食品中苯并芘的提取及测定方法改进
食品中苯并[a]芘的测定
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环已烷重复提取
环已烷层洗涤（水，125mL×2）
浓缩至25mL
（2）净化 装柱 加样吸附 洗脱（苯30mL） 减压浓缩至0.1~0.5mL
（3）分离 点样 展开（95%乙醇：二氯甲烷=2：
1） 观察（紫外灯照射） 剪下斑点，加苯浸泡溶解。
（4）测定
食品中苯并[a]芘的测定
一、苯并[a]芘的结构与性质
简称为BaP
针状结晶，沸点310~320℃
溶解特性：水中溶解度为0.004~0.012mg/L
烷、苯、甲苯、
易溶于石油醚、环已烷、已
二甲苯、丙酮
稍溶于乙醇、甲醇
化学性质：稳定，常温下不与硫酸作用，能与硝酸、
高氯酸 反应
碱性条件下稳定
荧光特性：紫外线（360nm）下产生典型紫色荧光
欧共体
0.03ug/kg
调料
德国
1.0ug/kg
肉及肉制品
意大利
食品及饮料
荷兰
1.0ug/kg
肉制品
北欧国家 肉制品
1.0ug/kg
3、一些国家的每日允许摄入量(ug)
0.03ug/kg
五、防治措施 ➢ 加强环境治理 ➢ 改变生产方式 ➢ 改进烹调和加工方法 ➢ 改变饮食习惯 ➢ 去毒处理
六、测定方法
苯并[a]芘标准液
苯并[a]芘标准贮备液：100ug/mL
3、仪器
脂肪抽提器
层析柱（10cm×350cm）
层析缸
K-D浓缩器
紫外灯
荧光分光光度计
4、操作方法 （1）样品提取 粮食及低水分含量食品 回流抽提，碱皂化6~8h（90下） 皂化液趁热转移至分液滤斗 洗涤接收瓶（50mL95%乙醇） 加水（100mL）振摇提取 静置分层 下层二次提取（70mL环已烷） 合并环已烷 洗涤环已烷层（水，100mL×3） 洗涤水环已烷提取（30mL×2） 浓缩至40mL（60 ℃水浴中）
高效液相色谱法测定肉制品中的苯并芘
１ 材料与方法 １ 仪器与试剂 ． １ 固相萃取仪 ： 美国 Ｓ ｐｌ ； ｕ ｅ ｏ高效液相色谱仪一 ｃ 荧光
检测器 ： ｇ ｅｔ ２０ Ｊ ９ 一Ⅱ超声细胞破碎仪 ： Ａ ｉｎ ０ ； Ｙ ２ ｌ １ 宁波
量应在 ５ｂ ／ｇ以下， ｇ ｃｋ 目前 国 内 ３ 一苯并 ｆ 芘 的检 测 ， ４ ａ ） 方法不成熟 ， 回收率不高， 样品处理时间长； 主要应 国外 用高效液相色谱法 、 气相色谱一 质谱联用法等先进的检
Ａｂ ｔａ ｔ ｔｏ ａ ｅ ｅｏ ｅ ｏ ｅｅｍｉｉｇ ３４－ ｅ ｚ （ ）ｐ ｒｎ ｎ ｍｅｔｐｏ ｕ ｔ，ｉ ｎ ｌｄ ｄ ｓｒ ｃ：Ａ ｍｅｈ ｄ ｗ ｓｄ ｖ ｌｐ ｄ ｆｒｄ ｔｒ ｎｎ ， ｂ ｎｏ ａ ｙｅ ｅ ｉ ａ ｒｄ ｃｓ ｔ ｃｕ ｅ
ｓ ｎｃ ｔ ｎ ｅ ｔａ ｔ ｎ ｕ ｉ ｃ ｔｏ ｙ ｌｑ ｉ － ｉｕ ｄ ｉｔｉｕ ｉｎ ｎ ｅ ｏ ｔｍｉ ａｉｎ ｙ Ｃ１ Ｓ Ｅ ｏｕ ， ｏ ｉａ ｉ ｘｒｃ ｉ ，ｐ ｒｆ ａｉｎ ｂ ｉ ｕｄ ｌ ｉ ｄｓｒｂ ｔ ，ａ ｄ ｄ ｃ ｎ ａ ｎ ｔｏ ｂ ８ Ｐ ｃ ｌｍｎ ｏ ｏ ｉ ｑ ｏ
３ 一苯并ｆ 芘［ｅｚｐ ｒ ｅ 简称 Ｂ ｐ 是一种 由 ５ ， ４ ａ ｂｎｏｙｅ ， ） ｎ ａ，
个苯环构成的多环芳 烃， 常温下为无 色至淡黄色针状
晶体 ， 性质稳定 ， 不溶于水 ， 微溶于乙醇 、 甲醇 ， 溶于苯 、
