非小细胞肺癌基因检测
非小细胞肺癌患者EGFR基因检测
标本的处理
癌性胸水脱落细胞
尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须>1 毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为 符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇 ，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确 保3天内到达。
55.7% (24/42)
EGFR基因突变检测的一般原则
为使患者尽可能地从最有效的治疗中受 益，所有NSCLC，只要条件许可，都 应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺 癌。
EGFR基因突变检测标本
肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切 除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的 检测。
理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞 （文献报道大于100个即可）
用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法
用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检 出率基本相同
目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测） 数据，故对其敏感度与特异性尚无结论
胸膜转移和胸水的对比研究
本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR 突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶 时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。
关于胸水EGFR突变的检测
国内外胸水标本EGFR检测的研究
作者
Kimura H Soh J
Hung MS Kimura H
Jian G
国家/地区
日本 日本 台湾 日本 中国
病例数 24
EGFR突变率 （%）
33%
61
26%
29
41%
43
25.6%
32
28.1%
非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因检测结果的初步分析
： ｌ ：
【 摘
要】 目的
探讨非小细胞肺癌 （ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ ） 组织棘皮动物微管样蛋白 ４ 一 间变淋巴瘤激酶（ Ｅ Ｍ Ｌ ４ 一 Ａ Ｌ Ｋ ） 融合基因的突变
采用突变扩增阻滞系统检测 ２ ６例 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ组织 中 Ｅ Ｍ Ｉ Ａ — Ａ Ｌ Ｋ融合基 因
情况 ， 及其与 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ临床病理特征和预后的关 系。方法 特征和总生存期（ ０ ｓ ） 的关系 。结果
的 ９种突变和表皮生长因子受体（ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ） 的１ ８ 、 １ ９ 、 ２ ０ 、 ２ １ 外显子突变 ， 进一步分析 Ｅ ＭＬ ４ 一 Ａ Ｌ Ｋ融合基 因突变与 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ临床病理 ２ ６例 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患 者中检测 到 ６例 Ｅ Ｍ Ｉ Ａ — Ａ Ｌ Ｋ融合基 因突变 。Ｅ Ｍ Ｉ Ａ— Ａ Ｌ Ｋ融合基 因突变与 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ中 Ｅ ＭＬ ４ 一 Ａ Ｌ Ｋ融 年龄 、 吸烟 史、 临床分期 、 组织分化和 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ突变有关 ， 与病理类型、 性别 、 标本类 型和血清癌胚抗原无关 （ Ｐ＞ ０ ． ０ ５ ） 。Ｅ ＭＩ Ａ — Ａ Ｌ Ｋ 融合基 因阳性 者的中位 ０ ｓ为 ９个月 ， 低于阴性者的 １ ２个月 ， 但差异无统计学意义（ Ｐ＝ ０ ． ４ ６ ０ ） 。结论
