【精品】正常血细胞形态观察
项目1正常血细胞形态学
1 / 1项目4 缺铁性贫血的检查总课时 4模块1 缺铁性贫血的血象和骨髓象检查课时 2教学目标学会缺铁性贫血的骨髓象检查方法能够正确诊断缺铁性贫血教学内容骨髓涂片检查血涂片检查工作任务1.涂片染色2.骨髓象检查3.血象检查4.诊断和鉴别诊断教学方法1.病例教学法2.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1.根据病例进行患者的骨髓细胞象检查2.填写骨髓象检查报告单1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.骨髓象检查方法2.骨髓象检查注意事项3.缺铁性贫血骨髓象特点1.铁粒幼细胞性贫血缺铁性贫血的鉴别诊断项目4 缺铁性贫血总课时 4模块2 铁代谢检查课时 2教学目标学会铁代谢的检查方法教学内容铁代谢检查工作任务1. 血清铁的测定2．血清总铁结合力的测定3. 血清铁蛋白的测定教学方法1.多媒体教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1. 讲授实验原理、步骤及临床意义2. 有学生实际操作1.血清铁2.血清总铁结合力3．血清铁蛋白1. 血清铁的测定2. 血清总铁结合力的测定3. 血清铁蛋白的测定1. 转铁蛋白饱和度的测定1.IDA时铁代谢的变化项目5 再生障碍性贫血的检查总课时 2模块2 再生障碍性贫血的血象和骨髓象检查课时 2教学目标学会再生障碍性贫血的骨髓象检查方法能够正确诊断再生障碍性贫血教学内容骨髓涂片检查血涂片检查工作任务1.涂片染色2.骨髓象检查3.血象检查4.鉴别诊断教学方法1.病例教学法2.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1.根据病例进行患者的骨髓细胞象检查2.填写骨髓象检查报告单1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.骨髓象检查方法2.骨髓象检查注意事项3.再障骨髓象特点1.急性造血功能停滞2.纯红再障1.再障的鉴别诊断项目6 巨幼细胞性贫血的检查总课时 2模块1 巨幼细胞性贫血的血象和骨髓象检查课时 2教学目标学会巨幼细胞性贫血的骨髓象检查方法能够正确诊断巨幼细胞性贫血教学内容骨髓涂片检查血涂片检查工作任务1.涂片染色2.骨髓象检查3.血象检查4.鉴别诊断教学方法1.病例教学法2.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1.根据病例进行患者的骨髓细胞象检查2.填写骨髓象检查报告单1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.骨髓象检查方法2.骨髓象检查注意事项3.巨幼贫骨髓象特点1.巨幼贫的诊断治疗 1.巨幼贫的鉴别诊断项目7 溶血性性贫血的检查总课时 16模块1 显示溶血的检验方法课时 2教学目标学会溶血的检验方法教学内容溶血的检验方法工作任务1.血浆游离血红蛋白测定2.血清结合珠蛋白测定3.血浆高铁血红素白蛋白测定教学方法1.多媒体教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1. 讲授实验原理、步骤及临床意义2. 有学生实际操作1. 血浆游离血红蛋白2. 血清结合珠蛋白3. 血浆高铁血红素白蛋白1.血浆游离血红蛋白测定2.血清结合珠蛋白测定3.血浆高铁血红素白蛋白测定1. 溶血性性贫血的概念及分类1. 溶血性性贫血时血浆游离血红蛋白、血清结合珠蛋白血浆、高铁血红素白蛋白如何变化项目7 溶血性性贫血的检查总课时 16模块2 溶血性贫血的实验室鉴别诊断课时 2教学目标学会溶血性贫血的实验室鉴别诊断教学内容溶血性贫血的实验室鉴别诊断工作任务1.确定溶血的存在2.确定使血管内还是血管外溶血3.确定溶血性贫血的原因教学方法1.病例教学法2.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1. 溶血的诊断标准2. 血管内溶血与血管外溶血的鉴别3.溶血原因的确定1. 溶血的诊断标准2. 血管内溶血与血管外溶血的鉴别3.溶血的原因1.溶贫的实验室检查溶血性贫血的特点溶血性贫血的临床表现项目7 溶血性性贫血的检查总课时 16模块3 红细胞膜缺乏症的检验方法课时 2教学目标学会红细胞膜缺乏症的检验方法教学内容红细胞膜缺乏症的检验方法工作任务1.红细胞膜缺陷症的检验方法2.遗传性球形红细胞增多症的检查3.遗传性椭圆形红细胞增多症的检查4. 遗传性口形红细胞增多症的检查教学方法1.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1. 红细胞膜缺陷症的检验方法2.骨髓细胞象检查3.