透射电镜的样品制备技术
透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。
它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。
然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。
下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。
一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。
常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。
2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。
通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。
3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。
二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。
超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。
2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。
离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。
三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。
2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。
通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。
这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。
3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。
树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。
四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。
透射电镜的样品制备技术
平整的废包埋块压在其上,于60 ℃聚合硬化.将 粘有包埋块的玻片置于90 ℃热板上加温10s,取
下包埋块修块,超薄切片及电子染色.
构不清
超薄切片质量好坏指标
• 样品结构保存良好,结构细腻,无丢失. • 切片厚薄均匀,厚度在60-90nm之间.表面无
皱折、刀痕、震颤等缺陷. • 样品反差良好,无染色沉淀. • 支持膜厚度适中,观察时不产生漂移和破裂.
六.电子染色
• 利用重金属盐类选择性地与生物样品中不同 结构成分相结合,来提高结构成分散射电子的 能力,从而增加图像反差的染色,又称为正染
Fig. 4. Colloidal gold nanoparticles 20 nm. 1: anti-TTX Mab labelled colloidal gold nanoparticles showing the protein halo around the labelled nanoparticles, 2: unlabelled colloidal gold nanoparticles.
• 多用于解剖关系比较复杂、质地柔软或对 缺氧比较敏感的组织.以保证器官的血液供 给,避免缺血造成的组织损伤或自溶.
• 操作步骤 在动物麻醉后保持血液供应的条件下,
边解剖边在取材的部位局部滴加固定液,直 至组织达到适当的硬度为宜.
灌流固定法
• 指通过血液循环途径,将固定液灌注 到组织器官内,进行固定后再取材的方法. 常用于对缺氧敏感,死后变化快的组织器 官,如中枢神经系统、心脏、胃肠道、视 网膜和肾脏等.也可用于所取组织的种类 较多以及解剖关系比较复杂、难以渗透 的组织器官.