ｎ ａ ｓ ｅ（ Ｅ ＭＩ Ａ— Ａ Ｉ Ｋ ）ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ｉ ｎ ｎ ｏ ｎ — ｓ ｍ ａ ｌ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｕ ｎ ｇ ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ（ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ ） ， ａ ｎ ｄ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｉ ｔ ｓ ｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ｉ ｔ ｈ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ｏ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ
非小细胞肺癌的诊断标准
非小细胞肺癌的诊断标准
非小细胞肺癌的诊断标准主要包括以下几个方面：
1.组织学检查：通过活检或手术切除标本的组织学检查，确定
肿瘤的类型是非小细胞肺癌。
2.病理学分期：根据病理学分期确定肿瘤的分期，常用的分期
系统包括TNM分期系统和国际非小细胞肺癌联合委员会（IASLC）第8版分期系统。
3.临床表现和影像学检查：非小细胞肺癌的临床症状常包括咳嗽、咳痰、胸痛、呼吸困难等，影像学检查如X线胸片、CT、MRI等可以提供肿瘤的位置、大小和有无转移的信息。
4.肿瘤标志物：一些肿瘤标志物如癌胚抗原（CEA）、细胞角
蛋白19片段（CYFRA21-1）等，在非小细胞肺癌的诊断和预
后评估中有一定的参考价值。
5.基因突变检测：非小细胞肺癌中常见的基因突变包括EGFR、ALK、ROS1、KRAS等，通过基因突变检测可以指导靶向治
疗的选择。
需要注意的是，以上诊断标准是综合考虑的，根据病情情况可能会有所不同，具体的诊断应由医生根据完整的病史和检查结果综合判断。
非小细胞肺癌驱动基因谱
非小细胞肺癌驱动基因谱《非小细胞肺癌驱动基因谱》非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）是一种常见的肺癌类型，占据了肺癌患者的大部分比例。
尽管在治疗方法和技术上有了显著进步，但NSCLC仍然是一个具有挑战性的疾病。
为了更好地理解NSCLC的发病机制和开发更有效的治疗策略，科学家们开始关注NSCLC的驱动基因谱。
驱动基因谱是指与肿瘤发展、进展和预后相关的一组突变基因。
在NSCLC中，研究人员已经鉴定出许多驱动基因，这些基因的突变直接参与了肿瘤形成和发展的过程。
下面，我们将介绍一些目前已知的NSCLC驱动基因。
第一个被发现的驱动基因是EGFR基因突变。
EGFR基因突变在NSCLC患者中非常常见，特别是在亚洲人群中。
EGFR突变导致了受体激活通路的过度激活，进而促进了细胞生长和增殖。
由于EGFR突变的存在，EGFR酪氨酸激酶抑制剂成为了NSCLC治疗的重要药物。
另一个重要的驱动基因是ALK基因突变。
ALK基因突变在NSCLC患者中也比较常见。
ALK融合蛋白的过度表达与肿瘤细胞增殖和生存的异常相关。
针对ALK突变的靶向治疗剂已经在临床试验中显示出显著的疗效。
此外，研究人员还发现了ROS1、RET、KRAS、HER2等一系列驱动基因。
这些基因的突变与肺癌的发生和发展密切相关。
研究人员通过对这些驱动基因的研究，为NSCLC的治疗带来了新的机会。
了解NSCLC的驱动基因谱对于治疗选择至关重要。
通过对患者进行基因检测，可以确定突变的存在与否，从而为个体化治疗提供指导。
有了对驱动基因的更好理解，科学家们正在努力开发更多的靶向药物，以提高NSCLC患者的生存率和生活质量。
总之，《非小细胞肺癌驱动基因谱》的研究揭示了NSCLC发病机制中重要的驱动基因，为肺癌的治疗策略提供了新的思路。
未来，随着对这些驱动基因的进一步研究，我们有望开发出更多的靶向药物，提供更加个体化的NSCLC治疗方案。
非小细胞肺癌患者EGFR基因检测PPT培训课件
03
