链霉菌实验操作手册
发酵工程制药实验-链霉菌发酵
实验2灰色链霉菌的活化一、实验目的学习制备高氏一号斜面培养基的方法以及斜面接种技术。
二、实验原理高氏一号斜面培养基是一种合成培养基，用于培养放线菌。
三、实验试剂与仪器1. 菌种：灰色链霉菌；2. 培养基：可溶性淀粉20g，硝酸钾1 g，氯化钠0.5 g，磷酸氢二钾0.5 g，硫酸镁0.5 g，硫酸亚铁0.01 g，琼脂20 g，水1000毫升，PH7.2—7.4（配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中）；3. 器材：天平、500mL刻度量杯、小刀、牛角匙、玻棒、纱布、18mL×180mL试管、棉花、电炉、烧杯、记号笔、酒精灯、接种环等。
四、实验步骤1. 高氏一号培养基的制备（1）按配方称量药品，加热搅拌至琼脂完全熔化，补水至1000mL。
趁热分装于18mL×180mL试管，斜面以8mL为宜。
（3）分装完毕后，塞好棉塞并将试管捆扎好。
高压蒸汽灭菌：121℃灭菌20min，灭菌后趁热摆斜面。
2. 斜面接种接种是将纯种微生物，在无菌操作条件下，移植到已灭菌并适宜该菌生长繁殖所需要的培养基中。
为了获得微生物的纯种培养，要求接种过程中必须严格进行无菌操作。
一般是在无菌室内，超净工作台或实验台酒精灯火焰旁进行。
（1）左手拿试管菌种，右手拿接种环，先将金属环烧灼灭菌，再将接种环在空白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻。
（2）左手将试管菌种放下，拿起斜面培养基。
在火焰旁用右手小指和手掌边缘拔下棉塞并夹紧，迅速将接种环伸入空白斜面，在斜面培养基上轻轻划线，将菌体接种于其上。
划线时由底部向上划一直线，一直划到斜面的顶部。
注意勿将培养基划破，不要使菌体沾污管壁。
（3）灼烧试管口，在火焰旁将棉塞塞上。
接种完毕，接种环上的余菌必须灼烧灭菌后才能放下。
（4）斜面置于28℃恒温箱中，培养5～6d观察结果。
实验3 灰色链霉菌的摇瓶种子制备一、实验目的学习制备摇瓶种子培养基的方法以及种子扩大培养技术。
链霉菌亚甲蓝染色法实验报告
链霉菌亚甲蓝染色法实验报告实验：链霉菌亚甲蓝染色法实验一、实验目的：1.了解链霉菌的形态特征；2.掌握链霉菌亚甲蓝染色法的操作步骤；3.观察链霉菌在显微镜下的染色效果。
二、实验原理：链霉菌是一种常见的革兰氏阳性细菌，其形态特征为在培养基上形成长而曲折的链状菌丝。
链霉菌亚甲蓝染色法是一种常用的染色方法，用于观察链霉菌的形态结构。
该方法利用亚甲蓝染料，将链霉菌染色后，在显微镜下观察其形态特征。
三、实验材料与方法：1.实验材料：（1）链霉菌培养基；（2）链霉菌培养物；（3）亚甲蓝溶液（0.5%）；（4）显微镜；（5）玻璃片。
2.实验步骤：（1）取链霉菌培养物，加入适量的生理盐水进行稀释，制备菌液。
（2）取一片玻璃片，用酒精消毒并晾干。
（3）滴取一滴链霉菌菌液于玻璃片上，用火焰消毒的针头将滴液均匀涂抹于玻璃片上。
（4）将涂有链霉菌菌液的玻璃片，放置在亚甲蓝溶液中浸泡5分钟。
（5）取出玻璃片，用水冲洗干净。
（6）将玻璃片放在显微镜下，使用100倍的镜头观察链霉菌的形态结构。
四、实验结果：在显微镜下观察到的链霉菌呈现为一条条长而曲折的链状菌丝，菌丝之间相互交织，形成复杂的网络状结构。
链霉菌染色后呈现为蓝色，菌丝清晰可见。
五、实验讨论：链霉菌亚甲蓝染色法是一种简单而有效的染色方法。
亚甲蓝是一种碱性染料，具有较强的亲和力，能够与链霉菌细胞壁上的负电荷结合，使菌丝呈现出蓝色。
这种染色方法可以清晰地显示链霉菌的形态结构，有助于对其生长特征和菌株的鉴定。
在本实验中，我们观察到链霉菌在显微镜下的形态结构，即长而曲折的链状菌丝。
链霉菌的菌丝之间交织在一起，形成了复杂的网络状结构。
这种形态特征是链霉菌的重要鉴定特征之一，可以用于区分链霉菌和其他细菌。
六、实验总结：通过本次实验，我们了解了链霉菌的形态特征，并掌握了链霉菌亚甲蓝染色法的操作步骤。
链霉菌亚甲蓝染色法是一种常用的染色方法，能够清晰地显示链霉菌的形态结构。
通过染色后的链霉菌菌丝呈现出蓝色，使其在显微镜下更容易观察和鉴定。
实验室常用生化试剂配方
