影响免疫组化染色因素及对策
免疫组织化学染色存在的问题及解决方案
【 ４ 】 舒冬利 ．陆利萍． 手术 标本 的程序 化管 理［ Ｊ ］ ． 中华护理杂志 ，
２ ０ ０ ９ ， ４ ４ （ ６） ： ５ ４ ６ — ５ ４ ７ ．
２ ． ２ ． ６ 标本管理 ： 严格执行 标本 管理制度及核对制度 ， 实行标 本程序化管理 。主刀医生让家属看完标本后 ， 巡 回护士立 即 装 入写有患者完整信 息的标本袋 ， 并群 呼标本接 收人 员即时
液， 但禁 止在走廊输入 预防性抗生素 和麻醉术前药 。 并 告知患 者， 输 液期间身体若有 任何 不适 ， 立即告诉走廊里走过的任何
一
个人 ， 巡 回护士要 每隔几分钟查 看患者一 次。前一 台患 者
离开手术 间并 清理完卫生后 ， 连台患者再进 入手 术间输入抗
术室管理 的重点 ， 严格执行各项规章制度和技术操作规范 ， 提 高手术室护理人员隐患防范意识 ，养成 良好 的工作作风和习
会使组织扭 曲变得过分脆硬 ， 抗原减少或定位不准 ， 亦使免疫
（ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ７ － ０ ２ － ０ ３ ）
免疫组织化学染色存在 的问题及解决方案
何新明 顾 霞 郭 文婷 林毅 妍 岳 永亮
２ ０世 纪 பைடு நூலகம் ０年代免疫组织化学 技术应用 于病 理诊断 ，目
前肿瘤 的病理诊 断应用最为广泛㈣。免疫组织化学染 色切 片
质 量 影 响 结 果 的判 断 ，由 于 免 疫 组 织 化 学 染 色 过 程 繁 杂 ， 步
有研 究表 明 ， 在延迟 ４ ８ ｈ 后 进行 固定 ， 免疫 组织化学 染色基
本看不到 明确 的膜 阳嗍 。尽 量缩短延迟 固定时间。 １ ． １ ． ２ 固定时 间的长短对组织抗 原的活性 的影 响：固定时间 不足易造成 固定液不能完全渗透至组织 内部 ，固定时间过长
免疫组化染色信号减弱的原因
免疫组化染色信号减弱的原因1.引言1.1 概述免疫组化染色是一种常用的实验技术，主要用于检测和定位细胞或组织中特定蛋白质的表达与分布情况。
免疫组化染色的结果通常通过观察显微镜下的染色信号来分析目标蛋白质的存在与表达水平。
然而，在某些情况下，免疫组化染色的信号可能会出现减弱的现象，即目标蛋白质的染色信号强度较低或难以观察到。
出现这种问题的原因可能是多方面的。
首先，可能是由于实验中的操作问题导致的。
例如，在固定细胞或组织时，固定剂的配比、浓度和处理时间等因素会直接影响到染色结果。
不当的固定条件可能会导致蛋白质丢失、改变染色性能或造成交叉反应，进而影响染色信号的强度。
其次，可能是由于抗体的选择和性能问题。
在免疫组化染色中，选择合适的抗体是非常重要的。
抗体的亲和力、特异性和纯度等因素都会对染色结果产生影响。
如果选择的抗体与目标蛋白质的结合特异性较低，或者存在交叉反应的问题，都可能导致染色信号的减弱。
此外，染色试剂的质量也是影响染色信号减弱的因素之一。
染色试剂如二抗、荧光染料等的质量差异可能导致染色信号的变弱。
因此，在实验过程中，需要严格控制试剂的质量和储存条件，以确保染色试剂的稳定性和有效性。
最后，样品预处理过程中可能存在一些问题。
样品的预处理包括脱脂、脱水、脱胶原等步骤，这些步骤的不当操作可能导致蛋白质的丢失或损伤，从而影响染色信号的强度。
总的来说，免疫组化染色信号减弱的原因可能涉及实验操作问题、抗体选择与性能、染色试剂质量以及样品预处理等多个方面。
在进行免疫组化染色实验时，务必要小心操作、选择合适的抗体和试剂，并严格控制样品预处理过程，以获得准确可靠的染色结果。
1.2文章结构文章结构部分的内容可以包括以下几个方面：1.2 文章结构本文主要包含以下几个部分：引言部分：介绍免疫组化染色在疾病诊断和研究中的重要性，以及免疫组化染色信号减弱的问题。
正文部分：列举和探讨导致免疫组化染色信号减弱的主要原因，包括可能的技术因素和样本处理因素。
影响免疫组织化学染色质量的因素分析
影响免疫组织化学染色质量的因素分析摘要：目的探究影响免疫组织化学染色质量的因素并进行分析。
方法从不同的方面对影响免疫组化学的染色质量的因素进行分析，分别包括组织固定、切片、烤片、抗原修复和免疫组化染色等五个方面，该研究主要对不同的固定剂对染色质量的对比进行详尽的分析，对其他的四个方面进行简明的比较和分析。