透射电镜制样流程
透射电镜制样流程透射电镜（Transmission Electron Microscopy，TEM）制样是指通过一系列的化学和物理方法来制取透射电镜所需的样品。
透射电镜是一种高分辨率的显微镜，可以在纳米尺度下观察材料的原子结构和微观形态。
为了获取高质量的TEM图像，制样过程非常关键。
下面将详细介绍透射电镜制样的流程。
1.样品制备：样品可以是纳米颗粒、薄膜、纤维或生物样品等。
首先，准备适宜的基底材料，如碳膜覆盖的铜网格或碳膜覆盖的铜刀片。
样品通常需要制成非常薄的切片，通常在50到100纳米的厚度范围内。
制备方法包括机械切割、电解石蠟切片、离子切割或电离蚀刻等。
2.固定和固化：对于生物样品，需要先进行固定处理，以保持样品的形态和结构。
常用的固定剂包括戊二醛、酸性醛或重金属盐。
然后，固定的样品需要进一步处理以固化，如用过氧化物、树脂或聚合物进行浸渍，以增加样品的稳定性。
3.切割和悬浮：将固化的样品切割成适当的尺寸和形状。
使用超微切割机、离子切割仪或其他切割工具进行切割。
切割后，样品通常会悬浮在水或有机溶液中，以便进一步处理。
4.脱水和对比染色：脱水是将样品从水中逐渐转移到有机溶剂中的过程。
这种处理可以控制样品的体积，以减少对比染色和观察中的伪影。
脱水通常通过渗透固定液逐渐转移，然后通过有机溶剂（如醋酸乙酯、丙酮或丙二醇）进行交换。
5.嵌入：将样品嵌入到透明的聚合物或树脂中。
嵌入过程中，通常采用逐渐增加浓度的树脂混合物，以确保样品得到完全浸透。
然后，将样品与树脂进行硬化，通常在高温下进行。
6.超薄切片：将固化的样品切割成非常薄的切片。
使用超薄切片机和钻磨刀片进行切割。
切割后的切片应尽快收集并转移到透明的铜网格或铜刀片上。
7.超薄切片处理：超薄切片通常需要进行后继处理以增强对比度和解决其他问题。
这可能包括染色、胶层增强或薄膜剥离等方法。
8.观察：将制备好的样品放入透射电镜中进行观察。
在观察前，样品需要在真空中或过氮气中去除气泡和其他杂质。
细菌透射电镜样品制备方法
细菌透射电镜样品制备方法
细菌透射电镜样品制备可参考以下步骤：
1. 将适量无菌水加入生长良好的细菌斜面内，用吸管轻轻拨动菌体制成菌悬液。
2. 用无菌滤纸过滤菌悬液，并调整滤液中的细胞浓度为10^8-10^9个/毫升。
3. 取等量的上述菌悬液与等量的2％的磷钨酸钠水溶液混合，制成混合菌悬液。
4. 用无菌毛细吸管吸取混合菌悬液滴在铜网膜上。
5. 经3-5分钟后，用滤纸吸去余水，待样品干燥后，置低倍光学显微镜下检查，挑选膜完整、菌体分布均匀的铜网。
细菌透射电镜样品制备的方法还有很多，具体步骤可能因细菌的种类和实验需求而有所不同。
透射电镜制样步骤以及注意事项
透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。
制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。
制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。
第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。
例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。
第二步是固定与固化。
对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。
第三步是切片。
将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。
第四步是薄化。
将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。
常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。
第五步是网格制备。
将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。
