基因工程复习资料
分子克隆技术:指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术
克隆：是指从一个共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上相同的 DNA 分子、细胞或个体所组成的特殊的生命群体
载体：携带外源DNA进入宿主细胞的工具。化学本质：DNA 1.运送外源基因高效转入受体细胞2.为外源基因提供复制能力或整合能力3.为外源基因的扩增或表达提供条件。
基因工程的含义：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对一种生物（供体）的遗传物质（DNA ）直接进行体外重组操作与改造，并转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。
黏性末端是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新环化起来
DNA连杆，是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成的、具有一个或数个限制酶识别位点的寡核苷酸片段。
DNA接头它是一类由人工合成的一头具有某种限制性内切酶粘末端，另一头为平末端的特殊的双链寡核苷酸片段。当它的平末端与平末端的外源DNA片段连接之后，便会使后者成为具黏性末端的新的DNA分子，而易于连接重组。
载体：携带外源DNA进入宿主细胞，并为其提供复制和功能基因表达调控系统的工具。
目的基因：基因工程中克隆的目标DNA分子
SD序列：mRNA中起始密码子上游8-13个核苷酸处有一段富含嘌呤核苷酸的顺序，它可以与30S亚基中的16S rRNA 3’端富含嘧啶的尾部互补，形成氢键结合，有助于mRNA的翻译从起始密码子处开始
启动子：DNA分子与RNA聚合酶特异结合的部位，也是转录开始的部位
基因组文库：某种生物的基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌的群体之中，这个群体即为该生物的基因组文库。
cDNA：以mRNA为模板合成的互补脱氧核糖核苷酸序列。
cDNA文库：某种生物基因组转录的的全部mRNA经反转录产生的各种cDNA分别与克隆载体重组，贮存在一个受体菌的群体中，这个群体就称为cDNA文库。
转化：受体菌直接吸收供体菌的DNA片断而获得后者部分遗传性状的现象。
转化子（transformant）：通过转化方式而形成的杂种后代。
感受态：指受体细胞最易接受外源DNA片断并能实现转化的一种生理状态。
转染：将重组λDNA分子直接导入受体细胞的过程。
转导：通过λ噬菌体颗粒感染宿主细胞的途径把外源DNA分子转移到受体细胞内的过程
重组子的筛选：经过各种方法将外源DNA分子导入受体，获得所需目的重组子的过程
选择：转化子的初步筛选：通过某种外加压力（如：抗生素）的辨别作用，呈现具有重组DNA分子的特定克隆子的一种方法。
筛选：进一步检测目的重组子：通过某种特定的方法，从受体细胞群体或基因文库中，鉴定出目的重组子的过程。
启动子：DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列
SD序列：核糖体结合位点
终止子：在一个基因的3’端或是一个操纵子的3 ’ 端往往还有一特定的核苷酸序列，它有终止转录的功能，这一DNA序列称为转录终止子
融合蛋白：是指蛋白质的N末端由原核DNA序列或其他DNA序列编码，C端由真核DNA的完整序列编码。
转染：将重组λDNA分子直接导入受体细胞的过程。
转导：通过λ噬菌体颗粒感染宿主细胞的途径把外源DNA分子转移到受体细胞内的过程
重组子：含有重组DNA分子的转化子
转化子：导入外源DNA分子后稳定存在的受体细胞
供体、受体、载体是DNA重组技术的三大基本元件
DNA体外重组的基本步骤1.目的基因的获取：从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR 扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。 2.重组体的制备：将目的基因的DNA片断插入到能自我复制并带有选择性标记的载体分子上。3.重组体的转化：将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。4.克隆鉴定：筛选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）5.目的基因表达：使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物。
基因工程的基本操作步骤：1. 目的基因的获取从复杂的生物基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片断。 2. 重组体的制备将目的基因的DNA 片断插入到能自我复制并带有选择性标记。 3.重组体的转化将重组体（载体）转入适当的受体细胞中。4.克隆鉴定筛选转化成功的细胞克隆（含有目的基因）5.目的基因表达使导入寄主细胞的目的基因表达出我们所需要的基因产物
载体应具备的条件：1.具有对受体细胞的可转移2.具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点3.长度尽可能小，以提高其载装能力4.具有多种单一的酶切位点5.具有合适的选择性标记。
限制性内切酶的命名原则前3个字母代表来源的生物,随后1个字母或阿拉伯数字代表菌株,最后1个罗马字母代表发现或鉴定的次序
star activity高浓度的酶（>100U/g）、高浓度的甘油（>5%）、低离子强度（<25mM）、极端pH值(>pH8.0)等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即所谓的star activity现象.
