高中生物 第六章基因重组与基因工程
人教版教学教案高一生物必修2第6章第7章知识点归纳
第六章从杂交育种到基因工程第1节杂交育种与诱变育种一、杂交育种1.概念：是将两个或多个品种的优良性状通过交配集中一起，再经过选择和培育，获得新品种的方法。
2.原理：基因重组。
通过基因重组产生新的基因型，从而产生新的优良性状。
3.优点：可以将两个或多个优良性状集中在一起。
4.缺点：不会创造新基因，且杂交后代会出现性状分离，育种过程缓慢，过程复杂。
二、诱变育种1.概念：指利用物理或化学因素来处理生物，使生物产生基因突变，利用这些变异育成新品种的方法。
2.诱变原理：基因突变3.诱变因素：（1）物理：X射线，紫外线，γ射线等。
（2）化学：亚硝酸，硫酸二乙酯等。
4.优点：可以在较短时间内获得更多的优良性状。
5.缺点：因为基因突变具有不定向性且有利的突变很少，所以诱变育种具有一定盲目性，所以利用理化因素出来生物提高突变率，且需要处理大量的生物材料，再进行选择培育。
三、四种育种方法的比较【例1】普通小麦中有高秆抗病(TTRR)和矮秆易感病(ttrr)两个品种，控制两对性状的基因分别位于两对同源染色体上。
实验小组利用不同的方法进行了如下三组实验：请分析回答：(1 )A组由F1获得F2的方法是________，F2矮秆抗病植株中不能稳定遗传的占____________。
(2)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类矮秆抗病植株中，最可能产生不育配子的是____________类。
(3)A、B、C三组方法中，最不容易获得矮秆抗病小麦新品种的方法是________组，原因是____________________________________________。
(4)通过矮秆抗病Ⅱ获得矮秆抗病小麦新品种的方法是________。
获得的矮秆抗病植株中能稳定遗传的占_________________________________________________________________。
(5)在一块高秆(纯合体)小麦田中，发现了一株矮秆小麦。
高中生物必修二第六章
第6章从杂交育种到基因工程第一节杂交育种与诱变育种一、各种育种方法的比较：杂交育种诱变育种多倍体育种单倍体育种处理杂交→自交→选优→自交用射线、激光、化学药物处理用秋水仙素处理萌发后的种子或幼苗花药离体培养原理基因重组，组合优良性状人工诱发基因突变破坏纺锤体的形成，使染色体数目加倍诱导花粉直接发育，再用秋水仙素优缺点方法简单，可预见强，但周期长加速育种，改良性状，但有利个体不多，需大量处理器官大，营养物质含量高，但发育延迟，结实率低缩短育种年限，但方法复杂，成活率较低例子水稻的育种高产量青霉素菌株无子西瓜抗病植株的育成第二节基因工程及其应用一、基因工程1、概念：基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。
通俗的说，就是按照人们意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。
2、原理：基因重组3、结果：定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。
二、基因工程的工具1、基因的“剪刀”—限制性核酸内切酶（简称限制酶）（1）特点：具有专一性和特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。
（2）作用部位：磷酸二酯键（4）例子：EcoRI限制酶能专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开。
（黏性末端）（黏性末端）（5）切割结果：产生2个带有黏性末端的DNA片断。
（6）作用：基因工程中重要的切割工具，能将外来的DNA切断，对自己的DNA无损害。
注：黏性末端即指被限制酶切割后露出的碱基能互补配对。
2、基因的“针线”——DNA连接酶（1）作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。