结果Bouin液对SS和GAS的抗原性的保存较好，结果显示Bouin液保存的阳性细胞的平均数明显高于10%甲醛保存的阳性细胞数，两组比较有显著的差异，比较具有统计学的意义（P<0.05）；选择合格免疫组化试剂和染色方法，并设立实验对照样，采取严格实验操作，对该方法至关重要。
结论选择合格和恰当的免疫组化试剂和合适的染色方法，并设立实验对照样，采取严格实验操作，才会得到合格的免疫组化的染色结果，才能是该方法更加可靠和精确。
关键词：免疫组织化；染色质量；因素分析免疫组织花化学简称为免疫组化，是一种常用作的病理诊断的主要辅助手段，该技术是一种染色技术，受到越来越多的病理学的工作者的欢迎[1]。
近年来，伴随着越来越多的新技术和新抗体的被发明，免疫组织化学的技术在病床病理的诊断中的应用更加的广泛，得到了很大程度上的推广。
该方法为肿瘤性质的判断、临床病理的诊断以及预后的检测等都提供了非常重要的根据[2]。
但是该方法还存在一些不稳定的因素，这些不稳定因素使得免疫组化的质量浮动比较大，是免疫组化工作者面临的主要问题。
如何在实际的工作中消除和避免这些因素对免疫组化产生影响，已经成为了众多的工作者亟待解决的问题，该研究对免疫组化中对染色质量有影响的因素进行了分析并进行报道。
1 不同的组织固定对免疫组化染色效果的影响组织的固定是对免疫组化染色质量影响最为显著的因素。
为了使得离体的组织的抗原性得到较好的保存，一般要求将离体的组织在15min之内将其固定好。
1.1方法样本选取大鼠的胃窦组织，固定液分别选取Bouin液和10%的甲醛溶液，用图像分析技术和免疫组化方法对大鼠的胃黏膜的胃泌素和生长抑制素的表达进行检测，并对结果进行分析对比。
免疫组化染色的常见问题及定量分析
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二.胃蛋白酶(Pepsin)消化方法
1.配制：0.4％胃蛋白酶，用0.1mol/L的Hcl配制。 2.消化时间：37℃20 min。 3.用途：主要用于细胞间质抗原的显示，如纤粘素、
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68
激光显微切割的缺点
未封片的组织切片组织结构较模糊，会影 响显微切割的准确性。
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染色中各步骤注意事项及原理
前期处理 染色 后期处理
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12
前期
不可控制因素：取材、固定、脱水、透明、 浸蜡，包埋
可控制因素： 捞片：注意不要太靠近一侧，必要时用镊
子压住组织片控水
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染色过程中的影响因素
阻断非特异性过氧化物酶 抗原修复 封闭抗原非特异性表达 一抗 二抗 DAB显色
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PALM激光显微切割系统简介
PALM激光显微切割系统是由德国PALM 公司研发的一套高级精确的实验室设备。利 用337纳米的紫外激光对显微镜下的生物样 本 (组织、细胞簇、单细胞、染色体及染色 体片断等）进行切割和分离。在病理学、遗 传学和肿瘤学等多个科研领域得到非常广泛
的应用。
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7
免疫组化的优点
特异性强 ：抗原与抗体的“一对一”的特 异结合，仅当组织细胞中存在交叉抗原时 会出现交叉反应 。
敏感性高 定位准确、形态与功能相结合
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免疫组化技术操作上的优点
方法简单，易掌握 在组织切片原位显示抗原的表达情况 试验条件要求不高，绝大多数实验室都可
免疫组化染色过程中存在的问题原因分析及对策
