脂质体的制备及包封率的测定
• 【注意事项】 • (1)在整个实验过程中禁止用火。 • (2)磷脂和胆固醇的乙醇溶液应澄清，不能在 水浴中放置过长时间。磷脂和胆固醇的比例可 以采用4：1或5：1或6：1，如果磷脂和胆固醇 的质量不好，建议采用6：1 。 • (3)磷脂、胆固醇形成的薄膜应尽量薄。 • (4)60-65℃水浴中搅拌水化10-20min时，一定 要充分保证所有脂质水化，不得存在脂质块。
inside acid pH
DH+ H+
DH+ H+
D
D
•
评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布 和包封率等。其中脂质体的包封率是衡量脂质 体内在质量的一个重要指标。常见的包封率测 定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法等。 本文采用阳离子交换树脂法测定包封率。“阳 离子交换树脂法”是利用离子交换作用，将荷 正电的未包入脂质体中的药物(即游离药物)， 如本实验中的游离小檗碱，通过阳离子交换树 脂吸附除去，包封于脂质体中的药物(如小檗 碱)，由于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交 换树脂吸附，从而达到分离目的，用以测定包 封率。示意图见下图。
• ⑤吸收度的测定：以空白溶剂为对照，在 345nm波长处分别测定样品溶液与对照品 溶液的吸收度，计算柱分离度。分离度要 求大于0.95。 • 柱分离度 = 1－[A样/（A对×2.5） ] • 式中，A 样 —样品溶液的吸收度；A 对 —对 照品溶液的吸收度；2.5—对照品溶液的 稀释倍数。
• 注意：在进行柱分离度实验前，需要用 空白脂质体对分离小柱进行饱和，具体 操作如下：量取0.2ml空白脂质体，置于 分离小柱顶部，待柱顶部的液体消失后， 仔细用5mlPBS进行洗脱，待液体滴尽即 可。
脂质体的制备及包封率的测定
沈 阳 药 科 大 学 药 学 院
邓意辉
一、
实验目的
1、掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。
2、掌握用阳离子交换树脂测定脂质体包封 率的方法。 3、熟悉脂质体形成原理，作用特点。 4、了解“主动载药” 与“被动载药” 的 概念。
二、 实验原理 脂质体是由磷脂与(或不与)附加剂为骨 架膜材制成的，具有双分子层结构的封闭囊 状体。
• （2）主动载药 准确量取空白脂质体2.0ml、药 液(3mg／m1) 1.0m1、NaHCO3 溶液0.5m1，在振摇 下依次加入10ml西林瓶中，混匀，盖上塞，70℃ 水浴中保温20min（定时摇动），随后立即用冷 水降温，即得。 • 【注意事项】 • (1) “主动载药”过程中，加药顺序一定不能颠倒， 加三种液体时，随加随摇，确保混合均匀，保证 体系中各部位的梯度一致。 • (2)水浴保温时，应注意随时轻摇，只需保证体 系均匀即可，无需剧烈振摇。 • (3)用冷水冷却过程中，应轻摇。 • 【质量检查】观察粒子形态，最大粒径与最多粒 径，药物的包封率。
常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏 水烃链和一个亲水基团。将适量的磷脂加至 水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排相 对缔和为双分子层，构成脂质体。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如大 豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂等；合成磷脂，如二棕 榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱等。常 用的附加剂为胆固醇。胆固醇也是两亲性物质， 与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，其作 用是调节双分子层的流动性，降低脂质体膜的 通透性。其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这 些附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而 改变脂质体的包封率、体内外稳定性、体内分 布等其他相关参数。
脂质体检测结果
脂质体 类别
