大蒜多糖组分B的纯化与糖含量测定

大蒜多糖组分B的纯化与糖含量测定
作者：余薇，查文良，夏勇，吴基良，陈凤
【摘要】目的建立苯酚一硫酸法测定大蒜多糖组分B的含量。

方法采用
醇沉的方法分离纯化大蒜多糖组分B，以苯酚-硫酸显色后用紫外分光光度计测定吸光度,测定波长486 nm。

结果在4.0〜10.0 M g/ml内，浓度与吸光度呈良好线性关系。

回归方程：A=0. 069 4C-0.004 9 (r=0. 999 6，n=7)，平均回收率为101. 27%，RSD为1.9%。

大蒜多糖组分B的平均糖含量为83. 37%，RSD 为2.5%(n=5)。

结论该方法简便、准确、精密度高、重现性好，为生产的质量控制及进一步研究奠定良好的基础。

【关键词】大蒜多糖组分B苯酚-硫酸法含量测定
Abstract:ObjectiveTo develop phenol-sulfuric acid method for the determination of polysaccharides B from garlic. MethodsGarlic Polysaccharides B was extracted and purified through ethanol precipitation, the content was determined by phenol-sulfuric acid at 486 nm. Resultsln the range of 4.0〜10. 0 |J g/ml, there was an excellent linear shape between the concentration and absorbence. The regression equation was A=0. 069 400.004 9 (r=0. 999 6, n=7)and the average recovery was 101.27% with RSD=1. 9%. The average polysaccharides content B from garlic was 83. 37%, RSD=2. 5% (n=5). ConclusionThe method is simple and accurate and it can be used for the quality control of polysaccharides form garlic.
Key words:Garlic polysaccharides B； Phenol-sulfuric
acid； Content determination
多糖的研究起自20世纪60年代，从20世纪70年代开始逐渐发现多糖及
其复合物(蛋白多糖和脂多糖)具有多方面的药理作用，主要包括：增强免疫、抗肿瘤、活血抗栓、降血压、降血脂、降血糖、抗衰老、增强骨髓造血机能、抗辐射、对肝肾等主要脏器具有保护作用。

中药多糖的化学研究范围涉及提取、分离、纯化等方面[1,2]。

目前我国对大蒜多糖的研究主要在于药理方面
[3,4],涉及结构分析、定性定量、分子量确定等领域较少。

大蒜多糖是大蒜的醇沉部分，有大蒜多糖组分A、B和C 3种成分，笔者对大蒜多糖组分B进行了含量测定，旨在为大蒜多糖的研究提供基础资料。

1材料与仪器
0.1药材市售山东产大蒜。

1.2试剂葡萄糖标准品，上海化学试剂公司；苯酚，上海化学试剂公司；
硫酸(分析纯)，上海化学试剂有限公司；95%乙醇；蒸馏水。

1.3仪器UV-754型紫外可见分光光度计；FA1104电子分析天平。

2方法与结果
2.1大蒜多糖组分B的分离纯化新鲜大蒜去皮碾碎，无水乙醇浸泡脱脂，
在沸水浴中用4〜5倍双蒸馏水提取8 h，滤液用乙醇沉淀，得多糖组分B粗品，
粗品用Sevage法去蛋白后在55°C下干燥至恒重得大蒜多糖组分B精制品。

纯
化后大蒜多糖在紫外可见光谱段进行扫描，结果显示在190 nm处有多糖的特征
吸收峰，而在260和280 nm处无吸收，表明大蒜多糖组分B中无蛋白质成分。

见图1。

2.2试剂的配制
1.2. 1标准品溶液的制备精密称取105°C干燥至恒重的葡萄糖7. 0 mg置100 ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为70 |J g/ml的标准
品溶液。

1.2. 2供试品溶液的制备精密称取55°C干燥至恒重的大蒜多糖组分B
10.0 mg置100ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100
|J g/ml的多糖供试品液。

2.2. 3 5%苯酚试剂的配制取苯酚100 g，加铝片0. 2 g和NaHC03 0. 1 g, 蒸馏，收集180〜182°C馏分。

精密称取精制苯酚5. 0 g以蒸馏水溶解后转至
100 ml容量瓶中定容，摇匀，得5%苯酚试剂。

2.3检测波长的选择精确量取的葡萄糖溶液、样品溶液 1. 0 ml分置于两
支干燥试管中，分别加入5%苯酚溶液1. 0 ml摇匀，然后加入浓H2S04 5.0 ml 摇匀，另以1.0 ml水同上操作，作为空白液，于室温中放置5min，沸水浴中
恒温15 min,取出，冰水浴冷却至室温，在波长400〜800 nm之间扫描。

