石斛属植物基因组DNA提取方法的对比
石斛的分子生物学鉴定_基于RAPD分析
第26卷第4期 西 南 农 业 大 学 学 报(自然科学版)Vol.26,No.4 2004年8月Journal of Southwest Agricultural U niversity(Nat ural Science)Aug.2004文章编号:1000-2642(2004)04-0437-04石斛的分子生物学鉴定 基于RAPD分析彭 锐,李泉森,李隆云(重庆市中药研究院,重庆 400065)摘要:利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析了15种石斛属药用植物,选用10个有效引物(10bp)扩增出99条DNA片段,用于遗传多样性分析、构建U PGM A聚类图。
分析结果表明:RA PD方法能有效鉴别所试石斛属植物,其多态位点百分率为84.85%,表现出丰富的遗传多样性。
关 键 词:石斛属;RA PD;遗传多样性中图分类号:S567.901 文献标识码:ARAPD-BASED M OLECULAR IDENTIFICAT ION OF DENDROBI UM SPECIESPENG Rui,LI Quan-sen,LI Long-yun(Chongqing Academy of Chinese M ateria M edica,Chongqing400065,China)Abstract:Fifteen species of the g enus Dendr obium were analyzed,using RAPD(random amplified polymorphic DNA)technique.T en decanucleotide pr imers(10bp)w ere selected from70pr imers,and99bands o f amplification w er e obtained,which w ere used for RA PD analysis.Based on the RAPD profile,a dendrog ram of cluster analysis of the species studied was co nstructed according to their similar ity coefficients.It is concluded that RAP D is effective in characterizing Dendrobium species.T he hig h per centage of polymorphic loci (84.85%)in the species indicates that this genus is highly diverse genetically.Key words:Dendr obium;RAP D;genetic diversity中药石斛为贵重中药材,药用研究悠久,中国药典2000年版收载的石斛来源有铁皮石斛(Dendrobi-um off icinale Kimura et Migo C,D.candidum Wasll ex Lindl,Ch.P.)、金钗石斛(Dendr obiunm nobile Lindl)、束花石斛(Dendrobium chrysanthum Wall.ex Lindl)、粉花石斛(Dendrobium loddigesii Rolfe)、流苏石斛(Dendr obium f im br iatum H ook)的新鲜或干燥茎。
美花石斛基因组DNA提取方法的比较
Ａｂ ｔａ ｔ Ｆｖ ￣ ｏ ｓｏ ｇ ｎ ｍｉ ｓｒ ｃ ： ｉｅｍｅ ｄ ｆ ｅ ｏ ｃＤＮＡ ｘ ｒｃｉｎ ｆｏ Ｄｅ ｄ ｏ ｉｍ ｏ ｄｇ ｓｉ ｌ ｒ ｏ ａｅ ． ＤＮＡ ｅ ｔａ ｔ ｍ ｎ ｒ ｂｕ ｔｄ ｉｅ ｉ Ｒｏｆ ｗｅｅｃ ｍｐ ｒｄ ｏ ｒ ｅ ｗａ ｅｅ ｔｄｂ ｌｃｒｐ ｏ ｅｉ， ｓｄ ｔｃｅ ｙｅｅ ｔ ｈ ｒｓｓ ＵＶ ｄＲＡＰ Ｐ ｏ ａ ｎ Ｄ－ ＣＲ． ＤＮＡ ａ ｄ ｈ ｗｅ ａ ｅｍｏ ｉ ｅ ｂ ｎ ｓｓ ｏ ｄｔ ｔ ｄｆ ｄＣＴＡＢ ｎ ａｂ ｍ ｉｅ ｈ ｔ ｈ ｉ ａ ｄｃ ｒ ａ ｄ