填写骨髓象检查报告单1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.红细胞渗透脆性试验 2.自身溶血试验及纠正实验3.酸化甘油溶血试验1. 红细胞膜缺乏症的诊断1. 红细胞膜缺乏症的鉴别诊断项目7 溶血性性贫血的检查总课时 16模块4 红细胞酶缺乏症的检验方法课时 2教学目标学会红细胞酶缺乏症的检验方法教学内容红细胞酶缺乏症的检验方法工作任务1. 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的骨髓象检查2. G6PD缺乏的检验方法3. G6PD缺乏的诊断教学方法1.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1. 红细胞酶缺陷症的检验方法2.骨髓细胞象检查3.填写骨髓象检查报告单1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1．高铁血红蛋白还原试验2．变形珠蛋白小体试验3．G6PD荧光斑点试验4．硝基四氮唑蓝试验1. 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的分型1.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的诊断项目7 溶血性性贫血的检查总课时 16模块5 珠蛋白异常的实验室检查课时 2教学目标学会珠蛋白异常的实验室检查教学内容珠蛋白异常的实验室检查工作任务1.涂片染色2.骨髓象检查3.血象检查4.常用检验方法教学方法1.多媒体教学法2.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1.骨髓细胞象检查2.填写骨髓象检查报告单3.常用的检验方法1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.骨髓象检查方法、注意事项及特点2. 血红蛋白电泳1.血红蛋白的组成和种类2.珠蛋白生成障碍性贫血的病因及发病机制3. β和α地中海贫血的类型1.β和α地中海贫血的血红蛋白电泳结果项目7 溶血性性贫血的检查总课时 16模块6 异常血红蛋白的检验课时 2教学目标学会异常血红蛋白的检验方法教学内容异常血红蛋白的检验工作任务1.血红蛋白S病2. 血红蛋白E病3. 不稳定血红蛋白病教学方法1.病例教学法2.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1.骨髓细胞象检查2.填写骨髓象检查报告单3.检验方法1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.骨髓象检查方法2.骨髓象检查注意事项3. 骨髓象特点4.血红蛋白电泳1.血红蛋白S病2. 血红蛋白E病3. 不稳定血红蛋白病1．异常血红蛋白的鉴别诊断项目7 溶血性性贫血的检查总课时 16模块7免疫性溶血性贫血的检查课时 4教学目标学会免疫性溶血性贫血的检查教学内容免疫性溶血性贫血的检查工作任务1.自身免疫性溶血性贫血2.药物诱发的免疫性溶血性贫血3.新生儿同种免疫性溶血性贫血教学方法1.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1.自身免疫性溶血性贫血的实验室检查2.药物诱发的免疫性溶血性贫血的实验室检查3.新生儿同种免疫性溶血性贫血的实验室检查1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.骨髓象检查方法、注意事项及特点2.抗人球蛋白试验3.冷凝集素试验4.冷热溶血试验1. 自身免疫性溶血性贫血的类型1. 三种药物诱发的免疫性溶血性贫血实验室检查的比较项目8其他贫血检查总课时 2模块1其他贫血检查课时 2教学目标学会其他贫血检查方法教学内容其他贫血检查工作任务1.增生性贫血2.继发性贫血教学方法1.病例教学法2.PBL教学法教学设计相关理论知识相关实践知识拓展知识思考与练习1.增生性贫血的骨髓细胞象检查2.继发性贫血的骨髓细胞象检查3.填写骨髓象检查报告单1.骨髓增生程度2.粒红比值3.各系统细胞形态学特点1.骨髓象检查方法2.骨髓象检查注意事项3.骨髓象特点1. 增生性贫血的概念、类型2.继发性贫血的常见原因1.贫血的鉴别诊断。
常见血液细胞形态的识别
常见血液细胞形态的识别
1. 红细胞：正常的红细胞呈双凹圆盘状，中央较薄，边缘较厚。
成熟的红细胞无细胞核，细胞质内充满血红蛋白，使其呈红色。
在显微镜下观察，正常的红细胞大小均匀，形态规整。
2. 白细胞：白细胞是一种有核的细胞，根据形态和功能的不同，可分为中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞五种类型。
