式细胞仪测定的第
三代培养的 Ｂ Ｃ 表 面标志 Ｃ ４ 、 Ｄ ９阳性表达 ， Ｄ ４、 Ｄ ５、 Ｌ — Ｒ阴性表达。分析 Ｃ ４ 、 Ｄ ９ 发现银屑 ＭＳ ｓ Ｄ４ Ｃ ２ Ｃ３ Ｃ４ ＨＡＤ Ｄ ４Ｃ ２ ，
密度 梯 度 离心 法 结合 贴 壁 法 可 获 得 较 纯 的 Ｂ Ｃ 。银 屑 病 患者 表 面标 志 Ｃ ４ 、 Ｄ ９ ＭＳ ｓ Ｄ ４Ｃ ２
Ｂ Ｃｓ ｓ ｒ ｃ ｒ ｅｓ Ｃ ４ ＭＳ ｕ ａ ｅ ｍａ ｋ ｒ Ｄ４ ，ＣＤ ９ ｅ ｐ ｅ ｓ ｎ ｎ Ｄ３ ，ＣＤ ５ ｆ ２ ｘ ｒ ｓ ｉ ，ａ ｄ Ｃ ４ ｏ ４ ，ＨＬ Ａ－ ｅ ａ ｉｅ ｅ ｐ ｅ ｓ ｎ Ｄ４ ｎ Ｄ２ ｆ ＤＲ ｎ ｇ ｔ ｘ ｒ ｓ ｉ ．Ｃ ４ ａ ｄ Ｃ ９ ｏ ｖ ｏ ｐ ｏ ａｉ ｇ ｏ ｐ ｓｒ ｔ ｉ ｃ ｒ ｕ ｗａ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｌ ｌ ｗ ｒ ｈ ｎ ｈ ｔ ｆ ｏ ｔ ｌ ｒ ｕ ． Ｃｏ ｃ ｕ ｉ ｎ ｓ ｉ ｎｆ ａ ｔ ｉ ｙ ｏ ｅ ｔ ａ ｔ ａ ｏ ｃ ｎ ｒ ｇ ｏ ｐ ｏ ｎ ｌ ｓｏ Ｃ ｍｂ ｎ ｔ ｎ ｆ ｄ ｎ ｉ ｇ ａ ｉｎ ｏ ｉ ａ ｉ ｏ ｅ ｓｔ ｒ ｄ ｅ ｔ ｏ ｙ
文 章 编 号 ：６ ２ ０ ０ （０ ０ ０ — ２ ０ ０ １７ — ７ ９ ２ １ ）５ ０ ８ — ３
Ｅｘ ｅ ｓｏ ｏ ｎｅＭ ａｒ ｏ Ｍ ｅ ｅ ｃ ｍ ａ ｅ ｅｌＳ ｆ ｃｅＭ ａ ｒｉ ｏ ｉｓｓＰａ ｉｎｔ ｐｒ ｓｉ ｎ ｆＢｏ ｒ ｗ ｓ ｎ ｈｙ ｌＳｔ ｍ Ｃ ｌ ｕｒ ａ ｋｅ ｎ Ｐｓ ｒａ ｉ ｔｅ ｓ
骨髓间充质干细胞与肿瘤耐药
骨髓间充质干细胞与肿瘤耐药【摘要】将骨髓间充质干细胞置入人体内，并不会引起排斥反应，并且该干细胞还具有多向分化的优点，在医学领域中，这种干细胞被广泛应用。
本文对骨髓间充质干细胞的相关知识及肿瘤耐药进行分析，针对骨髓间充质干细胞与肿瘤耐药作一综述。
【关键词】骨髓间充质干细胞；肿瘤耐药；临床研究位于人体骨髓中的间充质干细胞，具有多向分化的潜能，在人体实体瘤及血液系统恶性疾病中，骨髓微环境及肿瘤细胞两者之间存在着密切的关系，相互影响相互作用[1]。
本文对骨髓间充质干细胞的特征及其与肿瘤耐药的相关作用机制进行研究，现综述如下。
1 关于骨髓间充质干细胞1.1 间充质干细胞的定义起初，骨髓间充质干细胞被称为成纤维细胞样细胞；在人体外，骨髓间充质干细胞的鉴定，可以通过对骨髓间充质干细胞形成成纤维细胞集落形成单位的能力、向中胚层分化的多能性及特征性的阴性及阳性表面标记物进行确定。
在人体内，骨髓间充质干细胞可以分化成骨、脂肪、肌细胞系几软骨；在人体的骨髓内，骨髓间充质干细胞能够提供一个微环境，这个微环境可以进行调节，对于造血干细胞的增殖及静止能够起到有效的控制作用。
1.2 间充质干细胞的特征关于骨髓间充质干细胞，其细胞表面标志缺少特异性标志，无论是在人体内，还是在鼠体内，其骨髓间充质干细胞的CD45及CD34均显示为阴性。
人体内的骨髓间充质细胞最典型的表面标志为H细胞黏附分子、5核苷酸酶、内皮糖蛋白、胸腺嘧啶表面抗原、血管细胞黏附分子-1等表现标志均显示为阳性。
将骨髓间充质干细胞钝化分离，其组成基础就是上述组合。
另外，骨髓间充质干细胞具有高度差异性表达的整联蛋白及低亲和力神经生长因子受体等这些表面标志。
在体外，骨髓间充质干细胞表现出非常明显的可塑性，在成熟的成骨细胞中，这种可塑性能够保持，因为，骨髓间充质干细胞在人体外能够转化为脂肪细胞[2]。
2 骨髓微环境中的间充质干细胞2.1 骨髓间充质干细胞是骨髓结构的重要组成部分在骨髓内，造血干细胞的形成及生长为：骨髓基质细胞通过产生趋化因子、细胞因子进行调节的，同时，骨髓基质细胞还能够通过细胞内信号对造血干细胞的生长进行调节。
人骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
人骨髓间充质干细胞的培养与鉴定目的分离培养人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cells，hBMSCs），体外观察其生长特性。
方法采用密度梯度离心结合贴壁培养法自脐血中分离间充质干细胞，倒置显微镜下观察其形态及生长情况；流式细胞仪分析细胞周期并检测细胞表面标志物。
结果纯化的hBMSCs 贴壁生长，呈均一梭形，具有较强的增殖能力，流式细胞仪分析P3代hBMSCs 稳定表达间充质干细胞表面抗原标志CD73，CD90和CD105等。
结论本实验分离培养的hBMSCs具有较强的增殖能力，表达间充质干细胞的表面标记。
Abstract：Objective To isolate and culture human bone marrow derived mesenchymal stem cells（hBMSCs），and to observe biological characteristics of hBMSCs. Methods Bone marrow mononuclear cells were separated by the method of density gradient centrifugation and MSCs were obtained by adhere culture.The cell morphology and their growth characteristics in vitro were observed under an inverted phase contrast