常规微生物学试验分析
微生物期末实验总结报告
微生物期末实验总结报告一、绪论微生物学是研究微生物的形态、生理、代谢以及与宿主和环境之间的关系的学科。
微生物广泛存在于自然界中的各个环境中，对地球上的物质转化和生物循环起着重要的作用。
本次微生物期末实验旨在通过实际操作，加深对微生物学理论知识的理解，并培养实验技能。
二、实验目的本次实验的主要目的包括：1. 学习微生物实验操作方法，包括无菌操作、菌种接种、菌液稀释、培养基制备等；2. 学习常见的细菌菌种特性的鉴定方法；3. 学习观察和记录微生物生长过程的方法；4. 学习细菌的培养方式和生长规律。
三、实验步骤1. 实验一：无菌操作技术实验一旨在学习无菌操作技术，以避免微生物实验中的污染。
实验中我们按照实验标准操作程序，准备好所需的培养基、试剂和设备，并在无菌条件下进行操作。
2. 实验二：菌种接种和菌液稀释实验二旨在学习菌种的接种方法和菌液的稀释方法。
我们先接种已知菌种，然后用菌液稀释系列倍数，并在不同条件下进行培养观察。
3. 实验三：硫醇呼吸性菌的鉴定实验三主要学习硫醇呼吸性菌的鉴定方法。
我们选择已知菌种进行划线培养，观察菌落形态、气味和色素的产生，以确定菌种的鉴定结果。
4. 实验四：细菌的营养需求和生理特性根据不同的营养需求和生理特性，我们选择不同的培养基进行培养，观察菌落的形态和生长情况，从而推测菌株的特性。
5. 实验五：细菌的菌液稀释和菌群分析实验五主要学习菌液的稀释方法和菌群的分析。
我们将菌液经过稀释，并通过涂布法和铺平法将菌液均匀涂布到培养基上，待菌落形成后进行菌群分析。
四、实验结果与讨论在本次实验中，我们成功学习了无菌操作技术、菌种的接种方法和菌液的稀释方法，掌握了硫醇呼吸性菌的鉴定方法以及菌株的营养需求和生理特性。
通过实验操作，我们观察到了不同菌种在不同培养条件下的生长情况，并得出了一些有关微生物生理特性的结论。
然而，本次实验中也存在一些问题。
首先，在实验操作过程中，有时会因为操作不慎或设备不合适而导致菌液的污染，降低了实验结果的准确性。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
微生物学实验报告
微生物学实验报告(格式标准)(生命科学专业)教师:黎勇目录索引实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测与分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八(综合实验)化能异养微生物的分离与纯化13课程名称: 微生物学实验班级:化生系生命科学本科实验日期: 指导教师:黎勇实验一油镜的使用与细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术;观察细菌的基本形态;学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1、 N·A=n·sinα2、 D=λ/2N、A3、目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大瞧不清,未分辨物放得再大也瞧不清。
4、用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸;细菌、放线菌等固定装片;培养18小时左右的B、subtilis、 S、arueus 菌斜面培养物;无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕:(一) 油镜的使用镜检装片在中倍(或高倍镜)下找到目的物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位(光斑处)滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台(缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触) 粗调器徐徐下降载物台(密切注视视野,当捕捉到物像时,立即用细调器校正) 仔细观察并绘图取出装片,清洗油镜:擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留(用手指辅助,迅速拭擦一、二次) 用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯(2-3次)。