其中，中性粒细胞是数量最多的白细胞，其细胞核呈分叶状，一般为 2-5 叶；淋巴细胞的细胞核相对较大，呈圆形或椭圆形；单核细胞的体积较大，细胞核呈不规则形状；嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的细胞核通常分为两叶，细胞质内含有特殊的颗粒。
3. 血小板：血小板是一种无核的细胞碎片，在止血和凝血过程中起着重要作用。
正常的血小板呈圆形或椭圆形，体积较小，在显微镜下观察，血小板通常聚集成团。
在临床实践中，通过对血液细胞形态的观察，可以初步判断血液疾病的类型和病情，为进一步的诊断和治疗提供依据。
同时，血液细胞形态的识别也需要结合临床表现和其他实验室检查结果进行综合分析。
需要注意的是，以上内容仅为一般性介绍，具体的血液细胞形态特征可能因个体差异和疾病状态而有所不同。
如果你对血液细胞形态的识别有特定需求或疑问，建议咨询专业的医生或实验室技术人员。
正常血细胞形态学检测实验
染色质 粗网状，疏松
聚集成索块
四、中幼红细胞、浆细胞、淋巴细胞的鉴别
胞体 胞浆 胞核 染色质
中幼红细胞
浆细胞
淋巴细胞
圆形
椭圆形
圆形
嗜多色性，不 透明，无颗粒
蓝色，不透明有泡沫感， 有时可见红色镶边，边缘 不规则，近核处有淡染区， 常有空泡，可见颗粒
天蓝色，透明， 有核周淡染区， 可见颗粒
圆形，居中
血细胞发育演变规律图
▪ 一、原始粒细胞与原始红细胞的鉴别
原始粒细胞
原始红细胞
胞体 10～18微米 15～20微米，可见瘤状突起
胞浆 透明，天蓝色
染色质
细砂粒状，均 匀平坦如薄纱
不透名，深蓝色，有油画感， 核周有淡染区
粗颗粒状，不均匀
核膜 不清楚
清楚
核仁
2～5个，较小， 清晰
1～2个，较大，界限不清
灰蓝，半透核明型，含无数散在圆粉尘形样嗜或天椭青颗圆粒，形有时可见空泡圆形或椭圆形
细砂粒状，均匀平坦如薄纱
圆形或不规则形， 有折叠纤细网状
淡红或淡蓝，透明，含中等量、大小较一致的特异性中性颗粒
极圆圆粗形形密 或 ，，不常凝规偏染成则一色大形侧块，，质，有有似折切车叠迹轮纤细平状细，网致坦中状间的，有砂如明显粒薄空隙状 纱，，有色泽 颗粒状，稍粗
纤细网状
极粗密，凝成大块，似车轮状，中间有明显空隙，有色泽
核膜浓厚， 极粗密，凝成大块，似车轮状，中间有明显空隙，有色泽 核膜 不清楚 淡红或淡蓝，透明，含中等量、大小较一致的特异性中性颗粒 界限不清 圆形，常偏一侧，有切迹
不清楚
四圆、形中 或幼不红规核细则仁胞形、，浆有细伪胞足、样2清淋突～巴起晰细5胞个的，鉴别较小，
血细胞形态学检查
血细胞形态学检查血细胞形态学检查是一种常见的临床检查方法，通过对患者血液中的各种细胞形态、数量、比例等进行观察和分析，可以为医生提供关键的诊断信息，帮助确定疾病的类型、病情的严重程度以及治疗方案的选择等。
本文将对血细胞形态学检查的基本原理、操作步骤、结果解读、临床应用等方面进行详细介绍。
一、血细胞形态学检查的基本原理血细胞形态学检查是一种通过显微镜观察和分析患者血液中各种细胞形态、数量、比例等的检查方法。
正常情况下，成年人的血液中包含红细胞、白细胞和血小板三种细胞。
其中，红细胞主要负责携带氧气和二氧化碳，白细胞主要负责免疫防御和炎症反应，血小板主要负责血液凝固。
在血细胞形态学检查过程中，可以通过染色、显微镜观察等手段对这些细胞的形态、数量和比例等进行精细的分析和判断，从而为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。
二、血细胞形态学检查的操作步骤1. 患者采血血液样本的采集是血细胞形态学检查的第一步。
通常采用静脉采血的方法，将患者的血液样本采集到一只干燥、无菌的试管中。
2. 制备血涂片制备血涂片是血细胞形态学检查的关键步骤之一。
首先，将采集到的血液样本滴于玻璃片上，然后用另一只玻璃片将其涂开，形成一张薄薄的血涂片。
为了使细胞更加清晰可见，通常会对血涂片进行染色处理。
3. 染色处理染色是血细胞形态学检查的另一个关键步骤。
目前常用的染色方法包括Wright染色、Giemsa染色、Leishman染色等。
这些染色方法可以使细胞的核、细胞质等成分更加清晰可见，便于观察和分析。
4. 显微镜观察经过染色处理后，将制备好的血涂片放入显微镜中进行观察。
通过显微镜可以对血液中的各种细胞形态、数量、比例等进行精细的分析和判断。
三、血细胞形态学检查的结果解读通过血细胞形态学检查，可以观察到血液中的各种细胞形态、数量、比例等信息。
针对不同的细胞类型，其形态和数量的变化可能会提示不同的疾病情况。
以下是常见的几种血细胞形态学检查结果的解读：1. 红细胞计数和形态红细胞计数和形态是血细胞形态学检查中最常见的指标之一。
正常血细胞形态学
裸核巨核细胞
胞核同产血小板巨核细胞.产生血小板巨 核细胞的胞浆解体后,释放出大量血小板, 仅剩一细胞核,故称为裸核巨细胞.
