颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响
《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》范文
《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》篇一一、引言在畜牧业和生物医学领域，牛卵丘—卵母细胞复合体（Cumulus-Oocyte Complexes, COC）的研究具有极其重要的意义。
该复合体不仅在生殖生物学中扮演着关键角色，还与卵母细胞的发育潜能密切相关。
本文将重点探讨牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡的发生和调控机制，以及其与卵母细胞发育潜能的关系。
二、牛卵丘—卵母细胞复合体的结构与功能牛卵丘—卵母细胞复合体主要由卵母细胞和围绕其的卵丘细胞组成。
卵丘细胞为卵母细胞提供营养支持和保护，同时参与调控卵母细胞的发育过程。
复合体的正常结构和功能对于维持卵母细胞的发育潜能至关重要。
三、凋亡发生与调控机制1. 凋亡发生：在牛卵丘—卵母细胞复合体中，凋亡是一种重要的生物学过程，涉及细胞的程序性死亡。
当复合体受到内外环境变化或损伤时，凋亡机制被激活，导致部分卵丘细胞死亡。
2. 调控机制：凋亡的调控涉及多种信号通路和分子机制。
例如，某些生长因子、细胞因子和转录因子等可调节凋亡过程，从而影响牛卵丘—卵母细胞复合体的发育潜能。
此外，氧化应激、钙离子浓度等也参与凋亡的调控。
四、凋亡与发育潜能的关系牛卵丘—卵母细胞复合体的凋亡过程与其发育潜能密切相关。
凋亡的发生会影响卵丘细胞的数目和功能，进而影响卵母细胞的发育潜能。
研究表明，适当的凋亡水平有助于维持卵母细胞的发育能力，而过度或不足的凋亡则可能导致卵母细胞发育受阻。
因此，了解凋亡的调控机制对于提高牛卵母细胞的发育潜能具有重要意义。
五、研究方法与结果本研究采用显微操作技术获取牛卵丘—卵母细胞复合体，通过观察其在体外培养过程中的凋亡情况，分析其与发育潜能的关系。
结果表明，适当的凋亡水平有助于提高牛卵母细胞的发育潜能。
进一步的研究发现，某些生长因子和细胞因子可通过调控凋亡过程，从而提高牛卵母细胞的发育潜能。
六、讨论与展望本研究揭示了牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能的关系。
人卵丘颗粒细胞和壁层颗粒细胞体外培养方法比较
人卵丘颗粒细胞和壁层颗粒细胞体外培养方法比较何文;吕杰;李涛;文艳飞;韩婵林;蔡柳洪【摘要】AIM:To establish an effective method for purification and culture of human cumulus cells(CCs) in vitro,and to compare the characteristics between CCs and mural granulosa cells(MGCs).METHODS:Follicular fluid and cumulus complex from the patients undergoing intracytoplasmic sperm injection were s were mechanically cut from cumulus complex and then directly inoculated on a Petri dish, and MGCs were obtained from follicular fluid through density gradient centrifugation.The expression of follicle stimulating hormone receptor(FSHR)was determined by immunofluorescence.The cell growth curves were measured by CCK-8 assay.The secretion of estrogen was detected by ELISA.RESULTS:After incubated for 24 h, the adherence of CCs was s and MGCs had similar growth