空白脂质体 被动法载药 脂质体 主动法载药 脂质体
形态
最大粒径 最多粒径 (m) (m)
备注
• 五、思考题 • 1. 以脂质体作为药物载体的特点。请讨 论影响脂质体形成的因素。 • 2. 从显微镜下的形态上看，“脂质体”、 “乳剂”及“微囊”有何差别？ • 3. 如何提高脂质体对药物的包封率？ • 4. 请问如何选择包封率的测定方法？本 文所用的方法与“分子筛法”、“超速离 心法”相比，有何优缺点？ • 5. 请试着设计一个有关脂质体的实验方 案？本实验方案还有哪些方面有待改进？
• 对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物， “被动载药”法较为适用。而对于两亲性药物， 其油水分配系数受介质的pH值和离子强度的影 响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包 封率有较大的变化，首选“主动载药” 方法。
• 下图为“主动载药”中pH梯度法载药原理示
意图
oudside neutral pH
• （3）包封率的测定 精密量取盐酸小檗 碱脂质体0.lml两份，一份置10ml量瓶中， 按柱分离度考察项下②进行操作，另一份 置于分离柱顶部，按 “柱分离度考察” 项下③进行操作，所得溶液于345nm波长 处测定吸收度，按下式计算包封率。
• 包封率(％)=（ Al /At ）×100％
• 式中，Al—通过分离柱后收集脂质体中盐 酸小檗碱的吸收度；At—盐酸小檗碱脂质 体中总的药物吸收度， At = A 样 ×2.5 ， 2.5为稀释倍数。
• • • • • • •
3．盐酸小檗碱脂质体的制备（主动载药法）
【空白脂质体处方】 注射用豆磷脂 0.9 g 胆固醇 0.3 g 无水乙醇 2-20 m1 柠檬酸缓冲液 30 ml 制成约30ml脂质体
• 【制备】主动载药法 • （1）空白脂质体制备 称取磷脂0.9g和胆固 醇0.3g，加入无水乙醇，置于65-70℃水浴中， 搅拌使溶解，于旋转蒸发仪上旋转，使磷脂 的乙醇液在壁上成膜，减压除乙醇。加入同 温的柠檬酸缓冲液30ml，65～70℃水浴中水 化10-20min ，取出脂质体于烧杯中，余下操 作同“1．空白脂质体的制备” 。
•
脂质体的制备方法有多种，根据药物的性质或研究 需要来进行选择。 • (1)薄膜分散法 这是一种经典的制备方法，它可形成多 室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。此法优点 是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。 • (2)注入法 有乙醚注入法和乙醇注入法等。“乙醇注入 法”是将磷脂等膜材料溶于乙醇中，在搅拌下慢慢滴于 55-65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醇，继续搅 拌1—2h，即可形成脂质体。 • （3）逆相蒸发法 系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂， 如氯仿、二氯甲烷中，再按一定比例与含药的缓冲液混 合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。该 法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的 脂质体制备，可提高包封率。
Na+
Ber + Ber +
SO-3
Na+
SO-3
Na+
－ － － － － Ber + Ber － － － Ber +－ － － －
SO-3
Na+
SO-3
• 三、 实验内容 • （一） 实验材料与设备 • 1.实验材料：盐酸小檗碱、注射用大豆卵磷脂、 胆固醇、无水乙醇、95％乙醇、磷酸氢二钠、 磷酸二氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、NaHCO3 、阳 离子交换树脂。 • 2.实验设备与仪器：旋转蒸发仪、烧瓶、恒温 水浴锅、磁力搅拌器、吸耳球、光学显微镜、 玻璃棉、5ml注射器筒、0．8 m微孔滤、紫外 分光光度仪、溶量瓶等。
• 其他方法：冷冻干燥法 、熔融法 等。
•