血小板
星形,圆形或椭圆形,无细胞核,胞质淡蓝色或淡红色,中 心部位有细小,分布均匀的紫红色颗粒.由于血小板具 有聚集性,故骨髓片中的血小板常成堆存在.
组织嗜碱细胞
各种原始细胞的鉴别
颗粒巨核细胞
胞体直径40-70um,有的可达100um以上,常不规则.胞 核巨大.胞质丰富,胞质中充满大量细小的紫红色颗粒 而呈淡红色.周边可有少许血小板附着.
产血小板巨核细胞
胞体直径40-70um,有时可达100um,胞核巨大且不规则. 核染色质呈团块状,胞浆极丰富,淡红色,颗粒可聚集呈 蔟.胞膜不清晰,其内外侧常有聚集的血小板.
可有伪足。胞核圆形，稍凹陷或不规则，可有折叠、扭 曲。核染色质疏松纤细，呈细丝网状，为淡紫红色。核 仁1-3个，大而清楚。胞质较其他原始细胞多，呈灰蓝色 不透明毛玻璃样，其中可有空泡，颗粒无或少见。
幼单核细胞
胞体直径15-25 μm ，圆形或不规则，有时可有
伪足。胞核常不规则，呈扭曲、折叠状，或有 凹陷切迹。核染色质开始聚集呈丝网状，核仁 有或消失。胞质增多，呈灰蓝色不透明，可见 空泡和细小紫红色的嗜天青颗粒。
；核染色质致密均匀呈深紫红色；核仁消失。胞质较多，呈清 澈的淡蓝色，常有少许嗜天青颗粒。
2 小淋巴细胞：胞体直径6-9 μm,圆形或类圆形。胞核类圆形
或有小切迹；核染色质紧密呈大块状，核仁消失。胞质量极 少，呈淡蓝色，常无颗粒。
原浆细胞
胞体直径12-25 μm 。圆形或椭圆形。胞核圆形，占胞体
的1/2以上，偏位或居中；核染色质呈粗颗粒网状，染呈 紫红色；核仁2~5个。胞质量多，呈深蓝色、不透明， 有核旁淡染区，无颗粒，可有空泡。
血细胞形态图片
低倍镜，增生活跃或明显活跃 (图一) 40倍，可见各阶段幼稚粒、有核红，粒系有核左移，有的中性中幼粒有核浆发育不平衡；幼红细胞体积偏小，偏蓝 (图二)100倍，幼红细胞胞体偏小，胞浆偏碱 外周血，成熟红细胞体积小，中心浅染去扩大(图三) (图四)低倍镜，增生活跃，细胞胞体偏大 (图五)低倍镜，增生活跃，细胞胞体偏大(图五) 40倍，可见各阶段巨幼红细胞(图六)高倍镜，杆状核巨型变(图七) 中巨幼红(图八)大红细胞及H-J小体（100倍）(图九) 过分叶核粒细胞(图十)低倍镜，增生明显活跃(图十一) 高倍镜，红系明显增生，中晚幼红为主，成熟红细胞多嗜性(图十二)低倍镜：成人CAA，髂骨：增生减低，高倍镜骨髓小粒：组织嗜碱细胞，油滴较多，小粒空虚，细胞面积约20％浆细胞，网状细胞(图十三) (图十四)儿童（CAA)髂骨涂片，增生活跃（-）粒系晚幼一下阶段为主，炭核红，巨核巨核少见(图十五) 少（40倍）(图十六)儿童SAA（胸骨）(图十七) 破骨细胞(图十八)(图十九) (图二十)核间桥（细胞内）(图二十一) 三核红(图二十二)假性Pelge-Huet畸形(图二十三) 环形核(图二十四)免疫酶标(图二十五) 环状铁粒幼红细胞(图二十六)增生极度活跃 CML (图二十七) BM:以中心中晚幼粒为主，嗜酸，嗜碱粒易见(图二十八)CML(PB) (图二十九)PV 增生活跃(图三十)成熟红细胞堆积排列(图三十一)外周血可见泪滴红(图三十二)ET外周血，血小板大片状分布(图三十三) ET 骨髓成熟产板巨核，(图三十四)幼稚浆细胞细胞形态(图三十五)骨髓涂片浆细胞淋巴瘤细胞形态学特征(图三十六)骨髓活检浆细胞骨髓瘤组织学表现(图三十七)骨髓活检浆细胞骨髓瘤组织学特征(图三十八)Russel包涵体(图三十九)(图四十) 原发性淀粉样变性图示肺血管淀粉样变性A：刚果红染色B：苹果绿双折光血清蛋白电泳(图四十一) 血清蛋白电泳示多克隆（黄色）和单克隆（蓝色）图中示γ区单克隆“M”蛋白峰免疫球蛋白的对比(图四十二)免疫固定电泳显示血和尿“M”蛋白成分图中示血清中IgG-κ轻链M蛋白成分以及κ B-J蛋白尿(图四十三)核呈分叶状的巨大浆细胞(图四十四) MM细胞胞体较大，核形不规则(图四十五)火焰状MM细胞双核三核MM细胞(图四十六) 由于Ig沉积MM胞浆中可见结晶及包含体(图四十七)AML伴有t(8;21)(q22;q22),(AML1/ETO) APL[AML伴有t(15;17)(q22;q11-12)异常中幼粒，核旁“朝阳红”(图四十九) M3的核形和大小不规则，常为肾形核或双核胞浆内充满粗大的嗜天青颗粒。
