金黄色葡萄球菌检验
金葡球菌实验报告
一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。
（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。
（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。
2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。
（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。
（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。
（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。
四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。
2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。
3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。
4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。
5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。
五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检测ppt
• 3、生化特性：
• 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲 基红反应阳性，VP反应弱阳性。
• 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化 明胶。
• 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感 性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
四金黄色葡萄球菌的流行病学
• 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人 和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌， 其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康 人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染 的机会很多。
• 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引 起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
二金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型
• 对分型进行简单的了解 • １、血清学分型： • 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 • 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 • 多糖抗原有特异性。 • 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶
阴性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 • ２、噬菌体分型： • ３、根据肠毒素分型： • ４、根据血浆凝固酶分型：
•
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：
• 季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、 蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引 起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%， 所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
• 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：
• 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染； 食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生 了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受 到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其 他部位的污染。
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
01
02
样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
03
04
金黄色葡萄球菌检测实验报告
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。
2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。
临床样本：直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
金黄色葡萄球菌检验
葡萄糖肉浸液肉汤的制备：
成分：绞碎牛肉500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸 氢二钾2g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL，pH7.4～7.6。
制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，与蒸馏水 混合后放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小 时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收 集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、葡萄糖， 氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH，煮沸并过滤、分 装，121℃30min高压灭菌。
金黄色葡萄球菌检验
范俐
一、生物学特性
——菌体形态及培养特征
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.0微米，镜检 时呈单个、成对、四联或不规则的簇群，如 葡萄状，故称为葡萄球菌。
大多数菌株最适生长温度30-37℃，最 适pH为7.0-7.5；
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团 呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取 决于生长的条件，故称金黄色葡萄球菌。
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落，其 黑色常较典型菌落淡些，且外观可能粗燥，质地 较干燥。
B-P平板
检验程序
——鉴定之革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，组成葡萄状
检验程序
——鉴定之凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，因此对其鉴别的 主要试验是测定其凝固酶。 方法一：试管法 吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加 入培养24h的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物0.5mL， 振荡摇匀，放36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察 一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置 时，呈现凝块者，被认为阳性结果。
定性 检测
25g样品+ 225ml 生理盐水
5mL样品匀液（1:10）+ 50mL胰酪胨大豆肉汤
金黄色葡萄球菌的测定
金黄色葡萄球菌的测定1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。
2 检验方法2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。
显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。
是常见的引起食物中毒的致病菌。
常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。
2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。
（2）冰箱：2℃～5℃。
（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。
（4）天平：感量0.1g。
（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。
（7）无菌培养皿：直径90mm。
（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4；2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
（2）B－P琼脂平板1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.22）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。
3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。
分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。
临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。
培养基应是致密不透明的。
使用前在冰箱储存不得超过48h。
金黄色葡萄球菌肺炎的检查
金黄色葡萄球菌肺炎的检查金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，可以引起多种感染，其中包括金黄色葡萄球菌肺炎。
金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的肺部感染，会给患者的健康带来危害。
在临床上，及早诊断金黄色葡萄球菌肺炎至关重要，而检查是确诊这种感染的关键步骤之一。
临床症状金黄色葡萄球菌肺炎的临床表现多样，患者可能出现以下症状：•发热•咳嗽•咳痰•胸痛•呼吸困难•胸部 X 光检查有异常表现如果患者出现以上症状，尤其是在有金黄色葡萄球菌感染风险的情况下，应及时进行检查以明确诊断。
检查方法1. 血液标本检查通过抽取患者的血液标本进行实验室检查，可以检测出金黄色葡萄球菌的存在。
一般情况下，金黄色葡萄球菌会在血液中产生感染相关的标志物，比如 C 反应蛋白和白细胞计数增高等。
2. 咳痰标本检查金黄色葡萄球菌肺炎患者常常伴有咳嗽和咳痰，通过检测患者的咳痰标本，可以确定是否存在金黄色葡萄球菌的感染。
实验室会对咳痰标本进行培养和鉴定，以确定感染的病原体。
3. 气管镜检查在严重病例下，可以通过气管镜检查，直接观察患者的肺部情况。
医生会通过气管镜进入气管和肺部，对肺部病变进行观察和取样，以确诊金黄色葡萄球菌肺炎。
4. 胸部 X 光检查胸部 X 光检查是金黄色葡萄球菌肺炎的重要诊断手段之一。
通过 X 光片可以观察肺部是否存在感染病变，比如肺实变、肺不张等。
结合临床表现和其他检查结果，有助于确诊金黄色葡萄球菌肺炎。
结语金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的感染疾病，及早诊断和治疗对患者的健康至关重要。
通过上述检查方法，可以帮助医生明确金黄色葡萄球菌肺炎的诊断，从而制定有效的治疗方案。
建议患者在出现肺部感染症状时及时就医，并根据医生建议进行相应检查，以获得及时有效的治疗。
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。
具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。
金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。
2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。
金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。
- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。
- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。
3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。
通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。
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• 耐热DNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球 耐热DNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球
菌致病力的指标之一。该酶的最适pH为9.0。 菌致病力的பைடு நூலகம்标之一。该酶的最适pH为9.0。
金黄色葡萄球菌的肠毒素
• 金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重
要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污 染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导 致的。
• 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷
酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶( 酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置 适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的 适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的 样品匀液。