（2）连接部位：磷酸二酯键3、基因的运载体（1）定义：能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。
（2）种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。
三、基因工程的操作步骤1、提取目的基因2、目的基因与运载体结合3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测和鉴定四、基因工程的应用1、基因工程与作物育种：转基因抗虫棉、耐贮存番茄、耐盐碱棉花、抗除草作物、转基因奶牛、超级绵羊等等2、基因工程与药物研制：干扰素、白细胞介素、溶血栓剂、凝血因子、疫苗3、基因工程与环境保护：超级细菌五、转基因生物和转基因食品的安全性两种观点是：1、转基因生物和转基因食品不安全，要严格控制2、转基因生物和转基因食品是安全的，应该大范围推广。
人教版高中生物必修二第六章第2节《基因工程及其应用》 课件 (共38张PPT)
A.同种限制酶
B.两种限制酶
C.同种连接酶
D.两种连接酶
2、DNA连接酶的主要功能是
（）
A.DNA复制时母链与子链之间形成的氢键
B.粘性末端碱基之间形成的氢键
C.将两条DNA末端之间的缝隙连接起来
D.将碱基、脱氧核糖、磷酸之间的键连接起来
3、下列有关质粒的叙述，正确的是（ A.质粒是广泛存在于细菌细胞内的一种颗粒状
DNA聚合酶：DNA复制时分别以DNA的两 条链为模板形成磷酸二酯键合成新的脱氧 核苷酸链。
逆转录酶：以RNA为模板形成磷酸二酯键 合成新的脱氧核苷酸链
限制酶：切割DNA，断开磷酸二酯键
DNA连接酶：连接两个DNA片段，形成磷 酸二酯键。
（三）基因的运载体
常见种类：质粒、噬菌体和动植物病毒等
质粒
存在于许多细菌以及酵母菌 等生物的细胞中，是拟核或 细胞核外能够自主复制的很 小的环状DNA分子。
运载体特点： 1、能自主复制并能够转移到
受体细胞并稳定保存 2、有限制酶切位点 3、有标记基因 4、对受体细胞无害
三、基因工程的“四步曲”
提取目的基因
三、基因工程的“四步曲”
提取目的基因 目的基因与运载体结合
B.质粒是仅存于细菌细胞中能自我复制的小型 环状DNA C. D.质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立地 进行
4下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（） A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA
连接酶和运载体
B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷 酸序列
C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细 菌繁殖快
A.① B.
C.①②③ D.②③④
再见！
C.DNA
D.RNA
《基因工程及其应用》 说课稿
《基因工程及其应用》说课稿尊敬的各位评委、老师：大家好！今天我说课的题目是《基因工程及其应用》。
下面我将从教材分析、学情分析、教学目标、教学重难点、教学方法、教学过程以及教学反思这几个方面来展开我的说课。
一、教材分析“基因工程及其应用”是人教版高中生物必修 2《遗传与进化》第六章第二节的内容。
本节课是在学生学习了基因的本质、基因的表达以及基因突变和基因重组等知识的基础上，进一步探讨基因工程这一前沿生物技术。
基因工程是现代生物技术的核心，它不仅在农业、医学、工业等领域有着广泛的应用，而且对于学生理解生命的本质、科技对社会的影响等方面具有重要的意义。
教材首先介绍了基因工程的基本概念和操作工具，包括限制酶、DNA 连接酶和运载体。
接着详细阐述了基因工程的基本操作步骤，即目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞以及目的基因的检测与鉴定。
最后，教材介绍了基因工程在农业、医药等领域的应用，让学生了解基因工程对人类生产和生活的重要影响。
