糖化血红蛋白检测的SOP
糖化血红蛋白定量测定试剂盒标准操作程序
糖化血红蛋白定量测定试剂盒标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人全血中的糖化血红蛋白的百分含量。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测人全血中的糖化血红蛋白含量。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的糖化血红蛋白定量测定试剂盒采用的是酶法。
5.原理本试剂盒测定人全血糖化血红蛋白（HbA1c）的含量采用百分含量表示。
采用酶法测定，全血样本中血红蛋白（THb）被特定的蛋白酶裂解，其中糖化血红蛋白（HbA1c）裂解产生果糖氨基酸，然后果糖氨基酸在果糖氨基酸氧化酶（FAOD）作用下产生H2O2，H2O2经POD与发色剂偶联Trinder反应，在700nm测定其吸光度。
通过使用合适的校准品建立校准曲线，在一定浓度范围内糖化血红蛋白（HbA1c）百分含量与吸光度变化成正比。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1a：MES缓冲液、蛋白酶R1b：MES缓冲液、NaClR2：FAOD、POD、发色剂溶血剂：MOPS缓冲液、表面活性剂糖化血红蛋白校准品a、b：由新鲜人EDTA或肝素抗凝全血（HBsAg，抗HIV1/2、抗HCV、TP抗体均为阴性）冷冻干燥制备而成，冻干品。
不同批号试剂盒各组分请勿混用。
7.3试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。
校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
Bio-Rad DiaSTAT糖化血红蛋白A1c测定仪SOP文件
Bio-Rad DiaSTAT糖化血红蛋白A1c测定仪SOP文件1．目的：Bio-Rad DiaSTAT糖化血红蛋白A1c测定仪可体外测定正常人和糖尿病人的糖化血红蛋白，用于糖尿病的辅助诊断和诊疗监控。
2．原理：DiaSTAT 使用低压离子交换液相色谱法，在梯度洗涤液的作用下，从人全血中分离出各种血红蛋白成分，分离出的血红蛋白经415 nm光谱吸收分析后，结果记录和存储在计算机上。
DiaSTAT软件随后对结果进行分析并打印结果报告。
DIASTAT血红蛋白A1c测定仪可从样品管中自动吸取标本，随后进行稀释和分析，每个样本在10分钟内即可完成测定。
3．仪器使用环境：1．无尘、换气良好的环境。
2．避免阳光直接照射。
3．室内相对湿度20~80%4．电源电压变动在220V±10V之内5．有保护性接地4．安全条款：1．使用对人体有危险或发生感染的样品时，请使用橡胶手套，不要直接接触。
如操作人员直接被污染时，用大量的水冲洗、消毒，必要时应及时看医生。
仪器污染时应随时清洗干净且消毒。
2．仪器上面和周围不要放置或使用易燃、易爆物品，避免引起火灾、爆炸。
3．仪器的操作、保养按规定程序进行。
5．标准操作过程5.1开机程序：1)确认试剂量和打印纸充足，废液桶倒空2)打开仪器后侧左下部的电源开关仪器自检后自动进入主菜单5.2关机程序如系统处于主菜单时，可直接关掉电源开关注: 尽量避免在Running状态突然关机5.3常规样本实验5.3.1 样本准备1）全血样本准备（EDTA抗凝全血）a. 将Diastat Dispenser 打开，预热15分钟以上。
b.注意溶血试剂是否用完。
c.将Dispenser对准溶血试剂瓶（注意防止污染），按住拇指开关，喷射四次，使管路通畅。
无气泡。
d.三灯齐亮状态下，可以吸取样本。
