土壤微生物测定取样方法
微生物土样取法
1.采集点的选择与取样。
样地选择：土壤取样时选择的样点周围区域的桉树和农作物两者均生长良好，对照点的桉树生长也要达到平均水平以上。
除去地面植被和地表覆盖物,以5点法采集（每个样点取5个平行样），每点分别采集0～20cm、20～40 cm、40～60 cm三层土壤样品各200克左右，把5平行样同层土壤进行混匀，用四分法取样，取其对角线上的两份，将每层的最后100克左右土样装入无菌聚乙烯袋后密封，重复3次。
取样点的选择如图1所示(其中黑色的四方块为取样点)：
图1
对照地也采用同样方法进行取3个样。
每个样重复三次，每个重复做五个平行样进行四分法取出100克。
注意事项：
1.为保证取样时的准确性，需用3张肥料袋薄膜纸，分别用于5
平行样的同层土样的混匀四分法取样。
2. 由于只有一个土钻，为避免不同层土样间相互污染，先对所有点的0-20cm 土样，取完再取20-40cm 土样和40-60cm 土样。
每取完5样点中的同一层时。
需将土钻内壁的土擦干净，以避免层间污染。
3. 每次土钻采样时，要去掉图示中红色部分，避免层间污染。
图2
20cm 40cm
地面
60cm。
土壤微生物量碳测定方法
土壤微生物量碳测定方法：1、试剂配制：1、0.5M K2SO4溶液：称取K2SO4 87.165g溶液于蒸馏水中，搅拌溶解，（可加热）定容至1 L。
2、去乙醇氯仿的配制：在通风柜中，量取100毫升氯仿至500毫升的分液漏斗中，加入200毫升的蒸馏水，加塞，上下振荡10下，打开塞子放气，而后加塞再振荡10下，反复3次，将分液漏斗置于铁架台上，静止溶液分层，打开分液漏斗下端的阀，将下层溶液（氯仿）放入200毫升的烧杯中，将剩余的溶液倒入水槽，用自来水冲洗。
再将烧杯中的氯仿倒入分液漏斗中，反复3次，将精制后的氯仿倒入棕色瓶中，加入无水分析纯的CaCl2 10g，置于暗处保存。
3、0.8000 mol.L-1 1/6 K2Cr2O7 标准溶液；称取39.2245g重铬酸钾（K2Cr2O7分纯）加400 ml蒸馏水加热溶解，冷却定容1L4、02 mol.L-1 FeSO4 溶液，56.0g硫酸亚铁【FeSO1.7H2O】溶解蒸馏水中，加15ml浓硫酸，用蒸馏水定容至1L5、邻啡罗啉指示剂：1.485g邻啡罗啉（C2H8N2.H2O）及0.695g硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）溶于100ml 蒸馏水，形成红棕色络合物【（FeC12H8.N2）8 2+】,贮存于棕色瓶中2、试验步骤：1、制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%的水在25℃下培养7~15d【day】，取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，精制5分钟，再抽滤5分钟，同样操作重复三次。
干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。
按照土：0.5M K2SO4=1:4（烘干土算，一般就是湿土；0.5M K2SO4=1:2），加入0.5M K2SO4溶液（空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。
土壤微生物群落在生态系统中的样品分析与测定
土壤微生物群落在生态系统中的样品分析与测定土壤是生态系统中非常重要的组成部分，同时也是最为丰富复杂的环境之一。
土壤环境中存在着大量的微生物，这些微生物与土壤之间相互作用，对土壤的物质转化、有机质分解和植物生长等方面具有重要的作用。
如何准确地了解土壤微生物群落的数量和多样性，对于揭示土壤生物学的功能和作用，以及发展生态农业，提高土壤质量和农产品产量等都具有重要意义。
一、土壤微生物群落的样品分析方法为了测定土壤微生物群落，必须进行样品的分析和测定。
在对土壤进行样品分析时，需要注意：1.土壤样品的收集在进行样品分析之前，必须进行土壤样品的收集。
土壤样品应该收集大约20-30厘米深度的土壤。
由于土壤菌群、真菌群和放线菌群在不同土层中的数量和种类也不相同，因此，收集的土壤深度需要根据研究的目的而定。
2.土壤样品的处理一般来说，土壤样品要进行粗碎，去杂质、去石头等处理。
此外，还需去除土壤中的植物残渣、动物排泄物等有机物。
在进行处理时，应该注意不破坏土壤结构和微生物活性。
3.土壤样品的储存土壤样品储存的温度和湿度等条件应根据微生物的生长需求而定。
如果储存时间长，应该对样品进行冷冻或低温干燥处理，以防止微生物的生长。
二、土壤微生物群落测定的方法以下是常用的样品测定方法：1.培养计数法该方法是通过使用培养基和适宜环境条件来促进微生物产生可见的生长。
然后通过计数方法确定细菌的数量。
虽然该方法能够对所有培养细菌进行计数，但是只适用于对可培养细菌群的测定，并且样品测定时间较长。
2.生物分子测定法该方法使用了PCR（多聚酶链式反应）等方法，通过分析土壤中微生物的核酸以及基因来测定微生物数量和多样性。
该方法可以对所有微生物进行分析，但精确度受到PCR扩增的准确度和反应的复杂性影响。
3.牢固偏最小二乘回归分析法（PLS-DA）该方法是通过采集土壤样品，并进行数据处理、筛选，最终运用牢固偏最小二乘回归分析法（PLS-DA）来测定微生物数量和多样性。
土壤微生物数量测定方法
土壤微生物数量测定方法土壤微生物是指生活在土壤中的微小生物，包括细菌、真菌、放线菌、古菌等。
