分子生物学诊断肺结核的基本原理
肺结核病原学检查方法及意义
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• 在我国，肺结核的发病率呈缓慢逐年下降 趋势，但仍显著影响着人民的健康，及时、 准确的诊断和治疗尤为重要。目前，肺结 核的病原学诊断方法多种多样，包括细菌 学、分子生物学、血清学及免疫学等等， 但并非阳性即可明确诊断，下面让我们一 起来复习一下肺结核病原学检查的方法及 意义。
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• PPD阳性提示机体存在结核分枝杆菌感染， 3岁以下婴幼儿提示为活动性结核病，但对 于成人患者，则不能区分为现症感染或既 往感染；当呈现强阳性时表示机体处于超 敏状态，发病风险高，如同时存在低热、 盗汗、血沉增快等表现者对诊断有一定提 示作用。
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• PPD阴性除了表明机体未曾感染过结核菌 外，还可能处于结核感染早期（4-8周内） 或血行播散性肺结核等重症结核病患者及 免疫抑制人群罹患肺结核，如AIDS、恶性 肿瘤、免疫抑制剂使用者、老年人、营养 不良者等。
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涂片阳性并非一定为结核分枝杆菌，也可以是非结核分枝杆菌、麻风分 枝杆菌，奴卡菌、放线菌抗酸染色可呈弱阳性。涂片阴性亦不能排除肺 结核，连续检查3次及以上，可提高检出率。
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2. 分离培养法
• 敏感性和特异性均高于直接镜检法，因可 直接获得菌落，便于与非结核分枝杆菌鉴 别，亦可进一步测定药物敏感性。分离培 养法可采用改良罗氏和BACTEC法，前者 为国内最常用方法，但耗时长，一般需培 养4-6周；后者可将时间缩短至2周左右， 培养阳性后4-6天即可完成药物敏感性测定。
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2015年2月，FDA批准Xper MTB/RIF1-2 次阴性结果作为撤离呼吸道隔离的标准，如 此可减少等待3次涂阴结果需要的时间，节约 人力、物力资源。
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三、血清学及免疫学检查
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肺结核诊断金标准
肺结核诊断金标准
肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，严重威胁人类健康。
肺结核的诊断是非常重要的，因为及早发现和治疗可以有效地控制病
情并防止传播。
目前，肺结核的诊断金标准主要包括以下几个方面。
1. 症状和体征
肺结核患者通常会出现咳嗽、咳痰、胸痛、低热等症状，并在体检中
发现肺部有异常体征，如湿啰音、胸膜摩擦音等。
这些都是肺结核的
典型表现，对于初步诊断非常有价值。
2. 结核菌素试验
结核菌素试验是一种通过注射结核菌素来检测人体免疫系统对结核杆
菌感染的反应的方法。
这种测试可以用来判断一个人是否曾经感染过
结核杆菌，并且可以帮助医生确定是否需要进行更进一步的检查。
3. X线检查
X线检查是一种通过拍摄胸部X光片来观察肺部情况的方法。
在X光
片上，肺结核患者的肺部通常会出现斑点状或结节状的阴影，这些阴
影可以帮助医生确定是否存在结核病灶。
4. 细菌学检查
细菌学检查是通过采集患者咳出的痰样本进行培养和染色，以检测结核分枝杆菌是否存在的方法。
这种检查可以帮助医生确定是否存在活动性结核感染，并且可以用来评估治疗效果。
5. 分子生物学检查
分子生物学检查是一种通过PCR技术来检测结核分枝杆菌DNA是否存在的方法。
这种检查具有高度特异性和敏感性，并且可以在很短时间内得出结果，因此被视为一种非常有价值的诊断手段。