最后一步是贴膜。
将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。
在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。
2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。
3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。
4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。
5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。
6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。
总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。
合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。
透射电镜样品制备步骤
透射电镜样品制备步骤透射电镜是一种重要的材料表征技术，它利用电子的波动性和微粒性来观察材料的结构和性质。
为了能够使用透射电镜观察样品，首先需要对样品进行制备。
透射电镜样品制备步骤如下：1.选择合适的样品：透射电镜样品可以是固体、液体、薄膜或纳米颗粒等。
根据研究目的和样品性质选择合适的样品。
2.样品预处理：根据样品性质的不同，进行必要的预处理。
例如，对于固体样品，可以选择切割、抛光或电解抛光等方法来得到平滑的表面。
3.样品固定：将样品固定到透射电镜样品架上。
不同的样品有不同的固定方法。
例如，对于固体样品，可以使用导电胶将其固定在样品架上。
4.薄层制备：对于厚度过大的样品，需要将其制备成透明的薄层以便透射电镜观察。
常用的方法有机械研磨、电子束刻蚀或离子束刻蚀等。
5.样品清洁：将样品放入超声波清洗机中进行清洗，以去除可能附着在样品表面的杂质或污染物。
6.特殊处理：如果需要对样品进行特殊处理，例如加热、冷冻处理或受到特定环境气氛的影响等，根据需要进行相应的处理。
7.样品干燥：将样品放入真空或氮气环境中，以确保样品干燥。
避免样品受到水汽的污染。
8.获得薄片：使用切片机将固态样品切割成适当厚度的薄片。
为了获得高质量的薄片，可以选择特殊的切片工具和技术，例如离子束切片或低速钻磨切片。
9.薄片形状整理：使用不同的研磨和抛光方法，将薄片的形状和表面进行调整，以确保样品的平滑度和一致性。
10.网格制备：将薄片粘贴在透射电镜网格上。
网格可以增强样品的稳定性和保护，同时提供用于定位和标识的标记。
11.后续处理：根据研究目的和透射电镜分析的要求，可以对样品进行进一步处理。
例如，可以进行染色、脱膜、溅射或腐蚀等处理。
以上是透射电镜样品制备的一般步骤。
不同样品和研究目的可能会有所不同。
因此，根据具体的研究需求和样品特点，制备过程可以做相应的调整和优化。
透射电镜样品的制备
第二节透射电镜样品的制备一、表面复型和萃取复型技术（一）复型样品成像原理复型样品是一种间接试样，是用中间媒介物（碳、塑料薄膜）把样品表面浮雕复制下来，通过对浮雕的观察间接地得到样品表面组织形貌。
一定能量的入射电子照射到样品上要受到样品内原子核与核外电子的作用，产生弹性散射与非弹性散射。
非晶体复型样品成像主要取决于入射电子与试样中原子相互作用所产生的电子散射。
电子束穿过样品时在样品厚的区域或原子序数大的区域受散射程度大，反之则小。
这就是所谓的质厚衬度效应。
如果在样品下方加一光阑，那么散射角大于光阑孔径角的电子被光阑挡住或吸收，而不能穿过光阑孔参与成像。
散射角小于或等于光阑孔径角的电子就能穿过光阑孔参与成像，因此在荧光屏上就形成了明暗不同的衬度，产生了样品的图像。
图5—10为复型样品成像示意图。
（二）复型样品制备技术1．对金相试样的要求电镜的高分辨本领使它能够显示出金属组织的微细特征。
为使组织微细特征不在制备试样时失真，对图5—10 复型样品成像示意图金相试样的制备要求严格。