固相萃取技术净化 ， 用高效液相色谱 ， 荧光检测器对 肉
ＨＵＱ － ｅＳ Ｅ ｉｗ ｉ Ｉ ｎ Ｙ ＯＴｎ， Ｏ ＧＹ ｉ ｉ，Ｈ ＮＬ－ ｅ Ｑ ， Ａ ｉｇＧ Ｎ ｅ ｊ ， Ｍｉ （ ｕｈ ｕ ｕｈ ｐ ｒ ｓ ｎ ｎ ｓｅｔｎＳ ｔ ｎ Ｈ ｚｏ １０ ０ Ｚ ｅａｇ Ｃ ｉ ） Ｈ ｚｏ ａ ｙ ｕ ｅｖ ｉ ｄ ｎｐｃ ｏ ａ ｏ， ｕｈ ｕ ０ ， ｈｊ ｎ， ｈ ａ Ｑ Ｓ ｉｏ ａ Ｉ ｉ ｔｉ ３ ３ ｉ ｎ
液相色谱法测定油性食品中苯并_芘的方法改进
1
1． 1
材料与方法
材料 试剂 乙腈、 乙醇（ 色谱级 ） ： 美国 MERCK 公司； 氢氧
1． 1． 1
化钾（ 优级纯 ） ； Florisil 弗罗里硅土小柱； 苯并芘标 准品 （ 浓度 12． 0 mg / mL ） ： 中国计量科学研究院； 1 mol / l 氢氧化钾乙醇水溶液。 标准贮备液 （ 1 mg / l ） ： 准确称取苯并芘对照品 0． 83 mL， 用乙腈溶解并定容至 10 mL， 置于 4 ℃ 冰 箱保存。 标准工作液： 乙腈稀释液配成 0． 5 ng / mL 苯并 芘工作液（ 可根据需要制成其他适当浓度的标准工 作液） ， 标准工作液一定要现配现用。 其余试剂均为分析纯。 HPLC 用水为超纯水， 其余为一级水。 1． 1． 2 1． 1． 3 材料 仪器和设备 橄榄油、 罗非鱼、 猪肉： 市售。 Waters 2995 － 2475 高效液相色谱仪 （ 配荧光检 测器） ： 美国 Waters 公司； SUPELCO 固相萃取装置： 北京康林责任有限公司； T25 均质器： 德国 IKA 公 司； 涡旋振荡器： 德国 IKA 公司； 氮吹仪： caliper life sciences（ 杭州艾普仪器设备有限公司 ） ； 离心机： 上 海安亭科学仪器厂。 1． 2 1． 2． 1 方法 样品制备与保存 取可食部分切碎， 混匀， 密封， 将试样置于 － 18 ℃ 冷冻保存。 1． 2． 2 试样提取 称取 2． 0 g 混匀试样， 加入 10 mL 1 mol / l 氢氧 化钾乙醇溶液均质 2 min， 于 80 ℃ 的水浴中皂化 3 h， 冷却到室温， 加入 10 mL 超纯水， 摇匀后， 再加入 15 mL 环己烷， 4 000 并在涡旋混合器上混匀 2 min， r / min 离心 3 min。 转移上清液。 并再往样品中加 入 10 mL 环己烷， 重复操作， 合并两次提取液， 氮吹 至 3 ～ 5 mL， 得到浓缩溶液。 1． 2． 3 净化 采用弗罗里硅土 SPE 柱净化处理， 使用前用 6 mL 环己烷润湿活化， 再将浓缩液移入柱中， 并收集 流出液， 再 用 6 mL 环 己 烷 淋 洗 柱 子， 合并收集滤 液， 浓缩后用 1 mL 乙腈溶解试样， 过 0． 45 μm 微孔 滤膜， 待上机测定。 1． 2． 4 测定条件与方法 5 μm， 250 mm × 4． 6 色谱 柱： XBridge C18 柱， mm（ 内径） ； 流动相为 V（ 水） ∶ V （ 乙腈 ） = 15∶ 85 ； 流
茶油精炼中去除苯并芘残留的工艺改进_罗存回
专家的协助下，对现有工艺流程进行了改进。采用
杂质 磷酸 ＋ 软水 碱液 废水 活性白土 白土渣 柠檬酸
↑
↓↓
↑