免疫组化染色过程中存在的问题、原因分析及对策良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提;由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节,每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果,因此,要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事;需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片;虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题,但从染色的结果看,一般可分为两类：无色片即无阳性信号和“杂音”染色片有阳性信号;一、无色片染色结束后,切片中见不到任何阳性信号;这是常规工作中比较常见的现象,出现这种现象,有两种可能：1、真阴性结果：整个染色过程没有出现问题,组织或细胞确实不表达与抗体相关的抗原;2、假阴性结果：即此阴性结果不是真实的反映;假阴性结果又可分为两种情况：1、切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞;出现这种情况,要麽是病理医生选择错了切片或抗体选错了,要麽是技术员选错了蜡块;获得正确的切片进行染色是获得正确结果的前提;由此表明：制作出合格的免疫组化切片不仅仅是技术员的事,病理医生也起着不可缺少的作用;2、染色过程中的某一或某些环节出了问题;比如,组织未进行抗原修复,有的组织必须经过抗原修复才能检测抗原表达；或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石蜡包埋组织的抗体；或一抗失效,虽然抗体失效在理论上是一个逐渐的过程,但偶尔也遇到突然失效的情况,抗体长期不用和/或已超过有效期是主要的原因;也可见于染色过程中漏掉了某一环节,如忘记加二抗或三抗,或用了两次二抗而缺少了三抗,或配制DAB时少了过氧化氢;为了避免这种简单的错误,有一种简单的方法：在三抗孵育结束时,将切片上的三抗甩在一张白纸上,在将配制好的DAB滴一滴在白纸的三抗上,观察是否出现棕色;如果出现了,证明三抗和DAB的配制过程没有错误;如果这种DAB再滴到切片上没有出现任何阳性信号,问题一定是出在三抗以前;如果纸上不出现棕色反应,问题肯定在三抗DAB或DAB的配制过程;这种简单方法能迅速的帮助我们查找出现问题可能的原因;解决阴性染色的问题非常简单,就是设立“阳性对照”;如果阳性对照有了表达,说明染色的全过程和所有试剂都没有问题;如果此时测试片仍为阴性,便是真实的阴性,说明组织或细胞没有相应的抗原表达;反之,如果阳性对照没有着色,表明染色过程中某个或某些步骤出了问题或试剂出了问题;应一一寻找原因;阳性对照包括两种,一种称为“自身对照”或“内部对照”,这是指在测试的切片中本身就存在已知的抗原,如正常淋巴结中存在T和B细胞抗原,CD20或CD3都应该有表达;自身对照是一种比较理想的对照,对照和测试组织或细胞都在同一张切片中,都处于相同的试验条件下,结果更可靠也更具有可比性;在选择自身对照片时最好选择既有病变组织同时又有正常组织的部分,这样有利于对比;另一种称为“外部对照”,有时在测试的切片中不存在已知的抗原,如在胃的标本中怀疑是恶性黑色素瘤,需要用HMB45或Mart-1来检测,在正常的胃组织中本身不存在相关的抗原,如果病变出现阳性反应结果,尚能提示是恶黑,但是如果出现阴性结果,就无法确定是本身组织中不含黑色素瘤抗原,还是技术问题;因此,应另外设立一个已知的阳性对照;这种在测试组织之外的阳性对照称为“外部对照”;在实际工作中需要设立外部对照的情况很多,如果每一种抗体都要选不同的阳性对照,工作量会很大;为了解决这个问题,目前国内外有单位将多种不同组织集成在一起,制成多组织切片、“腊肠”“春卷”切片、组织芯片等,其连续切片储备待用,需要时取出一张便可作为阳性对照;另外,比较简单的方法,是采用阑尾作为阳性对照,因为与人体其它组织器官比较阑尾包含的组织种类较多,如有上皮、淋巴组织、平滑肌、间质、神经、血管、间皮等;一张阑尾切片可以检测大多数常用的抗体;设立阳性对照是病理医生的任务或责任,而不是技术员的责任;病理医生观察了HE切片,了解切片中是否有自身对照,如果没有,就应告诉技术员采用阳性对照;因此,病理医生在免疫组化中的作用是不可忽视的;抗体未覆盖上测试组织：当多块散开的小组织染色时,可能漏掉某块组织染色;二、“杂音”染色片免疫组化除正常的真实的阳性信号外常常会遇到不正常的背景着色,这些非正常的着色称为“杂音”染色;“杂音”染色种类繁多,产生的原因也多种多样,为了便于说明,笔者将其归纳为下面几种; 