在制备含药脂质体时，根据药物装载的机 理不同，可分为“主动载药” 与“被动载药” 两大类。所谓“主动载药”，即通过脂质体内 外水相的不同离子或化合物梯度进行载药，主 要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。传统上， 人们采用最多的方法是“被动载药”法。所谓 “被动载药”，即首先将药物溶于水相或有机 相(脂溶性药物)中，然后按所选择的脂质体制 备方法制备含药脂质体，其共同特点是：在装 载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的 药物浓度基本一致，决定其包封率的因素为药 物与磷脂膜的作用力、膜材的组成、脂质体的 内水相体积、脂质体数目及药脂比(药物与磷脂 膜材比)等。
• • • • • • •
2．盐酸小檗碱脂质体的制备（被动载药法）
【处方】 注射用豆磷脂 0.6 g 胆固醇 0.2 g 无水乙醇 2-20m1 盐酸小檗碱溶液(1mg／m1) 30ml 制成30ml脂质体
• 【制备】被动载药法 • (1)盐酸小檗碱溶液的配制 称取适量的盐酸小 檗碱溶液，用磷酸盐缓冲液配成 lmg／ml和3mg ／m1两种浓度的溶液。 • (2)盐酸小檗碱脂质体的制备 按处方量称取豆 磷脂、胆固醇置于100ml烧瓶中，加无水乙醇， 余下操作除将PBS换成盐酸小檗碱溶液外，同 “空白脂质体制备”，即得“被动载药法 ”制 备的小檗碱脂质体。 • 【质量检查】观察粒子形态，最大粒径与最多粒 径，药物的包封率。 • 【注意事项】同前。
（二）实验部分
1．空白脂质体的制备（用于测定柱分离度用）
【处方】 注射用大豆卵磷脂 胆固醇 无水乙醇 磷酸盐缓冲液
0.9g 0.3g 2-20m1 适量 制成约30m1脂质体
• 【制备】 • （1）磷酸盐缓冲液（PBS）的配制 称取磷酸 氢二钠（Na2HPO4﹒12H2O）0.37g与磷酸二氢钠 （NaH2PO4﹒2H2O）2.0g,加蒸馏水适量，溶解并 稀释至1000ml（pH约为5.7）。 • （2）称取处方量磷脂、胆固醇于100ml（也可 以是250ml、500ml或1000ml ）烧瓶中，加无水 乙醇1-2ml（根据情况可以加10ml或20ml ）， 置于65-70℃水浴中，搅拌使溶解，于旋转蒸发 仪上旋转，使磷脂的乙醇液在壁上成膜，减压 除乙醇，制备磷脂膜。 • （ 3 ） 另 取 PBS 30ml 于 小 烧 杯 中 ， 同 置 于 6570℃水浴中，保温，待用。
• ②对照品溶液的制备：取①中制得的混合液 0.1ml置10ml量瓶中，加入95％乙醇6ml，振摇使 之溶解，再加PBS至刻度，摇匀，过滤，弃去初 滤液，取续滤液4.0ml于10ml量瓶中，加PBS至刻 度，摇匀，即得。 • ③样品溶液的制备：取①中制得的混合液0.1m1 至分离柱顶部，待柱顶部的液体消失后，放置 5min，仔细加入PBS(注意不能将柱顶部离子交换 树脂冲散)，进行洗脱(约需2-3ml PBS)，同时收 集洗脱液于10m1量瓶中，加入95％乙醇6ml，振 摇使之溶解，再加PBS至刻度，摇匀，过滤，弃 取初滤液，取续滤液为样品溶液。 • ④ 空 白 溶 剂 的 配 制 ： 取 乙 醇 (95 ％ ) 30ml ， 置 50m1量瓶中，加PBS至刻度，摇匀，即得。
姜黄素脂质体的制备及包封率测定
姜黄素脂质体的制备及包封率测定吴雪松【摘要】目的：探讨姜黄素脂质体的制备，建立其含量测定方法，测定其包封率。
方法：采用薄膜分散法制备姜黄素脂质体，采用超速离心法分离脂质体及游离药物，采用紫外分光光度法（UV）测定姜黄素含量，计算其包封率。
结果：采用薄膜分散法制得的姜黄素脂质体为黄色，呈圆形或类圆形，平均粒径为0.49μm，分布均匀，脂质体的平均包封率为96.02%，符合2010版《中国药典》的要求。
姜黄素脂质体中姜黄素含量为9.87mg/g，RSD为0.99%。
结论：薄膜分散法可以简单快速地制备姜黄素脂质体，操作流程掌握容易，制备的脂质体形态较好、包封率较高；超速离心法与紫外分光光度法结合可以准确、可靠地测定姜黄素脂质体的含量。