非小细胞肺癌患者EGFR基因 突变检测
突变类型与发生率
突变类型
EGFR基因突变主要涉及18-21外显子，包括L858R、G719X、T790M等常见 突变。
发生率
EGFR基因突变在非小细胞肺癌中发生率较高，约15-20%的肺腺癌患者存在 EGFR基因突变。
突变检测方法与流程
检测方法
目前常用的EGFR基因突变检测方法包括直接测序法、实时荧光定量PCR、液相 芯片法和组织芯片法等。
政策支持与资金投入
政府和社会各界应加大对EGFR基因检测的投入，提高检测的可及 性和可负担性。
感谢您的观看
THANKS
05
非小细胞肺癌患者EGFR基因 检测的临床实践
检测前的准备与注意事项
01
02
03
患者教育
向患者解释EGFR基因检 测的目的、方法及意义， 消除患者的疑虑和恐惧。
样本采集
确保采集的样本质量，如 肺部组织或血液，避免污 染和降解。
注意事项
告知患者检测前需避免使 用某些药物或停止使用某 些药物，以免影响检测结 果。
数字PCR技术
数字PCR技术具有高灵敏度、高特 异性的特点，未来可能会成为 EGFR基因突变检测的重要手段。
液态活检技术
基于循环肿瘤细胞的检测和基于循 环肿瘤DNA的检测等液态活检技术， 为肺癌患者的早期诊断和实时监测 提供了新的可能性。
个性化治疗与精准医学的结合
个性化治疗
根据患者的基因突变类型和个体特征，制定 个性化的治疗方案，以提高治疗效果和患者 的生存率。
检测过程中的沟通与护理
沟通
与患者保持良好沟通，了 解患者的病情和需求，解 答患者的问题。
护理
非小细胞肺癌EGFR基因检测的临床意义
非小细胞肺癌EGFR基因检测的临床意义作者：高艳郭婵娟张银倪兵朱顺辉来源：《中外医学研究》2017年第14期【摘要】目的：研究和探讨EGFR基因检测在非小细胞肺癌临床诊疗中的价值和意义。
方法：抽选2015年11月-2016年11月，在笔者所在医院病理科进行检查的86例非小细胞肺癌患者。
收集他们的组织样本和血清进行EGFR基因检测，观察和分析其基因突变情况，并根据结果分为突变组和非突变组，均给予EGFR-TKI靶向治疗，统计、分析和对比两组患者的临床治疗情况和结果。
结果：经过试验检测得出，86例患者中共有40例出现EGFR基因突变（占46.5%），其中19-Del外显子缺失突变22例（占25.6%），21号外显子L858R点突变9例（占10.4%），20号外显子T790M插入突变3例（占3.5%），20号外显子T20 S768I为点突变3例（占3.5%），19号外显子缺失突变及20号外显子T790M插入突变1例（占1.2%），19号外显子缺失突变及20号外显子20-Ins点突变1例（占1.2%），20号外显子T790M点突变及20-Ins插入突变1例（占1.2%）。
经过临床治疗，突变组患者的临床总有效率（87.50%）显著高于非突变组患者的临床总有效率（60.87%），差异有统计学意义（P【关键词】非小细胞肺癌； EGFR基因；临床意义doi：10.14033/ki.cfmr.2017.14.009 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）14-0017-02非小细胞肺癌的病症类型主要分为腺癌、鳞状细胞癌及大细胞癌，其发病原因多与“二手烟”、生活环境、电离辐射、遗传因素等有关[1-2]。
非小细胞肺癌的诊断发现的时间较晚，扩散转移慢，死亡率高，且目前临床上常用的标准治疗方案（含铂两药）已经达到了临床有效率的平台期[3]，如何提高非小细胞肺癌患者的临床有效率成为当前治疗过程中亟待解决的主要难题之一。
中国非小细胞肺癌患者EGFR T790M基因突变检测专家共识
中国非小细胞肺癌患者EGFR T790M基因突变检测专家共识本文来源：中华医学杂志, 2018,98(32) : 2544-2551.表皮生长因子受体(EGFR)基因突变是东亚人群中非小细胞肺癌(NSCLC)最常见的驱动基因突变，发生率为30%～40%。
既往多项研究支持EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)单药治疗是EGFR基因突变局部晚期或转移NSCLC患者的标准治疗方案，但大多数患者会在用药后9～14个月发生耐药，其中EGFR基因第20号外显子发生错义突变(即T790M突变)是耐药突变中最主要的类型。
目前已报道的EGFR-TKI耐药后组织样本的T790M突变阳性率基本在60%左右，不同技术方法检测结果较为相似，但是血浆样本T790M突变阳性率基于不同方法差别较大，在23%～63%。