1、全片着色全片着色是指整个切片全都染上了颜色,着色的强度可深可浅,总之,分不清那些组织是阳性那些组织是阴性;出现这种现象的原因有： 1、抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一;解决办法是,每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试,使每一抗体个体化,找到适合自己实验室的理想工作浓度,既使是即用型的抗体也应如此,不能只简单的按说明书进行染色; 2、抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是,严格执行操作规程,最好随身佩带报时表或报时钟,及时提醒,避免因遗忘而造成时间延长;现在流行的二步法Polymer敏感性很高,要求一抗孵育的时间不是传统的1小时,而是30分钟,因此,要根据染色结果进行调整; 3、DAB变质和显色时间太长：DAB最好现用现配,如有沉渣应进行过滤后再用;配制好的DAB不应存放时间太长,因为在没有酶的情况下,过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力,未用完的DAB 存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的;DAB的显色最好在显微镜下监控,达到理想的染色程度时立即终止反应;不过当染色片太多时或用染色机时,这样做似乎不现实,但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控,避免显色时间过长; 4、组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因;解决的办法是操作要认真仔细,采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈,可以有效的避免液体流失,也能提高操作速度; 5、切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长大于24小时：原因上不清楚,但现象存在;有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复,第二天加抗体进行免疫组化染色,如果将装有切片和修复液的容器放在4ºC冰箱过夜,对结果无明显影响,如果放在室温,特别是炎热的夏天,会出现背景着色,因此,不可存放时间太长;6、一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期,过期的抗体要麽不显色要麽背景着色;用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较; 2、切片边缘着色切片边缘着色也是一种常见的现象,这种现象称为边缘效应;产生的原因：1、组织边缘与玻片粘贴不牢,边缘组织松脱漂浮在液体中,每次清洗不易将组织下面试剂洗尽所致;解决办法：制备优质的胶片APES或多聚赖氨酸,切出尽量薄的组织切片,不厚于4微米,组织的前期处理应规范,尽量避免选用坏死较多的组织;2、切片上滴加的试剂未充分覆盖组织,边缘的试剂容易首先变干,浓度较中心组织高而致染色深;解决办法：试剂要充分覆盖组织,应超出组织边缘2 mm;用DAKO笔画圈时,为了避免油剂的影响,画圈应距组织边缘3-4 mm; 3、“阴阳脸”着色指组织一半着色一半无着色,形成交界清晰或不甚清晰的两种染色结果;其成因是试剂仅覆盖了部分组织而不是全部;如加试剂后未让试剂流散开而集中在部分组织上;通常应该在加完试剂后,仔细看一遍,是否有的组织未被试剂完全覆盖,如有这种情况,建议用牙签而不是用吸头或试剂瓶口将试剂引流开使之将组织全部覆盖;另外,染片盒不平,切片倾斜,虽然开始试剂已全部覆盖了组织,但后来试剂流向一边,部分组织未被试剂覆盖;对于这种问题,只要留心或想到了很容易发现,也很容易解决;有时,用DAKO或PAP笔在组织周围画圈时,划线太靠近或画到了组织上,由于笔油的力学原理,试剂不能达到靠近划线附近的组织;还有气泡也可引起阴阳分明的着色,只是不着色区域是圆形,由于气泡中含气,试剂被推到周围,因此,气泡中心的组织不着色;解决办法是滴加试剂时手法要轻,有气泡时用牙签捅破; 