%Objective:TO discuss how to prepare the liposome of Sculellaria barbata flavones,establish the method of total flavonoids determination, and determate its encapsulation rate.Method:By using the film dispersion method to prepare the liposome of Sculellaria barbata flavones,and by using the ultracentrifugation to liposome and free drugs, and by using ultraviolet spectrophotometry (UV) to determinate the total content of flavonoids, and determate its encapsulation rate.Result:The Liposome color is dark brown,round or class round,the average particle size was 0.54 microns, uniform distribution,and the average of liposome encapsulation rate is 94.38%, it is in line with the requirements of "Chinese pharmacopoeia" 2010 version.Conclusion:The film dispersion method is easy and simple to preparate the Sculellaria barbata flavones Liposome,the operation is easy to grasp,the morphology of liposomes prepared well andhigh encapsulation rate;The Ultracentrifugation method combined with UV can be accurate, reliable to determinate of the encapsulation rate.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】2页(P8-8,9)【关键词】姜黄素;脂质体;制备方法;含量测定【作者】吴雪松【作者单位】泰州市人民医院泰州 225300【正文语种】中文【中图分类】R283药用植物姜黄的主要药效成分是姜黄素，主要存在于根茎中，属于酚类物质，橙黄色，毒性较低[1]。
羧甲基茯苓多糖脂质体的制备及其包封率的测定
制剂 与 技 术 ・
２ ０ １ ３ 年 １ 月 第ｌ ０ 卷 第 ３ 期
羧 甲基茯苓 多糖脂 质体 的制备及其包封率 的测 定
赵 永 新 赵 子 剑 王 邹
怀化 学 院 ， 湖南 怀 化
４ １ ８ ０ ０ ０
【 摘 要】目的 制备 羧 甲基茯 苓 多糖 脂质 体 ， 并测 定羧 甲基 茯 苓多糖 脂 质体 的含 量 和包 封 率 ， 初 步探 讨最 佳 包 封 的 药 量 。 方 法 采 用薄 膜分 散法 制 备羧 甲基茯 苓 多糖脂 质 体 ， 离 心分离 法 测定 羧 甲基茯 苓 多糖 脂 质体 的包 封 率 。
Ｐｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｌ ｉ ｐ ｏ ｓ ｏ ｍｅ ｏ ｆ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｘ ｙ ｍｅ ｔ ｈｙ ｌ ｐ ａ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｒ ａ ｎ ａ ｎｄ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎａ ｔ ｉ ｏ ｎ
０ ｆ ｉ ｔ ｓ ｅ ｎ ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｅ ｒ ｃ ｅ ｎ ｔ ａ ｇ ｅ
ｌ ｉ ｐ ｏ ｓ ｏ ｍ ｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ａ ｓ １ － １ ０ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ． Ｔ ｈ ｅ ｂ ｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｄ ｒ ｕ ｇ ｏ ｆ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｘ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ห้องสมุดไป่ตู้ ｌ ｐ ａ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｒ ａ ｎ ｌ ｉ ｐ ｏ ｓ ｏ ｍｅ ｗ ａ ｓ