奥希替尼是一种口服、强效、不可逆，具有中枢神经系统活性，选择性抑制EGFR敏感突变和T790M突变的三代EGFR-TKI，同时对EGFR野生型细胞作用较弱，减少了相关不良事件的发生。
一项随机Ⅲ期临床研究AURA3对比了奥希替尼和含铂双药化疗治疗一线EGFR-TKI耐药后组织T790M阳性的晚期NSCLC患者，结果显示，对比标准化疗，奥希替尼可显著延长中位无进展生存期(PFS)。
Ⅱ期、开放性、单臂、中国注册临床研究AURA17显示了奥希替尼在EGFR-TKI 耐药后组织T790M突变阳性亚太及中国人群中的疗效，客观缓解率(ORR)达63%，中位PFS 9.7个月。
基于上述研究，奥希替尼于2017年3月22日被中国国家食品药品监督管理总局(CFDA)批准用于既往经EGFR-TKI治疗时或治疗后出现疾病进展，并且经检测确认存在EGFR T790M突变阳性的局部晚期或转移性NSCLC成人患者的治疗。
目前，美国国立综合癌症网络(NCCN)、欧洲临床肿瘤协会(ESMO)指南、中国临床肿瘤学会(CSCO)原发性肺癌诊疗指南均推荐奥希替尼为局部晚期或转移NSCLC EGFR-TKI耐药后T790M突变阳性患者的标准治疗。
肺癌基因检测的流程
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By Yoshinori Shirota, Journal of Clinical Oncology, 2001,19: 4298-4304
化疗药物检测项目（ mRNA 表达）
类型
药物
卡铂、顺铂 奥沙利铂 抗微管药物
基因
ERCC1
样本
评价
低表达敏感
TUBB3 RRM1
mRNA 表达 吉西他滨 氟尿嘧啶 培美曲赛
肿瘤治疗存在的核心问题
盲目治疗 过度治疗
个体化治疗
肺癌的传统分类观点
小细胞肺癌 (SCLC)
鳞癌 大细胞 小细胞 腺癌
非小细胞肺癌 (NSCLC) 腺癌 鳞癌 大细胞癌
肺腺癌的分子亚型
鳞癌 大细胞 小细胞
ALK fusion ROS fusion PIK3CA BRAF PDGFR amp MEK1 KRAS HER2 EGFR
检测EGFR突变的重要性
医学指南
全球三大肿瘤突变会指南均强调检测EGFR突变的重要性
EGFR突变检测的应用
很好预测TKI药物对NSCLC患者的疗效
HRM血浆突变检测
外显子19缺失； 外显子21点突变； 外显子18点突变； 非小细胞肺癌 没有发现外显子18、 19、21突变
外显子20未发生突变， 继续使用TKI治疗 肿瘤对TKI敏感，患者 使用TKI治疗 外显子20突变，提示 TKI治疗产生耐药，转 为非TKI治疗 肿瘤对TKI不敏感，患 者使用非TKI治疗
肿瘤个体化用药基因检测的临床应用
——非小细胞肺癌
人类基因组计划和国际癌症基因组计划
——个体化医疗的奠基石
于1990年在美国正式启动的人类基因组计划，要把人体内约10万个基因的密码全部解 开，同时绘制出人类基因的谱图。 2006年多国联合启动的国际癌症基因组计划，是人类基因组计划后的又一重大科学研 究。 揭示更多地与癌症相关的突变类型，获得50种肿瘤的特定分子异常谱型，探寻DNA变 异与肿瘤发生发展的机理。
Lord RVN et al, Clin Cancer Res, 2002, 8:2286-91
吉西他滨与RRM1 mRNA 表达
背景 吉西他滨是脱氧胞嘧啶核苷同系物，属细胞周期特异性抗代谢类化疗药，主
要作用于DNA合成期（S期）的肿瘤细胞，同时也阻断细胞增殖由G1向S期过渡的进程。 临床研究显示低RRM1 mRNA水平的肺癌患者对吉西他滨敏感性相对较高，药物疗效较
0.8 无进展生存率
0.6
对象 不加选择的中国患者 有效率 30％
0.4 0.4
根据临床特征选择优势人群 50％
0.2
根据EGFR敏感基因选择 +耐药基因选择 70-80% 80-95%
0.0 0 4 8 12 16 Time from randomisation (months) 20
Mok, Wu,Thomprast et al. NEJM, 2009
事件, n (%)
克唑替尼 (n=173) 100 (58) 7.7
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
化疗 (n=174) 127 (73) 3.0
60 40 20 0 0 5 10 时间(月)
• • Shaw et al., ESMO 2012; Abstract LBA1_PR N Engl J Med 2013;368:2385-94
案例分析
姓名：王女士
年龄：46