太理 想 ， 与 作者 实 验一 致 。因此 本 文 以美 花 石斛 这
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热带亚热带植物学报
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一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法[发明专利]
![一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/32bd5a9c8e9951e79a8927bd.png)
专利名称：一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法专利类型：发明专利
发明人：向红先
申请号：CN201710147466.8
申请日：20170313
公开号：CN106636075A
公开日：
20170510
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法，该方法包括步骤：（1）粉碎铁皮石斛叶片；（2）制备铁皮石斛DNA提取试剂，所述提取试剂的配方为：100mM Tris‑Hcl、15mM EDTA、0.7M Nacl、3%(W/V) CATB、0.4%（W/V）抗坏血酸、0.1~0.3%（V/V）β‑巯基乙醇；上述组分的溶液为水；再加入氯仿和异戊醇混合溶液，其中氯仿与异戊醇的体积比为1:1；所述混合溶液的加入体积占提取试剂总体积的1/2；（3）将步骤（1）所得物加入步骤（2）所得提取试剂中，在0~4℃下静置20~40分钟，离心，然后用乙醇水溶液进行沉淀，即得DNA。
本发明用时非常
少，DNA纯度高。
申请人：成都育芽科技有限公司
地址：610041 四川省成都市高新区天府大道中段1388号1栋8层866号
国籍：CN
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铁皮石斛种质资源研究中的DNA条形码初探
铁皮石斛种质资源研究中的DNA条形码初探姚领爱;胡之璧;郑志仁;周吉燕;王莉莉;化海霞;黎万奎【摘要】为了规范铁皮石斛种质资源及相关产品鉴定,开展条形码基因的初步筛选,通过对铁皮石斛叶绿体相关基因(rbcL、trnH-psbA、rbl16)进行扩增、测序、序列对比、聚类分析发现:rbcL基因可将市场上常易混淆的石斛种苗有效区分,但rbcL基因作为石斛属条形码基因需要扩大范围进一步深入研究.%In order to regulate the identification of Dendrobium officinale germplasm resources and relative products,preliminary screening of the barcoding genes was conducted by amplification,sequencing, sequence alignment and cluster analysis of D. Officinale chloroplast-related genes (rbcL, trnH-psbA ,rbl 16). The result showed that the dendrobium seedlings easy to be confused in the market could effectively be distinguished by the rbcL gene, but further research should be made before the rbcL gene could be used as a barcoding gene of Dendrobium.【期刊名称】《上海农业学报》【年(卷),期】2012(028)001【总页数】6页(P49-54)【关键词】铁皮石斛;DNA条形码;种质资源【作者】姚领爱;胡之璧;郑志仁;周吉燕;王莉莉;化海霞;黎万奎【作者单位】上海中医药大学基础医学院,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海师范大学生命与环境科学学院,上海200234;上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203;上海中医药大学中药研究所,上海201203【正文语种】中文【中图分类】S682.31铁皮石斛（Dendrobium officinale）属兰科附生草本植物，是传统名贵中药，因长期遭无节制采挖，其野生资源已近枯竭，已于1987年被列入《国家重点保护野生药材物种名录》。
