嗜冷菌
食品中嗜冷菌的检测实验报告
食品中嗜冷菌的检测实验报告
实验目的：检测食品中是否存在嗜冷菌，初步了解食品卫生质量。
实验材料：
1. 细菌培养基
2. 无菌培养皿
3. 恒温箱
4. 食品样品
实验步骤：
1. 提取食品样品5克，加入15毫升无菌生理盐水中，摇匀。
2. 取1毫升加入含有10毫升细菌培养基的无菌试管中。
3. 对于每个样品，设置一个无菌培养皿，将1毫升的培养基稀释10倍加入培养皿中。
4. 将试管和培养皿放入恒温箱中，分别在15℃和25℃两个温度下培养。
5. 培养24小时后，观察每个培养皿内是否有菌落生长。
实验结果：
在15℃的条件下，每个培养皿中都有菌落生长，且形态相似，颜色为灰白色，形状为圆形或椭圆形，直径约为1-2毫米；在25℃的条件下，也都有菌落生长，但数量较少，形态和颜色与15℃下相似。
结论：
通过实验，证实了食品样品中存在嗜冷菌。
嗜冷菌是一种能在低温环境下生长的细菌，容易引起食品污染，影响食品的卫生质量，应加强卫生监管。
牛乳中嗜冷菌的危害 牛乳中嗜冷菌的检测方法 - 养牛技术
牛乳中嗜冷菌的危害牛乳中嗜冷菌的检测方法-养牛技术嗜冷菌在-15—20℃之间最宜生长，其在保存过程中产生的大量胞外耐高温的脂肪酶和蛋白酶会分解脂肪和蛋白质，所以在高温杀菌后仍有残留，从而造成牛奶腐败变质。
为避免鲜牛乳发生变质,一般从收集到加工过程中都采取冷藏,但此时往往会导致乳中嗜冷菌占具主导地位,而其产生的耐热性酶类是主要造成鲜牛乳以及乳制品质量变差的一个主要原因.检测牛乳中细菌总数一般在37℃温度下进行48h培养,但该条件下嗜冷菌不会生长,从而往往被忽视,应加强检测。
下面就具体来了解一下：牛乳中嗜冷菌的危害牛乳中嗜冷菌的检测方法。
1、来源鲜牛乳中的嗜冷菌具有比较广泛的来源，且可分成较多类型的菌株，其中数量较多的是微球菌、假单胞菌以及产碱杆菌。
微球菌分布比较广泛，主要存在于动物体表、空气、水源以及、设备上；假单胞菌属主要在海水、淡水、土壤以及多种植物体内存在；产碱杆菌主要在饲料、水源以及粪便中存在。
在污染嗜冷菌的途径中，主要是通过接触个人，如药浴杯污染、挤奶工双手不卫生、水清洗乳头污染、贮存及运输设备不干净或没有严格消毒等，都容易导致嗜冷菌含量过高。
2、危害鲜牛乳中主要为兼性嗜冷菌，产碱杆菌属、假单胞菌属、克雷伯氏杆菌属、黄杆菌属以及无色杆属等，是目前经常能够分离到的嗜冷菌。
通过对以上菌株进行特性分析，发现其都会影响鲜牛乳的保存。
例如，假单胞菌具有很强分解蛋白质和脂肪的能力，能够导致脂肪发生分解，从而容易形成脂肪哈败味，还能够使其中的蛋白质发生分解产生蛋白胨；产碱杆菌，自身无法使牛乳中的糖类发生分解而产酸，但能够生成棕黄色、灰黄色的色素，还能够导致牛乳中含有的有机盐发生分解而生成碳酸盐，从而导致牛乳呈碱性，能够造成乳制品发生黏性变质。
也就是说，嗜冷菌能够使牛乳中的成分被破坏，这主要是由于嗜冷菌能够分泌耐热蛋白酶、脂肪酶而导致蛋白质、脂肪发生分解。
另外，在有氧低温条件下，嗜冷菌能够引起生色反应，如黄色、奶油色、绿色、红色、金色、黑色或者棕褐色等。
铜绿假单胞菌 (2)
铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌是一种革兰阴性的细菌，属于嗜冷菌。
它得
名于其在培养基上形成铜绿色的菌落。
铜绿假单胞菌广泛
存在于自然环境中，如水体、土壤、植物和动物体内等。
铜绿假单胞菌具有较强的耐受力和适应性，能够在多种环
境条件下生存和繁殖。
它可以生长在室温下，但最适宜的
温度是30-35摄氏度。
它对氧气的需要较低，可在低氧甚
至无氧条件下生长。
铜绿假单胞菌可以产生多种酶和毒素，其中一些具有致病性。
它是医院感染的常见细菌之一，可引起各种感染，包
括呼吸道感染、尿道感染和创伤感染等。
由于其对多种抗
生素显示出耐药性，治疗铜绿假单胞菌感染的方法较为有限，且会增加治疗的难度。
预防铜绿假单胞菌感染的措施包括保持良好的卫生习惯、
正确使用抗生素、避免过度使用抗菌剂等。
对于高危人群，
如免疫系统受损的患者和长期住院的患者，需要采取额外的预防措施，如定期消毒、单独隔离等。
总的来说，铜绿假单胞菌是一种常见的致病细菌，对抗生素显示出耐药性，需要注意预防和控制其感染的传播。
李斯特菌产生条件
李斯特菌产生条件李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的革兰氏阳性杆菌，它能够在人类和动物体内引起严重的感染疾病，被广泛认为是一种食源性病原体。
为了有效地控制和预防李斯特菌感染，了解李斯特菌的产生条件至关重要。
一、适宜的温度李斯特菌是一种嗜冷菌，其生长温度范围广泛，可以在低至0℃的低温下生长，也可以在高达45℃的高温下生长。
然而，李斯特菌在4℃以下的低温下生长速度相对较慢，而在30-37℃之间的温度下生长最为迅速。
因此，在冷藏食品中李斯特菌的生长速度较慢，但并不代表其无法生存和繁殖。
二、适宜的pH值李斯特菌对pH值的适应能力较强，可以在pH4.4-9.6的范围内生长。
然而，李斯特菌在中性或微碱性环境中的生长较为理想。
当食品的pH值低于4.4时，酸性环境会抑制李斯特菌的生长。
因此，通过控制食品的pH值可以有效地防止李斯特菌的繁殖。
三、适宜的水分含量李斯特菌对水分含量的要求较高，适宜的水分含量有利于其生长和繁殖。
在干燥的环境中，李斯特菌的生存能力会大大降低，而在高水分含量的食品中，李斯特菌的生长速度会加快。
因此，在食品加工和储存过程中，控制食品的水分含量是防止李斯特菌污染的重要措施之一。
四、适宜的营养物质李斯特菌对营养物质的需求较低，可以利用多种有机物质作为碳源和能源。
然而，它对蛋白质和糖类等营养物质的利用能力较强，这也是李斯特菌在食品中繁殖的重要原因之一。
因此，在食品加工和储存过程中，合理控制营养物质的含量，减少李斯特菌的生长机会是非常必要的。
五、适宜的氧气条件李斯特菌是一种好氧菌，可以在富氧环境中生长繁殖。
然而，在一些封闭的食品包装中，由于氧气的缺乏，李斯特菌的生长速度会受到限制。
因此，在食品包装和贮存过程中，保证适当的氧气供应，有助于控制李斯特菌的繁殖。
六、适宜的盐分含量李斯特菌对盐分的耐受性较强，可以在高盐环境中生长。
适宜的盐分含量对李斯特菌的生长和繁殖有一定的促进作用。
嗜冷菌
最常见的“嗜冷菌”，有耶氏菌和李斯特菌。