e.将Dispenser加样尖置入混匀好的样本管中，没入血样中一些，按住拇指开关一次，自动吸取20 ul样本。
单通道糖化血红蛋白 SOP文件
糖化血红蛋白项目没有经过稀释，不用修改稀释倍数，
6. 样本处理：10L 新鲜末梢血或者静脉全血，加入 1mL 溶血液中溶血；
7. 在测量杯中放入一粒搅拌子，加入 10ul 溶血后的样品，然后将测量杯置入测量室中，
加入 300L 的乳胶，开始自动计时 3 分钟； 注意：将样品加入测量杯时，要将样品置入测量杯的底部，不要将液体碰到测量杯的
在整个检测过程中，按[BACK]键，将回到前一检测步骤；按[ESC]键，将重新开始，
如需开始检测新的项目，按[ESC]键。 【仪器相关参数】：
光源：650 nm 红色激光
功率：0.5Mw
工作环境温度：15-30℃
电源要求：220V±10% AC 50Hz
测量杯：NEPHSTAR®特定蛋白分析仪专用测量杯 【参考范围】：
确保电源接通及仪器电源开关已打开 检查保险丝。如果保险丝熔断请更换保险丝
显示屏蓝屏,无文 字显示 将测量杯放入测量 室中,无“请加入试 剂”信息
加入试剂前就开始 测量空白
加入试剂后不读取 空白
5 分钟没有操作,仪器 进入屏保状态
测量杯未完全放入测 量室中
测量杯侧壁上粘有液 体或有大量气泡
仪器没有感应到试剂 的加入
壁上。否则，仪器可能会感应到液体的流动而自动进入测量程序。
版本:A0-201204
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8. 计时结束后，仪器将报警，并再次提示“请加入试剂”时，用电子移液器将 100L HbA1c
抗体 B 和 40L 抗体 A 一起加入测量杯中；
仪器将按程序进行空白测量和样品测量。测量时间以倒计时显示，倒计时结束后，仪器
病人准备：无特殊要求 样本要求：采用新鲜手指血，或者 EDTA 或肝素抗凝血进行测定，抗凝血在 2-8℃储存最长 不超过 72 小时，冷冻在-20℃或更低温度则可贮存更长时间。测试当天使用样品处理液处理 样品和检测。
HA-8180-校准SOP
有 效 期：1 年，见外包装上的标签内容。
5.2 溶离液 80B
用 途：本溶液用于 ARKRAY Factory, Inc.公司生产的 HA-8180 型全自动糖化血红
蛋白分析仪及 AH-8280 型全自动血糖/糖化血红蛋白分析仪的洗脱及缓
冲。
规 格：600mL×2 袋/盒
贮存方式：本溶液应在3～30℃之间密封保存。
4．标本的采集、收集与处理 4.1.样本采集 用 EDTA抗凝全血，肝素抗凝全血，不推荐草酸类，以及枸橼酸类抗凝剂。 4.2.样本保存 在2-8 °C下全血样本可保存7天；在室温下样本可保存3天。 -70°C下全血样本可保存一年，只允许1次复溶。 4.3.标本丢弃注意事项 丢弃使用后的样本时，需和一般的垃圾区别开，并按照当地废弃物相关管理规定来 处理。 4.4.样本准备 ①. 关于全血样本 请使用下列之一的抗凝剂：肝素、EDTA-2Na、EDTA-2K、EDTA-3K、NaF。为防止 层析柱的劣化，请勿使用含有碘醋酸抗凝剂的样本。 ②. 关于溶血样本 若溶血样本放置于室温下会慢慢变性，从而导致检测值的变化。请勿长时间放 置于室温下，要尽快检测。检测溶血样本时，请将血红蛋白的浓度调整在75～ 225 mg/dL（标准150 mg/dL）。超过此浓度范围时，会产生故障或导致仪器的 重复性变差。适当的改变稀释率或调整浓度后再进行检测（本仪器一般将全血 稀释101倍）。 ③. 关于去除血浆的样本 去除血浆后的样本不能放置于全血样本用试管架上检测。去除血浆的样本不能 稀释到适合的血红蛋白浓度，因此得不到正确的检测结果。需用专用的稀释液 溶血稀释，看作溶血样本来检测。
糖化血红蛋白仪SOP文件