正常血细胞形态(附中文)
C: abundant in reddish with a full complement of rose-violet specific granules丰富，带红色带
满补充玫瑰紫特定颗粒
4 kinds of granules(颗粒)in granulocytes
granule, vacuole, inclusion body 细胞浆（cyto浆）：颜色，数量， 颗粒，液泡，包涵体
General trends that affect the morphology of blood cells during the developmental process
C: same as the metamyelocyte
Neutrophilic Segmented Granulocyte 中性分叶核粒细胞
S: 10 to 14 μm, round
N: usually 2 to 5 lobes, connected by filaments strand of heterochromatin, coarse clumped chromatin pattern.通常2至5个裂片，通过细丝
式略浓缩,核仁存在，但不总是可见的
C: moderate in amount, intensely blue and opaque, perinuclear pale zone is visible中等量，强烈蓝色和不透明，核周
白色区是可见的
Polychromatic normoblast （中幼红细胞）
细胞质
myeloblast
细胞核
promyelocyte
核仁
myelocyte
正常血细胞形态观察
正常血细胞形态观察实验准备一．器材：载玻片盖玻片：滴管：4个橡皮吸头：4个玻璃棒：4根烧杯：1000 ml，2个量筒：100ml、500 ml、1000 ml各一蜡笔棕色小口瓶碾钵载玻片处置：一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分钟，用流水冲洗，再经清洁液浸泡留宿，用流水反复冲洗，最后入95%酒精浸泡约1小时。
掏出，以干净布巾夹持玻片边缘擦干备用。
二．试剂：瑞氏染液240ml瑞氏染料粉剂0.1g纯甲醇（AR）60ml将粉剂放入干净干燥碾钵内，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶内，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反复，直至染料完全溶解为止。
新配制的染液需密封保留，室温放置1周后才能利用。
染料寄存越久，染色效果越好。
磷酸盐缓冲液1%KH2PO4 30ml1%Na2HPO4 20ml加蒸馏水至800 ml，调PH值到~，定容至1000ml。
甲醇二甲苯实验步骤一．涂片（一）血液涂片的制作（1）需载玻片2张，别离称为玻片1和玻片2（推片）。
（2）用玻片1一端接约3mm直径的血滴，将此玻片1维持水平。
（3）取另一边缘平整的载玻片2（推片），将其前端放在血滴前，与片1维持30°角并稍向后移与血滴接触，即见血液沿片2（推片）下缘散开，使血液展开并充满整个推片的宽度。
（4）立刻将推片与载玻片呈30°角，边轻压推片边将血液按下图的箭头方向推动涂抹，至血液铺完血膜为止。
（5）挥动片1使血膜吹干，用蜡笔将血膜边缘圈画备染色。