肉类、奶及奶制品、豆制品、沙拉和水产品等，都是较易受其污染的食物。
先说耶氏菌，它可引起多种疾病，最常见的是小肠结肠炎，主要表现为腹痛、腹泻、发热等症状，或出现类似阑尾炎的症状，偶尔也能引起肠道溃疡和穿孔。
耶氏菌还可以引起皮肤多形红斑、结节红斑和关节炎。
严重的话可致人发生败血症、脑膜炎、肺脓肿、肝脓肿、骨髓炎。
李斯特菌可引起新生儿、孕妇、老年人以及免疫功能下降或缺陷的人发病，它可引起新生儿败血症、脑膜炎，导致呼吸或循环衰竭，病死率高达100%。
孕妇感染后会出现畏寒、发热、头痛、肌痛、关节痛、背痛等类似上呼吸道感染的症状，还可引起早产、死产或新生儿脑膜炎而致其死亡。
成年人感染后，则可引起败血症，表现为发热、肌痛、腹泻和恶心。
感染李斯特菌后，还可导致中枢神经系统受损，出现脑膜炎、脑炎、脑脓肿，出现发热、头痛、恶心、呕吐和偏瘫等，约40%的病人还会发生呼吸衰竭，病死率较高。
此外，李斯特菌感染还会引起心内膜炎、化脓性结膜炎、发热性肠炎、肝炎、肝脓肿、胆囊炎、脾脓肿、关节炎、骨髓炎等。
被耶氏菌和李斯特菌污染的食物，经正常的煮烧可将细菌杀灭。
多数嗜冷菌在贮存期间，能产生热稳定性胞外降解性酶类（主要是蛋白酶、脂肪酶和碱性磷酸脂酶），在巴氏消毒过程中基本不受影响，这类热稳定性胞外蛋白酶和脂肪酶甚至经过UHT处理后仍能保持部分活性，造成乳及乳制品风味及质地上的变异，主要表现为：1.蛋白酶分解乳蛋白后，导致产品发苦，，水解过程中释放的氨基酸会使褐变反应加剧，分解k-酪蛋白，引起蛋白胶凝化。
2.分解脂肪后，导致游离脂肪酸增加，口感风味变差。
嗜冷菌的检验和控制目前用于检测生奶中嗜冷菌数量的方法有多种，最常见的方法是在5℃—7℃培养10天后计数，或将样品21℃增菌培养后，采用选择性培养基在21℃培养25小时后，将样品中G-杆菌作为嗜冷菌污染的指标，这些方法在时间及针对性上都存在严重的缺陷。
原料乳中嗜冷菌的检测
— 1—
• 原料乳中嗜冷菌的检测
原 料
1. 实验材料
乳
中
嗜
冷
菌
的
检 测
恒温箱
水浴锅
无菌培养皿
无菌吸管、试管、锥形瓶
MPC琼脂培 养基
蛋白胨-盐溶 液
— 1—
• 原料乳中嗜冷菌的检测
原 料
2. 检验程序
乳
中
嗜
冷
菌
的
检
测
— 1—
• 原料乳中嗜冷菌检测的结果与报告
原
料 乳 中 嗜
结果计算
N
C
(n1 0.1n2 0.01n3 )d
菌
常见的嗜冷菌是革兰氏阴性菌，其中假单胞菌约占总数的50%。
的
检
测
— 1—
• 原料乳嗜冷菌概念和检测意义
原
料
乳
2. 检测嗜冷菌数的意义
中
嗜
冷
菌
乳中所含嗜冷菌及其胞外酶的浓度直接影响着牛
的 检
乳的货架期。嗜冷菌能导致产品酸包、苦味包、
测
乳清分离、变色发黏、脂肪分离等变质现象发生，
而且还会影响乳制品的加工。
冷
菌
的
检
测
— 1—
• 原料乳中嗜冷菌检测的结果与报告
原 料
结果报告
乳
中
称重取样以 CFU/g 为单位报告，
嗜 冷
体积取样以CFU/mL 为单位报告。
菌
的
检
测
— 1—
乳制品生产与控制
9
乳制品生产与控制
1
目录嗜冷菌的检测
原料乳嗜冷菌检测的 结果与报告
— 1—