characteristics and FSHR expression.The similar cell growth curves were observed by CCK-8 assay and the results of ELISA showed that they had comparable secretion of estrogen.CONCLUSION:Direct culture of CCs mechanically cutting from cumulus complex is an effective s had similar growth characteristics,growth curves and secretion of estro-gen to MGCs cultured in vitro and could be a substitutive source of granulosa cell subsets.%目的:建立有效分离、提纯及培养人卵丘颗粒细胞的方法,并与人壁层颗粒细胞的体外培养相比较.方法:收集卵胞浆内单精子显微注射取卵时的卵泡液和直接机械分离卵母细胞所得的卵丘颗粒细胞复合物,直接将卵丘颗粒细胞复合物接种于培养皿中培养.用密度梯度离心法分离卵泡液中的人壁层颗粒细胞.用免疫荧光法检测卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)的表达;用CCK-8法检测细胞生长曲线;用ELISA检测这2种颗粒细胞分泌雌激素的能力.结果:直接法所得人卵丘颗粒细胞培养24 h后可贴壁,体外培养生长状态与人壁层颗粒细胞相似;免疫荧光检测显示两者均表达FSHR;CCK-8实验结果表明,两者体外培养生长曲线相似;ELISA结果显示两者分泌雌激素能力相当.结论:利用机械切割获得人卵子周围卵丘颗粒细胞复合物直接培养的方法操作简单,获得的人卵丘颗粒细胞具有与人壁层颗粒细胞相似的生长状态、生长曲线以及雌激素分泌能力,可作为人颗粒细胞亚群体外培养方法的补充.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2018(034)002【总页数】5页(P380-384)【关键词】人卵丘颗粒细胞;人壁层颗粒细胞;细胞分离;体外培养;卵泡刺激素受体【作者】何文;吕杰;李涛;文艳飞;韩婵林;蔡柳洪【作者单位】中山大学附属第三医院生殖中心,广东广州510630;中山大学附属第三医院生殖中心,广东广州510630;中山大学附属第三医院生殖中心,广东广州510630;江门市中心医院,中山大学附属江门医院生殖中心,广东江门529030;中山大学附属第三医院生殖中心,广东广州510630;中山大学附属第三医院生殖中心,广东广州510630【正文语种】中文【中图分类】R363;R711卵巢颗粒细胞是组成卵泡最大的细胞群，是女性生殖过程中发挥重要作用的一类细胞。
PGC-1α与卵巢功能及相关研究进展
DOI:10.12280/gjszjk.20200254葛婷，杨晓葵△【摘要】过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptorgamma coactivator1alpha，PGC-1α）属于人体内一种重要的核转录辅助激活因子，是线粒体生成的关键调节因子，通过与核受体及转录因子的相互作用参与线粒体的生物合成、适应性产热、能量代谢、细胞凋亡、细胞信号转导和肿瘤发生等多种生物学过程。
近年来PGC-1α在卵巢中的作用备受关注，越来越多的研究表明PGC-1α可通过参与卵泡发育、卵泡闭锁、调控卵巢激素合成与分泌等多种途径影响卵巢功能。
PGC-1α的表达和功能异常与卵巢功能减退、多囊卵巢综合征和卵巢癌等病理反应相关。
随着研究不断地深入，PGC-1α通过调控细胞信号转导对卵巢功能的调控机制逐渐被揭示。
本文就PGC-1α在卵巢中的作用及相关研究进展进行综述，为卵巢功能异常及相关疾病的临床诊治提供参考。