（6）每只动物涂片一张。
（7）一张良好的血片，要求厚薄适宜，头、体、尾分明。
（8）置30min～1hr后较利于观察红细胞的形态。
注意事项：如标本本身太短，可观察的部份会受局限，故以在离开载玻片另一端2cm地方涂抹为宜。
载玻片、推片的角度越小、血液越薄；涂抹速度越慢、也越薄。
在涂抹贫血病人的血液时，将推片稍竖起（不是30°而是35°～40°左右），以较快的速度推比较好，而对红细胞增高的病人则相反。
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血液病检验技术实验指导实验一、活化凝血时间测定【实验原理】同试管法CT测定。
试验中加入白陶土-脑磷脂的悬液以充分激活因子Ⅻ和Ⅺ，并为凝血反应提供丰富的催化表面，故称为活化凝血时间(ACT)；还可以避免因接触激活阶段的不同结果带来的影响，从而提高了本试验的敏感性和重复性.【试剂】1．脑磷脂的制备脑磷脂是将兔脑粉中的组织凝血活酶除去参与外源凝血途径的蛋白部分后所得的磷脂，故又称部分凝血活酶.取干燥兔脑粉1。
2g加25ml丙酮，放置2h后过滤,将此兔脑粉加氯仿25ml，连续震荡2h,以滤纸过滤，滤液蒸发后为淡黄色蜡状物，刮入玻璃研钵中,加12ml生理盐水研磨成均匀乳剂，以每安瓶0.25ml分装。
2．4％白掏土悬液白陶土2g加入50ml生理盐水中，室温保存，用前摇动。
3．4%白陶土-脑磷脂悬液将脑磷脂用巴比妥缓冲液作1:50稀释后，再加等量4％白陶土悬液混合而成。
4οC可保存3天,用时充分混合。
4．巴比妥缓冲液巴比妥钠11.75g、NaCl14。
67g、0.1mol/L的HCl430ml，加蒸馏水至2000ml.此缓冲液pH应为7.3，否则影响试验稳定性。
【操作方法】1．在含4%白陶土-脑磷脂悬液0。
2ml的试管中注入受检全血0.5，轻轻混匀。
2．其余操作同试管法CT测定。
【参考值】1。
70±0。
76（1.14～2。
05）min。
【临床意义】1．同试管法CT测定，但较其敏感，重复性也较好，可检出因子Ⅷ:C小于45％的亚临床型血友病。
2．是监测体外循环肝素用量的良好指标之一.实验二、血浆游离血红蛋白测定（邻一甲联苯胺法）【实验原理】邻一甲联苯胺在酸性溶液中和过氧化氢与血红蛋白共同作用生成氧化型联苯胺，产生绿色→蓝色→紫色,其颜色的深浅与血浆游离血红蛋白的含量呈正相关。
【试剂】1．2g/L邻一甲联苯胺溶液称取邻一甲联苯胺0.2g，溶于冰醋酸60ml，加蒸馏水至100ml,置于棕色瓶内于冰箱保存，色变暗应重配。
2．1%过氧化氢溶液用30％过氧化氢原液新鲜配制.3．10%冰醋酸溶液。
取10ml冰醋酸，加蒸馏水至100ml。
4．血红蛋白应用标准液将血红蛋白贮存液用生理盐水稀释成10mg/100ml备用。
5．抗凝试管取0.2ml100U/ml肝素于试管内，在80℃以下烘干,每管可抗凝2ml全血.【操作方法】1．将抗凝全血分离血浆。
2．取试管3支，分别标明测定、标准和空白，分别加入血浆、应用标准液,再向各管中分别加入邻一甲联苯胺溶液及1％过氧化氢溶液各1。
0ml，充分混匀，放置10min.3．于上述3支试管内分别加入10%冰醋酸溶液10ml混匀，用435nm波长比色，以空白调“0”,读各管吸光度。
4．计算:测定管吸光度游离Hb（mg/L)=________________________×100标准管吸光度【质量控制】1。
一切容器均应避免血红蛋白污染，标本勿溶血，否则可引起假阳性。
2.过氧化氢溶液浓度要准，新鲜配制。
3。
联苯胺醋酸的含水量不能低于15%和超过30%，否则均可引起吸光度降低。
4.标准液的加入量一定要准.【参考区间】<40mg/L【临床意义】血浆游离血红蛋白含量增加是血管内溶血的特征.血浆中血红蛋白含量超过与血清中结合珠蛋白的结合能力时,其含量即可升高。