• 原料乳嗜冷菌概念和检测意义
注意冰箱中的嗜冷菌
注意冰箱中的嗜冷菌
在很多人眼中，冰箱就是一个与外界绝缘的'无菌保鲜室。
专家提醒，冰箱内虽温度较外界低，却是嗜冷菌的“温床”。
市民应经常清理冰箱，保持冰箱内环境的干净整洁，抑制细菌生长繁殖。
通常情况下，嗜冷菌在0℃～20℃的环境中最适宜生长。
在冰箱内，当其他细菌无法生存或生长繁殖速度减慢时，嗜冷菌却能够快速生长、大量繁殖。
一般来说，食用了被嗜冷菌污染的食物，会导致恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状。
嗜冷菌家族成员——李斯特菌，可引起新生儿、婴儿化脓性脑膜炎、成人败血症、孕妇流产等。
那么，该如何预防嗜冷菌污染食物呢？首先，要经常清理冰箱，保持冰箱内环境整洁，抑制细菌生长、繁殖；其次，要把握好冰箱的使用温度，冷藏室通常应保持在4℃～10℃；另外，食用从冰箱中取出的食物，应将之彻底加热，尤其是剩饭剩菜，需要再回锅煮一下。
一般加热15分钟以上，可以保证去除嗜冷菌，减少腹泻的发生；最后，生、熟食物要注意分开存放，避免交叉污染。
细菌的生长条件
细菌的生长条件细菌是一类微小的单细胞生物，其生长条件直接影响其繁殖和生存能力。
下面将介绍细菌的生长条件，包括温度、湿度、pH值、营养物质和氧气。
一、温度温度是细菌生长的重要因素之一。
根据适宜生长的温度范围，细菌可以分为三类：嗜热菌、嗜冷菌和中温菌。
1. 嗜热菌：适宜生长温度为50℃-80℃。
嗜热菌可以在温泉、海底热泉等高温环境下生存，其酶活性能够在高温下保持稳定。
2. 嗜冷菌：适宜生长温度为0℃-20℃。
嗜冷菌可以在极寒的环境中生存，如南极洲的冰川和北极海洋中。
3. 中温菌：适宜生长温度为20℃-45℃。
中温菌是最常见的细菌类型，可以在人类体温范围内生存繁殖。
二、湿度湿度对细菌的生长也有重要影响。
细菌对湿度的要求可以分为两类：耐干菌和耐湿菌。
1. 耐干菌：适应低湿环境的细菌。
它们可以在干燥的环境中存活，并且能够形成耐干的孢子来保护自身。
2. 耐湿菌：适应高湿环境的细菌。
这类细菌通常生活在水域、土壤或植物表面等湿润环境中。
三、pH值pH值是衡量溶液酸碱性的指标，对细菌的生长也有重要影响。
细菌可以分为酸性菌、碱性菌和中性菌。
1. 酸性菌：适宜生长在pH值低于7的酸性环境中。
这类细菌可以在酸性食品和发酵过程中生长繁殖。
2. 碱性菌：适宜生长在pH值高于7的碱性环境中。
这类细菌可以在碱性土壤和碱性水体中生存。
3. 中性菌：适宜生长在pH值接近中性的环境中。
这类细菌对酸碱度要求不高，可以在人体内生存繁殖。
四、营养物质细菌的生长需要各种营养物质，包括碳源、氮源、矿物质和微量元素等。
1. 碳源：细菌利用碳源进行能量代谢和有机物合成。
常见的碳源包括葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
2. 氮源：细菌需要氮源合成蛋白质和核酸。
常见的氮源包括氨基酸、尿素、硝酸盐等。
3. 矿物质：细菌需要矿物质提供微量元素，如钙、镁、铁等。
4. 微量元素：细菌还需要微量元素作为酶的辅助因子，如锌、铜、锰等。