【 Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｏ ｆ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｘ ｙ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｐ ａ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｒ ａ ｎ ｌ ｉ ｐ ｏ ｓ ｏ ｍ ｅ ａ ｎ ｄ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｔ ｈ ｅ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｘ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｐ ａ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｒ ａ ｎ
药剂学--脂质体的制备技术
四、脂质体的质量评价
4、磷脂的氧化程度
? 氧化指数的测定
氧化指数＝A233nm / A215nm
? 氧化产物的测定
HCl MDA + TBA
H2O
丙二醛 硫巴比妥酸
TBA-Pigment
5、有机溶剂残留量
五、类脂质体
类脂质体／泡囊（niosomes ） 用非离子型表面活性剂为囊材制成的单
层囊泡（nonionic surfactant vesicles ）。
一、脂质体（liposomes ）概述
一、脂质体（liposomes ）概述
3、膜材组成
?磷脂（卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂、合成磷脂） ?附加剂（胆固醇、十八胺、磷脂酸）
胆固醇用于调节磷脂膜的流动性，又称
“流动性缓冲剂”
脂质体的结构
脂质体的结构
脂质体的结构
一、脂质体（liposomes ）概述
4、脂质体的理化性质
?相变温度（phase transition temperature ）
当温度升高时，脂质体分子层中酰基侧键可从有序排 列变为无序排列，从而引起一系列变化，如由“胶晶” 变为液晶态，膜的横切面增加、厚度减少、流动性增加 等。转变时的温度即为相变温度。
一、脂质体（liposomes ）概述
二、脂质体的制备方法
1、薄膜分散法脂溶性药物溶有机溶剂 水溶性药物溶于缓冲液
二、脂质体的制备方法
2、逆相蒸发法
膜材
有机溶剂 药物水溶液
超声
W/O 乳剂
减压蒸发
胶态 缓冲液
除游离药物
水混悬液
脂质体
二、脂质体的制备方法
3、冷冻干燥法
膜材
缓冲液
超声 冷冻干燥
脂质体的制备及包封率的测定(新)
吉林大学生物基础实验教学中心
脂质体的制法有多种，可按药物性质或需要进行选择。 • 薄膜分散法：是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声 处理，得到小单室脂质体。特点是操作简便，但包封率 较低。 • 注入法：根据所用溶解磷脂质的溶剂，可分为乙醚注入法和乙醇注入 法。乙醚注入法是将磷脂、胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等 溶于适量的乙醚中，在搅拌下慢慢滴入50～60℃水性溶液 中，蒸去乙醚，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备 脂质体。本实验采用此法制成脂质体，安定为模型药物。乙 醇注入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留10％～20％ 乙醇。最近还有人研究用Freon为溶剂溶解磷脂质等脂溶性成 分，采用注入法制备脂质体。此法适于不耐热的药物。 • 反相蒸发法：是制备多层脂质体或大单室脂质体的方法，此法包封率 高。 • 冷冻干燥法：适于在水中不稳定的药物制备脂质体。 • 熔融法：适于制备多相脂质体，制得的脂质体稳定，可加热灭菌。
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试剂与器材
1.试剂：水杨酸 、卵磷脂 、胆固醇 生理盐水 2.器材：磁力搅拌器、光学显微镜、超滤 器、分光光度计