↓
↑↓
毛茶油→过滤→计量→脱胶→脱酸→分离→干燥→脱色→过滤→脱臭→
过滤→ 水洗 →冷却→ 离心 → 静置 → 冷冻 → 分滤 →液体油→计量→成品油。
↓
↑
↓
↑
↓
滤渣 热水 ＋ 分离介质
分层 冷却剂 底层分离物
摘要：通过工艺改进，最大限度地去除苯并芘残留，为茶油精加工提供参考。以毛茶油为材料，分别对传统工
艺、改进工艺的精制茶油和底层分离物进行取样，按照 ＧＢ／Ｔ ２２５０９—２００８ 所列注的苯并芘色谱条件，采用标准
曲线法检测苯并芘含量。结果显示，当温度精确控制在 － ２￣－ ４ ℃时，改进工艺所取得的分离效果最好。改进后
Ｘ 学术 交流
茶油精炼中去除苯并芘残留的工艺改进
罗存回 1， 3，罗钰珂 2，＊ 李宗军 1
（１． 湖南农业大学 食品科技学院，湖南 长沙 ４１０１２８；２． Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｕｄｄｅｒｓｆｉｅｌｄ，Ｑｕｅｅｎｓｇａｔｅ，Ｈｕｄｄｅｒｓｆｉｅｌｄ，Ｗｅｓｔ Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ ＨＤ１ ３ＤＨ，ＵＫ；３． 湖南省食品药品检验研究院，湖南 长沙 ４１０００１）
２ 当前的茶油精炼传统工艺流程
２．１ 食品级茶油精炼传统工艺流程 食品级茶油精炼生产工艺已经相当成熟，其工
艺流程：
杂质 磷酸 ＋ 软水 碱液 热水 废水
活性白土 白土渣
↑
↓↓↓↑
↓↑
毛茶油→过滤→计量→脱胶→脱酸→水洗→分离→干燥→脱色→过滤→
脱臭→冷却→过滤→冷冻→过滤→液体油→计量→成品油。
食品中苯并芘的研究进展_史巧巧
项（ 2010BS010） 。
并芘纯品，合 成 证 明 了 其 化 学 结 构，并 进 行 动 物 实 验，诱 导 小 鼠 产 生 了 皮 肤 癌，由 此，苯 并 芘 被 确 认 为 是第一个化学环境致癌物［4］。
3.4 酶联免疫吸附法
ELISA 检测法是免疫学检测的重要方法，其原理 是将抗原或 抗 体 吸 附 在 固 相 载 体 的 表 面，再 将 其 与 酶标记的二 抗 结 合，根 据 加 入 底 物 的 颜 色 反 应 来 判 定实验结果［26］。邓安平［27］通过对苯并芘的 6、7 和 10 位进行五种 不 同 的 化 学 修 饰，使 其 末 端 带 有 活 性 基 团羧基，再分别与牛血清白蛋白偶联，偶合物作为免 疫原对 BALB / c 小鼠进行免疫，将接受免疫的小鼠的 脾细胞与肿瘤细胞融合，融合细胞在培养液中培养， 用间接 ELISA 对培养液中的抗体进行筛选和质量鉴 定，共筛选出 14 种与苯并芘有特异性反应的单克隆 抗体，再经单克隆抗体的筛选和实验条件的优化，建 立了灵敏度高和选择性好的测定苯并芘的 ELISA 分 析法，实现了对苯并芘的快速检测。
Abstract： Benzopyrene is a kind of polycyclic aromatic compounds which has strong carcinogenic. It is easy to
produce when cooking food in a high temperature，and its food safety problem has attracted increasing attention.