五、氧气氧气是细菌生长的重要因素之一，对细菌生长的影响可分为以下几类：1. 厌氧菌：不需要氧气进行生长，可以在无氧或微氧条件下生存。
大规模牧场生鲜乳中嗜冷菌的控制策略
大规模牧场生鲜乳中嗜冷菌的控制策略在大规模牧场生产的生鲜乳中，嗜冷菌是一个不容忽视的问题。
嗜冷菌是一类在低温下生长繁殖的菌类，它们在生鲜乳中的存在可能导致乳制品质量下降甚至食品安全问题，因此控制嗜冷菌的生长至关重要。
在本文中，我将从不同的角度探讨大规模牧场生鲜乳中嗜冷菌的控制策略，希望能给您带来一些启发和帮助。
1. 嗜冷菌的特性嗜冷菌是一类耐低温的微生物，它们能在较低的温度下仍然生长和繁殖。
这使得它们在生鲜乳中的存在非常普遍，尤其是在大规模牧场生产中更为突出。
嗜冷菌的存在可能导致生鲜乳变质、产生异味和改变乳品的理化性质。
2. 控制嗜冷菌的物理因素为了控制嗜冷菌在生鲜乳中的生长，可以通过物理因素进行干预。
采取低温存储、快速冷却、超高温巴氏杀菌等方法可以有效地减少嗜冷菌的数量和活性。
加强生产设备和生产环境的清洁消毒也是控制嗜冷菌的重要手段之一。
3. 控制嗜冷菌的化学因素除了物理因素外，化学因素也是控制嗜冷菌的重要手段。
在生鲜乳的生产和储存过程中，可以添加一些抑制嗜冷菌生长的化学物质，如乳酸、酸橙酸和山梨酸等。
这些化学物质可以改变生鲜乳的酸碱度和微生物生长环境，从而抑制嗜冷菌的繁殖。
4. 控制嗜冷菌的生物因素除了物理和化学因素外，生物因素也可以被利用来控制嗜冷菌的生长。
在生鲜乳的生产过程中可以添加一些具有抑菌作用的益生菌，如乳酸菌。
这些益生菌可以与嗜冷菌竞争营养和生存空间，从而减少嗜冷菌在生鲜乳中的数量。
5. 个人观点和总结通过对大规模牧场生鲜乳中嗜冷菌的控制策略进行全面的评估和探讨，我们可以看到，控制嗜冷菌的生长是一个复杂的系统工程。
在生产实践中，我们需要综合运用物理、化学和生物因素来控制嗜冷菌的数量和活性，以确保生鲜乳的质量和食品安全。
在未来的工作中，我们还需要进一步研究和探索新的控制策略，以适应不断变化的生产环境和消费需求。
只有不断创新和提高，才能更好地控制嗜冷菌，保障生鲜乳的质量和安全。
在本文中，我尝试从物理、化学和生物因素分别探讨了控制嗜冷菌的方法，希望能给您带来一些启发和帮助。
嗜冷菌杀灭条件
嗜冷菌杀灭条件嗜冷菌，这听起来就像一群喜欢在寒冷角落里捣鬼的小麻烦。
咱们可不能小瞧它们，要是让它们在合适的环境里肆意生长，那可就麻烦大了。
今天啊，咱们就来唠唠怎么把这些嗜冷菌给杀灭掉。
你知道吗？嗜冷菌就像那些在冰天雪地里还能活蹦乱跳的小妖怪。
它们特别适应低温环境，低温对它们来说就像是温暖的被窝。
可是咱们要把它们消灭，就得给它们来点不一样的“待遇”。
高温是杀灭嗜冷菌的一个好办法。
这就好比把那些习惯了寒冷的小妖怪突然丢进了火焰山。
一般来说啊，如果能把温度升高到60℃以上，持续一段时间，很多嗜冷菌就受不了啦。
这就像我们人啊，突然从舒适的空调房被拉到炎热的沙漠里，肯定受不了。
不过这温度和时间也得掌握好呢。
要是温度不够高或者时间不够长，就像你只是在火上稍微烤了一下小妖怪，它可能只是受了点轻伤，很快就又能恢复活力啦。