(二) 细菌的简单染色法:涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察(三) 细菌运动性的观察取洁净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野,选取所观察的微生物绘图,注意特殊结构、形状与排列。
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
细菌实验报告分析讨论(3篇)
第1篇一、实验背景与目的随着微生物学研究的不断深入，细菌作为微生物学研究的重点之一，其分类、生理、生化特性等方面受到广泛关注。
本实验旨在通过观察细菌的形态、培养特性以及生化反应等，对细菌进行鉴定，并分析实验过程中遇到的问题及原因。
二、实验材料与方法1. 实验材料（1）细菌样本：本实验选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等细菌作为实验对象。
（2）培养基：营养肉汤、LB培养基、固体培养基等。
（3）试剂：革兰氏染色液、生化试剂等。
2. 实验方法（1）细菌形态观察：采用光学显微镜观察细菌的形态、大小、染色特性等。
（2）细菌培养：将细菌接种于不同培养基，观察细菌的生长状况。
（3）生化反应：进行糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等，观察细菌的生化特性。
三、实验结果与分析1. 细菌形态观察通过光学显微镜观察，大肠杆菌呈短杆状，两端钝圆；金黄色葡萄球菌呈球形，排列紧密；枯草芽孢杆菌呈长杆状，两端钝圆，具有芽孢。
2. 细菌培养将细菌接种于不同培养基，观察细菌的生长状况。
结果显示，大肠杆菌在LB培养基上生长良好，金黄色葡萄球菌在营养肉汤中生长良好，枯草芽孢杆菌在固体培养基上形成菌落。
3. 生化反应进行糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等，观察细菌的生化特性。
结果显示，大肠杆菌发酵葡萄糖，产生酸和气体；金黄色葡萄球菌不发酵葡萄糖，不产生酸和气体；枯草芽孢杆菌发酵葡萄糖，产生酸，不产生气体。
四、讨论与分析1. 细菌形态观察在本实验中，通过观察细菌的形态，可以初步判断细菌的种类。
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的形态特点符合其分类学特征。
2. 细菌培养细菌在不同培养基上的生长状况，可以反映细菌的生理特性。
本实验中，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在不同培养基上的生长情况，与其生理特性相符。
3. 生化反应生化反应是细菌鉴定的重要手段。
在本实验中，通过糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等，可以进一步确定细菌的种类。
微生物学实验(详细介绍)
（2）镜检： 1）毛霉和黑根霉的孢子的形状、颜色、大 小、孢子囊、中轴体的形状，有无假根和葡 萄菌丝。 2）黑曲霉的分生孢子的形状、颜色、大小、 顶囊的形状、小梗排列隔膜。 3）青霉的分生孢子的形状、颜色、大小、 小梗的排列方式，菌丝的隔膜。
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（3）将观察结果绘图，并注意各部分名称。
霉菌的静孢子 左：毛霉的孢子囊；中：孢子囊壁破裂，露出静 孢子；右：囊轴
旋仔细地从上到下进行观察。
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厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
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基础知识
三、 实验步骤
• (一) 显微镜的使用 • 1. 观察前的准备工作 • (1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要
双眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。 • (2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备