【关键词】过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子1α；卵巢；卵泡；卵泡闭锁；信号传导；多囊卵巢综合征；卵巢肿瘤Research Progress on PGC-1αin Ovary GE Ting,YANG Xiao-kui.Department of Reproductive Medicine,Beijing Obstetrics and Gynecology Hospital,Capital Medical University,Beijing100026,ChinaCorresponding author:YANG Xiao-kui,E-mail:***********************【Abstract】Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator1alpha(PGC-1α),an importantnuclear transcription coactivator,is a key regulator of mitochondrial production.PGC-1αis involved in variousbiological processes such as mitochondrial biosynthesis,adaptive thermogenesis,energy metabolism,apoptosisinduction,cellular signal transduction and tumorigenesis through interaction with nuclear receptors andtranscription factors.In recent years,many studies have shown that PGC-1αparticipats in the folliculardevelopment and atresia,and ovarian hormones synthesis and secretion.The abnormal expression of PGC-1αcanresult in reproductive and endocrine problems and disorder,such as diminished ovarian reserve,polycystic ovarysyndrome and ovarian neoplasms.With the continuous in-depth study,the mechanism of PGC-1αin theregulation of ovarian function will be discovered.This review briefly summarized the function of PGC-1αin ovaryand research progress,which may provide new reference for the diagnosis and treatment of some ovarian diseases.【Keywords】Peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator1alpha;Ovary;Ovarian follicle;Follicularatresia;Signal transduction;Polycystic ovary syndrome;Ovarian neoplasms（ＪＩｎｔＲｅｐｒｏｄＨｅａｌｔｈ蛐ＦａｍＰｌａｎ，2021，40：142-146）·综述·基金项目：国家自然科学基金（81871133）；北京市医院管理局2018年度“扬帆”计划重点医学专业（ZYLX201830）；北京市医院管理中心“登峰”人才培养计划（DFL20191401）作者单位：100026北京，首都医科大学附属北京妇产医院生殖医学科通信作者：杨晓葵，E-mail：***********************△审校者卵巢是女性的重要性腺，其主要功能为产生卵母细胞和分泌性激素。
卵母细胞质量的影响因素