总之，以上几种诊断方法都具有各自的优缺点，在实际应用中需要根据具体情况选择合适的方法进行诊断。
同时，在进行诊断时还需要综合考虑患者的临床表现、流行病学史、家族史等因素，以确保最终得出准确可靠的诊断结果。
结核分子生物学
结核分子生物学
结核分子生物学是一门研究结核病的分子机制和生物技术的学科。
它主要关注结核病的病原体——结核分枝杆菌的基因结构、基因表达、遗传变异等方面。
通过对结核分枝杆菌的基因组研究，科学家们可以更好地了解结核病的发病机制、传播方式以及耐药机制。
分子生物学技术如 PCR（聚合酶链式反应）、DNA 测序等，可以快速、准确地检测结核分枝杆菌的存在和耐药情况，为结核病的早期诊断和个体化治疗提供了有力的工具。
此外，结核分子生物学还研究结核分枝杆菌与宿主之间的相互作用。
宿主的免疫应答、基因多态性等因素也会影响结核病的发生和发展，通过对这些因素的研究，可以深入了解结核病的免疫病理学，为结核病的预防和免疫治疗提供新的思路。
在结核病的防控方面，结核分子生物学也发挥着重要作用。
例如，通过基因分型技术可以追溯结核病的传播链，及时采取措施控制疫情的传播。
同时，分子生物学还可以用于结核病疫苗的研发，通过对结核分枝杆菌的抗原基因进行研究和改造，开发出更有效的疫苗。
总的来说，结核分子生物学的发展为结核病的研究和防治提供了新的手段和方法，有助于提高结核病的诊断、治疗和防控水平，为最终消除结核病的危害做出贡献。
分子生物学技术在结核病诊断中的应用分析
分子生物学技术在结核病诊断中的应用分析摘要目的:分析研究分子生物学技术聚合酶链反应(PCR)对结核病检测的临床应用,并对其应用进行方法学评价。
方法:采用分子生物学技术体外核酸扩增聚合酶链反应对临床疑似结核病标本进行结核分枝杆菌检测。
结果:分子生物学技术聚合酶链反应对临床标本可以明确区分结核杆菌与其它分枝杆菌和一般呼吸道微生物,能从含有大量人类核酸和其它分枝杆菌的标本中检测到结核杆菌,实验快速,整个实验在一天完成,灵敏度高特异性强。
结论: 分子生物学技术聚合酶链反应对结核病的临床诊断是一项敏感性高,特异性强,简便快速等特点的诊断技术,对结核病的诊断具有较高的临床意义。
关键词结核病;结核分枝杆菌;聚合酶链反应20世纪90年代,全球多数发达国家结核病疫情出现明显回升,许多发展中国家出现结核病疫情严重加剧,结核病已成为全球最紧迫的公共卫生问题,目前世界上没有任何一个国家能逃脱结核病的威胁。
每年全世界约有800万新发病人,约300万人因结核病而死亡。
我国的情况也是如此,据2000年第四次全国结核病流行病抽样调查表明,我国结核病的形势仍然十分严峻。
结核病流行病学显示高患病率、高耐药率、低递降率等特点[1]。
因此快速准确的诊断是控制结核病的主要条件,我们对使用分子生物学技术聚合酶链反应在结核病实验室的诊断做了一些分析研究。
1材料仪器与试剂:广州达安基因生物公司DA-7600荧光定量核酸扩增仪和结核分枝杆菌检测试剂盒。
2方法2.1标本采集和处理2.1.1标本的采集和液化用一次性痰液收集器采集,最好留取早晨第一口痰液。
痰液收集后应尽快送检。
在痰液标本中加入4倍体积的4%NaOH溶液,吹打均匀后室温放置30分钟使之液化。
2.1.2 1×TE溶液配制吸取1ml20×TE,溶于19ml去离子水中,混匀即可。
2.1.3标本及质控标准品的处理取0.5ml液化痰液至1.5ml离心管中,再加入0.5ml4%NaOH室温放置10分钟后15000rpm离心5分钟,吸弃上清,在沉淀中加无菌生理盐水1ml打匀,15000rpm离心分钟,吸弃上清:再重复洗涤一次。
分子诊断知识科普
分子诊断知识科普分子诊断是一种基于分子生物学和遗传学原理的诊断方法，通过分析个体的基因、蛋白质或其他分子水平的信息，来判断其是否患有某种疾病或具有某种特定的遗传变异。
分子诊断可以通过检测基因突变、基因表达水平、蛋白质标记物等来识别疾病的存在或发展状态。
与传统的疾病诊断方法相比，分子诊断具有更高的准确性和灵敏度。
传统的诊断方法主要依靠临床症状、体征和影像学检查等，但这些方法往往无法提供足够的信息来进行准确的诊断。
而分子诊断则可以直接检测疾病相关的分子标记物，从而提供更为准确的诊断结果。
