氯苯降解菌的筛选及降解条件
降解菌的筛选原理
降解菌的筛选原理
筛选降解菌的基本原理如下:
1. 取样:从可能含有降解菌的环境中取样,如污染场地的土壤、废水等。
2. 富集培养:在包含目标污染物的培养基中首先富集降解该污染物的菌群。
3. 离纯培养:从富集得到的菌群中,进一步分离、纯化培养单个菌株。
4. 降解性测试:在包含污染物的最小培养基上,测试每个菌株的生长和降解能力。
5. 鉴定方法:对具有降解能力的菌株进行微生物学和生理生化鉴定。
6. 去除重复:对筛选得到的菌株进行同源性分析,去除重复的菌株。
7. 优选筛选:比较不同菌株的降解速率、范围等,选择降解能力最强的菌株。
8. 过程优化:优化筛选菌株的培养条件,提高其降解能力。
9. 降解机制研究:探究降解菌的代谢途径及关键酶的作用。
通过上述步骤,可以从环境样本中筛选获得对某种污染物具有良好降解能力的菌
株。
这些菌株可以用于环境修复。
2,4-D高效降解菌的筛选及其降解特性
2,4-D高效降解菌的筛选及其降解特性李志清，凌晓光，庞立飞，宋伟，杨海龙(山东潍坊润丰化工股份有限公司，山东潍坊261000)[摘要]2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)是一类广泛除草剂，但其大量施用导致环境残留已对生态环境造成严重威胁。
从山东某农药厂污水处理站二沉池污泥中筛选出一株高效降解菌，命名为ZQ，能以2,4-D为唯一碳源和能源生长，基于其形态，生化特性及16S rRNA基因序列分析，鉴定为Achromobacter sp.。
优化其降解100mg/L2,4-D条件，结果表明最佳降解条件为：温度35℃，pH=8.0，接种量为2%。
同时，不同初始浓度下2,4-D的降解动力学研究表明ZQ对2,4-D的降解符合一阶动力学模型。
当2,4-D浓度为100mg/L时，降解半衰期大约为10.80h。
菌株ZQ 还可以其他6种常见苯氧羧酸类农药作为唯一碳源生长。
结果证明Achromobacter sp.作为生态修复苯氧羧酸类农药生物强化菌具有潜在的适用性。
[关键词]2,4-D；生物降解；16S rRNA；Achromobacter sp.；降解动力学[中图分类号]TQ[文献标识码]A[文章编号]1007-1865(2021)08-0050-04Isolation,Identification of a2,4-D-degrading Bacterium and its High EffectiveBiodegradation CharacteristicsLi Zhiqing,Ling Xiaoguang,Pang Lifei,Song Wei,Yang Hailong(Shandong Weifang Runfeng Chemical Co.,Ltd.,Weifang261000,China)Abstract:Abstract2,4-dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D)is a systemic and broad-spectrum foliar herbicide.But because of its frequent use,2,4-D has resulted in considerable pollution to water and soil and thus threatened the ecological environment and human health.In this article,a novel gram negative bacterial strain, named ZQ,capable of utilizing2,4-D as the sole source of carbon and energy was isolated from activated sludge taken from activated sludge from secondary sedimentation tank of a pesticide plant in Shandong province through screening test.According to the analysis of morphology,physiological properties and16S rRNA gene sequence,strain ZQ was identified as Achromobacter sp..Effects of various environmental factors e.g.temperature,initial pH and dosage of bacteria on 2,4-D degradation were optimized.Optimal temperature and