卵母细胞质量的影响因素蔡娇娇;陆文昊;杨欢利;李真法;诸溢扬【摘要】随着辅助生殖技术的不断发展与进步,越来越多的不孕患者通过这一技术成功妊娠.卵母细胞的质量在决定辅助生殖技术结局中扮演着至关重要的角色.随着妇女年龄的增长,卵母细胞质量总体来说是呈下降趋势,颗粒细胞通过小分子物质、活性氧等影响着卵母细胞及胚胎发育潜能,此外超促排卵方式通过对激素的调节也改变着卵母细胞质量,而子宫内膜异位症则是因为微环境的变化影响卵母细胞及后续发育.本文旨在综述过去的理论基础和现阶段的最新研究,对这一理论系统进行初步总结.%With the development of assisted reproductive technology,more and more infertile patients chose this technology and got pregnant.The quality of oocyte plays an important role in determining the outcome of assisted reproductive technology.In this review,the theory system is summarized briefly by studying the basic theory and the latest research.The quality of oocyte gets worse with the age,and granulose cells influence oocyte by small molecular substance and reactive oxygen species.In addition,the different controlled ovarian hyperstimulation mode regulate the quality of oocyte through the hormone.And endometriosis influence oocytes and its subsequent development by changing the microenvironment.【期刊名称】《中国计划生育学杂志》【年(卷),期】2018(026)001【总页数】4页(P70-73)【关键词】卵母细胞质量;年龄;颗粒细胞;子宫内膜异位症;控制性超促排【作者】蔡娇娇;陆文昊;杨欢利;李真法;诸溢扬【作者单位】台州恩泽医疗中心集团浙江省台州医院 317199;台州恩泽医疗中心集团浙江省台州医院 317199;台州恩泽医疗中心集团浙江省台州医院 317199;台州恩泽医疗中心集团浙江省台州医院 317199;台州恩泽医疗中心集团浙江省台州医院 317199【正文语种】中文高质量的卵母细胞是体外受精-胚胎移植(IVF-ET)成功的重要前提。
《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》范文
《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》篇一一、引言近年来，在动物生殖生物学领域，卵母细胞及其周围环境的调控机制成为了研究的热点。
牛卵丘—卵母细胞复合体（COC）作为卵母细胞周围的重要微环境，其凋亡过程和调控机制与卵母细胞的发育潜能密切相关。
本文旨在探讨牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能之间的关系，以期为动物繁殖技术提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料本研究采用牛卵巢采集的COC样本，以及相关凋亡和发育相关基因的引物等实验材料。
2. 方法（1）COC样本的采集与处理；（2）凋亡过程的观察与记录；（3）基因表达水平的检测与分析；（4）统计学分析。
三、结果1. 牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡过程观察通过对COC样本的观察，我们发现牛卵丘—卵母细胞复合体在发育过程中会发生明显的凋亡现象。
在特定发育阶段，凋亡的发生程度较高，可能与卵母细胞的成熟和排精能力密切相关。
2. 凋亡调控机制研究研究发现，牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡过程受到多种基因的调控。
这些基因在COC发育的不同阶段表达水平不同，对凋亡过程产生重要影响。
其中，某些基因的异常表达可能导致COC凋亡异常，进而影响卵母细胞的发育潜能。
3. 发育潜能与凋亡关系分析通过对COC发育潜能与凋亡程度的相关性分析，我们发现牛卵丘—卵母细胞复合体的凋亡程度与卵母细胞的发育潜能呈负相关。
即凋亡程度越高，卵母细胞的发育潜能越低。
这表明凋亡过程对卵母细胞的发育具有重要影响。