microscope and the cell cycles were tested by flowing cytometry. Mesenchymal like stem cells were identified by surface marker with flow cytometry.Results hBMSCs were adhered like a fibroblast morphology and with pool like growth alinement.Flow cytometry showed that the third passage cells were positive for CD73，CD90and CD105 expression.Conclusion The MSCs from bone marrow in this study show great capability of proliferation.Key words：Bone marrow mesenchymal stem cells；Separation；Culture and identification间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是来源于中胚层的具有多向分化潜能的干细胞。
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骨髓间充质干细胞的主要表面标志
1 骨髓间充质干细胞的发现和来源
骨髓组织中有多种细胞成分，除基质细胞等已经分化的细胞外，还含有两类多潜能干细胞：造血干细胞和间充质干细胞。
1987 年Friedenstein 等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个细胞在一定条件下可分化为多种类型的细胞，而且经过20－30个培养周期仍能保持其多向分化潜能。
由于骨髓中的这种多能细胞能够分化为多种中胚层来源的间质细胞, 故称之为间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs),或间质祖细胞(MPCs)，是成人多能干细胞的一类。
早期分离培养时，发现其形状呈成纤维细胞样而称其为成纤维细胞集落形成单位(Colony-forming unit-fibroblast，CFU-F)，或骨髓基质成纤维细胞(Marrow stromal fibroblast，MSF)。
Friedenstein AJ , Chailakhyan RK, Gerasimov UV. Bone marrow o steogenic stem cells: in vit ro cult ivat ion and t ransp lantat ion in diffusion chambers. Cell T issue Kinet, 1987, 20 (3) : 263-267]
2 鉴于其强大的增殖能力及多向分化潜能，可在体外长期培养和遗传背景较稳定，而且用自体干细胞诱导构建的组织不涉及伦理问题，也不存在MHC限制，所以骨髓间充质干细胞日益受到重视。
但是与造血干细胞等其他细胞相比，骨髓中MSCs的数量非常少，约占整个骨髓有核细胞的十万分之一，并随年龄的增加，细胞数量逐渐减少。
因此，如何简便有效地从骨髓中获取高纯度的MSCs显得尤为重要，寻找高度特异性的MSCs的表面抗原也就成为MSCs研究中的一项重要任务和目标。
不仅如此，一种同样来源于骨髓、贴壁生长、被认为更原始（可以分化为MSCs）也具有更强增殖能力的干细胞也被鉴定，它就是多能成体祖细胞（multipotent adult progenitor cell (MAPC) or mesodermal progenitor cell(MPC)）[Reyes, M., Lund, T., Leuvik, T., Aguiar, D., Koodie, L., Verfaillie,
C.M. (2001) Purification and in vivo expansion of postnatal human marrow mesodermal progenitor cells. Blood 98, 2615-2625]，因能和MSCs一起被纯化而统称BM stromal stem cell。
3 利用流式细胞仪的研究显示,MSCs属混杂细胞群，其表面抗原也具有非专一性, 它表达了间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志。
主要包括: ①
黏附分子, 如CD166、CD54、CD102、CD44、CD106 等。
②生长因子和细胞因子受体, 如白介素21 受体( IL-1R )、IL-3R、IL-4R、IL-6R、IL-7R、C干扰素受体( IFN-CR)、肿瘤坏死因子(TNF) -A等。
③整合素家族成员, 包括CD49a、CD49b、CD49c、CD29、CD104 等。
④其他如CD90、CD105 等。
不表达造血细胞的表面标志, 如CD34、CD45、CD14、CD3、CD4、CD8 等, 也不表达与人白细胞抗原(HLA ) 识别有关的共刺激分子及主要组织相容性复合物类分子如HLA-DR 抗原等。
但到目前为止, 对于MSC 的表面标志尚不完全确定，有些标志尚存在种属特异性，现将普遍认同的不同种属的MSCs的表面抗原情况综述如下：
表一：MSCs的表面抗原
表二：multipotent adult progenitor cells ( MAPCs) 的表面抗原。