二、学情分析学生在之前的学习中已经掌握了基因的相关知识，对DNA 的结构、功能以及遗传规律有了一定的了解，这为本节课的学习奠定了基础。
然而，基因工程是一门较为抽象和复杂的技术，学生对于基因工程的操作工具和操作步骤可能会感到难以理解。
因此，在教学过程中，需要通过形象直观的教学手段，帮助学生突破难点，理解基因工程的基本原理和应用。
此外，高二学生已经具备了一定的逻辑思维能力和分析问题的能力，但对于新知识的接受和理解还需要教师的引导和启发。
在教学中，要注重培养学生的自主学习能力和创新思维能力，让学生在探究中学习，在学习中提高。
三、教学目标1、知识目标（1）简述基因工程的基本原理。
（2）举例说出基因工程在农业、医药等领域的应用。
2、能力目标（1）通过对基因工程操作步骤的学习，培养学生的逻辑思维能力和分析问题的能力。
（2）通过小组讨论和探究活动，培养学生的合作学习能力和创新思维能力。
2021届人教版高中生物必修二第6章 从杂交育种到基因工程 第1节有详细答案
第6章第1节杂交育种与诱变育种一、选择题1．下列关于几种常见育种方法的叙述，错误的是()A．在杂交育种中，一般从F2开始选种，因为从F2开始发生性状分离B．在单倍体育种中，常先筛选F1花粉类型再分别进行花药离体培养C．在多倍体育种中，用秋水仙素处理的目的是使染色体数目加倍D．在诱变育种中，人工诱变能提高变异频率解析：选B由于杂交育种要从F2才发生性状分离，开始出现所需要的表现型，所以从F2开始选种；在单倍体育种中，先对F1的花粉进行离体培养，后经秋水仙素处理，长成植株后再进行筛选；在多倍体育种中，用秋水仙素处理的目的是抑制纺锤体的形成，使染色体数目加倍获得多倍体；在诱变育种中，人工诱变能提高变异的频率，大幅改良某些性状，可加速育种进程。
2．小麦抗锈病对易染锈病为显性，人们在育种过程中需要鉴别和保留纯合的抗锈病小麦。
现有Ⅰ、Ⅱ两种抗锈病的小麦，鉴别其是否纯合的最简便易行的方法是()A．Ⅰ×ⅡB．Ⅰ×Ⅱ→F1，F1再自交C．Ⅰ、Ⅱ分别和易染锈病植株测交D．Ⅰ、Ⅱ分别自交解析：选D鉴别一株显性植株是不是纯合体，可用测交法和自交法，其中自交法最简便易行。
3．下列4种育种方法中，变异类型相同的是()①用玉米花药离体培养得到单倍体植株②用秋水仙素处理西瓜幼苗得到多倍体植株③通过杂交育种获得抗病抗倒伏小麦品种④用X射线处理青霉菌得到高产菌株A．①②B．③④C．①③D．②④解析：选A玉米花药离体培养得到单倍体植株、秋水仙素处理西瓜幼苗得到多倍体植株变异类型都是染色体变异；杂交育种获得抗病抗倒伏小麦品种变异类型是基因重组；X射线处理青霉菌得到高产菌株变异类型是基因突变。
4．下列有关育种的叙述，正确的是()A．杂交育种所选双亲必须是纯合子B．诱变所得植株若不出现预期性状就应丢弃C．多倍体育种时可用秋水仙素处理幼苗D．单倍体育种可培育出具有新性状的新品种解析：选C杂交育种的双亲可以为杂合子；诱变育种所得的植株若不出现预期性状，可能为杂合子，下一代有可能会出现预期性状；多倍体的获得方法有低温处理和秋水仙素处理；单倍体育种过程中没有产生新基因，所以不会有新性状产生。
高中生物基因突变和基因重组最全最新ppt课件
1、在生物界普遍存在
短腿安康羊（中） 玉米白化苗 人类多指
基因突变发生在生物个体发育的什么时期？ 任何时期
基因突变发生的时期与突变性状在生物体的表现部位及范围大小有什么关系？
突变发生的时期越早，表现突变的部分越多，突变发生的时期越晚，表现突变的部 分越少。
总之，基因突变可以发生在个体发育的任何时期，可以发生在细胞不同的DNA 分子上，可以在同一DNA分子的不同部位
2 类型:
①基因的自由组合: 非同源染色体上的非等位基因的组合.
②基因的互换: 同源染色体上的非姐妹染色单体之间发生局部互换. ③重组DNA技术：通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取 出来，在生物体外重组，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的性状。
转基因抗虫棉花 转入苏云金杆菌的一个抗虫基因，是中国目前最主要的转基因作物。
37
;.