4. 基因表达水平与发育潜能关系分析我们进一步分析了相关基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系。
发现某些关键基因的表达水平与卵母细胞的发育潜能呈正相关。
这些基因的异常表达可能导致COC凋亡异常，进而影响卵母细胞的发育潜能。
四、讨论本研究表明，牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡过程受到多种基因的调控，且凋亡程度与卵母细胞的发育潜能呈负相关。
这提示我们，在动物繁殖过程中，通过调控COC的凋亡过程和基因表达水平，可能有助于提高卵母细胞的发育潜能和生殖效率。
颗粒细胞与卵母细胞关系研究进展
颗粒细胞与卵母细胞关系研究进展
赵杰;陈秀娟
【期刊名称】《国际生殖健康/计划生育杂志》
【年(卷),期】2015(000)005
【摘要】颗粒细胞与卵母细胞共处于同一个微环境中，颗粒细胞通过复杂的缝隙
连接与卵母细胞进行细胞之间的“对话”，并调控卵母细胞的生长与成熟。
卵母细胞成熟后发生排卵，卵丘细胞通过自身及分泌作用影响着精卵结合及雄原核的形成。
在哺乳动物的研究中发现，卵丘细胞与胚胎共培养能够克服发育阻滞，并对胚胎的发育起很好的支持作用。
随着人类辅助生殖技术的发展，学者们越来越重视在基因及转录水平上对卵丘细胞的检测，从而对卵子及胚胎质量进行预测。
综述颗粒细胞在卵子生长与成熟、受精及胚胎发育等方面的作用。
【总页数】4页(P406-409)
【作者】赵杰;陈秀娟
【作者单位】010050 呼和浩特，内蒙古医科大学附属医院妇产科生殖中
心;010050 呼和浩特，内蒙古医科大学附属医院妇产科生殖中心
【正文语种】中文
【相关文献】
1.不同年龄IVF-ET患者卵丘颗粒细胞端粒长度与卵母细胞成熟度及妊娠结局的关
系 [J], 王兴玲;蔡鹏飞;张文娟;肖雅琳
2.卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究 [J], 李媛;曹义娟;姜晶晶;马
水英;李梅;胡京美;陈子江
3.颗粒细胞和卵母细胞的自噬及其研究进展 [J], 施陈楠;崔毓桂
4.颗粒细胞线粒体功能与卵母细胞发育相关性的研究进展 [J], 李贝贝;杜馨;张敏;姜宏
5.颗粒细胞对卵母细胞成熟和排卵影响研究进展 [J], 范冰峰;赵向远;韩玉萍;李文;李晓霞;许保增
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《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》范文
《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》篇一一、引言随着畜牧业的发展和人们对食品安全认识的提升，研究母体卵子及牛卵丘（Cumulus-Oocyte Complex, COC）对理解牛生殖生理、优化人工繁殖技术以及提高畜牧业生产力具有极其重要的意义。
卵丘作为包裹卵母细胞的颗粒细胞群，其与卵母细胞的相互作用对于调控卵子发育和成熟起着至关重要的作用。
近年来，牛卵丘—卵母细胞复合体（COC）的凋亡过程及其调控机制与发育潜能的关系成为了研究的热点。
本文将探讨这一领域的最新进展和发现。
二、牛卵丘—卵母细胞复合体的凋亡发生卵丘—卵母细胞复合体凋亡是指伴随卵泡发育成熟过程中，卵丘细胞与卵母细胞之间的相互作用逐渐减弱，直至最终发生细胞凋亡的现象。
这一过程涉及多种信号通路和基因表达，包括Caspase家族的激活、Bcl-2家族的调控等。
在牛的卵巢中，COC 的凋亡过程与卵泡的发育阶段密切相关，其发生机制和调控因素的研究对于理解卵子发育和成熟具有重要意义。
三、牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡的调控牛卵丘—卵母细胞复合体的凋亡受到多种因素的调控，包括激素、生长因子、基因表达等。
其中，生长因子如EGF、FSH等对卵丘细胞的生长和凋亡具有重要影响。
此外，基因表达也是调控COC凋亡的关键因素，如Bcl-2家族基因的过表达可以抑制细胞凋亡，而Caspase家族基因的激活则促进细胞凋亡。
这些因素之间的相互作用和影响，共同构成了COC凋亡的复杂调控网络。
四、牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡与其发育潜能的关系研究表明，牛卵丘—卵母细胞复合体的凋亡过程与其发育潜能密切相关。