抑制star activity的措施①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度②保证反应体系中无有机溶济或乙醇③提高离子强度到100～150mM ④降低反应pH至pH7.0 ⑤使用Mg2+作为二价阳离子
DNA连接酶需要在一条DNA链的3’-末端具有一个游离的羟基(-OH)，和在另一条DNA链的5’-末端具有一个磷酸基团(-P)，只有在这种情况下，才能发挥其连接DNA分子的功能作用。
体外连接DNA片段的方式黏性末端同种内切酶产生的黏性末端的连接，同尾酶产生的黏性末端的连接，不同黏性末端的连接。平末端的直接连接，末端修饰后的连接，加上连杆（ linker ），使之形成黏性末端后，再用DNA连接酶连接，DNA接头(adapter)连接法。
平末端DNA片段的连接（1）直接用T4DNA连接酶连接；（2）先用末端核苷酸转移酶，给平末端DNA分子加上同聚物尾巴之后再用DNA连接酶进行连接；（3）用连杆连接平末端DNA 分子；（4）DNA接头连接法。
载体应具备的条件 1. 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性 2. 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点3. 具有多种单一的酶切位点 4. 具有合适的选择性标记自我复制表达，外源基因的插入不影响其功能的发挥，易于从宿主细胞分离出来5. 分子量尽可能小，以提高其载装能力
质粒DNA的复制类型严谨型质粒松弛型质粒
天然质粒的缺陷（1）分子量大，拷贝数低（2）筛选标志不理想
构建质粒克隆载体的基本策略 1能在受体中进行有效的复制（有复制起始位点）。2含多克
隆位点3含有供选择克隆子的标记基因，如：常用的标记基因：Apr，Kmr，Smr， Tcr基因等4 DNA分子尽可能小和较高的拷贝数。5根据特殊需要，组装各种“元件”，构建不同用途的质粒克隆载体。
质粒克隆载体的构建 1选择合适的出发质粒2正确获得构建质粒克隆载体的元件3组装合适的选择标记基因4选用合适的启动子5构建过程力求简单
DNA插入而导致基因失活的现象，称之为插入失活效应。
蓝白斑筛选Ampicillin 抗性和 lacZ的肽互补（蓝白斑）相结合。-半乳糖苷酶能把无色的化合物Xgal分解成半乳糖和一个深蓝色的物质5-溴-4-氯靛蓝
Ti质粒介导转化的过程①根癌农杆菌对植物细胞的识别和附着②根癌农杆菌对植物信号物质的感受③根癌农杆菌Ti质粒上的vir基因以及染色体上操纵子的活化④ vir区基因被激活，virD基因编码的核酸内切酶分别将T-DNA的RB序列和LB序列切出单链切口，释放出T-DNA的单链线性拷贝，T-DNA复合体的产生⑤T-DNA复合体在RB序列的引导下定向地穿过农杆菌的细胞膜、细胞壁、进入植物细胞壁并整合到植物的染色体基因组中
TA克隆的优点不需使用含限制酶序列的引物，不需把PCR产物做平端处理，不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。
TA克隆注意事项 1. 要获得目的基因的TA克隆，PCR产物的特异性要好。2. PCR产物在TA 克隆前要通过纯化。3. 在PCR产物回收、纯化过程中防止外来DNA污染。
真核生物的启动子：真核生物有三种类型的RNA聚合酶，每一种都有对应的启动子。
1.RNA聚合酶I只转录rRNA，故只有一种启动子。
2.RNA聚合酶II转录mRNA，其启动子最为复杂；
3.RNA聚合酶III转录tRNA和5S rRNA，其启动子大都是位于转录的DNA序列之内，称为下游启动子。
目的基因的获得:直接分离法;PCR扩增;构建基因组文库法;构建cDNA文库法;化学合成法直接分离法:限制酶酶切法(DNA分子已测序/目的基因已定位)
基因组文库的构建(DNA未测序或未定位)：
采用限制酶切割
构建基因组文库
筛选目的基因克隆
基因文库构建的一般步骤：
（1）染色体DNA大片段的制备
①酶切法
②物理切割法
（2）载体与基因组DNA大片段的连接
①粘性末端直接连接
②人工接头法
（3）转导受体
（4）筛选重组子
cDNA：以mRNA为模板合成的互补脱氧核糖核苷酸序列。
cDNA文库：某种生物基因组转录的的全部mRNA经反转录产生的各种cDNA分别与克隆载体重组，贮存在一个受体菌的群体中，这个群体就称为cDNA文库。
cDNA文库与基因组文库的区别在于cDNA文库是有时效性的。
cDNA文库的特点
优点：分离的目的基因可直接用于表达；比DNA文库小的多，容易构建
缺点：只与编码序列有关；不能反映内含子；不能反映启动子、终止子以及与核糖体识别的
序列
构建cDNA文库的一般步骤：
（1）总RNA（total RNA）提取
（2）mRNA的分离纯化
①原理：利用mRNA都含有一段polyA尾巴，将mRNA从总RNA（rRNA、tRNA等）中分离纯化。
② mRNA的分离纯化 Column（柱）
（3）cDNA的合成
① cDNA第一链合成
②降解mRNA模板
③ cDNA第二链合成（cDNA 第二链合成的方法有四种，自身引导合成法，置换合成法，引导合成法和引物－衔接头合成法。）
（4）cDNA与载体连接：
（5）噬菌体颗粒的包装及转染或质粒的转化（导入宿主中繁殖）
基因的化学合成：寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接子和接头的合成；基因的半合成；全长基因化学合成
目的基因的分离：
目的序列已知：一般采用PCR技术或分子杂交技术分离克隆目的基因
目的序列未知：差异表达序列；无差异表达的目的序列，可采用文库筛选法、功能蛋白分离法、序列克隆法
基因克隆的方法：
一、目的基因的功能克隆
二、序列克隆法
三、差别杂交法
四、减法杂交技术
五、mRNA差别显示技术
功能克隆：根据已知基因的产物推断出其相应核苷酸序列，再根据此序列合成寡核苷酸探针，从cDNA文库或基因组文库中调取目的基因
表型克隆：如差异筛选法、差减杂交（SH）、mRNA差别显示技术（DDRT-PCR）、代表性差异分析（RAD）、抑制型差减杂交（SSH）等
无基因序列及表达功能信息，但具有基因遗传图，转座子标签等条件，常用图位克隆和转座子标签法克隆
目的基因的功能克隆：在纯化相应的编码蛋白后构建cDNA文库或基因组文库，然后从文库中筛选目的基因
1、根据特异蛋白分离目的基因
分离、纯化目的蛋白
测定特异的氨基酸顺序
推测编码该蛋白的核苷酸序列
人工合成一段寡核苷酸探针
从cDNA文库或基因组文库中筛选编码基因
分离、纯化目的蛋白
目的蛋白免疫动物，制备抗体
从cDNA表达文库中筛选目的基因
根据特异蛋白分离目的基因局限性：
特异蛋白已鉴定并分离纯化
某些基因产物，难以分离纯化
非所有基因有蛋白质产物
遗传密码的简并性
2、功能互补法克隆基因：利用被克隆的外源片段与宿主细胞染色体DNA具有功能互补。
筛选营养缺陷型互补基因
序列克隆法：根据已知基因序列或同源基因序列分离目的基因；采用核酸探针杂交筛选或用PCR技术进行分离
差别杂交法：组织特异性表达或特定发育阶段表达的基因；受生长因子调节的基因；经特殊处理诱导表达的基因
应用前提：基因在两种不同的细胞群体中的差异性表达（一个细胞群体中正常表达，另一个细胞群体中目的基因不表达）。
基本过程：制备两种细胞群体的的mRNA提取物；以两种总mRNA或cDNA为探针；以表达目的基因的细胞群体构建cDNA文库
局限性：
灵敏度比较低，不适于低丰度mRNA目的基因分离
需要筛选大量的杂交滤膜，鉴定大量的噬菌斑
差别杂交重复性较差
不同滤膜间DNA保有量不均一
杂交信号强度不一致
重新点杂交
减法杂交技术：又称差减杂交、扣除杂交、减数杂交、消减杂交
本质：尽量去除两种样品中普遍共同存在的基因序列，从而使目的基因序列得到有效的富集，从而提高基因筛选分离的敏感性
mRNA减法杂交；基因组减法杂交
感受态细胞的制备：
1、挑取平板上的大肠杆菌单菌落接种于2 mL LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜
2、按1％的接种量接种于3 mL新鲜LB培养液，37℃剧烈振荡培养至OD600为0.4-0.6(可见雾状)
3、倒至1.5mL的eppendorf管中,4℃下12,000 rpm离心1 min，倒出培养液，用无菌滤纸尽量吸干
4、加入1mL 预冷的无菌0.1mol·L-1 CaCl2溶液涡旋，4℃下12,000 rpm离心30秒,尽量去除上清