4、灶片状着色切片中着色区东一块西一块,呈灶片状分布,出现这种问题的原因有：1、裱片时水未排尽,在局部形成气泡使组织突起,染色时试剂渗入后不易洗尽,显色过深所致;解决办法是,漂片盒里的气泡应去尽,晾片热台不能平放,应有45度左右的斜度,利于水流走和蒸发;2、坏死组织灶,组织坏死后细胞破坏、酶的释放、蛋白游离、分解,复杂的肽链残段如Fc段可能与一抗或/和二抗结合导致最终着色;解决办法是在选择染色切片时应避免选择坏死组织较多的切片;3、制作APES胶片时,胶的浓度太高,干燥后在玻片上留下白色小点,显色时白色小点着色;解决办法是按照标准的制备方法进行,即5%盐酸酒精5ml盐酸+95%酒精95ml浸泡玻片4小时、热水冲洗玻片1小时、蒸馏水洗玻片1分钟、丙酮浸泡玻片5秒钟后空气干燥室温、2%APES2 ml APES+98 ml丙酮浸泡玻片5分钟、玻片过一下丙酮1-2秒钟、玻片过一下蒸馏水1-2秒钟、37°C 过夜干燥、室温储存备用;如果制片过程中,因丙酮逐渐挥发而胶变浓时可适当加入一些丙酮; 5、间质着色着色部位主要在间质,间质着色的原因很多,如抗体与组织中的蛋白质因蛋白疏水基团相互作用形成非特异性的连接而着色,加一抗前的血清封闭这一步就是为了避免非特异型的结合;又如血清中的免疫球蛋白常常渗出到组织间质,很容易与抗体结合,造成间质着色,特别是lambda和kappa染色时;当甲状腺胶质外溢到组织间质时,做甲状腺球蛋白染色也会出现间质着色;抗体不纯或抗体被污染也可出现间质着色,我们曾遇到CD20抗体不纯,除了染上B细胞外还染上了间质; 6、细胞浆着色胞浆着色是所有“杂音”染色中最具有欺骗性的着色,着色区局限在细胞内,间质无着色,看上去与真实的免疫反应着色几乎一样,很难区别;胞浆里含有较多的蛋白质,因此,很多非特异性的染色除了见于间质也可以出现在胞浆中;这种原因造成的着色,可以通过血清封闭解决;还有因内源酶造成的着色,如血红蛋白红细胞、肌红蛋白肌细胞、细胞色素粒细胞、单核细胞、过氧化氢酶肝、肾,这些可用过氧化氢进行封闭;巨噬细胞吞噬各种抗原物质或Fc片断而出现胞浆着色,这种着色不易避免,但可以通过形态学辨认出巨噬细胞而引起重视;内源性生物素的着色最具有欺骗性,因为它广泛的存在于组织细胞中,我们研究结果显示：冰冻组织中存在内源性生物素,经福马林固定石蜡包埋后生物素被封闭,加热抗原修复后造成内源性生物素暴露,内源性生物素暴露的强度在不同的组织有所不同,从弱阳性+到强阳性+++,内源性生物素在组织中的分布形式,既有散在分布也有弥漫分布,主要以颗粒状形式存在于胞浆中,内源性生物素广泛存在于上皮源性组织,特别是腺上皮组织,亦存在部分非上皮组织,内源性生物素不仅存在人体组织也存在大鼠组织,内源性生物素暴露的强弱与修复液有关,其强度增加依次为：柠檬酸、EDTA、EGTA,热抗原修复暴露的内源性生物素可被鸡蛋清封闭,非生物素检测系统Polymer两步法EliVision、EnVision可避免生物素干扰; 7、细胞核着色不适当的组织处理可以出现细胞核着色,如组织在二甲苯里浸泡时间太长如从星期五浸泡到下星期一、缓冲液中浸泡时间太长、组织变干、微波修复液的pH值和修复时间不当或修复过程中修复液留下得太少,未没过组织等;解决办法是严格按照操作常规进行工作;。
免疫组织化学染色过程中出现问题及对策
1941年co ons首先用荧光素标记抗体,检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功,从而创建了免疫组织化学技术。
经过60余年的不断发展,由最初的直接免疫荧光标记法,逐渐发展出现了间接法,免疫酶法,免疫胶体金法,酶标记复合法等等。
该方法的敏感性和特异性不断得到提高,使其成为医学和生命科学领域中研究组织形态、功能和代谢的一项有力工具[1—3]。
随着该技术应用的普及和深入,免疫组织化学(免疫组化)染色技术作为病理诊断的主要辅助手段,各种新技术的引入以及新抗体相继问世,使免疫组织化学技术得到了更广泛的推广和应用,为临床病理诊断、肿瘤性质的判定、预后的估测等提供了重要依据。
但是,由于影响其操作的因素较多,免疫组化质量不稳定常常困扰着免疫组化工作人员。
本文举出了一些染色过程中出现的问题,并分析其中可能原因。
1.阴性反应染色结束后,切片中见不到任何阳性信号。
排除掉组织或细胞中确实不表达与抗体相关的抗原的原因外,还可能是染色过程中的某一或某些环节出了问题,出现了假阴性结果。