实验室常用生化试剂配方1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版）抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml) 10025(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 3525(0.15M NaOH配) 50(DMSO配)50 50MM使用终浓度（μg/ml）链霉菌2CMYEME大肠杆菌LA或LB氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMPAmpicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprimcat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph－* 10 10 2 5 10 5 100 10－－ 25 25 20 25 10 － 50－－－－－－ 2.5 － 550-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30注意事项：(1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装；（2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并设置阴性对照；（3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。
有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio（4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易挥发，有剧毒；（5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存；（6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整；(7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂对自身的损伤及对工作环境的污染。
链霉菌实验操作手册
链霉菌实验室操作手册第一章培养基抗生素生长因子 (3)常用抗生素及其使用浓度 (3)LB（Luria-Bertani）培养基 (3)LA (3)基本培养基（MM） (3)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用 (4)YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌） (4)TSBY （1L）（液体培养链霉菌） (4)MS培养基 (5)2CMY培养基（用于井岗的接合转移） (5)YMS培养基（阿维，井岗产孢） (5)YD培养基 (5)生长因子补充物的使用浓度 (6)第二章DNA基本操作 (7)大肠杆菌质粒的抽提 (7)酶连反应 (7)DNA片段凝胶回收 (8)DNA纯化 (9)E.coil总DNA的提取 (9)链霉菌质粒DNA的小量提取（还需改进） (10)去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara的CIAP使用说明） (10)AT克隆（详见说明书） (10)Southern Blot (11)第三章PCR及相关技术 (13)PCR (13)PCR重组（详见《PCR技术实验指南》p429 重叠延伸技术） (14)PCR定点诱变（DpnI法） (14)第四章基因片段转移技术 (15)大肠杆菌CaCl2法制备感受态细胞及DNA转化 (15)DNA转化 (15)大肠杆菌质粒的快速检测 (15)接合转移（详见英文《手册》249页） (16)链霉菌原生质体的制备 (16)链霉菌原生质体的转化 (17)PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化 (17)第五章RNA操作技术 (19)链霉菌总RNA的抽提 (19)链霉菌的RT-PCR（promega RT kit） (19)第六章蛋白质基本操作技术 (21)SDS-PAGE，考马斯亮蓝染色 (21)大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG诱导的表达体系）： (21)链霉菌总蛋白抽提： (22)大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7表达系统如BL21菌株中的pET系列表达体系）： (22)Western Blot (23)第七章遗传作图相关技术 (25)链霉菌孢子悬液的制备 (25)链霉菌中NF的证明 (25)孢子杂交 (25)在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因 (25)第八章其他技术 (27)链霉菌菌种保藏 (27)检测链霉菌淀粉酶的活性 (27)第一章培养基抗生素生长因子常用抗生素及其使用浓度抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml)使用终浓度（μg/ml）链霉菌大肠杆菌M M2CM Y E M E L A或L B氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素Ampicillin, AmpChloramphenicol, CmlHygromycin, HygKanamycin, KmSpectinomycin, SpcStreptomycin, StrThiostrepton, ThioErythomycin, EryApramycin, Amblacathygaac或aphaadAstrtsrerm Eaac(3)IV10025(无水乙醇配)5025505025(DMSO配)10050R10102?5010510010R－2550502510－50R－－－50－2.5－5050-1002550505025不敏感2030-50*–表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制*此表仅供参考！！！*R表示不敏感*Km 和Am有交叉抗性，所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并作好对照。
《具有抗稻瘟病菌活性的链霉菌ⅠT2和ⅡW1菌株的分离鉴定及其接合转移方法的建立》
《具有抗稻瘟病菌活性的链霉菌ⅠT2和ⅡW1菌株的分离鉴定及其接合转移方法的建立》一、引言稻瘟病是一种对水稻生产造成严重威胁的病害，而链霉菌因其抗稻瘟病菌活性被广泛研究。
为了有效应对稻瘟病病害，本文通过深入研究，成功分离并鉴定了具有抗稻瘟病菌活性的链霉菌ⅠT2和ⅡW1菌株，并建立了其接合转移方法。
二、材料与方法（一）材料本实验所使用的材料包括：稻瘟病感染的水稻叶片、土壤样品、培养基等。
（二）方法1. 链霉菌的分离与纯化采用涂布法在选择性培养基上分离链霉菌。
经过多次划线纯化，得到纯种链霉菌。
2. 链霉菌的鉴定通过形态观察、生理生化试验及分子生物学方法（如16S rRNA基因序列分析）对链霉菌进行鉴定。
3. 接合转移方法的建立采用原生质体接合转移技术，通过电击等方法诱导链霉菌原生质体的形成，然后进行DNA的接合转移。
三、实验结果（一）链霉菌的分离与纯化经过多次尝试和优化，成功从稻田土壤中分离出链霉菌ⅠT2和ⅡW1两个菌株，并在选择培养基上纯化。
（二）链霉菌的鉴定通过对ⅠT2和ⅡW1菌株的形态观察、生理生化试验及分子生物学方法鉴定，确认其均为链霉菌属。
其中，ⅠT2和ⅡW1菌株具有抗稻瘟病菌活性。
（三）接合转移方法的建立我们成功建立了链霉菌ⅠT2和ⅡW1菌株的接合转移方法。
通过原生质体接合转移技术，实现了DNA的高效接合转移。
其中，电击等物理方法被证明能够有效地诱导原生质体的形成。
通过多次实验，我们优化了接合转移的条件，提高了接合转移的效率。
四、讨论本研究成功分离并鉴定了具有抗稻瘟病菌活性的链霉菌ⅠT2和ⅡW1菌株，并建立了其接合转移方法。
这为进一步研究链霉菌的生物学特性及其在稻瘟病防治中的应用提供了重要的基础。
在链霉菌的分离与纯化过程中，我们采用了多种方法进行优化，以提高分离纯化的效率。
在鉴定过程中，我们不仅进行了形态观察和生理生化试验，还采用了分子生物学方法进行鉴定，以确保鉴定的准确性。
此外，我们还研究了不同因素对接合转移效率的影响，为提高接合转移效率提供了重要的参考依据。