5、沉淀以50-100μL 预冷的0.1mol·L-1 CaCl2重悬，4℃保存备用，7d内可用。
大肠杆菌的转化方法：
1.Ca 2＋诱导大肠杆菌转化法
CaCl2 的诱导原因：在0℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态
Ca 2＋能与加入的DNA分子结合，形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物，黏附在胞膜的外表面；42 ℃热激处理，细胞膜的液晶结构发生扰动，出现间隙。
对照试验：转化处理过程中，可能感染杂菌，导致假阳性
2.电穿孔转化法
基本原理：利用高压电脉冲作用，在大肠杆菌细胞膜上进行电穿孔，形成可逆的瞬间通道，促进外源DNA的有效吸收。
影响因素：电场强度，电脉冲时间，外源DNA浓度
3.三亲本杂交接合转化大肠杆菌
重组DNA分子导入植物细胞
（1）农杆菌介导的Ti质粒载体转化法
作用机制：将待转移的目的基因组入农杆菌中的Ti质粒载体；农杆菌识别敏感植物，将Ti 质粒的T-DNA转移到植物细胞内部
基本程序：选择合适的外植体；农杆菌的接种操作；洗菌并筛选培养
常用方法：
1.创伤植株感染法
2.共培养感染法：叶盘转化法；植物愈伤组织共培养转化法；植物悬浮细胞共培养转化法；原生质体共培养转化法
（2）DNA的直接转移法：多聚物介导法；电穿孔转化法；激光微束穿孔转化法；显微注射法；超声波介导转化法；基因枪法；脂质体介导法；花粉管通道法
重组DNA分子导入哺乳动物细胞
病毒介导的转染：病毒颗粒转导法
生化转染：磷酸钙转染法；DEAE－葡聚糖转染法；聚阳离子－DMSO转染法；脂质体介导法物理转染：显微注射法；电穿孔法
常见的筛选重组子方法
1 遗传表型直接筛选：抗药性筛选；插入失活筛选法；插入表达筛选法；显色互补筛选法
2 PCR法鉴定
3 酶切法鉴定
4 杂交法鉴定：Southern blot；Northern blot；Western blot 等
5 测序
原核生物基因表达的特点
①只有一种RNA聚合酶识别原核细胞的启动子，催化所有RNA的合成。
②基因的表达是以操纵子为单位的。
③原核生物无核膜，所以转录与翻译是偶联的，也是连续进行的。
④原核基因一般不含有内含子，在原核细胞中缺乏真核细胞的转录后加工系统。
⑤原核生物基因的控制主要在转录水平，这种控制要比对基因产物的直接控制要慢。
⑥ mRNA的核糖体结合位点上，含有一个S-D序列，而真核基因则缺乏此序列。
启动子的特性：列特异性；向性；置特异性；属特异性
几种类型的原核表达载体
非融合蛋白：不与细菌的任何蛋白或多肽融合在一起的表达蛋白
优点：它具有非常接近于真核细胞体内蛋白质的结构，因此表达产物的生物学功能也就更接近于生物体内天然蛋白质。
缺点：易被细菌蛋白酶破坏。
融合蛋白：由一条短的原核多肽或具有其他功能的多肽和真核蛋白质结合在一起。
优点：大大增加，不易被细菌蛋白酶降解；于分离纯化
影响基因表达效率的因素：启动子的强度、DNA转录起始序列、密码子的选择、mRNA分子的二级结构、转录的终止、质粒的拷贝数以及质粒的稳定性和寄主细胞的生理特征等
提高基因表达效率的途径：
1.采用强启动子；35和-10区之间保持的距离（16～19bp）
2.确定合适的SD序列后面的几个碱基成分及起始密码子上游的碱基成分
3.起始密码子和S-D序列之间的距离必须接近到一定程度（7个核苷酸时最合适）
4.在基因内部的适当位置上存在着转录的终止区，就能够保证使质粒的拷贝数(也就是基因的表达效率)控制在一个正常的水平上。
5.提高基因的拷贝数（将基因克隆到松弛型的质粒载体上）
6.轻细胞的代谢负荷：
（1）诱导表达：细菌的生长与外源基因的表达分开，是减轻宿主细胞代谢负荷的最为常用的一个方法
(2) 表达载体的诱导复制：将宿主菌的生长和质粒的复制分开
7.高表达蛋白的稳定性，防止其降解
(1)克隆一段原核序列，表达融合蛋白
(2)采用某种突变菌株，保护表达蛋白不被降解
(3)表达分泌蛋白
基因工程的应用：
医药业：疾病的预防;病的诊断;病的治疗
农业及食品工业:提高作物抗性;良作物品质;长果实货架期;用农作物生产药物
畜牧业;工食品
环境:环境检测;环境净化
基因工程考试试题.doc
基因工程 一名词解释 DNA，1、限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源DNA的感染，可讲解外 来 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是甲基转移酶，或者说是甲基化酶，能保护 自身的 DNA不被讲解。限制酶和甲基转移酶组成限制与修饰系统。 2、各种限制与修饰系统的比较 Ⅱ型Ⅰ型Ⅲ型 识别位点4~6bp，大多为回文序列二分非对称5~7bp 非对称 切割位点在识别位点中或靠近识别位点无特异性，至少在识别位点外100bp 识别位点下游 24~26bp 简答 1. 何谓 Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法？ 答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。 pH 引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（>5%）；②酶过量（ >100U/μl ）；③低离子强度（ <25mmol/L）；④高(> ；⑤有机溶剂如DMSO （二甲基亚砜）、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺等；⑥用其它二价阳离子 星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙醇；③提高离子强度到100 ～ 150mM（在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价阳离子。 2. 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？（影响酶活性的因素？） 答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染）、何时加酶、操作是否恰当，反应体系的选择、反应时间的长短 内因：星星活性、底物甲基化、底物的构象 3、 DNA末端长度对酶切割的影响 答：限制酶切割 DNA 时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切 割扩增的 PCR产物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3 ～4 个碱基对。 4、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？ 答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于 筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。 5 抗性基因（ Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？ 答：氨苄青霉素抗性基因（ ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、氯霉素抗性基因（ Cmr）、卡那霉素和新霉素抗性基因（ kanr , neor ）以及琥珀突变抑制基因supF 。 ⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性Ampr 编码一个酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化β - 内酰胺环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。 ⑵四环素与核糖体 30S 亚基的一种蛋白质结合，从而抑制核糖体的转位。 Tetr 编码一个由 399 个氨基酸组成的膜 结合蛋白，可阻止四环素进入细胞。 6. 何为α - 互补？如何利用α - 互补来筛选插入了外源DNA 的重组质粒？ 答：α - 互补指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β - 半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。α - 互补是基于在两个不同的缺陷β－半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。实现α- 互补主要有两部分组成：LacZ △ M15 ，放在 F 质粒或染色体上，随宿主传代；LacZ' ，放在载体上，作为筛选标记，当在 LacZ' 中插入一个片断后，将不可避免地导致产生无α- 互补能力的β－半乳糖苷酶片断。在诱导物IPTG 和底物 X-gal （同时可作为生色剂）的作用下，含重组质粒的菌落不能产生有活性的β－半乳糖苷酶，不能分解 X-gal ，呈现白色，而含非重组质粒的菌落则呈现兰色。以此达到筛选的目的。 7、试简述λ噬菌体的裂解生长状态Lytic growth 和溶原状态 Lysogenic state 两种循环的分化及其调节过程？ 答：裂解生长状态是λ噬菌体在宿主中大量复制并组装成子代λ噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂 解。溶原状态为λ噬菌体基因组 DNA 通过位点专一性重组整合到宿主染色体DNA 中随宿主的繁殖传到子代细胞。调节过程：由感染复数