可能原因如下:1.1操作失误有的组织必须经过抗原修复才能检测抗原表达,却未进行抗原修复[1,2];或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石蜡包埋组织的抗体;或一抗失效,也可见于染色过程中漏掉了某一环节;还可能是所选用的检测系统与一抗不匹配,如选用的一抗是兔源性抗体,二抗错选了抗鼠源性抗体。
解决办法:在三抗孵育结束时,将切片上的三抗滴在一张白纸上,再将配制好的DAB滴在白纸的三抗上,观察是否出现棕色。
如果出现了,证明三抗和DAB的配制过程正确。
如果不出现棕色反应,则三抗或DAB的配制过程有误。
1.2假阴性造成假阴性结果的因素一般来自三方面:1.组织处理不当,抗原损失过多或被遮蔽;2.抗体(包括特异性一抗和标记抗体)失活,效价过低或稀释度不合适;3.染色步骤的差错或其他试剂的问题,如显色剂、缓冲液的离子强度及ph值[3]。
解决阴性染色的问题,需要设立“阳性对照”和“阴性对照”。
免疫组织化学染色质量的影响因素
诊[3]。
我科门诊2a 来接诊6例,院外误诊5例。
其中败血症1例,咽结膜热2例,传染性单核细胞增多症1例,淋巴结炎1例。
误诊的主要原因是对川崎病尤其是不典型者认识不足。
由于川崎病20%～40%病例引起心血管并发症,现已成为儿童后天性心血管疾病的一个主要原因。
因此,早期诊断非常重要。
笔者认为:发热、唇鲜红、唇皲裂、结膜充血、手足掌及卡疤潮红具有早期诊断意义。
对高度可疑者进一步做超声心动图检查,异常者有助于作出早期诊断。
5 儿童情绪障碍躯体化儿童情绪障碍是很常见的儿童心理卫生问题,在国内居行为问题、发育障碍之后的第3位。
各个年龄段的儿童均可见到,以学龄期女童多见。
其病因多为精神过度焦虑和紧张。
临床表现多样化,若有明显的焦虑、恐怖、抑郁、强迫症状时较易诊断,但以躯体化症状为主时,如叹息样呼吸、心悸、胸闷、胸痛、头痛等,常就诊普通内科或儿科门诊,易误诊为心肌炎、胸膜炎、肋间神经痛、偏头痛等。
笔者遇到2例误诊为心肌炎,住院治疗10d 余。
误诊的主要原因是临床医生对心理性疾病识别能力不高[4]。
近年来儿童情绪障碍发病率呈上升趋势,综合性门诊医生遇到患儿无器质性疾病依据时,要及时建议家长带患儿去看心理医生。
6 抽动障碍抽动障碍是一组发病于儿童期、原因不明的运动障碍,表现为反复、迅速、无目的、不自主的单一或多部位肌群收缩。
抽动部位常见于面部,如挤眉、眨眼、口角抽动、肩部、上下肢体抽动和不自主发声或骂脏话等。
临床上分为短暂性抽动障碍、慢性运动或发声抽动障碍和抽动秽语综合征,其中短暂性抽动障碍最多见,常被家人及部分医生忽视,误诊者屡见不鲜[5]。
笔者接诊19例,误诊17例,其中“坏毛病”、“坏习惯”达7例,结膜炎5例,风湿性舞蹈病2例,面肌痉孪2例,癫痫1例。
误诊的主要原因是临床医生对本病认识较少,以致于患者反复就诊于眼科、风湿科等。
所以,提高对本病认识是减少误诊的主要措施。
【参考文献】[1] 王立生.儿童咳嗽变异性哮喘误诊18例分析[J ].中国误诊学杂志,2005,5(2):236.[2] 刘圣国,唐翠平.鼻旁窦2支气管病变综合征34例误诊分析[J ].临床误诊误治,2004,19(9):6572658.[3] 张越英.皮肤粘膜淋巴结综合征误诊39例分析[J ].中国误诊学杂志,2004,4(8):1299.[4] 李玲莉,刑莉,陈丽颖.儿童叹息症误诊为病毒性心肌炎26例分析[J ].中国误诊学杂志,2002,2(5):7712772.[5] 姚跃英,李云南.45例短暂性抽动障碍误诊分析[J ].福建医药杂志,2000,22(4):60261.收稿日期:2005210212;修回日期:2005211214 责任编辑:魏建免疫组织化学染色质量的影响因素张惠球,刘奕生作者单位:广州医学院病理教研室510182【主题词】 免疫组织化学【中图分类号】 R 392.31 【文献标识码】 B 【文章编号】 100926647(2006)0320571203 免疫组织化学染色技术作为病理诊断的主要辅助手段,已越来越受到广大病理工作者的青睐。
免疫组织化学染色质量的影响因素
诊[3]。
我科门诊2a 来接诊6例,院外误诊5例。
其中败血症1例,咽结膜热2例,传染性单核细胞增多症1例,淋巴结炎1例。
误诊的主要原因是对川崎病尤其是不典型者认识不足。
由于川崎病20%～40%病例引起心血管并发症,现已成为儿童后天性心血管疾病的一个主要原因。
因此,早期诊断非常重要。
笔者认为:发热、唇鲜红、唇皲裂、结膜充血、手足掌及卡疤潮红具有早期诊断意义。