否则会造成假像影响对观察结果的分析。
试样要细心磨制，仔细抛光，力求避免产生微小的磨痕及变形层。
浸蚀剂与做金相试样时所用的浸蚀剂相同，浸蚀应浅些，这样可保留组织细节。
如果浸蚀过重就可能引起相界、晶界的过浸蚀，导致失真、脱落，甚至会出现腐蚀坑等假象。
2．AC纸的制作AC纸就是醋酸纤维素薄膜，是用6%醋酸纤维素丙酮溶液制作的塑料薄膜。
为了使AC 纸质地柔软、渗透性强并具有蓝色，在所配制的溶液中再加入2%磷酸三苯脂和几粒甲基酯。
待醋酸纤维素在丙酮中溶解后将其倒在干净、平滑的玻璃板上，倾斜转动玻璃板，使溶液均匀展开。
然后用玻璃钟罩扣上，让钟罩下边与下板间留有一定间隙以便于丙酮挥发。
大约经过24小时后AC纸干透，用小刀片轻划AC纸边缘，小心揭下即可。
3．塑料—碳二级复型塑料—碳二级复型由于其制备过程不损坏金相试样表面，重复性好，供观察的第二级复型—碳膜导电、导热性好，在电子束照射下较为稳定，因而得到广泛的应用。
透射电镜样品制备方法
透射电镜样品制备方法透射电镜（Transmission Electron Microscopy，简称TEM）是一种高分辨率的显微镜，能够观察到原子尺度的物质结构。
在进行透射电镜观察前，样品的制备是至关重要的一步。
本文将介绍透射电镜样品制备的方法，希望能够帮助大家更好地进行样品制备工作。
首先，样品的制备要求样品具有一定的薄度。
因此，在进行透射电镜观察前，通常需要将样品切割成极薄的切片。
对于生物样品，可以采用超薄切片机进行切割；对于金属、陶瓷等样品，可以采用离子蚀刻或机械打磨的方法制备薄片。
在进行切割或打磨时，需要保持样品表面的平整和光洁，以确保透射电镜观察时获得清晰的图像。
其次，样品的制备还需要考虑到样品的固定和染色。
对于生物样品，固定和染色是非常重要的步骤。
固定可以保持样品的形态和结构不变，而染色则可以使样品在透射电镜下更易于观察。
常用的固定剂包括乙醛、戊二醛等，而染色剂则根据需要选择不同的染色方法。
另外，样品的制备还需要考虑到样品的支撑。
在进行透射电镜观察时，样品通常需要支撑在一种载体上，以便于放置在透射电镜的样品台上。
常用的载体包括碳膜、网格和硅片等。
在选择载体时，需要考虑到载体的透明性、机械强度和热稳定性等因素。
最后，样品的制备还需要考虑到真空条件。
透射电镜通常在高真空环境下进行观察，因此样品制备时需要保证样品的干燥和密封。
特别是对于生物样品，需要进行脱水和干燥处理，以避免在真空环境下产生气泡或水蒸汽，影响透射电镜观察效果。
总之，透射电镜样品制备是透射电镜观察工作中至关重要的一步。
在进行样品制备时，需要考虑到样品的薄度、固定和染色、支撑和真空条件等因素，以确保最终获得清晰、准确的透射电镜图像。
希望本文介绍的方法能够对大家进行透射电镜样品制备工作有所帮助。
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常用的包埋剂
具有低黏度、亲和性强和优良的切割性能， 切片透明度高，组织结构保存好，并能耐受 电子束的轰击及在低温下聚合的特点。
• 环氧树脂Epon812(进口) 渗入组织容易，对细胞结构保存好，较 常用。 • 丙烯酸酯（acrylic resin) 618(国产)
Lowcryl K4M：
为低温水溶性包埋剂，较常用。特点是低温下(-35 ℃) 可保持低黏度；在紫外光（波长360nm）下可聚合。聚合后 可在常温下切片；能较好地保持组织结构和抗原性及植物凝 血素结合部位，减少背景非特异性染色，故多用于免疫细胞
• 可使核酸、蛋白质、结缔组织纤维的反差增强。
–0.1％～0.4％柠檬酸铅
• 可使膜结构、脂类的反差增强。
正染色
TEM样品：
①超薄切片厚度要均匀 ②无震颤 ③无刀痕 ④无染色污染 ⑤反差适当
负染技术
• 指利用重金属盐类与结构背景 相结合，增加背景电子散射能 力，使背景呈黑色，样品结构 变亮。
• 操作步骤（以全身灌流固定法为例） 麻醉要进行灌流的动物,将动 物固定于实验台上,打开胸腔暴露 心脏,将针头刺入左心室，剪开右 心耳以引出血液和灌流液。用注射 器或输液器缓慢注入37 ℃、 0.9%NaCl,直至内脏血色消失或流 出液无血色为止,注入4 ℃固定液， 待组织变硬后取材。