在卵泡发育过程中，COC的凋亡程度直接影响到卵子的质量和发育潜力。
适当的凋亡水平有利于卵子的正常发育和成熟，而过度的凋亡则可能导致卵子质量下降，影响其受精能力和胚胎发育潜力。
因此，通过研究COC的凋亡过程和调控机制，可以更好地理解其与发育潜能的关系，为优化人工繁殖技术和提高畜牧业生产力提供理论依据。
卵巢运输及保存的重要影响因素
遗传改良GENETIC IMPROVEMENT卵巢运输及保存的重要影响因素兰可心1，2 *，张学炜1，郑璐璐1，2，王敏1，2，崔茂盛2（1.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津 300380；2.天津市农业科学院畜牧兽医研究所，天津 300381）哺乳动物卵巢内含有大量的原始卵泡，是当前科研上获取卵母细胞的重要原材料。
随着转基因、克隆等胚胎工程技术日渐成熟，对卵母细胞的需求也在不断增加。
体内成熟技术（in vitro maturation，IVM）和超数排卵技术所获得的卵母细胞数量有限，实际操作复杂且成本高。
而屠宰场所提供的卵巢数量大、所获得卵母细胞充足且成本低廉。
各研究所现在更趋向于选择屠宰场的废弃卵巢用来作为体外成熟卵母细胞的原材料。
但因屠宰场和实验室之间距离以及工作时间因素的影响，卵巢从离体到实验对其进行处理使用的时间是不定的。
导致采集卵母细胞的时间不可控，有时需要较长的时间。
因此，为了合理安排实验的同时节省运输费用，需要对离体卵巢进行一定时间的保存。
目前已有对常见家畜（猪、牛、绵羊、山羊等）以及一些特种动物（家猫、犬、野生梅花鹿、伊比利亚红鹿、羊驼、兔、鼠、牦牛、驴等）的相关报道。
将卵巢从动物死亡那一刻起直至到实验人员取卵母细胞为止的保存条件是维持卵母细胞活力的重要因素，不适当的保存条件会对后续实验造成不利影响，可见如何在卵巢保存的过程中维持组织内卵泡的活力对于后续的研究工作是十分重要的。
1 卵巢运输及保存温度当离体卵巢所处的环境发生变化时，会对卵泡及卵母细胞造成负面影响。
温血动物体内存在的酶在正常体温的温度时活性最强，细胞的新陈代谢与酶的活性有关，而酶的活性与温度呈现依赖性。
细胞代谢会消耗细胞内能量，紧接着消耗保存介质中的营养和氧气。
所以，即使在很短的保存时间（例如2 h或4 h）内，也可能会启动颗粒细胞以及卵母细胞凋亡导致较高的滤泡闭锁率。
据相关研究报道，在卵泡内的卵母细胞因为受到了卵泡内环境的保护避免了温度变化对其的损伤，相较于生发泡阶段分离的卵母细胞对于冷刺激的表现较弱。
《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》范文
《牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能关系研究》篇一一、引言随着畜牧业的发展和动物生殖生物学研究的深入，牛卵丘-卵母细胞复合体（Bovine Cumulus-Oocyte Complex, COC）的发育及其在繁殖技术中的应用受到越来越多的关注。
COC的发育潜能与卵母细胞的成熟度和质量密切相关，而凋亡则是影响其发育潜能的重要因素之一。
因此，本研究将着重探讨牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控与其发育潜能的关系。
二、牛卵丘—卵母细胞复合体结构及功能牛卵丘—卵母细胞复合体由卵母细胞及其周围的卵丘细胞组成。
卵丘细胞对卵母细胞的发育起着重要作用，如提供营养支持、维持微环境稳定等。
而卵母细胞的成熟度和质量则直接决定了COC的发育潜能。
三、凋亡及其在牛卵丘—卵母细胞复合体中的作用凋亡是一种程序性细胞死亡过程，对于维持生物体内环境的稳定具有重要意义。
在牛卵丘—卵母细胞复合体中，凋亡的发生对卵母细胞的发育潜能产生重要影响。
当卵丘细胞发生凋亡时，会导致卵母细胞缺乏营养支持和微环境稳定，进而影响其发育潜能。
因此，调控COC中凋亡的发生对于提高其发育潜能具有重要意义。
四、牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡发生和调控机制牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡的发生和调控涉及多个信号通路和分子机制。
研究表明，这些机制包括氧化应激、钙离子浓度变化、细胞因子分泌等。