基因工程原理练习题及答案
基因工程原理练习题及其答案 一、填空题 1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。 10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。 11．EDTA是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的___________水解掉。 16．基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、______________。 17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测 不出质粒，这种现象叫。 19．pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。 20．Y AC的最大容载能力是，BAC载体的最大容载能力是。 21．pSCl01是一种复制的质粒。 22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp 抗性基因则是来自。 23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。 24．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是 和。 25．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。 26．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。 27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。 28．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基 因组的的范围内。 29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是 。 30．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc， 其目的是。 31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) (3) (4) 。 32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的。 33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 。 34．乙醇沉淀DNA的原理是。 35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：
怎样写听课评课记录
怎样写听课评课记录 发布者：罗乐发布时间： 2011-7-8 10:52:22 听课与评课是教学和教研活动的重要内容之一。为提高听、评课的质量，促进教学改革的不断深化和教学质量的进一步提高，促进教师业务水平和整体素质的进一步提高，特制定本办法。 一、听课前的准备 1、阅读教学大纲，了解所听学科的地位、作用及教学目的、要求。 2、查阅《学期授课计划》，了解所听课程的进度和基本内容。 3、浏览教材，了解教材编写体例，弄清新旧知识、技能的内在联系，熟知所听课的教学内容的重点、难点及教学目标。 4、依据教学大纲，在大脑中确定课型，设计课堂的基本结构，为评课提供参照体系。 5、根据听课目的（研讨性、检查性、指导性等），确定侧重点，以便针对授课教师的业务层次和水平进行评议、指导及提出不同要求。 二、课中的听与看 （一）听——做好听课记录 听课记录是重要的教学资料，是教学指导与评价的依据。它应全面、具体、详细地记录以下主要内容： 1、情境创设。课前教师与学生的情感沟通，课堂教学氛围的创设，学习气氛的形成及教师与学生所进入的“教”与“学”的状态等。 2、教师的点拨与引导。点拨与引导的问题可以是教学内容研讨方面的，也可以是突出重点、突破难点方面的。 3、师生的双边活动。教师的“教”是如何促进学生的“学”的，“教”是否为“学”服务（详见下面“看”的内容）。 4、教法选择。教师运用了哪些教学方法，具体效果如何。 5、学法运用。学生运用了哪些学习方法，具体效果如何。 6、练习设计。不是简单地使用教材上的练习题，而是从学生的实际出发，教师自己设计具有针对性的练习题。 7、教学反馈。学生对教师教学效果的反馈，包括课堂上的应答反应，以此体现三维目标的实现，即知识、技能的获得，过程、方法的掌握，情感、态度、价值观的发展等。 8、课堂的亮点与失误。“亮点”即成功之处、创新之处；“失误”即缺点、不足之处，可以是知识方面的，也可以是教法方面的。 9、听课者的评析与建议。针对上述内容作出简要评析，并对失误提出相应建议。 10、归纳小结。依据教育教学理论，对课堂教学过程中的优缺点给与综合性整体评价，即指出优点在于体现了什么教学理念，依据什么教学原理等；同时，指出缺点与不足，怎样改可能效果更好，依据什么等。 （二）看——注重师生的双边活动 “看”与“听”是同时进行的，它们都是为评课作准备的。看，既要看教师的教，又要看学生的学。 1、教师的教。主要关注以下四个维度： （1）组织能力。包括教学内容的组织、教学语言的组织、教学活动的组织等，核心是教学活动的组织能力。 （2）调控能力。看教师能否根据课堂教学的进展情况与出现的问题，采取有效措施，调整教学环节，保证课堂教学任务的顺利完成。
2015-2017基因工程高考题附答案
选修3——基因工程高考题 1．（2017?新课标Ⅰ卷.38）（15分） 真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A（有内含子）可以表达出某种特定蛋白（简称蛋白A）。回答下列问题： （1）某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_____________________________________________。 （2）若用家蚕作为表达基因A的受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用______________作为载体，其原因是_______________________________________________________________。（3）若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_____________________________________________________（答出两点即可）等优点。 （4）若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是___________________（填“蛋白A 的基因”或“蛋白A的抗体”）。 （5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_______________________________________________________________________________。2．（2017?新课标Ⅱ卷.38）（15分） 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题： （1）在进行基因工程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNA，常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是________________________________。提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是______________________________________。 （2）以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是________________________________。 （3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是________________________________________________________（答出两点即可）。（4）当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是__________________________。 （5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____________________________________________。 3.（2017?新课标Ⅲ卷.38）（15分）编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。 回答下列问题： （1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是_____________________________________________________________。（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为________________，加入了________________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。 ①由图2 可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________________________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是________________________。 ②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 4．（2017·天津理综卷9）（20分）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。 Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。 （1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是______（单选）。 ①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点 ②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
《基因工程原理》期末复习思考题教案资料
《医用基因工程》复习思考题 第一章基因和基因组及基因工程的概念 一、名词概念 ①移动基因(插入序列；转位子)；②断裂基因；③RNA剪辑； ④内含子(间隔序列)与表达子；⑤重叠基因；⑥重复序列；⑦假基因；⑧启动子与终止子；⑨起始位点、终止位点。 二、讨论题 1.什么叫基因?何谓基因的新概念?基因的主要功能是什么? 2.一种基因一种酶的提法妥否？ 3.基因密码子三联体间是否存在着逗号？ 4.基因表达的产物中，氨基酸序列相同时，基因密码子是否一定相同？为什么？ 5.何谓转位子和转位作用?转位的后果如何? 6.基因中最小的突变单位和重组单位是什么？ 7.基因工程应包括哪些内容？何谓基因工程的四大里程碑和三大技术发明? 8.真核细胞基因组中常有内含子存在，能否在原核细胞获得表达？能，为什么？不能，为什么？ 第二章基因工程中常用的工具酶 1.什么是限制性核酸内切酶？ 2.什么是R/M现象？如何解释？ 3.II型核酸内切酶的基本特点有哪些？ 4.影响II型核酸内切酶活性的因素有哪些？如何克服和避免这
些不利因素？ 5.DNA连接酶有哪两类？有何不同？ 6.甲基化酶有哪两类？有何应用价值？ 7.什么叫同尾酶、同裂酶？在基因工程中有何应用价值？ 8.平末端连接的方法有哪些？(图示) 9.Klenow酶的特性和用途有哪些？举例说明。 10.反转录酶的特性有哪些？有何应用价值？ 11.列举碱性磷酸酶BAP/CAP的应用之一。 12.列举末端核苷酸序列转移酶的应用之一。 13.质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？ 14.基因片段与载体的平末端连接的方法有哪些？ 15.用寡核苷酸和衔接物DNA的短片段连接时为使基因内部的切点保护，常用何种办法解决？ 第三章基因克隆载体 1.基因工程常用的载体有哪5种？其共同特性如何？ 2.什么是质粒？质粒分哪几种？有哪两种复制类型，质粒的分子生物学特性有哪些？ 3.质粒存在的三种形式是什么？ 4.分离质粒的基本步骤有哪些？ 5.分离纯化质粒的方法有哪几种？简述CsCl密度梯度(浮密度)分离法、碱变性法的原理，如何选择合适的分离方法？ 6.作为理想质粒载体的基本条件有哪些？ 7.什么叫插入失活，举例说明之。 8.构建pBR322质粒载体的亲本质粒有哪些？ 9.什么叫插入型和替换型噬菌体载体?插入型和替换型入噬菌体
特殊教育听课记录表
听 课 记 录 表 学 校 学科 生活语文 班级 任课教师 课题 早睡早起 教材 时 间 年 月 日 上 午 第 节 记录人 教学过程 评 析 一、 课程导入 复习生字词：人、头、手、足、口、耳、目、舌、牙、袜、鞋、男、女、早睡、早起、厕所 1、 叫同学跟着老师读 2、 男女同学分组读，边读并边做相应动作 3、 表扬读得好的同学并奖励小红旗 二、 新授 老师以季节的改变说起，提问同学们的睡觉起床时间，引出早睡早起的问题，并提醒大家养成早睡早起的习惯。 1、 师：请大家看图（一个男孩在睡觉，墙上的钟显示是晚上九点）并问大家图上的男孩在干什么？ 生：睡觉 师：提醒大家注意墙上的时间，总结说出晚上九点了，他在睡觉。同时提醒大家要早睡早起特别是走读的同学。 师：我在睡觉，叫大家跟着一起读。 生：我在睡觉。 师：抽同学起来读，并进行纠正，先分开读，然后再一起连读。 2、 师：出示第二幅图（一个男孩起床了，墙上的钟显示是早上六点）并问大家他在干什么？说出了闹钟、太阳等词提示大家。 生：他在起床。 师：叫大家读（我在起床），再找人起来读，并纠正错误。 师：叫同学们把两个句子连起来读，纠正句子中间有个停顿。 通过复习生字词的方式开展教学，有利于大家对已有知 识的巩固和复习。而男女分组读，不仅是对已经学过的男女概念的应用，更是进一步加深了大家的自我概念的认同，提升认知水平 利用图片进行教学，具有很强的直观性。而图片的选择 跟同学已有的认知和生活经验相符合，便于大家能接受和教学活动的顺利开展。教师的提醒和慢慢引导，很好 地体现了教学细节的把握。但在“我”和“他”（第一 人称和第三人称）的转换时，并没有做出相关概念的解释。 教师在对学生进行纠正时，对于个别同学表达不清，采用了先分开教，再一起连读的方式，体现了循序渐进的 原则。这样有利于学生的掌握。在叫同学回答问题时，注意学生文明礼貌行为，体现了教师在课堂上，不仅仅 是关注教学的完成，更是关注学生个体的发展，展现了 新课程的以学生为中心，以学生的发展为本。
语文听课评课记录