体外培养细胞的固定
多聚甲醛(Paraformaldehyde)
• 白色粉末，使用浓度为4％ • 优点 –对组织的浸透力强 –保存抗原性物质，多用于免疫电镜技 术中 • 缺点 –高浓度时可使组织结构流失，多不单 独使用
常用缓冲液
• 用于配制固定液和漂洗
0.2M磷酸盐缓冲液:较常用 0.2M二甲砷酸盐缓冲液:用于电镜细胞化学
五.切片
• 目的：制备厚度小于100nm的切片 • 准备工作: 1.复膜载网
• 支持膜 –formvar膜 –火棉胶膜 –碳膜 用于负染技术 • 支持网 –铜网 常用 –不锈钢网、镍网、铂网（组化用）
2.制刀
3.修块 –目的是去除组织块周围多余的包埋介 质，便于切片。 • 半薄切片: –目的是确定所要观察的准确部位，厚 度为0.5～1μ m，用甲苯胺兰染色显示。
浸泡固定法
是将所取样品直接放入预冷固定液内固定 的方法，适用于大多数组织器官。最常用的 是戊二醛、锇酸双重固定。 操作步骤:
前固定： 2.5%-4%戊二醛
后固定：1%锇酸 漂洗： 蒸馏水 4℃
4℃
1-2h或数月
2-4h 中间换3次 30min） 10min
漂洗：用配固定液的缓冲液 4℃ 4℃
1.5-2h（培养细胞
支持膜的制作
支持膜是一种能支持观察样品的膜，厚度 约20nm。性能良好的支持膜应具备： 1.较高的透明度 2.在电镜下无可见结构
3.与所支持的各种样品不发生化学反应
方华膜、碳膜、火棉胶基底碳膜、硝化纤维素基底碳膜、微筛膜等
支持膜的制作
方华膜（方华的
化学成分是聚乙 烯醇缩甲醛，为 淡黄色粉末）： 准备-附膜-漂膜-
• 浸透
–环氧丙烷 室温 –环氧丙烷:包埋剂 1:1 –包埋剂 室温 20min 室温 3h 40-60min
• 包埋
–将样品放入包埋板或胶囊内 –放好标签 –充填满包埋剂
• 聚合(使包埋剂变硬)
35 ℃ 45 ℃ 55 ℃ 12h 12h 12h
2.原位包埋法
适用于组织块中数量少的特殊结构，如： 运动终板；冷冻切片、半薄切片及单层培养细 胞的某些结构的观察. • 1、组织块：前固定后用振动切片机切成50100μ m的厚片，显微镜下选出含有所需结构的 厚片进行漂洗。经过1%锇酸后固定，乙醇及 丙酮系列脱水，环氧树脂浸透，把厚片铺于载 玻片上，将顶端平整的废包埋块安在切片的特 定部位上，60 ℃聚合后修块，常规切片及染 色。
• 超薄切片:采用超薄切片机
–操作步骤: •包埋块固定 •刀固定 •水槽加水 •切片 •选片 •捞片
切片带弯曲可能原因及解决办法
可能原因 梯形或矩形组织面上下边不平行 刀刃锋利程度不一
解决办法 用双面刀片重新休整组织切面使之平行 更换新玻璃刀
组织面上边或下边与刀刃不平行
重新调整组织与刀刃距离，使之平行
Fig. 4. Colloidal gold nanoparticles (20 nm). 1: anti-TTX Mab labelled colloidal gold nanoparticles (showing the protein halo around the labelled nanoparticles), 2: unlabelled colloidal gold nanoparticles.
锇酸(Osmium tetroxide OsＯ4) • 淡黄色块状结晶，使用浓度1～4％， 使用温度4℃。 • 优点 –对蛋白质和脂类有较好的固定作用 –可避免组织块收缩或膨胀 –可产生明显的反差
锇酸(Osmium tetroxide OsＯ4)
• 缺点 –分子量大，穿透能力差 –对碳水化合物和酶固定效果不好 –固定时间较长易引起组织变脆 –有强烈的刺激味对角膜、鼻粘膜有毒性作用 –光热作用时易发生变化
一.取材
• 从人体、动植物、细胞和微生物的培养物中 选取电镜观察材料的过程。 • 在活体取材时要做到： •快─离体1～2min内放入固定液 •准─取材部位要准，有代表性 •小─1mm×1mm×1mm大小，太小时结构少， 太大时固定不充分结构保存不好 •轻─动作要轻，器械要锋利 •冷─0℃ ～ 4℃ ，器械、容器、固定液 均需预冷
原位固定法