对高度可疑者进一步做超声心动图检查,异常者有助于作出早期诊断。
5 儿童情绪障碍躯体化儿童情绪障碍是很常见的儿童心理卫生问题,在国内居行为问题、发育障碍之后的第3位。
各个年龄段的儿童均可见到,以学龄期女童多见。
其病因多为精神过度焦虑和紧张。
临床表现多样化,若有明显的焦虑、恐怖、抑郁、强迫症状时较易诊断,但以躯体化症状为主时,如叹息样呼吸、心悸、胸闷、胸痛、头痛等,常就诊普通内科或儿科门诊,易误诊为心肌炎、胸膜炎、肋间神经痛、偏头痛等。
笔者遇到2例误诊为心肌炎,住院治疗10d 余。
误诊的主要原因是临床医生对心理性疾病识别能力不高[4]。
近年来儿童情绪障碍发病率呈上升趋势,综合性门诊医生遇到患儿无器质性疾病依据时,要及时建议家长带患儿去看心理医生。
6 抽动障碍抽动障碍是一组发病于儿童期、原因不明的运动障碍,表现为反复、迅速、无目的、不自主的单一或多部位肌群收缩。
抽动部位常见于面部,如挤眉、眨眼、口角抽动、肩部、上下肢体抽动和不自主发声或骂脏话等。
临床上分为短暂性抽动障碍、慢性运动或发声抽动障碍和抽动秽语综合征,其中短暂性抽动障碍最多见,常被家人及部分医生忽视,误诊者屡见不鲜[5]。
笔者接诊19例,误诊17例,其中“坏毛病”、“坏习惯”达7例,结膜炎5例,风湿性舞蹈病2例,面肌痉孪2例,癫痫1例。
误诊的主要原因是临床医生对本病认识较少,以致于患者反复就诊于眼科、风湿科等。
所以,提高对本病认识是减少误诊的主要措施。
【参考文献】[1] 王立生.儿童咳嗽变异性哮喘误诊18例分析[J ].中国误诊学杂志,2005,5(2):236.[2] 刘圣国,唐翠平.鼻旁窦2支气管病变综合征34例误诊分析[J ].临床误诊误治,2004,19(9):6572658.[3] 张越英.皮肤粘膜淋巴结综合征误诊39例分析[J ].中国误诊学杂志,2004,4(8):1299.[4] 李玲莉,刑莉,陈丽颖.儿童叹息症误诊为病毒性心肌炎26例分析[J ].中国误诊学杂志,2002,2(5):7712772.[5] 姚跃英,李云南.45例短暂性抽动障碍误诊分析[J ].福建医药杂志,2000,22(4):60261.收稿日期:2005210212;修回日期:2005211214 责任编辑:魏建免疫组织化学染色质量的影响因素张惠球,刘奕生作者单位:广州医学院病理教研室510182【主题词】 免疫组织化学【中图分类号】 R 392.31 【文献标识码】 B 【文章编号】 100926647(2006)0320571203 免疫组织化学染色技术作为病理诊断的主要辅助手段,已越来越受到广大病理工作者的青睐。
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一、影响免疫组化染色质量的因素
1、标本的固定 手术标本的及时固定是保证免疫组化染色
质量的关键。未能及时固定的组织，会造成 细胞的变性和自溶，导致结构的破坏和抗原 物质的弥散，在免疫组化染色上表现为抗原 定位的变化和背景染色的增高。
过度的固定会造成抗原决定簇的封闭和抗 原的丢失。
影响免疫组化染色因素及对策
影响免疫组化染色质量的因素
6、显色剂、复染剂的影响 不同的DAB显色试剂盒、不同的显色时间， 会对免疫组化染色强度及级别判断产生影响。 苏木素复染过深、过浅，对比都不清晰。
影响免疫组化染色因素及对策
DAB显色恰当
GST-π影响免疫组化染色因素及对策
DAB显色恰当
CK5/6
如果温度过低或二甲苯使用次数较多，可适当延长 脱蜡时间。
影响免疫组化染色因素及对策
免疫组化染色的质量控制
抗原修复 抗原修复的方式有多种，热修复一般推荐高压锅热
修复法，但是微波修复也有其方便的一面。影响抗 原修复的基本因素是加热的温度和加热的时间，以 及所使用的修复液的PH值。需要操作者在实际工 作中摸索总结，同时要根据每种抗体的具体要求， 找到较适合的修复方式。抗原修复的恰当与否，直 接关系到免疫组织化学染色的成败，进一步影响最 后结果的正确判读。
抗体覆盖组织不完全造成的边缘效应
影响免疫组化染色因素及对策
抗体覆盖不均匀的灶状着色
影响免疫组化染色因素及对策
影响免疫组化染色质量的因素
5、第一抗体、检测系统的影响 使用不同克隆、不同种属来源的抗体，不同 的检测系统，免疫组化的染色会产生差异。 使用三步法试剂盒（如SP法）生物素系统 进行免疫组化染色时，如果操作不当会产生 较强的背景染色。
影响免疫组化染色因素及对策
同一蜡块不同修复时间的结果