还有化学消毒剂，这就像是给嗜冷菌准备的特制毒药。
像含氯的消毒剂就挺厉害的。
你可以把它想象成一群拿着小剑的小战士，冲进嗜冷菌的阵营里，把它们杀得片甲不留。
不过使用化学消毒剂的时候可得小心啊，就像你拿着一把锋利的刀，得知道怎么用才不会伤到自己。
你得按照正确的比例去调配，要是消毒剂太浓了，就像你给那些小战士灌了太多的力量药水，可能会产生一些不好的东西，对咱们周围的环境或者东西造成损害；要是太稀了呢，就像小战士没吃饱饭，没力气，杀不了多少嗜冷菌。
紫外线也是个厉害的家伙。
紫外线对嗜冷菌来说，就像是一道超级激光，能把它们的身体结构都破坏掉。
把有嗜冷菌的东西放在紫外线下照射一段时间，就像把那些小妖怪放在聚光灯下烤，它们可就无处遁形啦。
但是紫外线也不是万能的，有些角落可能照不到，就像有些小妖怪躲在阴影里，躲过了激光的扫射。
在我们的日常生活里啊，就有很多这样的例子。
比如说家里的冰箱，有时候要是长时间不清理，里面就可能滋生嗜冷菌。
这时候你要是想把它们消灭掉，就得把冰箱里的东西都拿出来，用热水擦一擦，再用消毒剂消消毒，最后再让阳光照一照那些能拿出来晒的部件，这就像是给冰箱来了一次大扫除，把那些嗜冷菌的小窝都给端了。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
乳中嗜冷菌数测定
检验依据：NY/T 1331-2007
4 原理：检样在MPC琼脂内，于6.5℃条件下培养10 d，菌落计数，算出每毫升检样中的嗜冷菌数。
5 稀释液和培养基
5.1.2 制法
将酶水解酪蛋白豚和氯化钠溶解于蒸馏水中，用质量分数15%氢氧化钠溶液校正pH至7.0士
0.1。
分装试管和烧瓶，每管9 ML、每瓶90 ML或225 mL，相对误差不超过士2%。
密封后，121℃士it
高压灭菌15 min,
5.2
5.3
磷酸盐缓冲液:按GB/T 4789-28-2003中3.22规定进行制备。
MPC琼脂培养基
5.3.1 成分
胰蛋白陈 5.0 g
酵母浸膏2.59
葡萄糖1.0 g
脱脂奶粉1.0 g
琼脂10 g- 15 g
蒸馏水1000 ML
注1:脱脂奶粉不应含有抗生素类物质。
注2:琼脂用量根据其凝固程度决定。
5.3.2 制法
将 5.3.1 中除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中，用质量分数巧%氢氧化钠溶液校正pH至7.0士
0.1。
加人琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。
必要时使用两层纱布之间夹脱脂棉过滤，分装烧瓶。
密封后，
121℃士I℃高压灭菌巧min。
若立即使用此培养基，在水浴(6.3)中将其冷却到45r-;否则，将灭菌后
的培养基放于暗处温度为OU -5℃之间贮存，时间不超过30 d。
为了避免延误倾注培养基的时间，微
生物检测之前，加热融化培养基。
然后，于水浴(6.3)中冷却到4 51C。
6 设备和材料
微生物实验室常用设备和材料。
生化培养箱:6.5℃士0. 5C。
水浴锅:45℃士It。
无菌培养皿:直径90 mm.