土壤微生物在土壤的生物地球化学循环、有机质分解、养分转换和植物健康等过程中起着重要的作用。
因此，对土壤微生物数量的准确测定具有重要意义。
本文将介绍一些常用的土壤微生物数量测定方法。
1.瓶培法：将适量的土壤样品与适量的培养基混合，在37°C下培养约24小时，然后通过平板计数法或最凼稀释法进行测定。
2.膜过滤法：将土壤提取液通过特定孔径的膜过滤器滤过，然后将膜放置在培养基上进行细菌的生长，最后进行计数。
3.间接法：通过测定土壤样品的可培养细菌指标，如氧化还原酶、脱氢酶等的活性，从而推算出土壤中的细菌数量。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的细菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行细菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的真菌，通过计数来估算真菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使真菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌数量测定相似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行真菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的真菌基因，如18SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行真菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的放线菌，通过计数来估算放线菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使放线菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌和真菌数量测定类似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行放线菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的放线菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行放线菌数量的测定。
通过上述方法测定土壤中微生物的数量，可以了解土壤微生物对土壤生态系统功能的影响，并为土壤质量评价和科学合理利用提供依据。
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量的测定方法有很多种，一般可以分为直接和间接测定方法。
直接测定方法包括：
1. 水解法：将土壤样品经过水解处理，然后通过高密度离心和显微镜观察计数获得微生物生物量。
2. 利用滴定法：通过向土壤中添加抑制剂或适宜的滴定液，测定细菌和真菌的数量以确定生物量。
3. 融解法：将土壤样品与溶解剂混合，在特定温度下溶解土壤中的微生物，然后通过测定溶液中的生物量来计算土壤中的微生物生物量。
间接测定方法包括：
1. 培养基测定法：将土壤样品接种到特定的培养基中，利用培养基中微生物生长所需的营养物质来测定微生物生物量。
2. 脂肪酸测定法：通过提取土壤样品中的脂肪酸，并利用气相色谱仪测定来确定微生物的生物量。
3. 磷脂酸测定法：通过提取土壤中的磷脂酸，并利用色谱或质谱仪测定磷脂酸来估计微生物生物量。
这些方法各有优缺点，选择适合的方法需要考虑实验条件、样品处理的方便程度
和测定结果的准确性。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或者塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）与0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱与水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱与溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳固，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳固后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
土壤微生物量测定方法
土壤微生物量测定方法一、土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸－K2SO4提取-碳分析仪器法）1、试剂（1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 2（v : v）加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。
得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。
纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。