石斛属植物基因组DNA提取方法的对比
石斛属植物基因组DNA提取方法的对比郑云柯;胡翔宇;宋希强;王健【摘要】笔者使用6种DNA提取方法提取7种含糖量较高的石斛属植物的DNA,比较不同方法提取DNA的效果,结果表明:改良PEX法和改良CTAB法对含有丰富多糖和多酚类的石斛属植物的DNA提取效果较好.改良PEX法与其他5种方法对比,可以更好地去除多糖类和多酚物质的干扰,能够满足后续的分子生物学实验的要求.改良CTAB法和改良SDS法与CTAB法和SDS法相比,可获得较高的DNA产率,并且可以较好地去除多糖类杂质的干扰.【期刊名称】《热带生物学报》【年(卷),期】2015(006)002【总页数】5页(P168-172)【关键词】石斛;含糖量;DNA提取方法;多酚【作者】郑云柯;胡翔宇;宋希强;王健【作者单位】海南大学园艺园林学院/热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海南海口570228;海南大学园艺园林学院/热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海南海口570228;海南大学园艺园林学院/热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海南海口570228;海南大学园艺园林学院/热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室,海南海口570228【正文语种】中文【中图分类】Q52由于植物代谢产物(尤其是多糖及其他未知次生代谢产物)种类和含量的不同，难以找到一种适合所有植物DNA提取的方法，因此,不同化学组分的植物需要不同的DNA提取方法[1]。
兰科石斛属植物组织富含多糖、多酚及其他代谢产物，这些物质对植物DNA的提取分离是非常不利的[2]。
多酚是一种很强的氧化物质，在空气中极易氧化，并能够不可逆地同DNA结合，生成褐色凝胶状物质；多糖的许多理化性质与DNA很相似，很难将它们分开，因而在去除多糖的同时DNA也被裹携走了，造成DNA产量减少。
在沉淀DNA时，如含有多糖，多糖会和DNA结合在一起产生凝胶状透明沉淀，难溶于TE溶液中，给实验操作带来不便。
美花石斛基因组DNA提取方法的比较
美花石斛基因组DNA提取方法的比较
包英华;白音;谭庆辉;彭凌;阙生全
【期刊名称】《热带亚热带植物学报》
【年(卷),期】2007(015)002
【摘要】采用CTAB法、尿素法、高盐低pH法、SDS法和陈大明法等5种方法提取美花石斛(Dendrobium loddigesii Rolfe)基因组总DNA,通过电泳、紫外光谱分析和RAPD-PCR扩增等检测手段,比较分析了DNA质量.DNA条带显示改良CTAB法和改良尿素法较好.
【总页数】5页(P147-151)
【作者】包英华;白音;谭庆辉;彭凌;阙生全
【作者单位】韶关学院英东生物工程学院,广东,韶关,512005;韶关学院英东生物工程学院,广东,韶关,512005;韶关学院英东生物工程学院,广东,韶关,512005;韶关学院英东生物工程学院,广东,韶关,512005;韶关学院英东生物工程学院,广东,韶
关,512005
【正文语种】中文
【中图分类】Q523
【相关文献】
1.石斛属植物基因组DNA提取方法的对比 [J], 郑云柯;胡翔宇;宋希强;王健
2.美国白蛾基因组DNA提取方法比较及不同引物对COⅠ、COⅡ、Cyt b序列的扩增效果 [J], 陈景芸;陈云芳;詹国辉;高渊;蔡平
3.美花石斛和铁皮石斛试管苗物质含量比较 [J], 曾宇馨; 张悦; 祝天添; 贺雨馨; 孙志蓉
4.铁皮石斛花总RNA提取方法的比较研究 [J], 赵聪慧;俞振明;何春梅;王浩斌;司灿;张明泽;段俊