pH value for2,4-D degradation(initial concentration was100mg/L)were determined as:35℃,pH=8.0, 2%inoculation quantity.Meanwhile,all the degradation processes of2,4-D under various initial2,4-D concentrations by ZQ were followed the first-order reaction model.The half-life of degradation was about10.80h when the concentration of2,4-D was100mg/L.The other six common phenoxycarboxylic acid pesticides could be also utilized as the sole carbon and energy source for the cell growth.The results indicate the bacterium may represent a promising application for2,4-D bioremediation.Keywords:2,4-D；Biodegradation；16S rRNA；Achromobacter sp.；Degradation kinetics正人类活动产生的环境污染是全世界存在的问题。
降解菌的筛选
降解菌的筛选
降解菌的筛选过程包括以下步骤：
1.采集具有代表性的土壤样品。
选择具有代表性的若干采样点，使用铲子或样品采集器采集土壤样品。
注意避免受到污染，避免接触有机物、农药等潜在干扰物。
将采集到的土壤样品倒入干净的塑料袋或容器中，并将多个采样点的样品混合均匀，以获得代表性的复合土壤样品。
对于大面积的稻田，可能需要采集多个复合样品。
2.将采集的土壤样品进行富集培养。
例如，在富集培养基配方中，添加活性污泥，于30℃、150rpm振荡培养，直到颜色变浅后，将菌液转接入新鲜培养基中。
重复这一过程3次-4次，得到能够使溴氨酸脱色的菌群。
3.进行平板分离。
将菌液稀释，分别取0.1mL菌液于平板中，用涂棒涂布均匀。
静置几分钟后，将平板倒置于30℃的培养箱中培养。
4.进行好氧培养。
将无菌操作台的紫外灯打开，灭菌20min后，用接种环从已脱色平板中挑若干单菌分别放入不同三角瓶中，用棉塞封口。
于30℃、150rpm 振荡培养。
苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究
上海师范大学硕士学位论文苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究姓名：何小丽申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：肖明20090501上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究学校专业：微生物学学位申请人：何小丽指导教师：肖明摘要酚类化合物为细胞原浆毒物，属高毒性物质。
这类物质来源广泛，通常污染水源，毒死鱼虾，危害农作物，并严重威胁人类的健康。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数的微生物分解。
从自然界中筛选分离出能够降解特定污染物的高效菌种，有针对性的投加到已有的污水处理系统中的生物强化技术，能够快速提供大量具有特殊作用的微生物，在有毒有害污染物治理中显示出巨大的潜力。
1、本研究从胜利油田河口采油厂的飞雁滩油田土壤样品中分离得到10株能够利用并降解苯酚的菌株P1-P4、P7、P9-P13。
该10株苯酚降解菌能够在以苯酚为唯一碳源和能源的培养基上生长，经16S rDNA分子鉴定和生理生化检测，该10株降酚菌分别被鉴定到属或种。
其中降酚菌株P1、P3和P4这3株菌株分别属于劳尔氏菌属(Ralstonia)、贪噬菌属（Variovorax）和节杆菌属（Arthrobacter）里的种。
其它7株降酚菌株P2、P7、P9-P13都属于假单胞菌属（Pseudomonas）里的种。
这4个属里的细菌在国内外都已被报道有降解苯酚的特性，其中有关假单胞菌降解环境有机物的报道较多。
2、培养液中的苯酚含量通过4-氨基安替比啉分光光度法测定，通过苯酚降解效率的比较，菌株P2降解苯酚的能力较其它9株菌株要强。
于是将菌株P2作为本研究中进一步研究的对象，研究了不同的环境条件下该菌株降解苯酚和菌体生长的情况。
3、通过苯酚羟化酶特异性引物的设计，从菌株P2扩增出苯酚羟化酶大亚基基因，该基因片段编码对苯酚有催化活性的多肽，催化苯酚代谢的第一步反应；表明菌株P2能降解苯酚是由于细胞具有降解苯酚的遗传基础。