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实验步骤
1.处方 水杨酸 卵磷脂 胆固醇 生理盐水
0.25g 2g 0.2g 加至50ml
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2.操作 (1)磷脂、胆固醇乙醇溶液的配制：取处方量的卵
脂质体的制备 及检测
吉林大学 国家级生物基础实验教学示范中心
1、目的要求 2、实验原理 3、试剂与器材 4、实验步骤 5、注意事项 6、思考题
目的要求
1.掌握注入法制备脂质体的工艺。 2.掌握脂质体包封率的测定方法。
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吐温80增溶_紫外分光光度法测定辅酶Q_10脂质体的载量及包封率
2 结果与讨论
211 脂质体增溶剂的选择和膜材料对辅酶 Q10含量 测定的干扰
当脂质体中的增溶剂浓度相当高时 ,脂质体双分 子层结构解体形成混合胶束 ,与此同时 ,双分子层中 包埋的脂溶性物质释放出来并被增溶于混合胶束之 中 。表面活性剂 Triton X2100 是分析脂质体包封率 常用的增溶剂 。以 1 % Triton X2100 乙醇溶液作为 增溶剂 、在 200 ～ 350 nm 范围内扫描的紫外吸收光 谱见图 1 。相比于辅酶 Q10乙醇溶液 ,辅酶 Q10的最大 吸收波长分别从 212 nm 、275 nm 红移至 249 nm 以 及 290 nm 处 ,这说明辅酶 Q10 被 Triton X2100 增溶 后与在乙醇中所处的微环境不同 ,具体表现为辅酶 Q10分子光谱性质的改变 。
包封率 = ( 总辅酶 Q10 含量 - 游离 辅 酶 Q10 含 量) / 总辅酶 Q10含量 ×100 %
载量 = (总辅酶 Q10含量 - 游离辅酶 Q10含量) / 磷脂含量 ×100 % 1121611 总辅酶 Q10含量的测定
有机溶剂提取法[9～10 ] 。取适量辅酶 Q10脂质体 , 加入 3 mL 甲醇 ,漩涡混合 30 s 后 ,再加入 2 mL 正己 烷 ,漩涡混合 3 min ,2 000 r/ min 离心 5 min ,取上层 正己烷液 ,重复操作 2 次 ,合并正己烷液 ,氮气吹干后 用乙醇定容至 10 mL 。用同法以空白脂质体为对照 进行操作 ,测定辅酶 Q10脂质体处理液在 275 nm 处 的 △A 值 ,由标准曲线求出辅酶 Q10含量 。
药剂学实验脂质体的制备及包封率的测定
06
实验注意事项与改进建议
实验安全注意事项
实验室安全
01
确保实验室通风良好，佩戴适当的防护装备，如实验服、手套
和护目镜。
化学品安全
02
熟悉并遵守所有化学品的安全数据表（SDS）指南，特别注意
有毒、易燃或腐蚀性物质的正确处理和存储。
设备安全
03
正确使用实验设备，遵循制造商的操作指南，确保设备维护和
其他制备方法
复乳法
将药物水溶液与磷脂等膜材制成W/O型乳剂 后，再分散到外水相中形成W/O/W型复乳 ，除去有机溶剂后可得脂质体
熔融法
将磷脂等膜材在高于相变温度条件下熔融成液晶态 ，加入药物溶液进行搅拌，然后冷却固化得到脂质 体
超声波分散法
利用超声波的空化作用将磷脂膜材分散成脂 质体
03
包封率测定原理及方法
02
直至形成稳定的W/O型乳剂，减压蒸发除去有机溶 剂
03
形成脂质体，加入缓冲液，通过凝胶色谱法或超速 离心法除去未包封的药物
注入法
1
将类脂质和脂溶性药物溶于有机溶剂中，然后把 此药液经注射器缓缓注入加热至相变温度以上的 磷酸盐或醋酸盐等缓冲液
2
类脂质排列成整齐的脂质双分子层而形成脂质体
3
该方法可制备粒径较大且粒径分布均匀的脂质体
包封率定义及意义
包封率定义
包封率是指脂质体中药物包裹量与投 药量之比，是评价脂质体制备工艺和 药物包裹效果的重要指标。
包封率意义
高包封率意味着更多的药物被有效地 包裹在脂质体内，有利于提高药物的 稳定性和生物利用度，减少用药剂量 和副作用。
测定原理
分离原理
通过物理或化学方法将脂质体中的游 离药物与包裹药物分离，然后分别测 定两者的含量，计算包封率。
伊达比星脂质体的制备及其包封率的测定
