糖化血红蛋白检测的SOP

糖化血红蛋白检测的SOP

【目的】：用于评定糖尿病的控制程度

【该SOP变动程序】：

本标准操作程序的改动可有任一使用本sop的工作人员提出，并报告经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。

【检验的适用证】：本试验适用于糖尿病病人

【仪器与试剂】

1. 仪器：离子交换层析柱

2. 试剂：

2.1阳离子交换树脂缓冲液：PH6.9，8mg/dl;

2.2GHB溶血试剂：氰化钾（含表面活性剂）10Mm；

2.3GHB标准液：冻干

2.4血清分离器：40枚

【操作程序】

实验温度：21-24C

测定波长：415nm

1、操作方法

（1）收集静脉血、加入EDTA抗凝。

（2）根据样品数取试管若干，分别吸取400μl溶血剂加入各试管中。

（3）分别吸取80μl标准或样本放入上述各试管中，混合均匀。（4）放置5～10min，则制成了血红蛋白样本A3。

2、糖化血红蛋白的制备及测定

（1）根据样品的数量，取干净的试管若干，分别吸取3.0ml阳离子树脂，放入各管中。

（2）向上述试管中分别加入已预备的100μl血红蛋白样本（A3）。将层析柱插入试管中，使得橡皮塞高于液面至少1cm。

（3）充分摇荡试管混合5～10min（最好使用涡旋摇荡器，如果没有则需剧烈摇荡20min。

（4）然后慢慢推动层析柱进入试管，直到糖化血红蛋白提取完全。

（5）上清液倒入另一支试管或直接倒入比色杯进行比色。

（6）以蒸馏水作空白在415nm调零。

（7）读取并记录标准，样品吸光度值。

3、总血红蛋白测定

（1）根据样品数量取试管若干，分别加入5.0ml蒸馏水。

（2）加入20μl血红蛋白样本（A3）。混合均匀。

（3）以蒸馏水作空白在415nm调零。（4）读取并记录各管吸光度值。

4、参考值范围及报告单

糖化血红蛋白GHB（%）=糖化血红蛋白吸光度/总血红蛋白吸光度×10

（正常值范围4.0%～6%）。

【糖化血红蛋白测定注意事项】

1.树脂缓冲液在使用前至少振摇10次加以混匀，每加5管反应摇匀一次；

2.全血标本的血红蛋白大于18g/dl时，应将标本用蒸馏水按1：1稀释，结果乘以2；

3.请勿使用塑料试管

4.请使用13X100mm玻璃试管，以免因试管太小，血清分离器无法插入或因试管内

劲太大，上清液无法进入血清分离器。

【监测意义】

糖化血红蛋白的特点决定了它在糖尿病监测中有很大的意义：（1）与血糖值相平行。血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平。（2）生成缓慢。由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化血红蛋白则是逐渐生成的，短暂的血糖升高不会引起糖化血红蛋白的升高；反过来，短暂的血糖降低也不会造成糖化血红蛋白的下降。由于吃饭不影响其测定，故可以在餐后进行测定。（3）一旦生成就不易分解。糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内的血糖波动，却能很好地反映较长时间的血糖控制程度，糖化血红蛋白能反映采血前2个月之内的平均血糖水平。（4）较少受血红蛋白水平的影响。糖化血红蛋白是指其在总血红蛋白中的比例，所以不受血红蛋白水平的影响。

【临床意义】

1是糖尿病患者血糖总体控制情况的指标

2有助于糖尿病慢性并发症的认识

3指导对血糖的调整

4对判断糖尿病的不同阶段有一定的意义

5区别应激性血糖增高和妊娠糖尿病(GDM)中的检测意义