好。 • (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否
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五、记录实验结果
• 绘图
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六、 思考题
• 1.使用油镜时，为使么选用香柏油或液体石蜡作 为物镜与玻片间的介质？其他液体行吗？
• 2.油镜用毕后，为什么必须把镜油擦净？用过多 的二甲苯或用酒精擦镜有什么危害？
• 3.什么是物镜的同焦现象？他在显微镜观察中有 什么意义？
• 4.观察时为什么要用左眼，并且两眼都应睁开？
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四、显微镜保养和使用中的注意事项
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以
保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最
后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油 镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片 或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座 ，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉 菌而腐蚀镜片。
微生物学实验总结
1.抗“O”试验（ASO test）：链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生相应抗体ASO，当两者中和后，再加入SLO 乳胶试剂，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗体与乳胶试剂反应，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。
原理：中和试验方法：间接凝集结果：效价大于400单位为阳性意义：链球菌感染指标或风湿热及其活动性的辅助诊断2.肥达试验Widal test原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。
用途：辅助诊断伤寒，副伤寒结果：考虑正常人群抗体水平动态观察：恢复期效价增加≥4倍O IgM,出现早，维持时间短，特异性差H IgG,出现迟，维持时间长，特异性强O高 H高肠热症可能性大O低 H低排除O高 H低早期或有交叉反应的其它沙门菌感染O低 H高预防接种或曾患过伤寒3.抗酸染色法(acid-fast stain) ：以5％石炭酸复红加温染色，再用3％盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)。
4.结核菌素试验定义：是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起迟发型超敏反应（Ⅳ型变态反应）的一种试验材料：旧结核菌素、纯蛋白衍生物( PPD )方法：前臂皮内注射PPD5单位结果：注射后72h，红肿硬节≤5mm 阴性→未感染；＞ 5mm 阳性→已感染（接种BCG等）≥ 15mm 强阳性→活动性感染假阴性：感染初期、严重结核病患者、细胞免疫功能降低（麻疹、AIDS、肿瘤、免疫抑制剂) 应用：①选择卡介苗接种对象和测定卡介苗接种后的免疫效果。
结核菌素试验阴性者应接种或补种卡介苗②作为婴幼儿(尚未接种过卡介苗者)结核病的辅助诊断③在未接种卡介苗的人群中作结核杆菌感染的流行病学调查,了解人群自然感染率④测定肿瘤患者的细胞免疫功能5.外斐反应：变形杆菌代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，检测人类或动物血清中有无相应的抗体本质：交叉凝集试验，立克次体病的辅助诊断6.革兰染色法：制片→涂片→干燥→固定→染色初染（结晶紫1min）→媒染（碘液1min）→（95%酒精 30sec）→复染（稀释复红30sec）→印干→油镜镜检。