链霉菌感受态制备
链霉菌感受态制备
链霉菌感受态制备是指培养链霉菌（ Streptomyces）细菌以产生其次级代谢产物。
次级代谢产物是链霉菌细菌在特定条件下产生的化合物，这些化合物对医药、农业和工业等领域有着重要的应用。
以下是一般的链霉菌感受态制备步骤：
1.链霉菌培养：
•选取合适的菌株：选择具有产生特定次级代谢产物潜力的链霉菌菌株。
•培养基准备：准备适宜的培养基，其中包括合适的碳源、氮源、微量元素和其他必要的营养物质。
2.发酵过程：
•接种培养基：将链霉菌接种到培养基中，培养并进行前期发酵过程。
•调控培养条件：控制发酵过程中的环境因素，如温度、pH、氧气供应和搅拌速度等。
这些条件会影响细菌的生长和次级代谢产物的生成。
•感受态诱导：在特定的生长阶段，通过改变培养条件（ 如添加特定的诱导剂或改变营养物质含量）来诱导链霉菌产生次级代谢产物。
3.次级代谢产物提取和分离：
•菌体分离：通过离心或过滤等方法分离菌体。
•次级代谢产物提取：利用化学方法或生物技术手段从菌体培养物中提取次级代谢产物。
•分离纯化：通过色谱、层析等技术对提取的混合物进行分离和纯化，得到目标产物。
4.评估和应用：
•活性评估：对获得的次级代谢产物进行活性评估和检测，确定其可能的生物学活性和潜在应用价值。
•应用研究：将获得的活性物质进行进一步研究，包括药理学、医药化学、生物学等方面，以确定其在医学、农业、工业等领域的应用潜力。
链霉菌感受态制备是一个复杂的过程，需要仔细设计实验条件和严格控制培养环境，以获得理想的次级代谢产物。
同时，对产物的提取、分离和评估也需要具备专业的技术和设备。
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印片法链霉菌实验报告
印片法链霉菌实验报告
实验目的：
本实验旨在研究印片法对链霉菌进行分离和鉴定的效果，为链霉菌的研究提供实验数据和参考。
实验材料：
1. 链霉菌培养基
2. 无菌培养皿
3. 恒温培养箱
4. 实验室常用器材和试剂
实验步骤：
1. 准备工作：将链霉菌培养基培养至适宜的生长状态，确保培养基无污染。
2. 取一块无菌的培养基，倒入培养皿中，并均匀摊开。
3. 取一支火针，在火焰中消毒并冷却后，将其沾取链霉菌培养液的菌落，然后将其均匀涂抹在培养基上。
4. 用无菌的铁环或火针，在链霉菌菌落上进行串联接种，即将链霉菌菌落划过培养基表面，使菌落由密集到稀疏排列。
5. 将培养皿盖好，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，通常为24-48小时。
6. 观察菌落生长情况，并记录其形态、颜色、直径等特征。
7. 根据菌落的形态特征，进行初步的链霉菌鉴定。
8. 如有需要，可进行进一步的生化实验或分子生物学实验，以确认链霉菌的鉴定结果。
实验结果：
根据实验观察，链霉菌在培养基上形成了典型的菌落，呈现出特定的形态和颜色。
菌落直径在一定范围内，具有一定的变异性。
初步鉴定结果表明，该菌落为链霉菌。
实验结论：
本实验通过印片法成功分离和鉴定了链霉菌。
印片法是一种简单、快速且有效的方法，可用于微生物的分离和鉴定。
该实验结果可为链霉菌的进一步研究提供参考和基础数据。
农用细黄链霉菌使用说明书
农用细黄链霉菌使用说明书
农用细黄链霉菌（Bacillus subtilis）使用说明书
1. 产品介绍
农用细黄链霉菌是一种对多种病原菌有抑制作用的微生物制剂，广泛应用于农业生产中的病害防治。
2. 使用方法
2.1 喷雾
将适量的农用细黄链霉菌制剂溶解于适量的水中，按照农作物叶面的湿度和药液浓度的要求进行喷雾处理。
2.2 种植基质处理
在种植基质中添加适量的农用细黄链霉菌制剂，并与基质充分混合，确保农作物根系与制剂接触。
3. 使用剂量
根据不同的作物病害发生程度和作物生长阶段，以及制剂浓度可能的误差等因素进行适量的剂量调整。
4. 注意事项
4.1 使用前请先进行小范围试验，确保农用细黄链霉菌对目标
病原菌有有效的抑制作用，并不对作物产生明显的伤害。
4.2 适量使用，避免过量喷洒或过度浓度的种植基质处理，以
免对作物产生不良影响。
4.3 储存于阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温环境，以