伊达比星脂质体的制备及其包封率的测定王玲玲;邓盛齐;尹婕;任静【摘要】目的制备伊达比星脂质体,建立伊达比星脂质体包封率的测定方法.方法采用薄膜分散-超声合并挤压法制备伊达比星脂质体,通过葡聚糖凝胶柱色谱分离游离药物和脂质体,用HPLC测定伊达比星含量,计算包封率.结果伊达比星脂质体平均包封率为65.42％,载药量为7.70％.凝胶柱色谱柱回收率99.76％,伊达比星在0.05～30.0μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999).结论薄膜分散-超声合并挤压法适用于制备伊达比星脂质体,分析方法准确可靠可以用于伊达比星脂质体包封率的测定.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2014(039)006【总页数】4页(P447-450)【关键词】伊达比星;薄膜分散-超声合并挤压法;脂质体;包封率【作者】王玲玲;邓盛齐;尹婕;任静【作者单位】成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052;成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052;成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052;成都大学,四川抗菌素工业研究所,成都610052【正文语种】中文【中图分类】R978.1+9伊达比星(idarubicin，IDA)是柔红霉素(daunorubicin，DNR)的去甲氧基衍生物，是哺乳动物DNA强有力地毒性剂，它的细胞毒性强于DNR或阿霉素，临床上单独或与其它化疗药物结合用于治疗急性白血病、晚期乳腺癌、多发性骨髓瘤、非何杰氏淋巴瘤等，对柔红霉素和多柔比星耐药及复发性和难治性的急性白血病也有效。
但在用药过程中心脏毒性、骨髓抑制以及消化系统反应等不良反应严重限制了其在临床上的广泛和长期使用[1-3]。
脂质体作为抗癌药物的载体具有靶向、高效、低毒、抗耐药性等优越性，结合IDA本身的理化性质，本文采用注射用大豆磷脂和胆固醇为载体材料制备了伊达比星脂质体并采用葡聚糖凝胶柱色谱法测定其包封率，为伊达比星脂质体制剂的进一步开发奠定良好基础。
脂质体的制备
脂质体的制备及检测一.目的要求1.掌握注入法制备脂质体的工艺。
2.掌握脂质体包封率的测定方法。
二.实验原理1. 60年代初，Begkan等发现磷脂分散在水中可形成多层囊，并证明每层囊均为双分子脂质膜且被水隔开，称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。
1971年Rymen 等人提出将脂质体作为药物载体，即将酶或药物包裹在脂质体中。
2. 脂质体系一种人工细胞膜，它具有洋葱似的封闭球形结构，可使药物被保护在它的结构中，发挥定向作用，特别适于作为抗癌药物载体，以改善药物的治疗作用，降低毒副作用等。
脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂，卵磷脂等，合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。
磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。
磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。
当较多的磷脂加至水或水性溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层，形成椭圆形或球状结构一—脂质体。
常用的附加剂为胆固醇，它也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体，其作用是调节双分子层流动性，减低脂质体膜的通透性。
其它附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。
3. 脂质体载药系统的优势：1.被动靶向：脂质体进人体内可被巨噬细胞作为外界异物而吞噬，主要被单核巨噬细胞系统的巨噬细胞所吞噬而摄取，形成肝、脾等网状内皮系统的被动靶向性。
2.缓释作用：将药物包封成脂质体，可减少肾排泄和代谢，延长药物在血液中的滞留时间，使药物在体内缓慢释放，从而延长了药物的作用时间。
3.降低药物毒性：药物被脂质体包封后，有效地在肝、脾和骨髓等单核巨噬细胞较丰富的器官中浓集，对心、肾有毒性的药物或对正常细胞有毒性的抗癌药包封脂质体后，可明显降低药物的毒性。
4.提高稳定性：一些不稳定的药物被脂质体包封后，可受到脂质体双层膜的保护。
4. 常用的脂质体制备方法：注入法、薄膜分散法、超声波分散法、逆向蒸发法。