氯苯降解国内外研究现状
1.关于催化剂的研究现状TiO2的光催化活性被日本科学家Fujishima和Honda证实。
为了提高TiO2对可见光的吸收能力和光催化能力，对TiO2进行掺杂。
由于Fe元素的多价性，单掺金属Fe原子在锐钛矿TiO2中也有双掺杂的协同效应，但是目前关于Fe单掺杂锐钛矿相TiO2能够产生双掺杂的协同作用的理论和实验研究尚未出现。
一般的TiO2为晶体结构，掺杂方法是在单晶中掺杂金属原子或者无机化合物形成共掺杂化合物。
也可用凝胶法制备Fe-TiO2（Fe掺杂纳米TiO2）。
2.关于Fe-TiO2催化降解氯苯的研究现状2.1关于氯苯降解的研究现状2.1.1物化方法物理方法通常有吸附法、萃取法、蒸馏法和气提法等。
余子瑞等( 2003 年) 研究了在不同温度、PH 等条件下, 活性碳纤维对水氯苯系列的吸附动力学, 发现活性碳纤维对氯苯系列的吸附容量的大小比较是:K 六氯苯>K 二氯苯>K 三氯苯>K 氯苯。
张晓永等( 2000 年) 用固相微萃取装置直接从水中萃取氯苯系化合物, 回收率为85%～102%, 其中HCB 为99%。
贾青竹等( 2001年) 利用超声波发生仪分别以石油醚和丙酮及正己烷和丙酮为溶剂振荡萃取3 种氯代物, 其中六氯苯的回收率分别为78%和76%。
物理法可对污染物起到浓缩富集并部分处理的作用, 常作为一种预处理手段与其他处理方法联合使用。
该方法的主要缺点是易造成二次污染。
化学方法在六氯苯污染治理中的应用十分广泛, 主要有湿式氧化法、超临界水氧化法、光催化氧化法以及声化学氧化法、催化还原脱氯法等。
吕锡武等( 1997 年) 采用乙醚溶解移入法, 配制六氯苯模拟试验水样, 进行UV- microO3 工艺处理水中六氯苯的连续采样测定, 初始浓度为2.3ug·L- 1, 去除率最高可达100%。
周萍等( 2004 年) 通过自组装技术制备了一系列多金属氧酸盐- 有机胺- 分子筛杂化催化剂, 以有机杀虫剂六氯苯为探针分子考察了其光催化活性, 研究表明多金属氧酸盐杂化催化剂的光催化降解能有效地去除污水中的六氯苯。
高中生物 第1章 第1节 微生物的分离和纯培养检测(含解析)中图版高中选修1生物试题
第一节微生物的分离和纯培养一、培养基1．含义由于微生物代谢方式的不同，因而对营养物质的需求也是有差异的。
根据微生物生长繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。
2．平板培养基将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。
二、无菌技术1．目的和要求在微生物的分离和纯培养中，一定不能有外来的污染性杂菌，所以必须采用无菌技术进行操作。
因此，在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所要进行消毒。
2．灭菌和消毒(1)灭菌：用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物，常用的方法是高温灭菌法。
(2)消毒：用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞，常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。
三、接种技术1．含义把相应的研究对象移入培养基中的过程。
2．分类在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。
预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物的概念及特点 1．概念微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。
2．特点微生物⎩⎨⎧小个体微小⎩⎪⎨⎪⎧ μm 微米级：光学显微镜下可见细胞nm 纳米级：电子显微镜下可见细胞器、病毒微生物⎩⎪⎪⎨⎪⎪⎧ 简构造简单⎩⎪⎨⎪⎧单细胞简单多细胞非细胞即“分子生物”低进化地位低⎩⎪⎨⎪⎧原核类：细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、蓝细菌真核类：真菌酵母菌、霉菌、原生生物非细胞类：病毒、类病毒、朊病毒二、微生物的营养及功能微生物的化学组成成分与其他生物大体相同，也是由C 、H 、O 、N 、P 、S 等元素组成，其中C 、H 、O 、N 占细胞干重的90%以上，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物和有机化合物。
这些化合物可归纳成碳源、氮源、生长因子、无机盐和水这五大类营养要素。