无菌吸管。
7 取样
样品的采取按GB/T 4789. 1执行。
8 检测程序
检样
做成几个适当倍数的稀释液选择三个适宜稀释度各取I ML分别加人无菌培养皿内每皿内加人适量MPC琼脂培养基
6.5℃士0.5℃土10d
菌落计数
9 操作步骤
9.1 检样处理
9.1.飞快速翻转待检样品容器25次，使样品混合均匀，避免形成泡沫。
然后，以无菌操作打开样品包装容器。
9.1.2 用无菌吸管(6.5)吸取1 ML检样于含有9 ML无菌稀释液(5.1或5.2)的试管中(或to ML检
样于含有90 ML无菌稀释液的烧瓶中，或25 mL检样于含有225 ml,无菌稀释液的烧瓶中)，经充分振摇获得10一1均匀稀释液。
9.1.3 另用一支I ML无菌吸管吸取to-,稀释液1 ML，加人到含有9 ML 无菌稀释液的试管中，振摇试管，混合均匀，获得10一2稀释液。
按上述操作方法，做10倍递增稀释。
如此每递增稀释一次，即换用一支1 ML无菌吸管。
9.2 接种及培养
9.2.1 根据对样品中嗜冷菌污染情况的估计，选择三个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ML该稀释液于无菌培养皿(6.4)内，每个稀释度接种两个培养皿。
9.2.2 检查培养基(5.3)的温度不要超过46r-。
然后，立即倾注12 mL- 15 mL培养基到每个培养皿中。
9.2.3 小心地转动培养皿使接种样液和培养基混合均匀，水平放置使混合物凝固。
从第一步稀释液的制备到接种样液和培养基混合所用的时间不得超过15 min,
9.2.4 接种的同时，用I ML稀释液作空白试验。
9.2.5 待琼脂凝固后，堆叠培养皿，倒置在培养箱(6.2)中，于6.5℃士0.5℃培养10 d.培养皿堆叠不
超过6个。
9.3 菌落计数
9.3.1 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，极微小的菌落也应计数在内，需要时用放大镜检查。
9.3.2 蔓延的菌落被认为是单一菌落。
如果被蔓延菌落所覆盖的部分不到平板面积的1/4，计数未受
影响的平板部分的菌落并计算出整个平板的相对量;如果被蔓延菌落所覆盖的部分超过了平板面积的1/4，不应计数。
10 结果计算
10.1 保留含有10个一300个菌落的培养皿。
用公式(1)计算每毫升样品中的嗜冷菌数:
艺。
(ni+0.ln2+O.Oln3)d
(1)
式中:
N—样品中嗜冷菌数，cfu/mL;
)II c—所有保留培养皿中计数菌落的总和;
ni—保留的含有10个一300个菌落的培养皿中第一个稀释度的培养皿数;
n2—保留的含有10个一300个菌落的培养皿中第二个稀释度的培养皿数;
n3—保留的含有10个一300个菌落的培养皿中第三个稀释度的培养皿数;
d—第一个稀释度的稀释因数。
结果保留两位有效数字。
NY/T 1331-2007
示例:
嗜冷菌的菌落数给出如下结果(每个稀释度培养2个培养皿):
—在第一个稀释度下(to一2)含有168个和215个菌落;
—在第二个稀释度下(10-3)含有14个和25个菌落;
—在第三个稀释度下(10一4)少于10个菌落。
艺。
(n,+O.1n2+O.Otn3)d
168+215+ 14+25
(2+0.1 x 2) X 10 -2
一422二19182
U .U LL
修约上述结果，样品中嗜冷菌数报告为19000或1. 9 X 104CfU/ML.
10.2 如果所有稀释度培养皿中菌落数均少于10个，结果报告为“样品中嗜冷菌数小于10 X 11d cfu/
rIILII，式中d为最低稀释液的稀释度。
10.3 如果所有稀释度培养皿中的菌落数均多于300个，从最接近300个菌落的培养皿中计算出一个
估计值乘以相应最高稀释度的倒数。
结果报告为“每毫升样品中嗜冷菌数的估计值”。
11 重复性
在重复性条件下两次独立测试结果的绝对差值，不大于较低结果的30%，以大于较低结果30%的情况不超过5%为前提。
__。