AC6600型糖化血红蛋白分析仪使用说明简明操作规程一、准备1、将A、B、C、D洗脱液加满。
2、开机预热半小时、自检、进入系统清洗。
二、测量1、预处理样本：用EDTA抗凝全血，取出1只装有300ul溶血剂的冷冻管，然后加入IOILI的全血稀释并放入AC60电子预温器中预温5min（或37℃预温lOmin）。
2、，单个分析：放入ST位测量。
3、批量分析：设置盘号，开始位号，结束位号，按顺序将处理好的样本放在样品盘上。
三、结束l、倒空废液瓶。
2、检查层析柱剩余个数。
注意事项一、仪器的工作环境温度为15℃～30℃，最佳温度为20℃～25℃，如超出此温度范围将对测量值造成影响。
二、需每日工作前检查A、B、C、D洗脱液是否加满，以防在批量测量过程中因为试剂用完导致测试中止，延误报告时间。
三、只能使用本公司提供的废液管，不得剪短和加长或更换废液管。
四、样本只能选用EDTA二钾或二钠抗凝，应放入AC60电子预温器中预温5min(或37℃)预温lOmin)后方可测定。
五、注意全血取样时勿将移液嘴插入样本管过深，以防造成血样挂壁。
六、在测试过程中，如果A、B、C、D任何一种洗脱液用完，本次报告不打印，加人洗脱液后重新测量此样本，造成时间和试剂的浪费，切记每日工作前将洗脱液加满。
七、如遇图谱出现异常，此样本不能报告，需重做。
八、在更换预处理柱或层析柱时，恒温筒盖要拧紧，以防漏液。
九、更换预处理柱时切莫将层析柱的密封圈带走，以防漏液。
十、更换预处理柱和层析柱时，先将A洗脱液和IC卡拿出，否则液体会不慎滴入IC卡。
十一、换上层析柱后，需预测同一个样本2～3次，稳定后正常启用C1和C2校正后测量。
十二、不能在仪器运行过程中强行关机。
十三、关机间隔超过15分钟后再开机，需预热半小时，必须进入仪器自检和系统清洗程序。
十四、工作完成后，应每日检查层析柱剩余数，及时订货。
十五、每日工作后将废液瓶倒空，以防废液溢出，影响工作环境。
糖化血红蛋白的SOP
糖化血红蛋白检测的SOP预期用途适用于体外定量检测人手指末梢血、静脉全血样本中的糖化血红蛋白的浓度。
检验原理糖化血红蛋白检测试剂盒是硼酸亲和色谱层析法。
试剂盒由层析器、R1试剂、R2试剂组成。
R1试剂包括专门裂解红细胞和沉淀血红蛋白及一种结合糖化血红蛋白的蓝色硼酸共轭物。
当血液加至R1试剂中时，红细胞裂解，并且所有的血红蛋白沉淀，硼酸共轭物与糖化血红蛋白的顺式二醇配合物相结合。
一定量的反应混合物加入到层析器，所有沉淀的血红蛋白与糖化血红蛋白结合或未结合的硼酸共轭物残留到层析器膜上。
任何未结合的硼化物通过R2试剂移除。
该沉淀通过使用分析仪分别检测蓝色（糖化血红蛋白）和红色（总血红蛋白）的颜色强度进行定量分析，从而测定血液样本中糖化血红蛋白的百分比。
样本要求：加了抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠）的样本可在2-8℃保存7天，不能用血红蛋白裂解的样本。
不能冻融。
没有添加抗凝剂的手指末梢血和静脉全血样本采样后要立即检测。
检验方法在检测之前所有的检测试剂应平衡至室温。
分析仪内置定标曲线，测试前不需要定标。
A采集5ul的全血样本至R1试管中，混合均匀，至少反应2分钟，最多不能超过3分钟。
B待全血样本与R1反应完毕后，再次摇晃该试管以便组分充分混合。
打开试管吸取25ul的混合物，加入到层析器中。
注意过程中不要触碰到层析器中的滤膜，也不能让样本有气泡产生。
C当步骤2中的混合物被层析器完全吸收后，再取25ul的R2试剂滴到层吸器上，反应大约10秒。
D待R2试剂被完全吸收后，把层析器放到托盘上，用分析仪进行分析。
E分析仪在每次开机时有自动校准功能，校准成功才能开展上述试验。