结果
供试品与标准品溶液在486 nm波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长无干扰，故选用486 nm为检测波长。

见图2〜3。

2.4标准曲线的绘制精密量取标准品溶液0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，
0.9，1.0 ml,分别置7只试管中，各加蒸馏水至1.0 ml，再加5%苯酚溶液
1.ml,摇匀后再加入浓H2S04 5.0 ml，摇匀，室温下放置 5 min,沸水浴中
恒温15min，取出，冰水浴冷却至室温，在486 nm处，以蒸馏水管作为空白
对照，测定各浓度标准液的吸光度，以糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标
绘制标准曲线，计算得回归方程A=0. 069 4C-0. 004 9 (r=0. 999 6，n=7)，两
者相关性较好。

2.5换算因素的测定精确量取供试品溶液2.0 ml，按测定标准曲线同样
的方法测其吸光度值。

按下式计算换算因素f=l. 11。

f=W/CXD
W为大蒜多糖质量（|J g)，C为供试品溶液中葡萄糖的质量浓度
(M g/ml) , D为多糖的稀释倍数。

2.6精密度实验随机取标准曲线绘制中其中一支葡萄糖试管液，反复测量该标准液的吸光度5次，RSD=0. 18%。

结果见表1。

表1精密度实验（略）
2.7稳定性实验精密量取50 [i g/ml多糖样品 1.0 ml，按测定标准曲线同样的方法操作每隔20 min测定吸光度1次，观察的样品溶液在100 min内吸光度的变化情况，算得吸光度的RSD=0. 23%,结果表明样品溶液在100 min内显色稳定。

结果见表2。

表2稳定性实验（略）
2.8重现性实验精密称取同一批次大蒜多糖组分 B 5 mg各5份分别置于5个100 ml容量瓶中以蒸馏水定容，得50 |J g/ml的多糖样品溶液，量取各样品液1.0 ml 丁-5支干燥试管中，按测定标准曲线同样的方法操作，在486 nm处分别测定其吸光度，算得其RSD=2. 52%。

2.9多糖含量的计算精密称取多糖5. 0 mg,用蒸馏水溶解后定容到100
ml,得样品溶液50 M g/ml。

取样品液1. 0 ml,按测定标准曲线同样的方法操
作并测其吸光度，按下式计算算得平均糖含量为83. 37%。

结果见表3。

表
3多糖含量的计算（略）
多糖含量(%) = (CXDXf)/WX100%
C为测得样品溶液中葡萄糖的浓度(M g/ml) ； D为样品溶液的稀释倍数；f 为换算因素；W为大蒜多糖质量(|j g) c
2.10回收率实验精密量取已知浓度的样品溶液 1. 0 ml 丁•试管中，加入与样品浓度相近的葡萄糖溶液 1.0 ml，按测定标准曲线同样的方法操作，算得样品的平均加样回收率为101.27%, RSD=1.91%，表明本方法准确度良好。

3讨论
多糖的研究发展很快，但研究层次及技术水平都还较低，为了比较、评价以多糖为有效成分的药材和药品质量，因此多糖的提取和含量测定的研究具有重要意义。

本实验通过无水乙醇醇沉和Sevage去蛋白的方法提取大蒜多糖组分B,并运用苯酷一硫酸比色法[5]，通过紫外分光光度计对大蒜多糖糖含量的测定进行了精密度、重现性、稳定性、回收率等各项指标的详细考察，测得多糖的含量为83. 37%，RSDS2.5%,结果表明上述提取及含量测定方法适用于大蒜多糖组分B。

【参考文献】
[1]王玉华，袁久荣.中药多糖的化学研究概况[J].中成药，
2004’ 26(6) :497.
[2]赵文彬，成玉怀.天山大黄多糖的超声提取及含量测定[J].时珍国医
国药，2006, 17 ( 2)： 223.
[3]蔡飞,陈金和，吴基良.大蒜多糖对小鼠病毒性心肌炎的治疗作用[J]
武汉大学学报•医学版，2003，24(2): 109.
[4]吴基良，余薇，汪阵，等.大蒜多糖对中毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影
响[J].中国生物工程杂志，2005, 25 (3): 40.
[5]郭辉，张红旭，曲枫，等.红毛五加多糖胶囊中多糖含量测定[J]. 时珍国医国药，2004，15(11):735.。