3、意义:
通过有性生殖实现基因重组为生物变异提供了极其 丰富的来源,是生物多样性的重要原因之一.
基因重组能否产生新的基因？
38
;.
对比基因突变与基因重组：
基因突变
基因重组
本质
基因分子结构变化，产生新基因（碱 基替换|增添|缺失）
并不产生新基因，产生新的基因型，使 不同性状发生组合
发生 时间
长折
短折
中国黄牛
ⅹ
荷斯坦牛 中 国 荷 斯 坦 牛
46
;.
课堂巩固
1、生物变异的根本来源是
D
A．基因重组 B．染色体数目变异
C．染色体结构变异 D．基因突变
2、基因重组发生在
A．减数分裂形成配子的过程中
B．受精作用形成受精卵的过程中
C．有丝分裂形成子细胞的过程中
高中生物2019人教版基因工程 重点知识无废话
基因工程知识清单基因工程：通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
又叫做DNA重组技术。
操作水平：DNA分子水平原理：基因重组1.1 基本工具“分子手术刀”—限制性内切核酸酶（限制酶）“分子缝合针”—DNA连接酶“分子运输车”—载体1、限制酶：限制酶存在于原核生物中的作用：切割进入细胞的外源DNA，有助于抵抗病毒的侵染。
限制酶不切割原核细胞自身DNA的原因：不存在能被识别的特定序列，或相关序列已被修饰，无法识别。
（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来。
（2）功能：识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，断开特定部位的磷酸二酯键，具有专一性（特异性）。
（3）结果：产生黏性末端或平末端。
2、DNA连接酶：DNA连接酶与DNA聚合酶的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。
DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键，二者均作用于磷酸二酯键。
3、载体（1）载体必备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。
③具有标记基因。
（2）质粒：最常用的载体，裸露的、结构简单的、独立于细菌染拟核之外或真核细胞细胞核之外，具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：噬菌体、动植物病毒4.DNA 的粗提取与鉴定1. 粗体取原理: ①DNA 不溶于酒精, 某些蛋白质溶于酒精。
（需要使用预冷的酒精溶液）②DNA 能溶于 2mol/L 的 NaCl 溶液。
2.DNA鉴定原理：DNA 遇二苯胺试剂在沸水加热条件下会呈现蓝色。
1.2 基本操作程序操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建（核心步骤）、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
第一步：目的基因的筛选与获取1.目的基因的筛选方法：从已知结构功能清晰的基因中进行筛选2.目的基因的获取方法：人工合成、PCR技术、从基因文库中获取PCR技术（聚合酶链式反应）（1）原理：DNA半保留复制（2）过程：①变性——90℃双链DNA断开氢键，解聚为单链；②复性——50℃，引物通过碱基互补配对结合到互补单链；③延伸——72℃，四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
必修二第六章从杂交育种到基因工程一二节
第六章 从杂交育种到基因工程第一节 杂交育种与诱变育种 一、杂交育种1．杂交育种是将两个或多个品种的优良性状通过交配集中在一起，再经过选择和培育，获得新品种的方法，它依据的主要遗传学原理是基因重组 。
2．过程：现有两个纯种的小麦，一为高秆(D)抗锈病(T)；另一为矮秆(d)易染锈病(t)，这两对性状独立遗传，如何获得矮秆抗锈病的新类型？(1) 应采取的步骤是：①先让两纯种亲本进行 杂交 ，得到F 1。
②再将F 1进行 自交 ，得到F 2。
③将F 2种植，从中选育出 矮秆抗锈病 新类型。
(2)过程如右图，请回答：①过程表示 ；②过程表示 ； ③过程表示 。
④写出图中F 2表现型及其比例。