一、分子诊断的基本原理分子诊断的基本原理是通过检测和分析个体的基因组、转录组和蛋白质组等分子信息，来确定是否存在某种疾病或病理状态。
这种方法通常需要从患者的血液、体液或组织样本中提取并分析分子，并与正常个体或已知疾病个体的分子信息进行比对。
分子诊断的核心技术包括基因测序、PCR(聚合酶链式反应)、核酸杂交等。
其中，基因测序是一种通过测定DNA序列来获取个体基因信息的方法。
PCR是一种通过扩增DNA片段来增加检测灵敏度的方法。
核酸杂交则是一种通过将目标序列与一段互补的DNA或RNA序列结合来检测目标序列的方法。
通过这些技术，分子诊断可以检测到包括遗传疾病、感染病、肿瘤等在内的多种疾病。
例如，通过检测BRCA1和BRCA2基因的突变可以判断一个人是否患有乳腺癌或卵巢癌的遗传风险。
通过检测某种病原体的DNA或RNA可以确定感染者的感染状态。
通过检测肿瘤细胞中的特定基因突变可以确定肿瘤的类型和治疗策略。
二、分子诊断的应用领域分子诊断在医学领域有着广泛的应用。
下面将介绍一些常见的应用领域。
1. 遗传疾病诊断：分子诊断可以通过检测个体的基因突变来确定遗传疾病的存在和风险。
例如，通过检测孩子的基因突变可以确定其是否患有遗传性疾病，如先天性心脏病、遗传性失聪等。
2. 传染病诊断：分子诊断可以通过检测病原体的DNA或RNA来确定感染病的存在和类型。
结核病分子诊断
3、耐药基因检测
多重耐药结核杆菌、广泛耐药结核杆菌的流行， 是结核病防治中的重大问题
耐药的主要原因是药物主要靶点的基因发生了 突变
检测这些耐药基因相关突变，可为临床治疗提 供依据：例如异烟肼耐药菌存在KatG基因突变 或缺失，突变模式为S315T。利福平耐药菌发生 发生了点突变、插入或缺失，突变形式为S531L、 H526Y等。
尿液 清晨第一次全部尿量或24小时尿沉渣
胸腹腔积液 尽快送检、离心
谢谢聆听！
结果判读
试验分四组：空白对照组、抗原组(ESAT-6和CFP10)、阳性对照组(植物血凝素PHA)。
通常正常结果：空白对照孔没有或有很少的斑点而 PHA对照孔斑点数超过20个。 空白对照孔斑点数超 过10个时结果被认为是“不确定”。当PHA对照孔 斑点数少于20个时，检测结果被认为是“不确定”。
如果抗原A和/或抗原B有应答，检测结果为“有反 应性”，参照以下标准：
空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔 的斑点数）-（空白对照孔斑点数）≥6；
空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B 孔的斑点数）≥2×（空白对照孔斑点数）；
检测结果为“无反应性”：不符合上述标准且 PHA对照孔正常。
还是死菌，也不能对疗效进行评价。
临床意义：
TB-DNA阳性主要见于：传统培养或涂 片阳性的患者，菌量多，有活力；涂片或培 养阴性的患者，患者菌量少，涂片或培养阳 性率低；经治疗后带有死菌或低活力菌的患 者；体内结核杆菌已死亡，但DNA尚未分 解。
TB-DNA阴性主要见于：非结核分枝 杆菌感染。非结核病患者；不排菌患者。
凡临床怀疑肺结核的患者，在送检痰涂片 和痰培养的同时，送检痰TB-DNA检查。
分子诊断的基本原理是
分子诊断的基本原理是
通过检测和分析生物体内的分子，来诊断疾病或评估健康状况的一种诊断方法。
分子诊断的基本原理包括以下几个步骤：
1. 样本采集：从患者体内获取可能含有疾病相关分子的样本，如血液、尿液、唾液等。
2. DNA/RNA提取：将样本中的细胞或者病原体进行分离，并提取出其中的DNA 或RNA。
3. 分子放大：使用聚合酶链式反应(PCR)等技术将提取的DNA或RNA进行放大，以增加其检测的敏感度。
4. 分子检测：对放大后的DNA或RNA进行检测，常见的方法包括聚合酶链式反应、实时荧光PCR、核酸激发等。
5. 数据分析：将检测结果进行分析和解读，判断样本中是否存在疾病相关的分子。
6. 结果解释：将数据分析结果与临床症状、其他检查结果等进行综合考虑，做出准确的诊断或评估。
通过分子诊断，可以检测到病原体、突变基因、染色体异常等与疾病相关的分子，帮助医生进行准确的诊断，并指导治疗方案的选择和调整。
肺结核诊断的金标准