5.富含多糖的转基因石斛基因组DNA提取方法(英文) [J], 张妙彬;潘丽晶;范干群;陈继敏;程萍
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基于DNA序列的石斛属药用植物鉴定研究进展
基于DNA序列的石斛属药用植物鉴定研究进展周红;马双姣;杨培;姚辉【摘要】本文从核基因组、线粒体基因组和叶绿体基因组三方面，综述了目前常用DNA序列在石斛属药用植物的分子鉴定和物种分类研究中的进展。
文献显示，目前用于石斛属物种分子鉴定研究的DNA序列主要有核ITS/ITS2、LEAFY，叶绿体rbcL、matK、trnH-psbA、rpoB、rpoC1、trnL-F、rbl16、trnl intron和线粒体基因组nad1 intron2，这些DNA序列均对石斛属药用植物鉴定具有借鉴意义。
笔者对叶绿体全基因组序列作为“超级条形码”在石斛属植物中应用的可行性进行了展望，以期为石斛属药用植物的鉴定研究提供参考。
%This paper reviewed the research developments of identification and classification ofDendrobium species based on DNA sequences from nuclear genome, mitochondrial genome and chloroplast genome. The existing documents revealed that DNA sequences used in identification ofDendrobium mainly include ITS/ITS2,LEAFY, chloroplastrbcL, matK, trnH-psbA, rpoB, rpoC1, trnL-F, rbl16, trnl intron, and mtDNA, nad1 intron2. These DNA sequences had the reference meanings in the identification ofDendrobium species. This article discussed the feasibility of complete chloroplast genome as the“super-barcode”, which provided the references for identification of medicinal plants inDendrobium.【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】8页(P950-957)【关键词】石斛属DNA序列;分子鉴定;核基因组;叶绿体基因组;线粒体基因组【作者】周红;马双姣;杨培;姚辉【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193【正文语种】中文石斛属（Dendrobium Sw.）是兰科（Orchidaceae）最大的属之一，该属现有原生种约1 500种，中国原产石斛属植物81种，占世界种群的5%左右，其中40多种为重要的药用植物，是中国传统的名贵中药材[1，2]，在《神农本草经》中将其列为上品，具有益胃生津、明目利嗓、滋阴清热、延缓衰老等功效。
dna分子标记技术在中药石斛类药材鉴定中的应用
dna分子标记技术在中药石斛类药材鉴定中的应用DNA分子标记技术在中药石斛类药材鉴定中1. 引言随着人们对中药饮片质量的不断关注，中药材鉴定技术越来越重要。
而传统的药材鉴定方法通常存在着耗时长、费力、误差大等问题。
近年来，DNA分子标记技术在中药石斛类药材鉴定中的应用开始受到重视。
2. DNA分子标记技术简介DNA分子标记技术是一种基于DNA序列差异的分子鉴定方法。
通过对目标DNA序列进行特异性扩增和分析，可以快速、准确地鉴定物种属别，避免了传统鉴定方法的繁琐过程和主观判断。
3. DNA分子标记技术在中药石斛类药材鉴定中的应用• 3.1 优势–高度准确：DNA序列具有高度特异性，能够准确鉴定物种的属别。
–高效快速：DNA扩增和分析的过程相对简洁，省时省力。