食品中苯并芘的污染及检测方法研究进展(ppt 31页)
合反应,形成B(a)P,附着于食物表面,这是烤 制食物中B(a)P的主要来源;
Байду номын сангаас
c、由于熏烤的鱼或肉等自身的化学成分—— —糖和脂肪,其不完全燃烧也会产生苯并芘 以及其他多环芳烃。比如熏鱼,制作过程中 其脂肪燃烧不完全,加上烟雾的污染,成品 中苯并芘含量高达67μ g/kg;
3、纸层析一灾光分光光度法
原理：水中多环芳烃能被环己烷萃取并 为活性氧化铝所吸附，以苯洗脱、浓缩后 乙酰化滤纸上层析，将多环芳烃分离，苯 并比在紫外光照射卜呈蓝紫色荧光斑点， 取下以丙酮洗脱，其洗脱液荧光强度与苯 并花含量成正比，可定量测定。
4、同位素稀释气相色谱串联质谱法测定海产品中的苯并比 的残留量
2、研究熏烤食品的成分对苯并(a)芘的影响
熏制方式对不同种类动物性食品中苯并(a)芘含 量也产生直接的影响。实验证明，炭火烤制羊肉中 BAP为10.75±2.56μ g/kg，而炭火烤制鸡肉中BAP 为5.68±1.47μ g/kg，二者差异显著(P<0.05)。二 者之间的差异可能是由于羊肉的脂肪含量较高，在 烤制过程中较鸡肉更易产生脂肪滴落引起燃烧现象 ，从而使烤制成的羊肉中BAP 含量更为增高。因此 ，在熏烤食品时，如果能避免脂肪滴落，也能减少 苯并(a)芘对人体的危害。
并可形成致突变化学物质。因此,在食品加工过程 中应尽量减少使用煎炸的方式,必须用煎炸时也应 注意火候的掌握。
（2）、炒的方式
通常炒菜前都要把食用油烧开,而食用 油加热到一定温度会产生油烟,这种烟雾中 含有许多具有致癌作用的烃类有机物。日 常炒菜时,不要使油长时间处于烧开状态, 注意控制油烟(比如注意厨房通风,有条件 的应在做饭时使用抽油烟机)。炒完一道菜 后,锅四周往往会产生一些黑色锅垢,其中 也含有苯并芘,因此一定要刷锅后,再做下 一个菜。
肉制品中3_4_苯并_芘检测方法的改进_曾习文
５．０
３．２６ ６５．２ ５．４６
５０．０ ３６．９２ ７２．８ ４．１５
５００．０ ３８６．３９ ７５．２ ４．２５
83
第 29 卷第 2 期
曾习文等：肉制品中 ３， ４－ 苯并（α）芘检测方法的改进
乙腈反提法（81.5%），二甲亚砜—环己烷反提法及 C18 小柱固 相萃取法较差。中性氧化铝过柱法操作繁琐且需要使用大量 溶剂，对环境会造成一定程度污染，同时成本也相对较高；而 乙腈反提法回收率（81.5%）较甲醇反提法要低（87.7%），并且 乙腈价格高于甲醇，对环境的污染也较大。综合考虑成本及 环境因素前提下，最终选择甲醇反提法作为肉制品中苯并芘 检测的净化方法。分析认为甲醇反提能达到净化的目的与甲 醇对油脂的溶解性不好，对目标化合物苯并芘有一定溶解 性，且在油脂中的渗透性较好有关，也就为浓缩液净化提供 了方便。 2.3 检测方法比对
旋转蒸发仪：RE-52AA 型，上海亚荣生化仪器厂；
安全与检测
2013 年第 2 期
超声波清洗机：SB-25-12DT 型，宁波新芝生物科技股份 有限公司；