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告医学微生物学实验报告引言：微生物是一类无法看见的微小生物体，它们存在于我们周围的环境中，包括我们自己的身体内。
微生物在医学领域中起着重要的作用，既可以是疾病的致病因子，也可以是药物的生产者。
本实验旨在通过实验方法和观察结果，探索微生物在医学领域中的应用。
实验一：细菌培养和鉴定在实验室中，我们首先收集了一些样本，包括空气、水、土壤和人体表面的皮肤。
然后，我们将这些样本分别接种在不同的培养基上，培养一段时间后观察结果。
结果显示，空气中存在大量的微生物，其中细菌是最常见的。
而水中的微生物数量相对较少，主要是一些单细胞的微生物。
土壤样本中的微生物种类丰富，包括细菌、真菌和寄生虫。
人体表面的皮肤样本中的微生物主要是细菌，这些细菌通常是人体的正常微生物群落的一部分。
通过鉴定这些细菌，我们发现了一些常见的致病菌，如大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
这些细菌在人体中可能引发感染和疾病。
另一方面，我们也发现了一些有益的细菌，如乳酸菌和酵母菌。
这些细菌被广泛应用于食品加工和制药工业中。
实验二：药敏试验药敏试验是一种常用的方法，用于评估细菌对不同抗生素的敏感性。
在本实验中，我们选择了几种常用的抗生素，并将它们分别加入到含有细菌的培养基中。
然后观察细菌在不同抗生素浓度下的生长情况。
结果显示，不同细菌对抗生素的敏感性有所不同。
有些细菌对某种抗生素高度敏感，而对另一种抗生素则不敏感。
这表明了不同抗生素对不同细菌的杀菌效果不同。
药敏试验的结果可以帮助医生选择合适的抗生素治疗感染病例，以提高治疗效果。
实验三：微生物的环境适应能力微生物具有很强的环境适应能力，可以在各种极端条件下生存和繁殖。
在本实验中，我们将细菌分别暴露在高温、低温、酸性和碱性环境中，观察其生长情况。
结果显示，有些细菌对高温和低温环境具有较高的耐受性，而对酸性和碱性环境则较为敏感。
这可能是因为细菌在不同环境下具有不同的生理和代谢特性。
了解细菌的环境适应能力有助于我们预测和控制细菌在不同环境中的生长和传播。
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常规微生物学试验曾占壮•消毒与灭菌•病原菌的分离、纯化与保存•细菌鉴定•细菌的药物敏感性试验消毒与灭菌一、概念1. 消毒：是指杀死或消除所有病原微生物的措施，可达到防止疾病传播的目的。
例如将物体煮沸（100℃）10分钟或60-70℃加热处理30分钟，就可杀死病原菌的营养体，但绝非杀死所有的芽孢，常用于牛奶、食品以及某些物体表面的消毒。
利用具有消毒作用的化学剂（又叫消毒剂，disinfectant），也可进行皮肤、体膜或体内的处理。
2. 灭菌：是指用物理或化学因子，使存在于物体中的所有生活微生物，永久性地丧失其生活力，包括最耐热的细菌芽孢。
这是一种彻底的杀菌措施。
通过灭菌的物品不再存在任何有生命的有机体。
二、常规灭菌方法（一）加热法干热灭菌（1）火焰灼烧灭菌：适用于接种环、接种针及金属用具、无菌操作时的试管口和瓶口的灭菌。
（2）热空气灭菌：即通常所说的干热灭菌，是在电烤箱内利用高温干燥空气进行灭菌，适用于玻璃器皿的灭菌。
湿热灭菌（1）高压蒸汽灭菌：将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，在一定压力的环境下经过一定的时间的灭菌方法。
灭菌压力的大小和时间的长短可根据灭菌物品的种类和数量的不同而有所变化。
此法适用于培养基、工作服、玻璃器皿等的灭菌。
（2）常压蒸汽灭菌：在不具备高压蒸汽灭菌的情况下，常压蒸汽是一种常用的灭菌方法。
对于不易用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等可采用此法灭菌。
由于压力为常压，其温度不超过100℃，仅能使大多数微生物被杀死，而产芽孢细菌却不能在短时间内被杀死，因此可采用间歇灭菌的方法以杀死芽孢细菌，达到彻底灭菌的目的。
（3）煮沸消毒法：注射器和解剖器械等可采用此法。
一般煮沸时间为10~15min，可以杀死细菌所有营养细胞和部分芽孢。
如延长煮沸时间，并在水中加入1%碳酸氢钠或2%~5%石炭酸，效果更好。
（4）超高温杀菌：是指在温度和时间标准分别为135~150℃和2~8s的条件下对牛乳或其他液态食品进行处理的一种工艺，其最大优点是既能杀死产品中的微生物，又能较好地保持食品品质与营养价值。