–不受外部环境影响：DNA分子标记技术不受外部环境因素影响，能够在不同生长状况下进行物种鉴定。
–易于标记和保存：DNA分子可以进行标记和保存，方便后续的重复检测。
• 3.2 鉴定方法–PCR扩增：DNA分子标记技术的关键环节，通过选择适当的引物扩增目标DNA序列，得到特定的扩增产物。
–DNA测序：通过对PCR扩增产物进行测序，可以获得目标物种的DNA序列信息。
–序列比对与鉴定：将测得的DNA序列与数据库中已知物种的DNA序列比对，根据比对结果进行物种鉴定。
• 3.3 应用案例–鉴定药材真伪：通过比对药材DNA序列与已知真品的DNA 序列，可以判断药材的真伪。
–鉴定药材品质：通过比对药材DNA序列与不同品质药材的DNA序列，可以判断药材的品质等级。
–溯源追踪：通过比对药材DNA序列与不同产地药材的DNA 序列，可以推断药材的产地。
4. 总结DNA分子标记技术在中药石斛类药材鉴定中具有广阔的应用前景。
它能够从分子层面上准确鉴定药材的真伪、品质和产地信息，有助于提高中药饮片的质量和安全性。
随着技术的不断进步和完善，相信DNA 分子标记技术将在中药材鉴定中发挥更重要的作用。
石斛总DNA提取
Content design, 10 years experience
2、取干燥25-50 mg植物组织材料至2.0 mL 离心管中， 加入灭菌的磁珠在球磨机上粉碎组织； 3、向管内加入900 μL预热（65℃）的CTAB提取缓冲液， 再加入10 μL（1d）β-巯基乙醇和少许PVP(聚乙烯基吡咯 烷酮)，置于65℃水浴保温40-90 min，其间翻动摇2-3次 混匀；
加入700μL氯仿/异戊醇，温和摇动使之充分混匀。室温， 12000 rpm离心10 min； 6、吸取500 μL上清至一干净的1.5 mL Ep管中，加入330 μL异丙醇（约占上清液的2/3体积），-20℃放置30 min； 7、高速冷冻离心机调至4℃，12000 rpm离心10 min，弃上 清；
CTAB提取缓冲液；
DNA提取方法
4、冷却至45℃以下，加等体积的氯仿/异戊醇，温和摇动使
welcome to use these PowerPoint templates, New 之混匀，使成乳状液。室温， 12000 rpm 离心10min ； Content design, 10 years experience 5 、静置分层后，将 700μL 上层清液吸入另一干净的 EP管中，
改进方法
为了得到质量较高的总DNA在选取材料时尽量选 取幼嫩的叶组织。
DNA对剪切力极为敏感，为了得到尽可能大的片 段，在提取过程中药尽量简化操作步骤如减少转
移DNA次数，离心时间等。
提取过程中应温和操作，避免剧烈震荡。用较粗 枪头吸取上清液时注意不要产生气泡。
Thank you!
8、加入500 μL 70%乙醇，12000 rpm离心5 min，弃 上清。重复操作一次； 9、加入500 μL无水乙醇， 12000 rpm离心5 min，弃
SDS法提取石斛基因组DNA的研究
SDS法提取石斛基因组DNA的研究李静;尹俊梅;任羽;杨光穗【期刊名称】《热带农业科学》【年(卷),期】2009(29)12【摘要】以密花石斛(Dendrobium densiflorum Lindley ex Wallich)为研究试材,对植物SDS方法提取基因组DNA中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析.结果表明:不同的SDS缓冲液配制方法提取效果差异较大,Wang'S配方产率及纯度都较高;石斛花苞的DNA提取产率较叶片高,但纯度较叶片低;提取过程中,适宜的水浴时间当为30～40min,过短DNA产率下降,过长会引起DNA的降解,或最后产物中增加其他杂质;氯仿/异戊醇抽提次当为2～3次,对去除DNA中蛋白质、多糖及其它杂质有一定的作用,过多则DNA损失也明显;异丙醇沉淀时间10min时核酸析出量在80%以上,纯度相对较高,继续沉淀的产物中DNA含量及纯度明显变低,同时采取挑取絮状沉淀或再用无水乙醇纯化10min的方法,可减少蛋白质、多糖等其它杂质的影响.