通过调控这些机制，可以影响COC中凋亡的发生和程度，从而影响其发育潜能。
五、牛卵丘—卵母细胞复合体凋亡与其发育潜能的关系研究表明，牛卵丘—卵母细胞复合体中凋亡的发生程度与其发育潜能呈负相关。
即凋亡程度越高，COC的发育潜能越低。
因此，通过调控COC中凋亡的发生和程度，可以提高其发育潜能，进而提高繁殖效率。
六、研究方法与实验结果本研究采用体外培养COC的方法，通过添加不同浓度的凋亡抑制剂或诱导剂，观察COC中凋亡的发生程度和发育潜能的变化。
实验结果表明，在适宜浓度的凋亡抑制剂作用下，COC中凋亡的发生程度降低，其发育潜能得到显著提高。
颗粒细胞在卵母细胞体外成熟过程中的作用-细胞生物学论文-生物学论文
颗粒细胞在卵母细胞体外成熟过程中的作用-细胞生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——卵母细胞体外成熟（IVM）是指将不成熟的卵母细胞，在体外模拟体内成熟的微环境，培养至成熟卵子（MⅡ）的过程。
此项技术开始于动物实验，早在1935年Pincus发现兔子的不成熟卵可以在体外成熟，并且这个成熟过程是自发的。
30年后，Edwars提出人类的不成熟卵母细胞可以体外发育成熟，并且通过实验证实其成熟过程需要至少24h.在卵母细胞的成熟过程中颗粒细胞通过缝隙连接传递多种信号，参与卵母细胞减数的启动以及卵胞浆的成熟。
有研究表明，对颗粒细胞卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte comeplexes,COCs）行IVM时，体外成熟率与受精率显着提高[1].不过，也有试验证明，颗粒细胞存在与否，并不能影响IVM的结局，甚至对卵母细胞的成熟与受精有负面影响[2].本文以颗粒细胞与卵母细胞的联系及信号传递为切入点，探讨在不同培养条件下的DOs能否达到和COCs相近的效果，更深层次研究颗粒细胞在IVM过程中的影响及作用，从而为DOs体外成熟创造更适合的培养环境。
1资料与方法1.1实验动物8~12周龄体重25g健康CD-1小鼠（雌性40只，雄性10只）购自维通利华实验动物技术有限公司，饲养在控温控湿及人工光照的条件下，自由饮水、采食。
1.2 IVM培养基IVM基础培养液购自瑞典vitrolife公司的卵裂期培养液（G1）；促卵泡生成素由瑞士Serono公司生产，剂量为75IU/支；HCG由瑞士Serono公司生产，剂量为5 000IU/支。
将上述试剂配置成含FSH75IU/L 和HCG150IU/L的IVM培养液[3],并用配好的培养液制备四孔皿，每孔放0.5~0.8ml覆盖矿物油，放在37Ⅱ、CO2浓度为6%培养箱中温浴不少于6h备用。
1.3卵母细胞收集雌鼠腹腔注射HMG10IU,48h后颈椎脱臼并取出卵巢。
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（ 东南大学医学 院附属徐州 医院 妇产科 ， 江苏 徐州 ， ２ ０ ９ ２ １０ ）
关键词： 颗粒细胞 ； 细胞凋亡 ； 卵母细胞 ； 体外成熟
中图分类号 ： ２ ． Ｒ３１１ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：１７ －３ ３ ２０ ）８０ ２ －２ ６ ２２ ５ （０８ ０ －１４０
卵 ， 吸负压为 ７ ５Ｐ 。共 获得 未成 熟 卵母 细胞 抽 ．ｋ ａ
３２个 。 ８
１２ 实验方 法 ．
均， 无核碎 片≤ ５ ％ ，评分 为 ２分 ； ０ 卵裂 球不 均 ， 无核碎 片 ≥５ ％， 分 为 １分 。随后 行 宫腔 内胚 ０ 评
胎移植 。
主要应用 Ｔ Ｅ ＵＮ Ｌ方法 对相应 的卵 的颗粒细
实 用 临 床 医 药 杂 志
・
２０ ｏ ８年第 ｌ ２卷第 ８ 期
… … ’… … … 。
１４ ・ ２
Ｊ ｕｎ ｌ ｆ ２ ｎｃｌ ｅｉ ｎ ｒＰ ａ ｔ ｅ ｏ ｒ ａ ｏ １ ｉｉ Ｍ ｄｃ ｅｉ ｒｃｉ １ ａ ｉ ｌ ｃ
．
颗粒 细 胞 凋 亡对 卵母细胞 发 育 潜 能 的影 响
６层 ， 紧密包 裹 在 卵 子周 围 ， 为 ３分 ； 评 卵细 胞形 态轻度 不规 则 ， 颗粒 细胞 层 不 完 整 ， 数≤ ３层 ， 层 评 为 ２分 ； 卵细胞形 态不规 则 ， 其它形 态结构 或有 异常， 评为 １分 ； 细胞极 紧密 的包 裹在颗粒 细胞 卵