此法的原理是建立在食品品质及营养成分等，不遭受热力破坏的温度与微生物受热死亡的温度两者之间差异很大的规律上的。
（二）过滤除菌1. 应用于血清、抗生素、糖溶液等易受热破坏的物质的灭菌。
2. 过滤器蔡氏过滤器：据其孔径大小可分为三种型号。
（1）k型—孔径最大，作一般澄清用；（2）EK 型—滤孔较小，用以一般细菌的滤除；（3）EK-S型—滤孔最小，可阻止大的病毒通过，使用时可根据需要选用。
微孔滤膜过滤器：最常用的过滤器，其滤膜为醋酸纤维酯和硝酸纤维酯的混合物制成的薄膜，孔径分0.025，0.05，0.10，0.20，0.22，0.30，0.45，0.60，0.65，0.80，1.00，2.00，3.00，5.00，7.00，8.00和10.00μm，实验室中用于除菌的微孔滤膜孔径一般为0.22 μm，但若欲滤除病毒，则需更小孔径的微孔滤膜。
（三）辐射灭菌•紫外线灭菌：在微生物工作及生产实践中应用较广。
无菌室或无菌接种箱或超净工作台的空气或台面可采用此法灭菌。
•60Co—γ射线灭菌：广泛应用于不能进行加热灭菌的纸、塑料薄膜、各种积层材料制作的容器以及医用生物敷料皮等的灭菌。
此法的优点为穿透力强，可在厚包装完好的条件下灭菌。
（四）化学药品灭菌化学药品消毒灭菌法是应用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。
能破坏细菌代谢机能并有致死作用的化学药剂为杀菌剂；只是抑制细菌代谢机能，使细菌不能增殖的化学药剂为抑菌剂。
化学药品对微生物的作用是杀菌还是以军以及作用效果还与化学药品浓度的高低、处理微生物时间的长短、微生物的种类以及微生物所处的环境等有关。
三、自动立式压力蒸汽灭菌器操作规程1. 放入待灭菌物品：把灭菌物品予以妥善包扎，各包之间留有间隙，保障其气路畅通；2. 接通电源；3. 加水：把生活用水从灭菌桶与蒸锅夹缝内加入至高水位灯亮；4. 设定灭菌温度：按动控制面板上增加键或减少键，在绿色数显上设定所需温度，按动移位键进行移位设定，当每次设定所需温度结束时，按确认键确认，即可完成设定；5. 设定灭菌时间：温度设定完毕且确认后，绿色温度数显状态自动切换成时间状态，再用增键或减键±，设定所需的灭菌时间，设定完毕后，按确认键确认；6. 密封：堆放与开机程序设定完成后，将压板推入固定柱内，应注意压板必须全部推到固定柱内，然后将手轮向右旋紧，使盖与主体密合；7. 灭菌：关闭放气阀及下排气阀，当压力表指针升至0.05Mpa时，开启放气阀排气至压力表指针回复0位，关闭放气阀，当压力表指针升至0.1~0.15Mpa之间后, 开启下排气阀让微量的蒸汽通过下排气阀在整个灭菌过程中不断排出；8. 灭菌物品取出：灭菌结束时，必须先将电源切断，停止加热待其冷却，直至压力表指针回复至零位，打开放气阀排去余气，才能将盖开启。
病原菌的分离、纯化与保存一、病原菌的分离选取具有典型症状的病体或病灶组织，对于体表或鳃，先经无菌水洗涤后用接种环挑取少量组织；对体内组织、器官，先用酒精将病鱼胸腹部进行大面积消毒，再经无菌水洗涤后，在无菌条件下，从肛门附近剪开一个缺口，沿腹部左侧和右侧向上剪去胸腹壁暴露脏器，以70％的酒精药棉消毒脏器并经无菌水洗涤后，接种环穿刺挑取少量组织。
然后划线接种于预先准备好的培养基上，25~37℃培养24~48小时，选取形状和色泽一致的优势单个菌落，重复划线分离培养以获得纯种。
接种用具包括接种环和接种针，由环（针）、金属柄和绝缘材料三部分组成。
制作接种环（针）的材料要求硬度适宜、易于传热，火焰灼烧后能较快冷却，以铂丝最佳，但因其价格昂贵，现多用镍铬丝。
环的直径为2~4mm，长5~8cm。
操作环境1. 无菌室是实验室内部安装的用于无菌操作的工作室，一般需安装两道以上的门，内外室均有紫外线杀菌灯、照明灯，内室（即操作室）还要有电源插座。
本实验室无菌室操作流程：开紫外灯灭菌10~15mi n→人员进入一更→换鞋→进入二更→更换衣服→进入操作室进行相关试验操作2. 超净工作台通过空气过滤装置使工作台内部保持无菌状态。
超净工作台的滤网（初效过滤器）应定期清洗，清洗周期一般为３～６个月培养设备1. 电热恒温培养箱：用于培养普通需氧或兼性厌氧菌。
温控范围在室温以上，无致冷作用。
2. 生化培养箱：用于培养普通需氧或兼性厌氧菌。
温控范围广，有致冷作用，能将培养温度设置在室温以下。