【总页数】5页(P22-26)【作者】李静;尹俊梅;任羽;杨光穗【作者单位】海南大学农学院,海南儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室,海南儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室,海南儋州,571737;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室,海南儋州,571737【正文语种】中文【中图分类】Q523【相关文献】1.改良SDS法提取多种植物基因组DNA研究 [J], 单志;吴宏亮;李成磊;陈惠;吴琦2.改良SDS法提取棉花基因组DNA研究 [J], 卢东柏;李晓方;刘志霞3.沉积物中宏基因组DNA快速提取方法:重铬酸钾-SDS法 [J], 李靖宇4.改良SDS法提取石韦基因组DNA的研究 [J], 杜金子;陈丽梅;黄荣韶;黎桦;黄棉5.基于改良SDS法的杏基因组DNA提取 [J], 杨丽;张俊环;孙浩元;王玉柱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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效果 ， 结果表明 ： 改 良Ｐ Ｅ Ｘ法和改 良 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ 法对含 有丰富多糖和多酚类 的石斛属植物 的 Ｄ Ｎ Ａ提取效果 较好。
改 良Ｐ Ｅ Ｘ法 与其 他 ５种 方 法对 比 ， 可 以更 好 地去 除 多 糖类 和多 酚 物质 的干 扰 ， 能 够满 足 后 续 的分 子 生 物 学实 验
石 斛 属 植 物 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ提 取 方 法 的对 比
郑云柯 ， 胡翔宇 ， 宋希强 ， 王 健
（ 海南大学 园艺园林学 院／ 热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室 ， 海南 海 口 ５ ７ ０ ２ ２ ８ ）
摘 要 ：笔者使用 ６种 Ｄ Ｎ Ａ提取方法提取 ７种含糖量较高 的石斛属植物 的 Ｄ Ｎ Ａ， 比较不 同方 法提取 Ｄ Ｎ Ａ的
改 良Ｓ Ｄ Ｓ法 与 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ和 Ｓ Ｄ Ｓ法 相 比 ， 改 良处分别 为 Ｎ ａ Ｃ １ 含 量增 加 至 ２ ． ５ ｍ ｏ ｌ ・ Ｌ～， 一巯 基 乙醇增 加 至
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ５— ０ ４— ０ １
基金项 目：国家农业公益性行业科研专项（ ２ ０ １ ３ ０ ３ １ １ ７ ） ， 国家 自然科学基金 （ ３ １ １ ６ ０ １ ７ ８ ） 和海南省应用技术研发 与 示 范推广专项 （ Ｚ Ｄ Ｘ Ｍ２ ０ １ ４ １ ２ ９ ） 作者简介 ： 郑 云柯 （ １ ９ ９ ０一） ， 男， ２ ０ １ ２ 级海南大学园艺 园林学院硕士研究生 ． Ｅ — ｍ ａ ｉ ｌ ： ３ ０ ９ １ ９ ６ １ ７ ７ ＠ｑ ｑ ． ｃ ｏ ｍ 通信作者 ： 宋希强 （ １ ９ ７ ２一） ， 男， 教授 ， 研究方 向： 生态学． Ｅ — ｍ ａ ｉ ｌ ： ｓ ｏ ｎ ｇ ｓ ｔ ｒ ｏ ｎ ｇ ＠ｈ ａ ｉ ｎ ｕ ． ｅ ｄ ｕ ． ｃ ｎ ①Ｕ ｎ ｔ ｅ ｒ ｇ ａ ｓ ｓ ｅ ｒ Ａ ．“ Ｄ Ｎ Ａ Ｍｉ ｎ ｉ ｐ ｒ ｅ ｐ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｃ Ｔ Ａ Ｂ ” ．Ｕ ｎ ｔ ｅ ｒ ｇ ａ ｓ ｓ ｅ ｒ ｇ Ｌ ａ ｂ ， ２ ０ ０ ８ ．
１ 材料 与 方 法
１ ． １ 材 料的采集及处理 石斛属植物叶片采 白海南省五指山和海南大学园艺 园林学 院基地 ， 每植株采集 ２～ ３