• 多用于解剖关系比较复杂、质地柔软或对 缺氧比较敏感的组织。以保证器官的血液 供给，避免缺血造成的组织损伤或自溶。 • 操作步骤 在动物麻醉后保持血液供应的条件下， 边解剖边在取材的部位局部滴加固定液， 直至组织达到适当的硬度为宜。
灌流固定法
• 指通过血液循环途径，将固定液灌 注到组织器官内，进行固定后再取材的 方法。常用于对缺氧敏感，死后变化快 的组织器官，如中枢神经系统、心脏、 胃肠道、视网膜和肾脏等。也可用于所 取组织的种类较多以及解剖关系比较复 杂、难以渗透的组织器官。 • 包括全身灌流固定法（适用于小动 物）和器官灌流固定法（适用于大动 物）。
二.固定
• 目的
–尽可能保存组织和细胞在生活状态下的结构 –使细胞内的各种成分固定下来，避免在以后 的冲洗和脱水等步骤中溶解和流失 –防止细胞内酶活性造成的细胞自溶 –防止外界微生物侵入繁殖而产生腐败致使细 胞的超微结构遭受破坏
• 方法
–物理方法 •快速冷冻法 •干燥法 –化学方法 •浸泡固定法 •原位固定法 •灌流固定法
• 2 、切片及单层培养细胞（需要在玻片上进 行）： 在光镜下选出所需观察的部位，在玻片反面 用笔做好标记。前固定、漂洗、后固定，脱水 及浸透同常规包埋方法，但各步骤时间可适当 缩短。在玻片有标记处的正面位置滴上包埋剂， 将顶端平整的废包埋块压在其上，于60 ℃聚合 硬化。将粘有包埋块的玻片置于90 ℃热板上加 温10s，取下包埋块修块，超薄切片及电子染色。
染色剂
磷钨酸（PTA） pH 6.7-7
染色步骤
复膜载网－滴样品-滴染1-2min－用滤纸 吸去染液－观察
优点
适用于悬浮液的样品（细菌、病毒、其他 微生物、大分子、分离细胞器） 操作快速、简便 样品用量少 图像结构反差好
小结：（超薄切片） 1.取材:要求部位准确,块小,时间短,低温,器械锋利, 减小机械损伤. 2.固定:戊二醛固定时间可以适当延长,一般不要超过 一周,期间要更换一次固定液,且要保持低温固定,充 分清洗后再进行锇酸固定1-2小时,时间一定不要太长. 3.脱水:锇酸固定后经过充分清洗,进行酒精梯度脱水, 一般50%,70%,80%,95%,无水酒精, 4.样品侵透,包埋.一定要保持干燥,侵透彻底. 5.聚合:由室温到高温梯度升温聚合.如35度,45度,60 度顺序. 6.超薄切片:切片机性能,片厚度,捞片,载网质量都需 要注意. 7.电子染色:过程中一定要避免一切污染.
超薄切片质量好坏指标
• 样品结构保存良好，结构细腻，无丢失。 • 切片厚薄均匀，厚度在60-90nm之间。表面 无皱折、刀痕、震颤等缺陷。 • 样品反差良好，无染色沉淀。 • 支持膜厚度适中，观察时不产生漂移和破裂。
六.电子染色
• 利用重金属盐类选择性地与生物样品中不同 结构成分相结合，来提高结构成分散射电子 的能力，从而增加图像反差的染色，又称为 正染色。 • 常用的染色剂: –0.5％～１％醋酸双氧铀
四.浸透及包埋
• 浸透：目的是使包埋剂逐渐取代脱水剂
渗透到组织细胞中。因包埋剂与脱水剂不 相溶，需用一种既能与脱水剂相溶，又能 与包埋剂相溶的物质进行转换，常用的转 换剂为环氧丙烷。
• 包埋：目的是让包埋剂完全浸透到组织
细胞内部，使组织具有一定的硬度、弹性 和韧性，能够承受切片时的各种压力，以 便制备超薄切片.
生物医学样品的特点：
1、样品多样化，包括组织、细胞、微生物及生 物大分子。 2、含水量多、质地软、脱水时容易皱缩变形。 3、机械程度低，对电子束轰击的耐受力差。 4、多由低原子序数的元素组成，故导电性能差。 5、样品形态对试剂的PH值及温度较敏感
主要步骤
• 取材 • 固定 • 脱水 • 浸透及包埋 • 切片 • 染色
注意事项 （负染） 样品浓度要适中 样品要不含杂质 样品的pH值要与染液pH值一致 掌握滴染时机（样品要未完全干燥时） 负染样品观察时，加速电压要适当,物镜 光阑要小，反差较好，照相要快.
Fig. 1. The labelling results of colloidal gold probe. A: colloidal gold, B: labeled colloidal gold (showing the protein halo around the labeled particles).