实验十 脂质体的制备及包封率的测定
实验十脂质体的制备及包封率的测定一、实验目的1.了解脂质体的结构和性质；2.掌握脂质体的制备方法；3.利用紫外分光光度计测定脂质体的包封率。
二、实验原理脂质体是由磷脂、胆固醇等成分组成的微粒囊，具有自组装、可逆组装、膜液相晶相转换、局部结构调整、聚合与解聚等一系列特性，同时具有高度转染能力、温和性及低毒性等优点，成为生物医学研究领域广泛关注的研究对象。
脂质体的制备方法多种多样，包括机械法、物理化学法、电化学法等，其中以醇沉法等物理化学法常用于大规模制备。
脂质体的包封率是指在脂质体中包封的药物量与药物总量的比例，通常使用紫外分光光度计在253nm处测定DNA或RNA的含量，根据所加药物与总药物量的比值计算出脂质体的包封率。
三、实验步骤1.制备脂质体将2mg的脂质体乳剂溶解在500μL的氯仿中，并加入10μL的药物（如pDNA），搅拌均匀。
将药物与脂质体混合液滴加入10mL的去离子水中，经过30分钟的振荡均匀搅拌，然后使用转移管将上清液取出。
将上清液倒入50mL的角状离心管中，加入18%硝酸钠，离心6000r/min，弃去沉淀。
将沉淀用去离子水洗涤3次，并用去离子水将沉淀重悬，最后得到脂质体的溶液。
将0.5mL脂质体溶液加入测试池，取另一个测试池作为空白对照。
在253nm处测定样品与空白的吸光度，并计算出脂质体的包封率。
四、实验注意事项1.脂质体的制备应在干燥、无风、无尘、无菌的条件下进行；2.药物与脂质体混合液的浓度应适当，以避免过度分散；3.在吸光度计测定时应注意对空白对照的处理。
五、实验结果与分析经过实验制备得到的脂质体溶液，通过紫外分光光度计测定其在253nm处的吸光度，计算出其包封率。
实验结果与所使用的药物种类和浓度等因素有关系，具体可参考文献资料。
六、实验思考题1.脂质体的结构及在生物医学领域中的应用有哪些？。
脂质体制备试验
实验十脂质体的制备及包封率的测定一、实验目的1．掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。
2．掌握用阳离子交换树脂法测定脂质体包封率的方法。
3．熟悉脂质体形成原理，作用特点。
4．了解“主动载药”与“被动载药”的概念。
二、实验指导脂质体是由磷脂与（或不）与附加剂为骨架膜材制成的具有双分子层结构的封闭囊状体。
常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团，将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体。
用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂、卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。
常用的附加剂为胆固醇。
胆固醇也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制得稳定的脂质体，其作用是调节双分子层的流动性，减低脂质体膜的通透性。
其他附加剂有十八胺、磷脂酸等，这两种附加剂能改变脂质体表面的电荷性质，从而改变脂质体的包封率、体内外其他参数。
脂质体可分为三类：小单室（层）脂质体，粒径为20~50nm，经超声波处理的脂质体，绝大部分为小单室脂质体；多室（层）脂质体，粒径约为400~3500nm，显微镜下可观察到尤如洋葱断面或人手指纹的多层结构；大单室脂质体，粒径约为200~1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多为这一类。
脂质体的制法有多种，根据药物的性质或需要进行选择。
（1）薄膜分散法：这是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理后得到小单室脂质体。
此法优点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。
（2）注入法：有乙醚注入法和乙醇注入法等。
“乙醚注入法”是将磷脂等膜材料溶于乙醚中，在搅拌下慢慢滴于55~65℃含药或不含药的水性介质中，蒸去乙醚，继续搅拌1~2h，即可形成脂质体。
（3）逆相蒸发法：系将磷脂等脂溶性成分溶于有机溶剂，如氯仿中，再按一定比例与含药的缓冲液混合、乳化，然后减压蒸去有机溶剂即可形成脂质体。
该法适合于水溶性药物、大分子活性物质，如胰岛素等的脂质体制备，可提高包封率。