片叶 ， 放人 已编号的封 口袋 中并立 即拿 回实验室进行新鲜叶片含糖量 ２ 叶片含糖量 的检测 采 用蒽酮 比色法检测 叶片 的含糖量 挖 。称 取新鲜 叶片 ０ ． １ ｇ 用于 Ｄ Ｎ Ａ的提取 。 １ ． ３ Ｄ Ｎ Ａ提取 方法 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ法和 Ｓ Ｄ Ｓ法参 考 Ｕ ｎ ｔ ｅ ｒ ｇ ａ ｓ ｓ ｅ ｒ Ａ ①和 Ｄ ｅ ｌ ｌ ａ ｐ ｏ ｒ ｔ ａ Ｓ Ｌ 的方法 ； 改良Ｃ Ｔ Ａ Ｂ法 和
行基 因组 Ｄ Ｎ Ａ提 取 ， 检测提取 Ｄ Ｎ Ａ的产率 、 纯度， 主要 分析 高盐 浓度 的提取 液对 除去 石斛属 植物 多糖 类杂 质 的影 响和提高 一 巯基 乙醇 的含量对 除去石斛属植物 叶片 内的多酚物质 的影响 ； 比较 ６种提取方 法对提取
不 同多糖含量 的 ７种石斛属植物 Ｄ Ｎ Ａ质量 的差别 ， 筛 选出最优 的石斛 属植物 叶片基 因组 Ｄ Ｎ Ａ 的提取 方法 ， 为提取高质量 的石斛属植物基 因组 Ｄ Ｎ Ａ及后续 的分子生物学实验 奠定基础 。
由于植物代谢产 物 （ 尤 其是多糖及其 他未知次生代谢 产物 ） 种 类 和含量 的不 同 ， 难 以找 到一种 适合 所有
植物 Ｄ Ｎ Ａ提取 的方法 ， 因此 ， 不 同化学 组分 的植物需要 不 同的 Ｄ Ｎ Ａ提取方 法 Ｊ 。兰科石 斛属 植物组织 富含 多糖 、 多酚及其他 代谢产物 ， 这些 物质对 植物 Ｄ Ｎ Ａ 的提 取分 离是 非常不 利 的 。多酚 是一种 很 强 的氧化 物
的要求 。改良 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ法和改 良 Ｓ Ｄ Ｓ 法与 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ法和 Ｓ Ｄ Ｓ法相 比， 可获得较高 的 Ｄ Ｎ Ａ产率 ， 并且 可以较好地去
除多糖类杂质的干扰。 关键词 ：石斛； 含糖量 ； Ｄ Ｎ Ａ提取方法 ； 多酚
中 图分 类 号 ：Ｑ ５ ２ 文献 标 志 码 ：Ａ
物基 因组 Ｄ Ｎ Ａ的方法很 多 Ｊ ， 目前石斛 属植物 基 因组 Ｄ Ｎ Ａ的提 取 主要 为在 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ法和 Ｓ Ｄ Ｓ法 的基 础上
改 良的改 良 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ法和改 良 Ｓ Ｄ Ｓ法 ， 操作 中依据研究 内容改 良部分 相应变化 。 。 ， 但 这些研究均 未结合石斛 属植物 的多糖 或其他代谢物质 的含量进行分 析 。笔者 以 ６种 Ｄ Ｎ Ａ提取 方法 对 ７种 兰科 石斛 属植 物 叶片进
质， 在空气 中极 易氧化 ， 并能够不 可逆地 同 Ｄ Ｎ Ａ结合 ， 生成褐 色凝胶状 物质 ； 多糖 的许 多理化性 质 与 Ｄ Ｎ Ａ很 相似 ， 很难将它们 分开 ， 因而在去 除多糖 的 同时 Ｄ Ｎ Ａ也被 裹携走 了， 造成 Ｄ Ｎ Ａ产量 减少 。在 沉淀 Ｄ Ｎ Ａ时， 如含有多糖 ， 多糖 会和 Ｄ Ｎ Ａ结合在一起 产生凝胶状透 明沉 淀 ， 难溶 于 Ｔ Ｅ溶液 中， 给 实验操 作带 来不便 。这 些杂质在含量较 高时 ， 还会抑制 限制性 内切酶 和 Ｄ Ｎ Ａ聚合 酶活性 ， 使得 提取 的 Ｄ Ｎ Ａ无法 用于 Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 、 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 分析 、 Ｐ Ｃ Ｒ和基 因克隆等分子生物学研 究 中 。因此要设 法 除去这 些杂 质或 者尽量 减少 其影 响 。提 取植
第 ６卷 第 ２期
２ ０ １ ５年 ６月
热 带 生 物 学 报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＲＯＰＩ ＣＡ Ｌ ＢＩ ＯＬＯＧＹ
Ｖｏ １ ． ６ Ｎｏ ． ２
Ｊ ｕ ｎ ． ２ Ｏ１ ５
文 章 编号 ： １ ６ ７ ４— ７ ０ ５ ４ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ２— ０ １ ６ ８一 ｏ ５