⑤从F 2代中选出矮秆抗锈病的个体，基因型为 ，能否立即推广，为什么？ ⑥怎样处理才能得到比较纯的矮秆抗锈病个体?3、杂交育种依据的遗传学原理是基因重组4、杂交育种的优点：使位于不同个体上的_优点_集中在 同一个体 上，即“集优”。
预见性强。
5、杂交育种的不足：不能创造出新的__基因__，进程缓慢，过程繁琐，后代易出现 性状分离 。
6、应用：在农业生产中，杂交育种是 改良作物品质，提高农作物单位面积产量 的常规方法。
杂交育种的方法也用于 家畜、家禽 的育种。
思考：在杂交育种工作中，选择通常从哪一代开始，理由是什么？深入拓展：若该生物靠有性生殖繁殖后代，则必须选育出优良性状的纯种，以免后代发生性状分离；若该生物靠无性生殖产生后代，那么只要得到该优良性状就可以了，纯种、杂种并不影响后代性状的表达。
二、诱变育种 1．诱变育种是利用物理因素 (如X 射线、γ射线、紫外线、激光等)或化学因素(如亚硝酸、硫酸二乙酯等)来处理生物，使生物发生基因突变。
2、诱变育种的原理是 基因突变 。
3、诱变育种的优点：提高了 突变率 ，在短时间内获得更多的优良变异类型，加速 产生新基因 的进程，创造生物新品种、新类型。
其优点是提高突变率、短时间内获得更多的优良变异类型、抗病力强、产量高、品质好 。
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第六章基因重组与基因工程教学大纲要求1.熟悉基因工程、基因文库、载体、限制性核酸内切酶、PCR等概念；2.掌握以质粒为载体进行DNA克隆的基本过程；3.了解重组DNA技术在医学上的应用。
教材内容精要一、自然界的基因转移和重组自然界不同物种或个体之间的基因转移和重组是经常发生的，它是基因变异和物种演变、进化的基础。
基因重组的方式有：接合作用、转化、转导、转座。
1．接合作用(Conjugation) 当细胞(细菌)与细胞(细菌)相互接触时，质粒DNA就可从一个细胞(细菌)转移到另一个细胞(细菌)。
2．转化与转导作用(1)转化作用(Transformation)：由外源性DNA导入宿主细胞，并引起生物类型改变或使宿主细胞获得新的遗传表型的过程，称为转化作用。
(2)转导作用(Transduction)：当病毒从被感染的(供体)细胞释放出来，再次感染另一(受体)细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组称为转导作用。
3．转座(转位)(Transposition) 可移动的DNA序列包括插入序列和转座子。
故由插入序列和转座子介导的基因转移或重排称转座。
转座是指一个或一组基因从一个位置转到基因组的另一个位置。
可分为插入序列(insertionsequenceIS)转座和转座予(transposons)转座。
4．基因重组不同DNA分子间发生的共价连接称基因重组。
基因重组有两种类型：位点特异的重组(sitespecial recombmatlon)和同源重组(homologous recomblnation)。
二、重组DNA技术’1．重组DNA技术的相关概念(1)DNA克隆：克隆(Clone)就是来自同一个体的相同的集合。
DNA克隆（DNA clone）：应用酶学方法在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的重组DNA分子，通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增，提取获得大量同一DNA分子的过程。
DNA克隆又称基因克隆或重组DNA。
DNA克隆也指将DNA重组体引进受体细胞中，建立无性系的过程。
因此，又称为基因克隆(gene cloning)、基因工程(gentre engneering)、重组DNA技术。
(2)工具酶；常用的有：内切酶、连接酶、聚合酶I、反转录酶等。
在所有工具酶中以限制性内切核酸酶最重要。
限制性内切核酸酶(Restriction endonuclease)是指能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
根据组成和作用特性的不同，常用的限制性核酸内切酶可分为三类。
，重组DNA技术用到的为Ⅱ类。
其特点为：①具有识别特异性：识别DNA分子上特定的核苷酸序列，该序列一般呈回文结构(Palindrome)，如：E．CoRI识别的序列为5' GAATTC 3'。