3. CO2培养箱：用于分离培养生长时需CO2的细菌，如嗜血杆菌和奈瑟氏球菌等。
4. 厌氧袋、厌氧罐和厌氧手套箱：用于分离培养厌氧菌。
5. 摇床和振荡培养箱：用于液体培养。
病原菌的分离方法1. 平板连续划线分离法此法适用于含菌数量较少的样品。
接种时，先将样品涂于琼脂平板的一角，然后用接种环自样品涂布部位开始，连续划成若干条分散的平行线。
2. 平板分区划线分离法此法适用于含菌量较多的样品。
（1）用接种环先将样品涂布在平板第一区并作数次划线；（2）接种环灼烧并冷却后依次在第二、三、四区作数次划线；（3）每一区域的划线应接触上一区域的接种线3~5次，使菌量逐渐减少，以利出现单个菌落；（4）接种环的灼烧次数依样品的含菌量而定，并非每划一区都需灼烧。
3. 液体培养基培养法此法主要用于含菌量较少的样品的增菌培养。
（1）用灭菌接种环挑取少量样品；（2）在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使样品混匀在液体培养基中。
二、细菌的纯化纯化：微生物学中将在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物，而只有一种微生物的培养物称为纯培养（物）。
获得微生物纯培养的过程即为纯化。
纯化是分离的延续。
微生物纯化方法：同分离方法。
三、菌种的保藏（一）菌种保藏的原理菌种保藏的具体方法很多，原理却大同小异。
首先要挑选典型菌株的优良纯种，最好采用它们的休眠体（如分生孢子、芽孢等）；其次，还要创造一个适合其长期休眠的环境条件，诸如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或酸度中和剂等。
一种良好的保藏方法，首先应能保持原菌的优良性状不变，同时还须考虑方法的通用性和操作的简便性。
（二）菌种保藏的常用方法1. 传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用）。
斜面保藏法是一种最基本的方法，适用范围广，细菌、真菌及放线菌都可应用。
当微生物在适宜的斜面培养基和温度条件下生长良好后，保存在4~6℃的冰箱，一定时间后重新移种一次。
一般菌种可保藏3～6个月。
当然保藏温度和时间都不是绝对的，个别菌种甚至在37℃保藏为宜，也有的需要1～2周传代一次。
这种方法的优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等；弊端是传代次数多了容易发生变异，如毒力减小、基因失落等，传代次数多也容易使污染机会增加。
2. 液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
主要适用于霉菌、酵母菌、放线菌、需氧性细菌等的保存。
3. 载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法。
1）土壤保存法：主要用于形成孢子回孢囊的微生物的保存，特别适用于真菌和放线菌不改变性状的长期保存。
2）砂土保存法：常用于梭状芽孢杆菌和一部分霉菌的保存，可保存数年。
3）硅胶保存法：本法对保存链孢霉菌较有效,对酵母菌的保存也较有效。
4）磁珠保存法：用本法保存根瘤菌在室温下至少可保存2年半。
5）滤纸保存法：适用于对干燥抵抗力较强的微生物，如产芽孢细菌和葡萄球菌，另外噬菌体、放线菌和丝状菌也可用本法。
4. 悬液保存法1）蒸溜水保存法：霉菌、酵母菌和放线菌的大部分，使其悬浮于蒸馏水中，可在室温下保存数年，青枯病假单孢杆菌也可用本法。
2）糖液保存法：过去用于保存酵母菌，但现在已不常用。
3）其他悬液保存法：如乳链球菌可用PBS保存，放线菌可用0.125%稀琼脂液保存。
5. 寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。
病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
6. 冷冻保藏法可分低温冰箱（-20~-30℃，-50~-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
7. 冷冻干燥保藏法使微生物在冷冻状态下，在减压下利用升华现象除去水份（真空干燥），使细胞的生理活动事实上停止，从而长期维持生活状态，本法适用于大多数细菌和放线菌，另外病毒、噬菌体、立克次氏体、霉菌和酵母菌在多数情况下用本法保存。