增菌与分离培养
• 增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL 增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL
7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉汤培养基内， 7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉汤培养基内， 36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯 36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯 化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大 化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大 豆肉汤内呈混浊生长。
这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。
• 血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。
一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有 致病力。否则为无力的菌株。血浆凝固酶对热稳定， 能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大 能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大 部分活性。
牛肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进 葡萄球菌的生长。
样品的稀释
• 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸
盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内， 8000r/min～ 8000r/min～10000 r/min均质1min～2min，或放入 r/min均质1min～2min，或放入 盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质 盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质 器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
• 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1个或 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1
以上，分别接种到5mL BHI和营养琼脂小斜面， 以上，分别接种到5mL BHI和营养琼脂小斜面， 36℃±1℃培养18 h～ 36℃±1℃培养18 h～24 h。 h。
• 取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入可 取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入可
金黄色葡萄球菌检验
概况
• 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种， 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，
从人体上可检出12个种。 从人体上可检出12个种。 • 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的 粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致 病菌。 • 金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被 称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起 化脓性炎症，又称为化脓性球菌。
培养特性：
• 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良
好。
• 需氧或兼性厌氧。 • 最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。耐盐性强， 最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。耐盐性强，
在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于 在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于 筛选菌种。
分离培养基
• 血琼脂：是一种基础培养基，含有5%的脱 血琼脂：是一种基础培养基，含有5%的脱
纤维血(羊血或兔血) 纤维血(羊血或兔血)。用于观察金黄色葡 萄球菌的溶血现象。金黄色葡萄球菌在血 琼脂平板上呈β 琼脂平板上呈β溶血。
• 金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，
有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、 表面光滑，周围有透明的β 表面光滑，周围有透明的β溶血环。
疑菌落的BHI培养物0.2mL～0.3mL，振荡摇匀，置 疑菌落的BHI培养物0.2mL～0.3mL，振荡摇匀，置 36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观 36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观 察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现 6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现 凝块）或凝固体积大于原体积的一半，判定为阳性 结果。
葡萄球菌 。 • 报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄 报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄 色葡萄球菌。
谢谢! 谢谢!
• 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板
和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。BairdParker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。 Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。
涂片染色
报告
增菌培养基
• 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基， 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，
因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此 增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多 数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。
• 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%，以胰酪胨替代 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%，以胰酪胨替代
血。
• 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有
白色沉淀环的菌落。
• 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不
产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛 VP试验多为阳性，不产生靛 基质。触酶阳性。
金黄色葡萄球菌的酶
• 金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。 金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。
金黄色葡萄球菌的生物学特性
形态与染色： • 金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.4～ 金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.4～ 1.2µ ，大小不一，平均直径约为0.8µ 1.2µ m，大小不一，平均直径约为0.8µ m。 • 革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。无鞭毛、无 芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰 氏阴性。
• 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的
肉汤培养物作为对照。
• 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL BHI， 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL BHI，
36℃±1℃培养18h～48h，重复实验。 36℃±1℃培养18h～48h，重复实验。
结果报告
• 如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色
型毒力较弱摄入25µg，才引起中毒。一般认为引 型毒力较弱摄入25µg，才引起中毒。一般认为引 起人中毒的最小剂量是1.0~7.2µg/kg。 起人中毒的最小剂量是1.0~7.2µg/kg。
金黄色葡萄球菌的检测程序
检样25g(mL) 225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液 检样25g(mL) ＋225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 36± 36±1℃ 18~24h
革兰氏染色
血浆凝固酶试验
• 试验原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的血
浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白， 附着于细菌表面 ，产生凝固。
• 金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与
细胞壁结合的凝固酶，为结合凝固酶；另一种 是菌细胞释放于培养基中，为游离凝固酶。二 者的抗原性不同。
血浆凝固酶试验
约2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊 2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊 带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶 的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈的非典型菌落。
• 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产
生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
分离培养基
• Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大 Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大
多数细菌的繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生 黑色和晕圈。培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也能促进金黄色 葡萄球菌的生长。
• 金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿润，直径
• 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、
表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色 素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内， 不渗至培养中。
• 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型溶 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β
• 根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、 根据肠毒素的血清型，可分A ）、D
E 5 个型。A型肠毒素引起的食物中毒较多，约占 个型。A 50%左右。其他依次为D 50%左右。其他依次为D、C、B和E型。也有A＋D、 型。也有A A＋B、A＋C、B＋C等。
• A型肠毒素毒力较强，摄入1µg即可引起中毒；B 型肠毒素毒力较强，摄入1µg即可引起中毒；B
• 近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在 近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在
实验室条件下可产生肠毒素，并且1 实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生 两种或两种以上的肠毒素。
• 肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链
组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有 组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有 机溶剂。
• 耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋 耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