新试验一 芦丁的提取、分离与鉴定

实验一 芦丁的提取、精制与鉴定

一、实验目的与要求

l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；

2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。

R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素

芦丁溶解度：冷水1：8000 热水1：200

冷乙醇1：300 热乙醇1：30

难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。

槲皮素溶解度：冷乙醇1：650 热乙醇1：60

可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、

乙醚、氯仿和水中。

二、实验原理

本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和

精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李

糖。芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。

三、实验内容

（一）提取分离和纯化

l 、芦丁的提取：

2、精制（重结晶）：

3、芦丁的水解：

O

O OH

OH OR

OH HO

流程图如下：

槐米（20g ）

研碎，于500ml 烧杯中，

加350，250ml 水煮沸15min,10min

棉花过滤

150ml ，1%H 2SO 4

直火加热水解30min

放置 1-1.5h ，抽滤

精品芦丁

（水浴浓缩至2ml ）

(二)鉴定

l 、化学检识

取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml 使溶解

(1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加浓

盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。

(2)Molish 反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加10%α

—萘酚0.5ml 摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml ，静置，观察二层

溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。

(3)FeCL 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯

化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。

(4) AlCl 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯

化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。

(5)Mg(Ac)

反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支试管中分别加1%乙

2

酸镁乙醇液几滴，观察颜色变化。

2、色谱鉴定

(1)槲皮素和芦丁的纸色谱鉴定

点样：取圆形滤纸，距圆心1厘米处用铅笔划一同心圆，为起始线，间隔1厘米处点样品（a,b,c,d）。将点好样品的滤纸置于培养皿中分别用展开剂①、②径向展开。

a自制芦丁乙醇液 b芦丁对照品乙醇液 c自制槲皮素乙醇液 d槲皮素对照品乙醇液。

展开剂：①正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上层)

②正丁醇—醋酸—水(4：1：5，下层)

显色：①可见光下观察色斑。

②喷1％AlCl

乙醇液，再置紫外灯下观察荧光。

3

(2)糖的纸层析鉴定

点样：取圆形滤纸，同上法点样和展开（e,f,g）。

e水解液 f葡萄糖对照品水溶液 g鼠李糖对照品水溶液

展开剂：正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上层)

显色：喷洒苯胺-邻苯二甲酸，电炉上加热烘烤至色斑出现。

四，分析讨论

1，芦丁酸水解时有何现象，如何解释？

2，槲皮素和芦丁纸色谱鉴定时，用BAW（4：1：5）上层和下层展开后，解释两者的相对比移值大小关系？

3，葡萄糖和鼠李糖的纸层析鉴定时，用BAW（4：1：5）上层展开后，何者相对比移值较大，为什么？

芦丁，槲皮素鉴定（二）

一，槲皮素衍生物的制备

槲皮素五乙酰化物的制备：取槲皮素结晶200㎎，置于干燥三角锥形瓶中，加5ml醋酐，用毛细管滴加农硫酸一小滴，振摇使完全溶解，水浴上加热30分钟（注意应避免反应过程中引入水份），放冷后将反应液在搅拌下倾入100ml水中，一直搅拌至油滴消失，且有固体沉淀析出为止，抽滤沉淀并洗涤，干燥后以95％乙醇重结晶，即得槲皮素五乙酰化物无色结晶。

二，芦丁的UV, HPLC, IR分析

（一）芦丁的UV分析（实验地点，二号试验楼A栋411室）：

（二）芦丁的HPLC分析（实验地点，二号试验楼A栋411室）：

1，色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇－1％冰乙酸溶液（32：68）为流动相，检测波长为257nm，理论塔板数按芦丁峰计算不低于2000

2，对照品溶液的制备：精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1㎎的溶液，即得。

3，供试品溶液的制备：取自制精制品约g，精密称定，置ml容量瓶中，加入甲醇溶液ml，超声处理30分钟，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45μm微孔虑膜，即得。

4，测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，测定，即得。

（三）芦丁的IR分析（实验地点，二号试验楼A栋2室）：