肺结核诊断的金标准肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，严重威胁着人类的健康。
在肺结核的诊断过程中，准确地确定病情对于治疗和预防传播至关重要。
因此，肺结核诊断的金标准显得尤为重要。
一、临床表现。
肺结核的临床表现多种多样，包括咳嗽、咳痰、低热、盗汗、乏力、体重减轻等。
但这些症状并不具有特异性，易与其他疾病混淆，因此不能作为肺结核诊断的金标准。
二、影像学检查。
胸部X线片是肺结核诊断的重要辅助手段。
在肺结核患者的X线片上常可见到肺部浸润病变、空洞形成等特征。
但需要注意的是，X线片的结果可能受到多种因素的影响，包括操作技术、设备质量等，因此不能单凭X线片结果作出肺结核诊断的金标准。
三、痰涂片检查。
痰涂片检查是肺结核诊断的重要手段之一。
通过显微镜下观察痰涂片中的结核分枝杆菌，可以直接确定患者是否感染了结核分枝杆菌。
然而，由于痰涂片检查的敏感性较低，假阴性率较高，因此不能作为肺结核诊断的金标准。
四、结核菌培养。
结核菌培养是目前肺结核诊断的金标准。
通过将患者的痰样本或其他临床标本接种于含有营养物质的培养基中，利用培养技术培养结核分枝杆菌，可以直接确定患者是否感染了结核分枝杆菌，且对抗生素的敏感性也可以在培养过程中进行测试。
结核菌培养的结果具有高度的特异性和准确性，是目前肺结核诊断的金标准。
五、分子生物学检测。
分子生物学检测技术的发展为肺结核诊断提供了新的手段。
PCR技术、基因扩增技术等可以直接检测结核分枝杆菌的DNA或RNA，具有高度的特异性和敏感性，可以在短时间内快速准确地确定患者是否感染了结核分枝杆菌。
因此，分子生物学检测技术也成为肺结核诊断的重要手段之一。
总结。
肺结核诊断的金标准是多种检测手段综合应用，其中结核菌培养是目前最为可靠的手段。
随着医学技术的不断进步，肺结核诊断的方法也在不断完善，相信在不久的将来，会有更加准确、快速的诊断手段出现，为肺结核的早期诊断和治疗提供更好的保障。
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分子生物学诊断肺结核的基本原理
肺结核是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的一种慢性传染病，
其传染性和危害性较大。
在现代医学中，分子生物学技术得到了广泛应用，其基本原理为
通过分子生物学方法来检测病原体的DNA或RNA序列，从而达到诊断肺结核的目的。
分子生物学诊断肺结核的方法包括多种，其中最常见的是聚合酶链式反应（PCR）技术。
PCR技术的基本原理是在反应管中模拟DNA复制过程，通过循环反应扩增目标DNA片段。
PCR技术的扩增速度非常快，可以在短时间内扩增出目标DNA的数量，并且可以从微量样
品中检测出目标DNA。
其主要原理是将靶DNA序列的两端加上一对引物，引物与靶DNA序列特异性互补，用酶解使双链DNA分离成两个单链模板，接着在一定条件下，引物向外扩展
与模板互补合成一条新链，重复上述步骤多次，即可扩增出数百万份相同的DNA片段。
PCR 技术对检测病原体的敏感性高，可以在肺结核病人的血液或痰样品中检测到微小数量的结
核分枝杆菌。
除了PCR技术之外，核酸杂交技术也是一种常见的分子生物技术，用于检测肺结核病
原体的DNA或RNA序列。
其基本原理是将已知的DNA/RNA探针标记上荧光物质，投放到未
知样品中，通过探针与未知样品中互补的目标DNA/RNA序列结合，然后通过荧光显微镜等
手段检测探针标记的荧光信号大小以及位置。
核酸杂交技术也可以用于检测多种肺结核病
原体的基因序列，并且可以实现对不同病原体的鉴别诊断。
另外，DNA测序技术也可以用于肺结核的诊断，其基本原理是将肺结核病原体的DNA
序列解析出来，通过比较其DNA序列与已知肺结核病原体的DNA序列进行比对，从而快速
准确地诊断出所含的结核分枝杆菌种类。
综上所述，分子生物学技术作为现代医学检测技术的一种，已经在肺结核病的诊断中
得到广泛应用。
可以提高病原体的检测效率，同时也可以提高病原体的检测准确性和灵敏度。
在未来，随着分子生物学技术的不断完善和进步，肺结核的诊断将会更加准确和有
效。