微血管内溶血时，血浆游离血红蛋白含量均明显升高。
PNH为200～2500mg/L，输不合血型后为150~5000mg/L。
温抗体型自身免疫性溶血性贫血、镰状细胞贫血及地中海贫血时血浆游离血红蛋白可轻度或中度增加。
血管外溶血则正常。
实验三、血清结合珠蛋白测定（比色法）【实验原理】血清结合珠蛋白（Hp）是肝脏产生的a糖蛋白，它与游离的血2红蛋白（Hb）具有特殊的亲合力，可形成稳定的Hb-Hp复合物，后者在弱酸性（pH4）条件下,具有过氧化物酶的活性，测其活性可间接反映Hp的含量。
【试剂】O）2.8g,冰乙酸5。
1．乙酸缓冲液0。
2mol/L（pH4)称取乙酸钠（NaAC·3H27ml溶解，加蒸馏水至500ml。
2．0。
1%（V/V)愈创木酚溶液取1ml愈创木酚溶液于500ml乙酸缓冲液中，加蒸馏水至1000ml.3．0。
3％过氧化氢溶液临用前配制。
4．0。
5g/L高铁血红蛋白液.【操作方法】1．取静脉血分离血清，避免溶血.2．取受检血清0.4ml，与等量高铁Hb溶液混合。
3．取上述混合液0.2ml,加入于已预温（25℃）的愈创木酚5ml溶液中,再加入0.5ml0。
3%过氧化氢，于25℃水浴内作用8min，注意避光。
每份标本均应双份同时测定。
4．用蒸馏水调“0”点,440nm处读取吸光度。
5．由校正曲线查出受检血清中Hp含量.【质量控制】1．受检血清要避免溶血。
2．电泳时温度不能过高，应把电泳槽置于冷水中电泳。
否则电泳效果差，区带不易区分。
3．电泳液应经常更换,防止因pH及离子强度改变对电泳效果的影响。
【参考区间】0。
2～1.9gHb/L.【临床意义】Hp可与Hb结合，以除去血循环中游离的Hb。
各种溶血性贫血,无论血管内溶血还是血管外溶血，血清中Hp含量均明显降低，甚至测不出。
Hp 降低的程度与溶血程度呈正相关，即溶血越严重,血清Hp越低.如果血管内溶血超出Hp的结合能力，即可出现血红蛋白尿。
动态监测表明,急性溶血开始，血循环中游离Hb即迅速增加，随着Hb-Hp复合物的有效清除，血清Hp也随之恢复正常,因此血清Hp与游离Hb同时测定对溶血性贫血的诊断及疗效观察均具有重要意义。
肝病、传染性单核细胞增多症和先天性无Hp血症,Hp亦降低,故诊断溶贫时应除外上述疾患。
感染、创伤、肿瘤、肝外阻塞性黄疸及类固醇激素治疗时Hp可增加，这些情况下Hp正常也不能除外溶血。
醋纤膜电泳有助于区别血管内抑或血管外溶血。
各种溶血性贫血患者Hp均显著减少，甚至缺如，故电泳后无Hb—Hp区带，而仅有一条未结合的Hb区带。
但显著血管内溶血（如PNH）时，还出现一条高铁血红素白蛋白区带，而血管外溶血（如球形红细胞增多症）则无此区带.实验四、尿含铁血黄素试验（R ou’stest）【实验原理】含铁血黄素中的高铁离子（Fe3+）在酸性环境中与亚铁氰化钾作用，生成蓝色的低铁氰化铁，称为普鲁氏蓝反应.【试剂】1、20g/L亚铁氰化钾水溶液，用时新鲜配制。
2、3%盐酸。
【操作方法】取新鲜尿5ml离心沉淀，弃去上清，于沉淀中加入试剂①和②各1ml,混匀。
置室温10min，再离心沉淀,取沉淀物显微镜检查.【结果判断】如见到有分散或成堆蓝色颗粒（直径约1~3μm）即为阳性.存在于细胞内更为可信。
【质量控制】所用试管、玻片、试剂均应防止铁剂污染，否则出现假阳性.每次试验应做阴性对照。
如两种试剂混合后即显深蓝色,提示试剂污染高铁，不宜使用。
晨尿阳性率较高。
【临床意义】血浆游离血红蛋白经肾小球滤出后,被肾小管上皮细胞吸收、降解，最后形成含铁血黄素，贮存于细胞内。
当细胞脱落随尿排出，即成为含铁血黄素尿。
正常为阴性。
阳性主要见于慢性血管内溶血,尤其以PNH为多见。
即使无血红蛋白尿时也可呈阳性.但阴性结果也不能完全排除血管内溶血,因含铁血黄素颗粒的直径需>1μm时才能从镜下见到。