营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO 2、NaHCO 3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物①微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。
高效苯酚降解菌的筛选及其特性的研究
鉴定该菌为球 菌， 兰氏染色阴性 。 实验结果表 明 ： 革 降解苯 酚的最佳条件为 ： 温度 ３ 、 Ｈ值 ７ ８ 葡 萄糖 浓度 １５０ｍｇ 、 ０ｏ ｐ Ｃ ～， ０ ／ 接 Ｌ
种 量 ｌ％、 液 量 ５ Ｌ Ｏ 装 ０ｍ 。 关键词 ： 酚 ； 化 ； 苯 驯 筛选 ； 响 因素 影
文章 编 号 ：６ ４ １２ （０ ０ ０ — ０ ５ ０ １ ７— ０ １ ２ １ ）９ ０４ — ３
长所 需 的各种 营 养物 质 。实 际工 业含 酚废 水 中可 能 苯 酚是 一种 重要 的有 机化 工 原料 ，是 丙烯 的重
要 衍 生物 之 一 ， 要用 于 生 产 酚醛 树 脂 、 主 己内酰 胺 、 双 酚 Ａ、 己二 酸苯胺 以及 水杨 酸 等 …， 成 为这 些 工 并
ｄｏ ｅ１ ％ ，ｉ ｉ ｏ ｕ ｅ５ ｍ Ｌ ｓ ０ ｌｑｕ ｄｖ ｌ ｍ ０ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｈｅ ｏ ； ｃ ｌｍａｔ ａｉ ｎ ｓ ｒ ｅ ｎｇ ｆ ｃｏ ｓ ｐ ｎ ｌａ ｃ ｉ ｉ ｔｏ ； ｃ ｅ ｎｉ ； ａ ｔｒ ｚ
中 图分 类 号 Ａ
Ｋ２ ＨＰＯ４０． Ｌ， Ｓ ５ Ｍｇ Ｏ４‘ ７Ｈ２ ０． ／ Ｃａ ２０． ／ ０ ２ ｇ Ｌ， Ｃ１ １ ｇ Ｌ，
业废 水 中 的主要 污染 物 。 中国等 许多 国家 已将 其列
入重点污染物的名单之中［。 ２ 近年来 ， １ 国内外许多学 者在生物降解苯酚方面进行了广泛的研究 ，已筛选 出多种 降 酚微 生物 菌株 ， 如假 单 胞 菌 （ｓｕｏ ｏａ— Ｐｅｄｍ ｎｓ ｓ． 、 ｐ ） 真养 产碱菌 （ ａｉｅｅ ｕｒ ｈ ｓ …、 Ａｌ ｌ ｎ ｓ ｔ ｐ ｕ ） 醋酸 钙 ｃ ｇ ｅ ｏ
高效苯 酚降解菌 的筛选及其特性 的研究
实验三 高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定
实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定一、实验目的1、掌握微生物分离纯化的基本操作；2、掌握用选择性培养基从环境中分离苯酚降解菌的原理和方法；3、掌握微生物对酚降解能力的测定方法；4、掌握4-氨基安替比林法测定苯酚含量的方法。
二、实验原理在工业废水的生物处理中，对污染成分单一的有毒废水，可以选育特定的高效菌株进行处理。
这些高效菌株以有机污染物作为其生长所需的能源、碳源或氮源，从而使有机污染物得以降解，具有处理效率高、耐受毒性强等优点。
苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会造成严重的环境污染，对人体、动物有较高毒性。
本实验通过筛选苯酚降解菌来处理含酚废水，将苯酚降解为为二氧化碳和水，消除对环境的污染。
+ COOHCH2CH2COOH CH3COOHCO2+H2O从环境中采样后，在以苯酚为唯一碳源的培养基中，经富集培养、分离纯化、降解实验和性能测定，可筛选出高效酚降解菌。
三、实验器材与试剂1、样品实验土样采自校园污水处理厂。
2、器材恒温培养箱、恒温摇床、分光光度计、比色皿、试管、250mL三角瓶、100mL 容量瓶、培养皿、涂布玻棒、量筒、天平、灭菌锅、酒精灯、接种环、棉花、棉线、牛皮纸、pH试纸。
3、试剂葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、苯酚、四硼酸钠（Na2B4O7）、4-氨基安替比林、过硫酸铵（（NH4）2S2O8）、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、琼脂。
苯酚标准溶液：称取分析纯苯酚1.0g，溶于蒸馏水中，稀释至1000mL，摇匀。
此溶液溶度为1000mg/L。
测定标准曲线时将苯酚浓度稀释至100mg/L。
Na2B4O7饱和溶液：称取Na2B4O740g，溶于1L蒸馏水中，冷却后使用，此溶液的pH值为10.1。
3% 4-氨基安替比林溶液：称取分析纯4-氨基安替比林3g，溶于蒸馏水中，并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。
2% （NH4）2S2O8溶液：称取分析出（NH4）2S2O8 2g，溶于蒸馏水中，并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。