诊断：非小细胞肺癌 样品种类：穿刺组织 检测项目：EGFR突变检测；EML4-ALK基因融合检测；ERCC1表达量；TYMS表达量； RRM1表达量；TUBB3表达量
检测项目
EGFR突变 EML4-ALK ERCC1表达量
检测结果
19外显子突变 无转位 高
临床意义
吉非替尼、厄洛替尼疗效佳 克里唑替尼无效风险高 铂类药物疗效较差
腺癌
肺癌的传统分类
肺腺癌的分子分类
EGFR基因突变检测在临床应用的意义
IPASS: 根据突变状态的疗效分 析
1.0 Gefitinib EGFR M+ (n=132) Gefitinib EGFR M- (n=91) Carboplatin / paclitaxel EGFR M+ (n=129) Carboplatin / paclitaxel EGFR M- (n=85)
中位数, 个月 HR (95% CI) P
0.49 (0.37 - 0.64) <0.0001
15
20
25
靶向药物检测项目汇总
药物
基因
EGFR
癌种
样本
组织标本、 血浆、体液 标本
判断标准
突变敏感 突变耐药 融合敏感 融合敏感
重要程度
必检 推荐 必检 推荐
吉非替尼/厄洛 替尼/埃克替尼
KRAS 非小细胞肺 癌 EML4-ALK
好，中位生存期延长。而且，专家建议RRM1高表达的患者应避免使用吉西他滨。
Rafael Rosell1. Oncogene (2003) 22, 3548–3553
抗微管类药物与TUBB3 mRNA 表达
背景 抗微管类化疗药是作用于细胞微管，通过影响纺锤体形成，从而抑制细胞有
丝分裂的一类广谱化疗药。在多种临床研究中，TUBB3 mRNA表达水平与抗微管类化疗 的疗效密切相关。低TUBB3表达水平的肿瘤患者接受紫杉醇类或长春碱类化疗的效果 较好，中位生存期较长。反之，TUBB3高表达的患者的抗微管类化疗疗效较差。
TYMS表达量
RRM1表达量 TUBB3表达量
低
高 高
氟类/培美曲塞/卡培他滨疗效佳
吉西他滨疗效差 抗微管类药物疗效差
克唑替尼
组织标本 组织标本
ROS1
铂类药物与ERCC1 mRNA 表达
背景 ERCC1（Excision Repair Cross Complement Group 1）是核酸外切修复家族中重 要成员，参与DNA链的切割和损伤识别。ERCC1的表达量直接影响DNA修复的生理过
程，DNA修复是铂类化疗耐药性产生的主要机制之一。
Rafael Rosell1. Oncogene (2003) 22, 3548–3553
氟类药物与TYMS mRNA 表达
背景 TYMS基因编码的胸苷酸合成酶（TS）是嘧啶核苷酸合成的限速酶，是肿瘤生 长的重要因子。5-FU的代谢物5-FdUMP与TS结合，阻碍TS的正常功能，从而抑制DNA合 成。临床研究表明，低TYMS mRNA水平的肿瘤患者接受氟类化疗的效果较好，中位生 存期较长。反之，TYMS高表达的患者对氟类疗效较差。研究也发现培美曲赛的疗效与 TYMS mRNA表达水平呈负相关。
EML4-ALK融合基因
ALK 最早是在间变性大细胞淋巴瘤（ ALCL)的一个亚型中被发现的，因此定名为 间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）。 靶向药：XALKORI ®胶囊（克唑替尼），辉瑞公司。 NCCN与ESMO推荐ALK阳性NSCLC的一线治疗首选克唑替尼。 总体突变率：11.4% 腺癌突变率：16.1% 鳞癌突变率：0.7% 优势人群：
轻微/从未吸烟； 与EGFR突变人群相比，ALK融合人群年龄更轻； 腺癌； EGFR/KRAS野生型； 病理学特（含印戒细胞的黏液型或实性腺癌中， ALK融合基因的发生率高于其他类型的肺腺癌 (46．2％VS. 8.0％）
EML4-ALK融合检测的意义
100 无进展生存期的概率 (%)
80
石蜡切片 新鲜组织
低表达敏感 低表达敏感 低表达敏感
TYMS
样本要求
石蜡包埋肿瘤组织块 一般组织块不小于5×5×5（mm），组织包于蜡块正中央，处理完可归还蜡块（推荐）。 送检保存：常温保存、运输。
新鲜肿瘤组织块
要求提供50mg左右的样本，取癌组织的中心位置组织块，5×5mm（绿豆大）以上，以 PBS或生理盐水清洗干净，15分钟内放入RNAlater保存液或液氮中保存。 送检保存：常温保存、运输，取样后24小时内送检。 全血标本 使用枸橼酸钠（1：9）或EDTA-Na2抗凝的采血管，血液样本2ml以上。 禁忌：切勿使用肝素抗凝剂；切勿反复冻融。 送检保存：4℃冰箱保存，切不可置于-20℃中（血细胞在融解的时候易发生溶血）；当天送检， 冰上运输。