（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L-1]：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳，从而影响滴定终点判断和测定的准确度。
配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱，可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d。
待碳酸钠沉降后，取56 ml 50%氢氧化钠上清液（约19 mol L-1），用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。
（3）硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5 mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾，用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L，盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h即可。
（4）六偏磷酸钠溶液[ρ（Na）= 5 g 100 ml-1，pH 2.0]：称取50.0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH 2.0，用高纯度去离子水定容至1 L。
要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制；由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。
（5）过硫酸钾溶液[ρ（K2S2O8）= 2 g 100 ml-1]：称取20.0 g分析纯过硫酸钾，溶于高纯度去离子水中，定容至1 L。
值得注意过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放且最多使用7 d。
（6）磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100 ml-1]：量取37 ml 分析纯浓磷酸（85%），慢慢加入到188 ml高纯度去离子水中即可。
分离土壤中微生物的方法
分离土壤中微生物的方法土壤中的微生物是土壤生态系统中非常重要的组成部分，对土壤的物质循环、生态功能以及农田生产等都有着重要的影响。
因此，分离土壤中的微生物并进行研究是了解土壤微生物群落结构和功能的重要手段。
下面将介绍一些常用的分离土壤中微生物的方法。
1.稀释涂平法：稀释涂平法是最为常用的一种分离培养微生物的方法。
首先，将土壤样品稀释成一定的浓度；然后，将适量的稀释液均匀地涂布在培养基平板上；最后，将培养基平板的菌落进行分离鉴定。
优点是简单易行，适用于常见的土壤微生物；缺点是只适用于可培养的微生物。
2.筛选技术：筛选技术通过筛选和培养特定类型的微生物，实现对土壤微生物的分离。
常用的筛选技术有选择性培养基筛选、酶基因筛选、菌落形态和色素筛选等。
优点是可以选择性培养其中一类型的微生物；缺点是存在选择性偏倚和培养基有限性。
3.海绵法：海绵法通过悬浮土壤样品，利用海绵吸附和负压吸附的原理，分离土壤中的微生物。
首先，将土壤样品加入海绵中；然后，通过一定的操作将海绵中的微生物分离出来；最后，对分离出的微生物进行鉴定。
优点是可以分离植物根际微生物和陆地微生物；缺点是操作复杂。
4.聚合物链式反应（PCR）和16SrRNA基因测序：PCR和16SrRNA基因测序是一种通过分子生物学手段分离和鉴定微生物的方法。
首先，从土壤中提取微生物的DNA；然后，利用PCR方法扩增16SrRNA基因片段；最后，对扩增产物进行测序并分析。
优点是可以快速分离和鉴定微生物，无需进行培养；缺点是依赖于标准数据库的准确性。
5.激光共聚焦显微镜技术：激光共聚焦显微镜技术可以直接观察土壤中的微生物，并通过分析其形态特征对微生物进行分类和分离。
优点是可以快速直观地观察微生物；缺点是无法进行鉴定和培养。
综上所述，分离土壤中微生物的方法有许多种，分别适用于不同的研究目的和需求。
可以根据具体情况选择适合的方法。
同时，需要注意的是，单一的方法可能无法完全反映土壤微生物多样性，因此最好结合多种方法进行研究，以全面了解土壤中微生物的群落结构和功能。
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土壤微生物测定取样方法
确定土壤微生物的测定取样方法需要考虑以下几个步骤：
1. 确定取样点：根据研究目的和土壤类型选择取样点。
通常应选择代表性地带土壤、若干个深度（如0-10厘米，10-20厘米，20-30厘米等）的土壤样品。
2. 准备工具：取样时需要准备洁净的工具和容器，如无菌铲子、无菌采样袋或无菌容器等，以避免样品受到外界微生物的污染。
3. 取样方法：将土壤取样器或无菌铲子插入土壤中，以尽量保持样品的代表性。
每次采样之前都应彻底清洗工具，以防止交叉污染。
4. 样品处理：将采样的土壤样品放入无菌容器中，并尽快送至实验室进行分析。
如果不能立即送达实验室，样品应存储在低温环境中，以减缓微生物代谢。
在实验室中，测定土壤微生物的方法可以包括土壤微生物生物量、多样性和功能等方面的分析。
需要注意的是，不同类型的土壤微生物所需的取样方法和处理方式可能有所不同，具体的步骤和要求应根据具体研究的需求和方法的要求进行调整。