影响免疫组化染色因素及对策
同一蜡块使用不同修复液的结果Ki-67
EDTA
柠檬酸
影响免疫组化染色因素及对策
4、操作过程中细节问题的影响 滴加抗体未完全覆盖组织，PBS残留过多， 操作过程中切片干燥等原因，会出现边缘效 应和染色不均匀及北京染色等。
影响免疫组化染色因素及对策
影响免疫组化染色因素及对策
二、免疫组化染色的质量控制
组织固定 1、标本在离体后应立即浸泡于相当于标本体积8~10倍的标准
固定液中，大标本要剖开固定。离体后标本固定前存放不得超 过30分钟。 2、在实际工作中，就可操作性而言，10%的缓冲福尔马林是 兼顾保存组织形态和抗原性通行的、被广泛接受的选择。 3、适度、适时的固定。一般而言，大标本只要做到及时切开 固定，在室温下12小时即可达到固定要求；为了适应免疫组化 染色标准化的需要，标本固定后应及时取材，通常固定时间不 得超过24小时。 4、达到固定时间要求而不能及时进入脱水程序的标本，建议 将标本置入70%的乙醇中进行暂时保存直至进入组织脱水程序。
影响免疫组化染色因素及对策
免疫组化染色的质量控制
脱水及制片 1、建立严格的组织脱水试剂规范化更换制度，保
证组织处理质量。 2、切片厚度一般3~4µm，厚薄均匀、平整，无
刀痕、折叠，采用高质量防脱载玻片。 3、切片在60℃烤箱内烤2~3小时，或者70 ℃烤
箱内1小时。 4、脱蜡要和常规切片分开，使用单独的二甲苯，
影响免疫组化染色因素及对策
免疫组化染色的质量控制
抗体及检测系统的选择 选择优良的抗体和检测试剂盒，新买抗体要
进行敏感性测试，找到最佳的抗原修复条件， 每次试验要设置相应的阳性和阴性对照。 试剂的使用一定在其有效期内，同时经常观 察抗体使用过程中的结果变化，如不理想要 及时更换。
影响免疫组化染色因素及对策
影响免疫组化染色的因素及对策
影响免疫组化染色因素及对策
良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结 果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中 存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都 可能影响到染色的最终结果，因此，要做好 一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常 容易的事。需要病理技术员和病理医生密切 配合、相互协调、共同努力才能保证做出合 格的免疫组化切片。
影响免疫组化染色因素及对策
Ki-67
影响免疫组化染色因素及对策
胸腔积液离心包埋细胞块的免疫组化染色
TTF-1
CK7
影响免疫组化染色因素及对策
Calponin
影响免疫组化染色因素及对策
TOPOⅡ
影响免疫组化染色因素及对策
影响免疫组化染色因素及对策
Cห้องสมุดไป่ตู้5/6
P63
影响免疫组化染色因素及对策
DAB显色适当，苏木素复染过浅
影响免疫组化染色因素及对策
影响免疫组化染色质量的因素
3、抗原修复环节的影响 抗原修复环节在免疫组化染色中是极为重要 的环节。不同的修复时间、不同的修复方法、 不同的抗原修复液，最终的结果会有差异。
影响免疫组化染色因素及对策
同一蜡块不同修复方式的结果
EHRer-2(2+) 微波修复
Her-2(1+) 影响免疫组化染色因素水及对浴策修复
影响免疫组化染色因素及对策
同一病例的ER表达情况
ER 固定不及时
固定二周后取材
ER
影响免疫组化染色因素及对策
固定8小时后取材
未及时固定的乳腺癌组织ER表达胞浆着色
影响免疫组化染色因素及对策
影响免疫组化染色质量的因素
2、切片质量的影响 切片太厚、皱褶，刀痕，敷贴不牢固，以
及脱蜡不彻底，均会影响免疫组化的染色质 量，易出现非特异性染色和染色不均匀。
免疫组化染色的质量控制
显色和复染 不要忽视显色过程，和常规染色类似，显色
不恰当也会造成染色的前功尽弃。不同的组 织、不同的抗体显色时间有差异，必要时使 用显微镜观察切片的显色效果。 苏木素复染过深过浅都会造成对比不清晰， 不利于观察评价。
影响免疫组化染色因素及对策
免疫组化染色的质量控制
影响免疫组化染色的因素很多。在操作中应 注重细节，避免随意性，严格按照技术流程 规范化操作，一个小的细节的疏忽或随意性 操作，都可能会对免疫组化染色造成明显的 影响。我们应该在实际工作中每一步都做到 位，养成一丝不苟的工作作风。