团中， 无法清楚分辨卵细胞 的形态源自， 评为 ０ 分。 未成熟卵母细胞培养及体外受精 ： 将卵子放 人含 有 ０ ０５Ｉ Ｆ Ｈ、 ． Ｕ Ｇ、０ｎ ／ ．７ Ｕ Ｓ ０ ５Ｉ ＨＣ １ ｇｍＬ
发泡（ Ｖ 、 Ｇ ）无极体为 Ｇ Ｖ期卵 ； Ｇ 也无极体 ， 无 Ｖ， 为第 １ 减数 分 裂 中期 （ ） 次 ＭＩ的卵 。如 卵母 细胞
粘液 团较 丰富 ， 卵细胞 形态 规则 ， 围颗粒细胞层 周
完整， 层数≥６ ， 层 扩展 良好 ， 评为 ４分； 卵细胞形 态基本 规则 ， 围颗粒 细胞 层基 本 完整 ， 周 层数 ３ ～
生育 中凋亡起着一定 作用 。卵母 细胞 与颗粒 细胞 之 间关 系密切 ， 测 颗粒 细胞 的功 能状 态 影 响卵 推 母细胞 的质量 ， 对 于随 后 胚胎 的生存 潜 能尤 其 这 重要 ＿。本 研究 通 过 检 测 体 外 培 养 后 的卵 的颗 ４ Ｊ 粒细胞 的凋亡 程 度 ， 评估 颗 粒细 胞 凋亡 对 未成 熟
未成熟卵体外培养成熟 （ Ｍ） Ｉ Ｖ 是近十几年 在辅助生殖领域新兴起来的一种助孕技术。其主 要原理是模拟体内卵母细胞的发育成熟环境 ， 使 从卵巢采集的未成熟卵母 细胞在体外培养成熟 ， 然后予 以受 精， 胚胎 培养 和移植 ， 获得 妊娠【 。 １ ］ 目 前体外培养的卵母细胞 的成熟率低及受精率 低 ， 的胚 胎发育潜 能差 ， 形成 常不能继 续发育 到囊 胚 阶段 而 导 致 着床 失 败 【 引。研 究 证 实 卵 泡 闭 锁 过程 中存 在颗粒细胞 的凋亡 现象 ｌ ， 明在人 类 ３ 说 Ｊ
用Ｔ ＵＮＥ Ｌ方 法对颗 粒细胞 进行染 色。将在
盒（ 美国 Ｒ ＆Ｄ公司， 货号 ： Ａ ６ ５ 。 Ｔ ４２ ）
标 本处理 ： 出的卵 泡 液立 即在保 温 的条 件 取
下送实验室 ， 体视显微镜下挑选卵冠丘复合物 ， 并 在倒 置镜下进行 卵母 细胞 评分 。
未成熟 卵母 细胞 评分 标 准 ： 细胞 浆 内见 生 卵
１ 资料与方法
１ １ 研 究对 象 ．
透明质酸酶 中２ ￣３ ， ０ ０Ｓ 同时配合吸管机械去除 颗粒细胞。观察卵母 细胞 的成熟情况， 有第一极 体释放的卵母细胞 为成熟卵， 即处于第 ２次减数
分裂 中期 的卵母 细胞 （ Ⅱ） Ｍ ，随后 行卵胞 浆 内单 精子显微 注射 （Ｃ Ｉ ，１ ～１ ＩＳ ） ６ ８ｈ后 ， 卵细 胞浆 内
Ｅ Ｆ、． ９ ｍｍｏ／ Ｇ ０ ２ ｌＬ丙 酮 酸 钠 、 ０ １ ％胎 牛 血 清 的 Ｔ Ｍ 一１ ９ Ｓｇｎ ， 国） ， ３ ℃ ， ％ ｏ ２ Ｃ ９（ｉ ａ 美 ｒ 中 在 ７ ５ ３ 环
卵体外培养后发育潜能的影响。
境 中培养 ２ ￣３ 将未 成熟卵放 入 ８ Ｕ／ ８ ２ｈ后 ０Ｉ ｍＬ
颗粒细胞凋亡分析 ： 将脱下的颗粒细胞收集
胞进行 染色 ， 剂盒 为 Ｔ Ｇ 试 Ａ Ｓ原 位 凋 亡测 试试 剂
于 ｅｐｎｏｆ ｐｅｄｒ管中， 作好编号 ， 置低温离心机，５０ ２０ ｒｍｎ ／ ｉ离心 １ ｉ， ０ｍ ｎ 弃上清 ， 管底颗粒细胞 团用 Ｔ ＮＥ Ｕ Ｌ方 法 进 行染 色 ， 观察 颗 粒 细胞 的凋亡 情 况， 并与卵母细胞质量评分 和发育的胚胎评分做 比较 。
收 稿 日期 ： ０ ８ ７—１ ２ ０ —０ ３
作者简介 ： 曹义娟（ ９４一） １７ ，女 ， 江苏徐州人 ，主治 医师。
第 ８期
曹义娟 ：颗粒 细胞凋亡 对卵母细胞发育潜能的影响
１ ０ ０Ｕ， ６ｈ 经 阴道超 声 行未 成 熟 卵穿刺 取 ｏ ０ Ｉ ３ 后
出现双原核为正常受精 ， 继续在胚胎培养液中培 养 ２ 后 ， ４ｈ 参照 Ｄ ｌ的标准 进行胚胎评分： ａ ｅ Ｊ 卵 裂球 均匀 ， 碎 片为 ４分 ； 裂球 均 匀 或 轻度 不 无 卵
均， 无核 碎 片≤ ｌ ％ ， 分为 ３分 ； ５ 评 卵裂球 轻 度不
２ ０ 年 １ ～１ 就诊 于 本 院生 殖 医学 中 ０６ 月 ２月 心的多囊 卵巢综 合征 患者 ， 年龄 ２ ～３ ６ ２岁 ， 均 平
（７８ ． ２ ． ±３７岁） 。标本采集 ： 在月经周期第 １ ～ ０ ｌ天， ２ 行阴道 Ｂ超监测双侧卵巢中无直径＞８ ｍ ｍ 的卵 泡 ， 肌 注 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 （ Ｃ 即 ｈ Ｇ）