语文听课评课记录 语文听课评课记录（一） 日前聆听了我校古苑老师一年级的“生本”示范课，感受颇深，真切体验到“三人行必有我师也“，在听课中我感觉到古苑老师的教学中人文性凸现明显。在此，我想将我的收获与大家分享。 本课从目标来看，有两个大要求。一是读通读顺课文，整体感知课文大意。二是识字。 从设计来看，对应目标做到了简洁，主要分为两大块： 一是识读结合，寓识于读，把课文读好。首先是老师的示范读，然后请小朋友选择自己最喜欢的自然段读给小伙伴听，接着是录音示范读；学生跟着录音读；小组展示读；全班读；每一次的读都使得学生知道自己读的目的是什么；同时每一次读都要求学生指读，读的形式多样，非常符合一年级小朋友的年龄特点，让学生在多次反复的读中感知了课文内容，非常值得我们学习。 二是寓识字于游戏中。 识字教学是一年级生本教学的重点。本课教材识字量是相当大的。古苑老师采取了多个小游戏，寓识字于游戏中，取得了良好的效果。首先是小组内互帮互学，然后小组展示，接着有摘桃子游戏识字，有开火车识字，一环紧扣一环是识字认字教学，学生学得兴味盎然。 古苑老师的课中让我感受最深的还是古苑老师非常注重学生的习惯培养。一年级正是学生学习习惯养成的关键时期。特别是生本的教育理念倡导小组合作、探究，对学生的倾听习惯、发言习惯要求更高，这节课古苑老师的课堂调控能力很高，组织课堂非常
强。她利用学生耳熟能详的古诗吸引学生的注意力。例如：课前师生交流中，“谁的小手最听话？谁的小手最灵巧？翻书比赛等。”非常好地培养了学生课前的准备习惯。 这次听课对我的震撼很大，教学是要充满热情，充满追求的。我一定要在以后的不断学习中去保持这种热情，去激励自己不断进取。 语文听课评课记录（二） 日前，梅江区“名师班”语文听评课小组在我校进行了听评课活动，我校巫小娜老师为名师们展示了一节语文课，下面我就这一节课谈谈我的感受。 巫老师的这节课所选的教材是小学语文S版十二册课文《文天祥》，这一节课较好地体现了学生的主体地位，给予了学生充分的学习时间和空间，体现了学生的自主、合作、探究的学习模式。由此我想到了著名特级教师周一贯老师关于课堂教学的一些思考： 一、“课堂”本应是“学堂” 课堂是学生和老师的生命共现场，而且课堂是因学生而设，学生占了极大部分，教师只是来为学服务的，所以“课堂”应当是“学堂”，而不该是“讲堂”。小学生的课堂更应当是适合儿童自主学习的场所。教师要力避各种变相的以“讲”代“学”。越俎代庖的结果，虽然由教师授予确实会比让学生探究来得简捷、清晰，但让学生自己发现，自己解决的重大教育价值却因此丧失殆尽。所以，教师的作用只能是儿童自主学习活动的组织者、引领者、参与者和促进者。因为有许多事情虽可以由别人代替，唯独学习是无法由别人代替的。巫老师以“感悟文天祥的语言”作为课堂教学的主线，让学生在小组内进行充分地说，小组成员互相补充。随后以小组代表进行汇报展示，这就是“以学代讲”，学生在课堂上的学习需求通过自己的努力得到了满足，在满足中扎扎实实地实现了发展。这样的“课堂”才是真正的“学堂”。 二、“教本”其实即“学本”
基因工程测试题
基因工程测试题 一、选择题： 1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( ) A.大肠杆菌 B.酵母菌 C.肺炎双球菌 D.乳酸菌 2.下列有关基因工程的叙述，正确的是( ) A．DNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来B．目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA 中出现的几率就越大 D．常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等 3.我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是( ) A.抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体 B.重组DNA 分子中替换一个碱基对，不一定导致毒蛋白的毒性丧失 C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染 D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的
4.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kan r)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基 生长。下列叙述正确的是( ) A.构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNA 连接酶 B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株 C.卡那霉素抗性基因(kan r)中有该过程所利用的限制性核酸内切酶的识别位点 D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传 5.上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30 多倍，以下与此有关的叙述中正确的是( ) A.“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物 B.“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因 C.只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有
基因工程复习题答案
基因工程原理复习题思考题 基因工程绪论 1、基因工程的定义与特征。 定义：在体外把核酸分子（DNA的分离、合成）插入载体分子，构成遗传物质的新组合（重组DNA），引入原先没有这类分子的受体细胞内，稳定地复制表达繁殖，培育符合人们需要的新品种（品系），生产人类急需的药品、食品、工业品等。 特征：1、具跨越天然物种屏障的能力。 2、强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。 2、试述基因工程的主要研究内容。 1）、目的基因的分离 2）、DNA的体外重组（载体、受体系统等） 3）、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选 4）、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。 3、基因工程在食品工业上有何应用发展？ 主要是通过基因重组，使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率；或者改良这些有机物组成成分，提高利用价值。 4、转基因是一把双刃剑，请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。 转基因技术所带来的好处是显而易见的，在人类历史进步和发展中起到了积极作用。 首先，通过该项技术可以提供人们所需要的特性，改良培育新品种； 第二，延长食品保存时间或增加营养成分； 第三，将抗虫防菌基因转入到作物中，使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力，减少了农药的使用量，有利于环境保护； 第四，转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。 人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。外源基因的导入可能会造就某种强势生物，产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性，也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。 转基因作物的大面积种植已有数年，食用转基因食品的人群至少有10亿之多，但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例；更何况目前每一种基因工程食品在上市前，都要经过国家法律认可，食品卫生部门和环境部门的严格检测。只有测试合格了，才能投放市场。因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。 第一章 DNA的分子特性与利用 1、原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别？ 1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。 2）真核生物基因表达的特点： ● 1．基因组DNA存在的形式与原核生物不同； ● 2．真核生物中转录和翻译分开进行； ● 3．基因表达具有细胞特异性或组织特异性； ● 4．真核基因表达的调控在多个水平上进行：DNA水平的调控、转录水平调控、转 录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控； 2、什么是基因？根据基因的产物，基因可分为哪三类？ 基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核苷酸序列，是分子遗传的功能