急性血管内溶血时，虽可有血红蛋白血症和血红蛋白尿，但还不能形成足够大的含铁血黄素颗粒，需在数日后才阳性，并可持续数周。
实验五、红细胞渗透脆性试验【实验原理】红细胞在低渗盐水中，水分透过细胞膜内渗，使之膨胀破坏而溶血.本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水的抵抗力，以鉴别某些与红细胞形态有关的溶血性贫血。
红细胞对低渗盐水的抵抗力与其表面积和体积的比值有关，厚度越大，该比值越小,即渗透脆性越大;反之，脆性越小.以浓度为横坐标，溶血度为纵坐标绘制曲线，找出50％溶血对应的盐浓度，即红细胞中间脆性（MCF），后者较敏感。
【试剂】171mmol/LNaCl（10g/L)溶液：将100℃烘干的分析纯氯化钠1。
0g 置于100ml容量瓶中加少量蒸馏水溶解后,再加蒸馏水至刻度处。
【操作方法】取12支试管，按5-1分别加入10g/LNaCl和蒸馏水。
表5—1红细胞渗透脆性试验操作表(国际单位制）试管号12345678910111210g/LNaCl（ml)1。
71。
61。
51。
41.31.21。
11.00.90。
80.70.6蒸馏水（ml）0.80。
91.01.11.21.31.41。
51.61.71。
81。
9NaClSIg/L6.86.46。
05。
65。
24。
84.44.03。
63。
22。
82.4制mmol/L116.3109.4102.695。
888。
982.175。
268.461.654。
747.941。
0浓度旧制（％）0.680.640.600.560.520。
480.440。
400。
360。
320。
280。
24然后各管立即加入新鲜静脉血各1滴，并从低浓度到高浓度逐管颠倒混匀,室温静置。
【结果判断】静置室温2h,观察结果,从高浓度开始，上清液呈透明红色而管底有红细胞者为开始溶血管；溶液透明红色,管底完全无红细胞者为完全溶血管.【质量控制】1．NaCl溶液浓度要准确，故应干燥精称.2．注射器和试管必须清洁干燥.3．应用新鲜静脉血,忌用抗凝血，必要时可用去纤维蛋白血或肝素抗凝血.4．结果不易判断时可离心后观察。
5。
黄疸病人开始溶血不易观察,严重贫血红细胞太少时均可用等渗盐水将红细胞洗涤后再配成50%红细胞悬液进行试验。
6．每次试验均应做正常对照,与被检血相差0。
4g/L,即有临床意义。
【参考区间】开始溶血：71.8~78。
6mmol/L（4.2～4。
6g/L)完全溶血：47。
8～54。
7mmol/L（2.8~3.2g/L）中间脆性：68.5～76.2mmol/L【临床意义】患者比正常对照高6.8mmol/L或中间脆性>76.2mmol/L有诊断价值.脆性增加：见于遗传性球形红细胞增多症，也见于自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。
脆性降低:见于缺铁性贫血,各型地中海贫血,HbC、D、E病,脾切除术后及阻塞性黄疸等。
实验六、酸溶血试验(Ham'stest)【实验原理】正常人红细胞在酸化（pH6.6～6.8）的自身新鲜血清中(内含补体和备解素），经37℃孵育1h不溶血。
而阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者，因红细胞膜缺陷，对补体溶血效应敏感性增强，则发生溶血。
【试剂】1．0。
2mol/LHCl。
2．8。
5g/LNaCl溶液。
【操作方法】1．配制50%红细胞悬液取10ml离心管2支，标明患者、对照，均加入8。
5g/LNaCl溶液5~6ml，分别加入患者和对照者未梢血十几滴，混匀，离心后弃去上清,如此重复洗涤红细胞2次,最后配成50％红细胞悬液备用。
2．分离正常对照血清取与患者同型或AB型血3~5ml，待自然凝固后分离血清。