免降低制剂活性。
4.4 使用过程中请佩戴防护手套、口罩等个人防护装备，避免
直接接触制剂。
5. 包装和保存
农用细黄链霉菌制剂按照标准包装，密封保存，避免潮湿和温度过高的环境。
请在保质期内使用，并在开封后尽快使用完毕。
6. 效果评估
为了评估产品的效果，请在施用后一定时间内观察农作物的生长和病害的发展情况，根据实际情况进行调整并进行效果评估。
7. 技术咨询
如需了解更多关于农用细黄链霉菌的技术信息和应用建议，请咨询相关专业人士或联系产品供应商。
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链霉菌实验室操作手册第一章培养基抗生素生长因子 (3)常用抗生素及其使用浓度 (3)LB（Luria-Bertani）培养基 (3)LA (3)基本培养基（MM） (3)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用 (4)YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌） (4)TSBY （1L）（液体培养链霉菌） (4)MS培养基 (5)2CMY培养基（用于井岗的接合转移） (5)YMS培养基（阿维，井岗产孢） (5)YD培养基 (5)生长因子补充物的使用浓度 (6)第二章DNA基本操作 (7)大肠杆菌质粒的抽提 (7)酶连反应 (7)DNA片段凝胶回收 (8)DNA纯化 (9)E.coil总DNA的提取 (9)链霉菌质粒DNA的小量提取（还需改进） (10)去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara的CIAP使用说明） (10)AT克隆（详见说明书） (10)Southern Blot (11)第三章PCR及相关技术 (13)PCR (13)PCR重组（详见《PCR技术实验指南》p429 重叠延伸技术） (14)PCR定点诱变（DpnI法） (14)第四章基因片段转移技术 (15)大肠杆菌CaCl2法制备感受态细胞及DNA转化 (15)DNA转化 (15)大肠杆菌质粒的快速检测 (15)接合转移（详见英文《手册》249页） (16)链霉菌原生质体的制备 (16)链霉菌原生质体的转化 (17)PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化 (17)第五章RNA操作技术 (19)链霉菌总RNA的抽提 (19)链霉菌的RT-PCR（promega RT kit） (19)第六章蛋白质基本操作技术 (21)SDS-PAGE，考马斯亮蓝染色 (21)大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG诱导的表达体系）： (21)链霉菌总蛋白抽提： (22)大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7表达系统如BL21菌株中的pET系列表达体系）： (22)Western Blot (23)第七章遗传作图相关技术 (25)链霉菌孢子悬液的制备 (25)链霉菌中NF的证明 (25)孢子杂交 (25)在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因 (25)第八章其他技术 (27)链霉菌菌种保藏 (27)检测链霉菌淀粉酶的活性 (27)第一章培养基抗生素生长因子常用抗生素及其使用浓度抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml)使用终浓度（μg/ml）链霉菌大肠杆菌M M2CM Y E M E L A或L B氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素Ampicillin, AmpChloramphenicol, CmlHygromycin, HygKanamycin, KmSpectinomycin, SpcStreptomycin, StrThiostrepton, ThioErythomycin, EryApramycin, Amblacathygaac或aphaadAstrtsrerm Eaac(3)IV10025(无水乙醇配)5025505025(DMSO配)10050R10102?5010510010R－2550502510－50R－－－50－2.5－5050-1002550505025不敏感2030-50*–表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制*此表仅供参考！！！*R表示不敏感*Km 和Am有交叉抗性，所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并作好对照。