高中生物基因工程试题
阶段质量检测（一）基因工程 （时间：45分钟，满分：100分） 一、选择题（每小题3分，共45分） 1 ?下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（） A. 重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体 B. 所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列 C. 只要是细菌中的质粒都可以直接作为基因工程中的载体 D. 载体必须具备的条件之一是有多个限制酶切割位点，以便与外源基因进行连接 2. （浙江高考）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B,而 开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确 的是（） A. 提取矮牵牛蓝色花的mRNA经逆转录获得互补的DNA再扩增基因B B. 利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B C. 利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞 D. 将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞 3. 日本下村修、美国沙尔菲和钱永健因在发现绿色荧光蛋白（GFP）等研究方面做出突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP在紫外光的照射下会发出绿色荧光。依据GFP的特性，你认为该蛋白在生物工程中的应用价值是（） A. 作为标记基因，研究基因的表达 B. 作为标记蛋白，研究细胞的转移 C. 注入肌肉细胞，繁殖发光小白鼠 D. 标记噬菌体外壳，示踪DNA路径 4. 下列有关质粒的叙述，正确的是（） A. 质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B. 质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状 DNA C. 质粒只有在侵入宿主细胞后，才能在宿主细胞内复制 D. 基因工程中常用的载体除了质粒外，还有核 DNA动植物病毒以及入噬菌体的衍生物
基因工程试题及答案
《基因工程》 一、选择题（每小题1.5分，共15分） 1．基因工程的创始人是( )。 A A. Kornberg B W. Gilbert C P. Berg D S. Cohen 2．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。 A 由作用于同一DNA序列的两种酶构成 B 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶 C 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 D 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 3．在DNA的3’-5’链上，基因的起始密码子是( ) A ATG（或GTG） B AGT C TAG D TGA 4．II限制性内切核酸酶可以特异性地识别( )。 A 双链DNA的特定碱基对 B 双链DNA的特定碱基序列 C 特定的三联密码 D 以上都正确 5．末端转移酶是合成酶类，具有( )活性。 A 3’5’DNA聚合酶 B 5’3’DNA聚合酶 C 5’3’DNA内切酶 D 5’3’DNA外切酶 6．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的。 A 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，因而有较多的拷贝数。 B 可以在氯霉素作用下进行扩增。 C 通常带有抗药性标记。 D 同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。 7．关于cDNA的最正确的说法是( )。 A 同mRNA互补的单链DNA B 同mRNA互补的双链DNA C 以mRNA为模板合成的双链DNA D 以上都正确 8．关于T4 DNA Ligase，下列说法中哪一项不正确? ( ) A 是最常用的DNA连接酶。 B 不但能连接粘性末端，还能连接齐平末端。 C 不但能连接粘性末端。 D 最适温度37 ℃。 9．下列关于建立cDNA文库的叙述中，( )是错误的? A 从特定组织或细胞中提取DNA或RNA B 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA C 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA D 新合成的双链DNA克隆到载体上，并导入受体细胞 10．用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。 A Southem blot B Northem blot C Western印迹 D 原位菌落杂交
二年级语文听课评课记录
二年级语文听课评课记录 ××× 时间：2009-4-22 听课学校及班级：××小学二（4）班 课题：18鸟岛 执教：××× 教学过程： 一、揭示课题板书课题：“18鸟岛” 二、组织学生观看录像（对鸟岛的初步认识、整体感知） 三、学习课文内容 （一）学习第一自然段 1、指名读第一自然段 了解鸟岛在什么地方？ 2、学习第二自然段 生：轻声读第二自然段 师引导理解“陆续”并说一句话 师：这些鸟是来干什么？(生答) （课件出示）片段，第二自然段，反复品读，悟出“鸟多”（板） 3、学习第三自然段（课件出示片段） 全班齐读，学生分句，逐句学习 引导学生理解“密密麻麻、一个挨着一个”（请几个学生到台上演示） 悟出“窝多”“蛋多”（板） 4、学习最后一个自然段 （1）指名读，教师再范读的同时让学生带着问题闭上眼睛想象（如果你来到小岛上会遇到什么有趣的事或糟糕的事？） （2）指名说 四、课堂延伸，实践拓展 1、师扮不文明的游客，生有礼貌的劝说； 2、师扮记者采访岛上的小鸟（生扮演）。
小学教师听课记录精选一 小学语文听课记录教学 一、导入新课： 这节课我们继续学习——（齐读课题） 二、复习旧知： 1、这些词语还认识吗？（钓鱼、从未见过、允许、遵守规定、铭刻） 2、回忆课文写了什么？你能这些词语说出来吗？（学生回答，教师板书“钓鱼”、“放鱼”） 三、进入新课：