参考区间参考区间为：4.3-6.0％检验结果的解释血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物是糖化血红蛋白，血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度。
糖化血红蛋白测试通常可以反应患者近8至12周的血糖控制情况。
普门H9糖化血红蛋白测定仪SOP文件
普门H9糖化血红蛋白分析仪SOP文件西山总医院检验科SOP编码：页数：制定人签名：日期：审核人签名：日期：批准人签名：日期：生效日期：颁发日期：周期性审查：年一次修订登记：审查登记：1．目的：普门H9糖化血红蛋白A1c测定仪可体外测定正常人和糖尿病人的糖化血红蛋白，用于糖尿病的辅助诊断和诊疗监控。
2．原理：使用低压离子交换液相色谱法，在梯度洗涤液的作用下，从人全血中分离出各种血红蛋白成分，分离出的血红蛋白经415 nm光谱吸收分析后，结果记录和存储在计算机上。
软件随后对结果进行分析并打印结果报告。
3．仪器使用环境：1．无尘、换气良好的环境。
2．避免阳光直接照射。
3．室内温度范围：10-25℃，相对湿度20~80%4．大气压力范围：75Kp-106Kp5．电源电压变动在220V±10V之内6．有保护性接地4．安全条款：1．使用对人体有危险或发生感染的样品时，请使用橡胶手套，不要直接接触。
如操作人员直接被污染时，用大量的水冲洗、消毒，必要时应及时看医生。
仪器污染时应随时清洗干净且消毒。
2．仪器上面和周围不要放置或使用易燃、易爆物品，避免引起火灾、爆炸。
3．仪器的操作、保养按规定程序进行。
4．5．标准操作过程5.1开机程序：1)仪器背面的电源开关置于“ON”，此时屏幕点亮，2秒后仪器显示层析柱和过滤器的剩余数，系统进入自检和清洗确认界面。
2)确认界面下，按“是”，仪器自检初始化后，进行清洗过程后进入菜单界面；按“否”后仪器跳过自检和清洗过程直接进入菜单5.2关机程序如系统处于主菜单时，可直接关掉电源开关5.3常规样本实验5.3.1 样本准备1）全血样本准备a. 使用K2EDTA抗凝真空采血管采集静脉血标本。
b.迅速将管中的静脉血与抗凝剂充分混匀。
c.将采血管上下颠倒混匀三次后放入试管架中。
2）预稀释样本准备a. 取1500uL的去离子水放入EP管中。
b.加入10uL的静脉全血或手指末梢血，盖好盖子后轻轻摇匀。
普门糖化血红蛋白分析仪H9校准SOP
3.6批内精密度
3.6.1依据：YYT 1246-2014糖化血红蛋白分析仪医药行业标准中第3.3条关于批内精密度的要求。
3.6.2实验方案：分别在4.0～6.5%、6.6～9.0%以及9.1～15.0%范围内分别选取新鲜的抗凝全血样本，
连续重复测定20次，分别计算SD和CV。
3.2.3操作：
1、先灌注A液，打开右侧门取出比色池确认没有气泡，然后正确安装；
2、打开左侧盖板，进入硬件参数界面；
3、观察415nm的ADC值是否在12000-14000范围内，500nm的ADC值是否在4000-5000范围内；
4、如果有偏差，可以采用小一字螺丝刀调节可调左侧脱气电路板上的电阻，逆时针调大LED电流，顺时针调小LED电流；
12.52
0.28
2.24%
附表九《试剂、校准品、质控品和层析柱批号记录表》
试剂序号
试剂名称
试剂批号
失效期
是否在控
1
A/B/C/L液
2
校准品
3
质控品
4
色谱柱
附件十：校准报告首页模板
XX市XXX人民医院
医学检验科
仪器校准报告
仪器名称：普门H9糖化血红蛋白分析仪
仪器序列号：___I02B17600520___ ___
比色组件
是√⃞否⃞
附表四《ADC值检测记录表》
附表五《温度准确度及波动度检测记录表》
附表六《高压泵流速记录表》
附表七《样品携带污染率记录表》
附表八《批内精密度验证记录表》