*Hyg易见光分解，应用锡箔纸包好。
*有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, VioLB（Luria-Bertani）培养基胰蛋白胨10g，酵母抽提物5g，NaCl 5g，葡萄糖1g，蒸馏水加至1000ml，pH7.3左右（灭菌后第一次用时还要调一次）LALB中加入终浓度为 1.5-2%的琼脂粉(不同的琼脂加的量不同，如青岛琼脂大概需1.5%，而华美的需要2%)。
＊做蓝白斑筛选时不加葡萄糖基本培养基（MM）溶液：L-天冬酰胺0.5g，K2HPO4 0.5g,MgSO4·7H2O 0.2g,FeSO4·7H2O 0.01g,蒸馏水至1000ml将每250ml溶液分装到装有2.5g琼脂的500ml三角瓶中，灭菌，使用时每瓶加入50％葡萄糖（8磅灭菌）5ml，调pH7.0。
配置MM的琼脂有lab agar、Ice agar(IA)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用蔗糖103gK2SO4 0.25gMgCl2·6H2O 10.12g葡萄糖10gDifco酪蛋白氨基酸0.1g微量元素溶液2mlOxoid酵母提取物5gTES 5.73g加蒸馏水至1000ml称取5.5g Difco琼脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然后塞上塞子后8磅灭菌（114度15分种）。
使用时，将培养基融化，每瓶中加入：KH2PO4(0.5%) 2.5mlCaCl2·2H2O(5M) 1mlL-脯氨酸(20%) 3.75mlNaOH(1M)调pH至7.3对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子（请参考《手册》）YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）Oxoid酵母提取物3gOxoid蛋白胨Tryptone 5g麦芽提取物（BD公司原Difco公司218630）3g葡萄糖10g蔗糖＊340g蒸馏水至1000ml高压灭菌后加入：（8磅灭菌，113－114゜C，15min，自动灭菌锅一次不能灭过多东西，否则会灭不彻底。
）MgCl2·6H2O(2.5M) 2ml/L制备原生质体时，还要加入：甘氨酸（20%）＊25ml/L＊蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
＊甘氨酸被认为能干扰链霉菌细胞壁的形成，使菌丝体片段更短，利于溶菌，有利于外源DNA的导入。
TSBY （1L）（液体培养链霉菌）Oxoid胰胨豆汤粉（TSB）30g蔗糖＊340gOxoid酵母抽提物5g蒸馏水至1000ml*不同菌株培养需要不同浓度的蔗糖，蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
MS培养基将黄豆饼粉加蒸馏水煮2到3小时，用纱布过滤得到滤液，将每250ml滤液分装到装有5g 琼脂，5g 甘露醇的500ml三角瓶中，10磅灭菌，使用时调pH7.2-7.3。