②具有切割特异性：从某一特定位点或其周围切割，产生后产生粘性本端或钝性末端，如：E．CoRI从G和A之间切开，产生两个粘性本端（5' G↑AATTC 3'）。
不同的限制性内切核酸酶识别DNA中的核苷酸长短不一，切割位点的多少也不同，产生的片段大小各异。
(3)目的基因：目的基因(target gene)是我们要研究或利用的DNA序列或基因，称为目的基因。
目的DNA有两种类型：cDNA和基因组DNA。
cDNA(Complementary DNA)是以RNA为模板，经反转录合成的与RNA互补的单链DNA。
以cDNA为模板经聚合反应可合成双链cDNA。
基因组DNA(genomic DNA)是指代表一个细胞或生物体整套遗传信息的所有DNA序列。
(4)基因载体：也叫克载隆体(cloning vector)是携带目的基因，实现目的基因的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。
具有转录和翻译所必须的DNA序列，可以完成目的基因表达过程的载载体称为表达载体(expression vector)。
作为载体，必须要有独立的复制能力，可导入宿主细胞，并且要便于检测。
常用的载体有质粒DNA、噬菌体DNA、和病毒DNA。
质粒(P1asmid)是存在于细菌染色体以外的环状DNA分子。
质粒大小适宜，拷贝数多，易于转化，利于筛选，有理想的酶切位点。
噬菌体(phage)是侵袭细菌的病毒。
常见的噬菌体有λ噬菌体和M13噬菌体。
基因工程所使用的噬菌体DNA均是经过人工改造的。
Ml3噬菌体的基因间隔区插入E．Co1i的调节基因及LacZ N一端146个aa残基编码基因，其产物为β-半乳糖苷酶的α-片段。
而突变型Lac-E Coli可表达β-半乳糖苷酶的ω-片段(酶的C-端)，单独的α-片段及ω-片段均无β-半乳糖苷酶的活性。
当舍有LacZ的M13噬菌体转化Lac-E．coli细菌时，α-片段及ω-片段共同表达，宿主Lac—E．COli细菌才有β-半乳糖苷酶活性，使特异的作用物变为兰色化合物，生长的细菌为兰色，这就是α-互补。
可用于重组体的筛选。
如果目的基因插入lacZ基因内，则LacZ不表达，为白色菌落。
2．重组DNA技术一个完整的DNA克隆过程包括目的基因的获取（分），克隆载体的选择和构建（切），目的基因与载体的连接（接），重组体导入受体菌（转），重组体的筛选（筛），克隆基因的表达（表）六个过程。
(1)目的基因的获取：可以通过化学合成、文库筛选，PCR等方法获得。
基因组DNA文库(genomic DNA library)：转化细菌内，由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合称为基因组DNA文库。
构建方法是把生物体全部的DNA提纯后，用限制性内切核酸酶，随机切割成许多片段，将所有片段均重组入同一类载体上，得到许多重组DNA分于，继而全部转入受体酋扩增，使每个细茼内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝，这样生长的全部细菌所携带的所有基因组DNA片段，即为整个基因组。
需要时用探针即可获得。
cDNA文库(cDNA library) 是与基因组DNA文库类似，以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的cDNA。
以总mRNA制作的cDNA文库，包含了细胞的各种mRNA cDNA。
聚合酶链反应(p01ymerasechainreaction，PCR)是DNA迅速大量扩增的方法，短时间内获得大量DNA，有利目的基因的获得。
(2)克隆载体的选择和构建：根据不同的目的基因，选择不同的载体。
并选用限制性内切核酸酶切割目的基因和载体。
(3)目的基固与栽体的连接：利用DNA连接酶将目的基因DNA与载体DNA连接在一起，形成重组体。
其连接方式有：粘性末端连接、平端连接、同聚物的加尾连接和人工接头连接等。
(4)重组体导入受体菌：即把重组DNA导入受体菌的过程。
根据载体的性质不同导入方式有：转化、转染、感染等早入方法如下：选择适当的受体茵。
符合安全标准，为限制酶和重组酶缺陷型。
感受态细胞(competentcell)：具备接受外源DNA的能力的经过特殊方法处理的受体菌。
(5)重组体的筛选：筛选出含重组DNA的受体菌，有直接筛选法和非直接筛选法。