范围
实测均值
标准差SD
CV值
4.0～6.5%
5.65
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糖化血红蛋白检测的SOP
【目的】：用于评定糖尿病的控制程度
【该SOP变动程序】：
本标准操作程序的改动可有任一使用本sop的工作人员提出，并报告经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。
【检验的适用证】：本试验适用于糖尿病病人
【仪器与试剂】
1. 仪器：离子交换层析柱
2. 试剂：
2.1阳离子交换树脂缓冲液：PH6.9，8mg/dl;
2.2GHB溶血试剂：氰化钾（含表面活性剂）10Mm；
2.3GHB标准液：冻干
2.4血清分离器：40枚
【操作程序】
实验温度：21-24C
测定波长：415nm
1、操作方法
（1）收集静脉血、加入EDTA抗凝。
（2）根据样品数取试管若干，分别吸取400μl溶血剂加入各试管中。
（3）分别吸取80μl标准或样本放入上述各试管中，混合均匀。
（4）放置5～10min，则制成了血红蛋白样本A3。
2、糖化血红蛋白的制备及测定
（1）根据样品的数量，取干净的试管若干，分别吸取3.0ml阳离子树脂，放入各管中。
（2）向上述试管中分别加入已预备的100μl血红蛋白样本（A3）。
将层析柱插入试管中，使得橡皮塞高于液面至少1cm。
（3）充分摇荡试管混合5～10min（最好使用涡旋摇荡器，如果没有则需剧烈摇荡20min。
（4）然后慢慢推动层析柱进入试管，直到糖化血红蛋白提取完全。
（5）上清液倒入另一支试管或直接倒入比色杯进行比色。
（6）以蒸馏水作空白在415nm调零。
（7）读取并记录标准，样品吸光度值。
3、总血红蛋白测定
（1）根据样品数量取试管若干，分别加入5.0ml蒸馏水。
（2）加入20μl血红蛋白样本（A3）。
混合均匀。
（3）以蒸馏水作空白在415nm调零。
（4）读取并记录各管吸光度值。
4、参考值范围及报告单
糖化血红蛋白GHB（%）=糖化血红蛋白吸光度/总血红蛋白吸光度×10
（正常值范围4.0%～6%）。
【糖化血红蛋白测定注意事项】
1.树脂缓冲液在使用前至少振摇10次加以混匀，每加5管反应摇匀一次；
2.全血标本的血红蛋白大于18g/dl时，应将标本用蒸馏水按1：1稀释，结果乘以2；
3.请勿使用塑料试管
4.请使用13X100mm玻璃试管，以免因试管太小，血清分离器无法插入或因试管内
劲太大，上清液无法进入血清分离器。
【监测意义】
糖化血红蛋白的特点决定了它在糖尿病监测中有很大的意义：（1）与血糖值相平行。
血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平。
（2）生成缓慢。
由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化血红蛋白则是逐渐生成的，短暂的血糖升高不会引起糖化血红蛋白的升高；反过来，短暂的血糖降低也不会造成糖化血红蛋白的下降。
由于吃饭不影响其测定，故可以在餐后进行测定。
（3）一旦生成就不易分解。
糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内的血糖波动，却能很好地反映较长时间的血糖控制程度，糖化血红蛋白能反映采血前2个月之内的平均血糖水平。
（4）较少受血红蛋白水平的影响。
糖化血红蛋白是指其在总血红蛋白中的比例，所以不受血红蛋白水平的影响。
【临床意义】
1是糖尿病患者血糖总体控制情况的指标
2有助于糖尿病慢性并发症的认识
3指导对血糖的调整
4对判断糖尿病的不同阶段有一定的意义
5区别应激性血糖增高和妊娠糖尿病(GDM)中的检测意义。