2CMY培养基（用于井岗的接合转移）可溶性淀粉10g胰蛋白胨2gNaCl 1g(NH4 )2SO4 2gK2 HPO4 1gCaCO3 2g无机盐溶液* 1 ml琼脂20g蒸镏水1000 mlPH7.2无机盐溶液(每升)FeSO4 .7H2 O 1gMgCl.6 H2 O 1gZnSO4. 7H2 O 1gYMS培养基（阿维，井岗产孢）酵母抽提物4g可溶性淀粉4g麦芽糖10gCoCl. .6 H2 O 5mg琼脂20g蒸镏水1000 mlPH7.2YD培养基酵母抽提物4g麦芽糖10g葡萄糖4gMgCl 2gCaCl 1.5g琼脂15g蒸镏水1000 mlPH7.2生长因子补充物的使用浓度天蓝色链霉菌1258 、J1501等都是营养缺陷型菌株，培养这些菌株时一般需向培养基中补加营养因子，使用浓度如表生长因子补充物的使用浓度表化合物储存液（mg/ml）1终作用浓度（μg/ml）组氨酸（Histidine）10 50其它氨基酸27.5 37腺嘌呤，鸟嘌呤，1.5 7.5胸腺嘧啶，尿嘧啶维生素0.1 0.51.储存液用无菌去离子水配置，8磅灭菌后4o C保存。
2.对于半胱氨酸营养缺陷型菌株，补充光氨酸。
第二章DNA基本操作大肠杆菌质粒的抽提苯酚/氯仿溶液抽提法1.接种5ml LB，37℃摇床过夜培养（12小时）2.离心，3000rpm，5min去上清3.振荡混匀沉淀，分装在2个离心管中，spin一下，吸去上清，加入150μl的溶液I（50mmol/L葡萄糖, 25mmol/L Tris·Cl(PH8.0), 10mmol/L EDTA(PH8.0) 在10lbf/in2（6.895×104Pa）高压蒸气下灭菌15min（8磅），贮存于4℃），剧烈振荡5分钟打散菌体（菌体不打散容易在产物中出现较多蛋白）。
4.加入300μl溶液II（0.2mol/LnaOH, 1%SDS, 用2倍的溶液现配现用）后立即振荡混合均匀，处理2分钟后加入225μl溶液III（5mol/L乙酸钾60ml，冰乙酸11.5ml，水28.5ml）混合均匀，12000rpm离心5min，取上清液中于新的离心管。
5.加120μl酸性苯酚/氯仿溶液，振荡混匀，12000rpm离心5min，再取上清液中于新的离心管中。
6.用120ul氯仿重复操作5。
7.加等体积的异丙醇或2倍体积的乙醇，混匀，12000rpm离心7min。
8.沉淀用70%乙醇洗涤两次,每次10min。
50℃烘干后加适量无菌去离子水（ddH2O）溶解，-20℃保存。
氯化锂抽提法1.前四部同苯酚/氯仿溶液抽提法（用Solution I II III处理）2.加等体积的异丙醇，混匀，沉淀DNA，12000rpm离心7min。
去上清，尽量去干净。
3.用少量70％乙醇洗一下（洗去异丙醇），离心去尽酒精，50℃烘干沉淀，用适量ddH2O（100ul）充分溶解（可在50度水浴中助溶）后加入4/5体积的氯化锂溶液（浓度约10mol/L）处理1min沉淀RNA和蛋白。
4.12000rpm离心5min，取上清液于新的离心管中，用等体积的异丙醇混匀，12000rpm离心8min，去上清。
5.将沉淀用70%乙醇洗涤两次,每次10min。
50℃烘干后加一定量的无菌去离子水（ddH2O）溶解，-20℃保存。
酶连反应一般采用10μl反应体系：T4连接酶1μl ，连接酶缓冲液1μl ，外源片段与载体按DNA 摩尔含量3:1加入即可。
如果是粘端连接，则需把外源片段和载体的混合物在50度处理10分钟使粘端变性，然后立即放入冰中5分钟。
平端连接采用14度，粘端连接采用16度，连接4小时以上（一般可过夜）。
＊外源片段与载体按DNA 摩尔含量为3:1或外源更多。
DNA片段凝胶回收1试剂盒回收 (离心法)（详见说明书）(1)在长波紫外灯下切下含有目标DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸干凝胶表面的液体并切小.计算凝胶的重量,该重量作为一个凝胶体积(如1oomg=1ooul)(2)根据凝胶的浓度,加DE-A 液凝胶浓度DE-A溶液体积≤1.0% 3个凝胶体积≤1.5% 4 个凝胶体积≤2.0% 5 个凝胶体积混匀后于75o C加热,(低熔点琼脂糖凝胶于45o C加热),间断混合,直到凝胶熔化(6-8分钟). (3)加0.5个DE-A体积的DE-B溶液,混匀(是否需调整PH值,见注意事项1);当分离的DNA片段小与400bp 时,加入异丙醇至终浓度为20%;(4)吸3中的混合液,转移到DNA制备管,3600rpm离心1分钟.如制备管中有残留,适当提高速度,再离心1分钟,去滤液;(5)将制备管置回离心管,加0.5ml W1溶液,3600rpm离心30,弃滤液;(6)将制备管置回离心管,加0.7ml W2溶液,3600rpm离心30,弃滤液,重复一次; （W2中含有酒精，应保证瓶子密封。