离心机：CT14D 型，上海天美生化仪器设备工程有限 公司；
氮吹仪：HGC-24A 型，北京晨曦勇创科技有限公司； 电子天平：AL204 型，梅特勒—托利多仪器（上海）有 限公司； 固相萃取小柱：C18 型，美国沃特世公司。 1.3 方法 1.3.1 标准贮备液及标准使用溶液的配制 将 1 mL 标准品 （10 μg/mL）加入到 10 mL 棕色容量瓶中，甲醇定容得浓度为 1 μg/mL 的标准贮备液（A 液），0～5 ℃避光保存。分别吸取定 量 A 液于 10 mL 棕色容量瓶中，甲醇定容，配制成 0.0，5.0， 10.0，20.0，40.0，80.0，100.0 ng/mL 标准使用溶液。 1.3.2 色 谱 条 件 色 谱 柱 ：ZORBAX Eclipse PAH 4.6 × 250 mm，5 μm；流动相：A 为超纯水，B 为色谱纯乙腈；采用等度 洗脱（乙腈 ∶ 水=90 ∶ 10），洗脱时间：20 min；流速：1.0 mL/min；柱 温：40 ℃；进样量：10 μL；荧光检测器激发波长为 384 nm，检 测波长为 406 nm；以色谱峰面积外标法定量。 1.3.3 样品处理 取肉制品，切碎，搅拌机捣碎，称取 10 g 左 右样品于 50 mL 离心管中，加入 2 g 无水硫酸钠，20 mL 乙酸 乙酯，涡旋混匀 1 min，超声提取 10 min，10 000 r/min 离心 3 min，倾出上清液，20 mL 乙酸乙酯重复提取 1 次，合并提取 液，旋蒸浓缩至近干，5 mL 石油醚转移浓缩液至 10 mL 比色 管中，氮吹至干，加入 2 mL 甲醇，涡旋 1 min，0.45 μm 尼龙滤 膜过滤后上机测定。
全自动固相萃取-高效液相色谱法测定熏烤肉制品中苯并(a)芘含量
全自动固相萃取-高效液相色谱法测定熏烤肉制品中苯并(a)芘含
量
摘要：苯并(a)芘是一种强致癌物质，常常存在于烟熏、烤肉等烹饪方式中。
本研究
利用全自动固相萃取-高效液相色谱法对熏烤肉制品中的苯并(a)芘含量进行了测定。
结果
表明，该分析方法具有较高的准确性和灵敏度，可为监管机构对熏烤肉制品的质量安全提
供重要参考依据。
引言
熏烤肉制品是人们日常饮食中常见的一种食品，其特殊的烹饪方式赋予了独特的香味
和口感。
烟熏、烤制过程中产生的烟熏物质和多环芳烃等物质可能对人体健康造成潜在的
危害。
苯并(a)芘是一种典型的多环芳烃化合物，被世界卫生组织确定为一种强致癌物质，长期摄入可能导致癌症等健康问题。
监测熏烤肉制品中苯并(a)芘的含量具有重要的意
义。
目前，国内外已有一些关于苯并(a)芘含量测定的研究，常用的分析方法包括气相色
谱法、液相色谱法等。
这些方法存在着分析时间长、操作复杂、需要较多有机溶剂等缺点。
我们需要进一步探索一种简便、准确、快速的分析方法对熏烤肉制品中的苯并(a)芘含量
进行测定。
实验部分
1. 仪器和试剂
实验采用的仪器为Agilent 1200高效液相色谱仪，固相萃取柱为C18色谱柱；试剂包括甲醇、乙腈、乙酸乙酯等。