第一板块： 1、由学生的回答开始，教师：钓鱼和放鱼的孩子的现在的情况吗？ 2、引导读课文一到四小节： A、（出示课件：汤姆——美国着名建筑设计师。他设计的作品多次获得国际大奖，日前……）他在接受采访时他对父亲让他放掉……表示感谢）我们就来看看这位设计师…… B、引导读读课文一到四小节。学生读课文。（要求自由读） 3、读书交流：一到四小节，你读懂了什么？（学生踊跃） 1) 课文写…… 2) 我感受到这里景色很美； 3)你知道涟漪是什么意思（教师不经意的随便问），我们把“涟漪”可以读得再美一些，齐读“涟漪”这一句； 4)我读懂了他们高兴：两个感叹号。 5) 我读懂了他们钓到的鱼很大：弧形（读出“大”来），还有谁知道这条鱼很大？（大家伙）而且是大鲈鱼。 6) 引导读：“哇！一条他从未见过的大鲈鱼”（三人） 7) 此时，传来了爸爸的声音。我们来读读课文中爸爸的语言。（学生读书） A. 出示课件：父子的对话：爸爸：“孩子，你必须把这条鱼放掉！”“为什么？”汤姆很不情愿地嚷起来。 B. 引导学生朗读这些话语：A、分角色；B、抓重点词语； C. 汤姆为什么要很不情愿地嚷起来？ D. 汤姆不肯放鱼的原因是什么？（听课疑问：孩子们，别人回答问题时，你静静坐着脑子里在想什么？） E.介绍“规定”，问：“知道了吗？” F. 出示课件，引导学生朗读，强调语气（斩钉截铁）：“不管有没有别人看见，我们都应该遵守规定。”先分别指读，接着邀请男子汉齐读； G. 出示课件，引导学生用“不管……都……”说说生活中的事情。（学生表达，教师评价） 四、小结板书：自觉遵守规定。 第二板块： 五、相信爸爸的这句话对大家的启发一定很深，我们一起来读这句话：“不管有没有别人看见，我们都应该遵守规定。”（齐读） 六、引导学生分角色读课文，其他学生做评委（第五小节开始——“规定”）引导学生提建议：读得怎么样？ 七、出示没有提示语的对话，要求学生把刚才的建议“用起来”； 八、提出新的要求：“加入动作、表情、道具”增强表达效果；出示课件配合，师生配合 九、爸爸和小汤姆争论的结果如何？此时的心情如何？（邀请数名学生回答） 第三板块： 十、教师小结学生回答。从“后悔”过渡到下文。 十一、讨论：后悔吗？（要求学生帮帮忙） 十二、引导学生读“最后一节”。 十三、教师总结全文，出示课件：“转眼间……不出所料……道德只是个很简单的是与非的问题，但是实践起来却很难……34年前的那个月光如水的夜晚……”
基因工程试题及答案
基因工程试题及答案 【篇一：基因工程题库以及答案】 因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2．基因工程的两个基本特点是： (1)____________， (2)___________。 3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和 __________。 4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。 5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶bsuri和haeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．dna聚合酶i的klenow大片段是用_____________切割dna聚合酶i得到的分子量为76kda的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止dna的自身环化，可用_____________去双链 dna__________________。 11．egta是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的t7 dna聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记dna的基本原理在于利用 _________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链dna分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化dna的合成外，还具有____________的作用，可以将dna- rna杂种双链中的___________水解掉。
最新-第二学期基因工程原理课程考试试卷(A)参考答案
学习-----好资料 2008─2009学年 第 2学期 《基因工程原理》课程考试试卷(A 卷)参考答案 专业: 生物技术 年级:2006 考试方式:闭卷 学分:4 考试时间:120分钟 一、名词解释(每小题2.5分，共15分) 1、 基因工程：是指在分子水平上进行的遗传操作，指将一种或多种生物提（供体）的基因 或基因组提取出来，或者人工合成基因，按照人们的愿望，进行严密的设计，经过体外加工重组，转移到另一种生物体（受体）的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。 2、 星活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH 值等，会使一些核酸内切酶 的识别和切割序列发生低特异性，即Star activity 现象。 3、 插入型载体：只具有一个可供外源DNA 插入的克隆位点。 4、 反转录PCR ：在逆转录酶的作用下、以mRNA 为模板合成互补的cDNA ，再以cDNA 为 模板进行PCR 反应。 5、 感受态：受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化学试剂法）的处理后，细 胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA 的载体分子通过的感受态细胞。 6、 考斯质粒：考斯质粒是一类人工构建的含有l-DNA cos 序列和质粒复制子的特殊类型的载 体 二、填空题(每小题1分，共10分) 1、用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇，这是因为异戊醇可以 防止气泡 ；分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 抑制了DNase 。 2、按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为 严谨型质粒 。和 松弛型质粒 。 3、λ 噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入 Lytic growth 也可以进入 Lysogenic state 。如果其基因组 DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入 融源状态 。；它也可以选择进入 融菌状态 ，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。 4、ddNTP 与普通的 dNTP 的不同之处在于 ddNTP 2’和3’双脱氧 ，它们可以在 DNA 聚合酶的作用下，通过其 5’ 掺入到正在增长的 DNA 链中，导致链延伸反应终止。 5、Klenow DNA 聚合酶是 DNA 聚合酶Ⅰ 经蛋白酶裂解而从全酶中除去 5’—3’外切酶 活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。 三、选择题(每小题1.5分，共15分) 1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别（ C ）。 A 、特定的三联密码； B 、双链 DNA 的特定碱基对； C 、双链 DNA 的特定碱基序列； D 、单链 DNA 的特定碱基序列。 2、在切口平移方法标记 DNA 探针时只能使用（ B ）。 A 、Klenow 酶； B 、DNA 聚合酶 Ⅰ； C 、DNA 聚合酶 Ⅱ； D 、DNA 聚合酶 Ⅲ。 3、在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（ C ）。 A 、反应体积； B 、酶反应温度； C 、反应时间； D 、酶量。 4、PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（ B ）。 A 、退火温度过低； B 、退火温度过高； C 、dNTP 浓度过高； D 、循环次数过多。 5、以下不属于 PCR 的应用的为（ D ）。 A 、随机扩增多态性 DNA （RAPD ）； B 、扩增片段长度多态性（AFLP ）； C 、RACE ； D 、S1 酶作图。 6、pUC18 与 pUC19 的区别在于（ B ）。 A 、二者的选择标记不同； B 、二者的多克隆位点方向相反； C 、pUC18 无 lacZ 基因； D 、pUC19 无 lacZ 基因。 7、有关 DNA 序列自动化测定的不正确叙述是（ D ）。 A 、用荧光代替了同位素标记； B 、激光扫描分析代替人工读序 基； C 、本原理与手工测序相同； D 、不再需要引物。