抗药性标志选择，标志补救及分子杂交属直接选择法；免疫化学湘酶联免疫检测法属非直接选择法。
通过转化、转染、感染等，导入重组体的受体细胞，经过培养得到大量的菌落或噬菌斑，因为每一个重组体只携带某一段外源基因，转化或转染时，每一受体菌仅接受一个重组体分子，所以要将它们区分，并鉴定那一菌落，含有带目的基因的重组体。
即得到目的基因克隆。
(6)克隆基因的表达：可以生成有价值的蛋白质或多肽。
原核生物表达体系；E．coil 是最常见的。
运用E．COti表达有用的蛋白质必须使构建的表达载体符合以下标准：舍有大肠杆菌适宜的选择标志，具有强启动子，舍有适当的翻译控制序列，合有合理设计的多接头克隆位点。
真核表达体系常见的有酵母、昆虫、哺乳类细胞等。
3．重组DNA技术与医学的关系：现代分子医学是重组DNA技术及其他分子遗传学技术、理论与医学实践相结合的结果，特别是在疾病基因的发现、发展生物制药、DNA诊断、基因治疗、遗传病的预防等方面有重要意义。
[测试题]一、名词解释1．基因工程3．转化作用4．转导作用5．同源重组6．限制性核酸内切酶7．回文结构8．目的DNA9．互补DNA10．克隆载体11．表达载体12．质粒13． -互补14．基因组DNA文库15．感受态细胞16．cDNA文库二、填空题1．自然界的常见基因转移方式有、、、。
2．不同DNA分子间发生的共价连接称为，有、两种方式。
3. 由和介导的基因移位或重排称为转座。
4．基因工程的载体必须具备的条件有、、。
5．限制性内切核酸酶识别的核苷酸序列的个数为、和——，其切口有端和端。
6. 基因工程常用的载体DNA分子有、和。
7．一个完整的DNA克隆过程应包括、、、、。
8．目的基因获取的途径或来源有、、、。
9．基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有、、。
10．基因克隆真核生物表达体系常见的有、、表达体系。
11．根据重组体DNA的性质不同，将重组体DNA导人受体细胞的方式有、、等。
12．如果Mi：的外源基因被插入到lac z基因内，则在含有X-gal的培养基上生长时会出现色菌落，如果在1ac z基因内无外源基因插入，在同样的条件下呈现色菌落。
13．重组DNA技术中常用的工具酶有、、、。
三、选择题A型题1．cDNA文库包含A．一个物种的全部基因信息B．一个物种的全部mRNA信息C．一个生物体组织或细胞的全部基因信息D.一个生物体组织或细胞的全部mRNA信息E．一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息2．关于接合作用正确的是A．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，染色体DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)B．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，某些较大质粒DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)C．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，噬菌体DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)D. 细胞与细胞或细菌通过苗毛相互接触时，所有类型的质粒DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)E．细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，所有类型的噬菌体DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌)3．基因工程的特点是：A.在分子水平上操作，在分子水平上表达B．在分子水平上操作，在细胞水平上表达C.在细胞水平上操作，在分子水平上表达D．在细胞水平上操作，在细胞水平上表达E．以上均可以4．实验室内常用的连接外源性DNA和载体DNA的酶是：A．DNA连接酶 B．DNA聚合酶I C．DNA聚合酶1D．DNA聚合酶I E．反转录酶5．用来鉴定DNA的技术是：A．Northern印迹 B。