2. 样品处理
将熏烤肉制品样品加工成适当大小的颗粒状，取适量样品称重，并使用乙腈进行提取，得到待测物质。
3. 全自动固相萃取-高效液相色谱法测定
将待测物质经过固相萃取柱进行富集，然后使用高效液相色谱法进行分离和检测，最
终得到苯并(a)芘的含量。
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食品中苯并芘的提取及测定方法改进
在食品中，苯并芘是一种常见的多环芳烃类化合物。
苯并芘是一种致癌物质，
对人体健康有潜在的危害。
因此，准确测定食品中苯并芘的含量对于保障公众健康至关重要。
本文将探讨食品中苯并芘的提取及测定方法，并提出改进方案以提高分析准确性和效率。
食品中苯并芘的提取方法通常使用有机溶剂提取法。
常用的提取溶剂包括乙腈、甲醇等。
此类方法具有操作简单、成本较低的优点。
然而，目前的提取方法对样品处理过程中可能存在的丧失和污染现象较为敏感。
为提高效果，可以考虑引入固相萃取技术来提取苯并芘。
固相萃取是一种常用的样品准备方法，具有高效、高灵敏度和经济性的优势。
利用固相萃取柱将目标化合物从样品基质中去除，可以有效地减少杂质干扰，并提高分析准确性。
为了提高苯并芘的提取效果，可以采用固相萃取技术结合有机溶剂提取法。
首先，将样品与适量的有机溶剂混合，进行振荡提取。
然后，收集有机相，并使用固相萃取柱进行进一步净化。
这样的处理过程可以消除样品中可能存在的杂质，提高分析准确性。
在苯并芘的测定中，一种常见的方法是高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC方
法被广泛应用于食品中苯并芘的测定，具有分离效果好、操作简便、准确性高的特点。
然而，由于苯并芘为一种多环化合物，其稳定性较差，易发生氧化和降解反应。
这可能导致测定结果的不准确性。
为了克服这个问题，我们可以在HPLC分析过
程中利用增强剂来提高测定的准确性和稳定性。
增强剂是指在分析样品中添加的一种辅助物质，可以提高检测灵敏度和准确性。
在苯并芘的测定中，可以考虑使用增强剂来提高样品的色谱峰强度和稳定性。
常用的增强剂包括硫酸、硝酸等。
在HPLC分析中，可以适量添加增强剂到样品溶液中，以增加苯并芘的吸光度和峰高度，从而提高测定结果的准确性和可靠性。
除了提取方法和测定方法的改进外，样品前处理过程中的其他因素也需要注意。
例如，样品的保存和保存条件可能会影响到苯并芘的含量和稳定性。
在样品收集和处理过程中，应尽量避免光照、氧化和污染等不利因素的影响。
此外，对于复杂基质样品的分析，也需要考虑到可能的干扰物对测定结果的影响，并相应地进行样品预处理和数据处理。
综上所述，食品中苯并芘的提取及测定方法改进是一项重要的工作。
通过引入
固相萃取技术和增强剂的使用，可以提高样品的提取效果和测定准确性。
同时，在样品前处理过程中，还需要注意其他可能的因素对测定结果的影响。
这将有助于提高食品中苯并芘的测定准确性，保障公众的健康。