厦门大学-实验六.小鼠精子畸形试验(讲义)
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。
实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。
经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。
首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。
这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。
其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。
而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。
这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。
此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。
结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。
这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。
综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。
这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。
在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。
希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。
厦门大学-HCY-染色体畸变-小鼠骨髓细胞染色体畸变讲义
染色体皱缩 形态明显
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小鼠染色体数目、核型
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端着丝粒染色体
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实验目的及意义
目的：
掌握动物骨髓细胞染色体标本制作方法 了解动物体内染毒及染色体畸变常见类型
意义：
检测受试物导致动物染色体畸变的能力和 畸变类型
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实验动物选择与处理
1.动物 一般选用成年大鼠或小鼠，每组6-10只，最好雌雄各半；
本试验：PBS
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1.移液器吸取5mlPBS置于 离 心管中 2. 注射器反复吸取PBS冲洗 3. 第二只股骨用同一PBS
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滴片
自-20冰箱60%乙醇溶液中，取出玻 片
25-40cm高度滴片，玻片倾斜30° 每个标本制备2-3张片 染 滴自做染色，取然好色立吉晾（标即姆干同记取萨（微B染液可 核液，以 试A顺液验借序，）助滴滴吹加加风1载机6滴玻），片吸1 耳 水阅观背球片察面吹：记冲匀一录洗AB只畸载液小变玻，鼠种片静找类，置到，晾102计干m00算in分—畸裂—变相自率，来
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实验流程总图
收获细胞：处死，取股骨， 4ml PBS 冲 洗 ， 1500r/min×10min，弃 上清，轻轻倒置沥干
2-4h前腹腔注射秋水仙素
24h前腹腔注射受试物
24.5h称重、分组
阅片：低倍镜 找良好视野， 换油镜观察
重要
KCl需要 提前预热
低渗：轻柔打散，加入0.070mol/L KCl 6ml，37℃低渗30-35min，第 10min，以枪头吹气泡的方式再次混 匀细胞悬液，加2ml固定液， 1000r/min×10min，弃上清，余 0.2ml液体
配枪头一盒
100ml量筒
1支/组，配固定液
1ml注射器
实验一小鼠精子畸形试验(共13张精选PPT)
实验目的
通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形 实验的原理和步骤
实验原理
精子畸形是指精子形状改变和畸形精子 器材：眼科剪、眼科镊、玻璃平皿、显微镜、擦镜纸、吸管
精子畸形百分率 分别记录各种类型畸形的精子，进行精子畸形类型构成比分析，并计算每组动物精子畸形百分率。 精子畸形是指精子形状改变和畸形精子数量增多。
酰胺（ 50mg/kg ）
实验操作步骤
一、动物分组及处理
动物选择 分组及处理：
， 阳性对照组：8只雄鼠 环磷酰胺腹腔注射三次
空白对照组：16只雄鼠，不做任何处理
实验操作步骤
二、制片
实验操作步骤
三、片
低倍镜 找到背景清晰、精子重叠较少的 部位高倍镜 按顺序检查精子的形态。
每只动物检查完整的精子1000个。
实验结果分析与评价
精子畸形 主要表现在头部，畸形的类型 阳性对照组：8只雄鼠，环磷酰胺腹腔注射三次 可分为无钩、香蕉形、无定形、胖头、 空白对照组：16只雄鼠，不做任何处理
精子畸形 主要表现在头部，畸形的类型可分为无钩、香蕉形、无定形、胖头、双头以及双尾等。 通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形实验的原理和步骤
双头以及双尾等。 实验动物：雄性小鼠 （6-8周）24只
空白对照组：16只雄鼠，不做任何处理 试剂：生理盐水、甲醇（分析纯）、 2%伊红水溶液环磷酰胺（ 50mg/kg ）
精子畸形百分率 分别记录各种类型畸形 阳性对照组：8只雄鼠，环磷酰胺腹腔注射三次
器材：眼科剪、眼科镊、玻璃平皿、显微镜、擦镜纸、吸管 精子畸形百分率 分别记录各种类型畸形的精子，进行精子畸形类型构成比分析，并计算每组动物精子畸形百分率。
精子畸形是指精子形状改变和畸形精子数量增多。 阳性对照组：8只雄鼠，环磷酰胺腹腔注射三次
小鼠精子畸形实验
操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔，取
出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中，用眼 科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 涂片：取１小滴滤液涂片 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直接涂片镜 检） 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜，在 较暗的视野下观察）
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水
溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小 鼠 2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低 三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物 死亡，然后以1/5或1/10递减为中、低剂量 组。 阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹腔注 射，连续５天，每天一次。
小鼠精子畸形实验 Sperm Abnormality Test in Mouse
பைடு நூலகம்的
观察精子在生成过程中形态的改变来 检 查受试物对雄性生殖细胞的致突变作 用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制，
当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。某些特 殊的染色体重排，如性-常染色体易位是 精子产生畸形的主要机理。但是，缺血、 变态反应、感染和体温升高也可能导致精 子的畸形。
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣
后再推片效果更好，注意推片的质量； 处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感， 因此在染毒后3～5周时精子畸形率最高，必要时 可作动态观察有助于全面评价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的镜子损伤。
小鼠精子畸形实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。
2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。
3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。
三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。
2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。
3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。
4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。
5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。
6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。
7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。
8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。
9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。
11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。
12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。
四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。
2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。
3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。
4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。
5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。
五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。
2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验
歧特生冲剂的小鼠精子畸形试验摘要：目的：对三株牌歧特生冲剂进行小鼠精子畸形试验，以测定其是否具有遗传毒性。
方法：参照《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的试验方法。
结果：其一，样品剂量组与隐性对照组相比，无统计学意义，判为阴性；其二，样品剂量组与阴性对照组相比，精子畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义，并有剂量反应关系，判为阳性；其三，样品剂量组与阴性对照组相比，有统计学意义，但无剂量反应关系，重复试验，结果能重复者判为阳性，否则为阴性。
结论：本试验条件下，受试样品剂量组的精子畸形率与阴性对照组（Veh）比较无显著性差异（P>0.05），无剂量反应关系，表明三株牌歧特生冲剂对小鼠精子的精子畸形率未产生明显影响。
关键词：三株牌歧特生冲剂、小鼠精子畸形试验三株牌歧特生冲剂，由三株福尔制药有限公司生产，其主要作用在于调节肠道菌群平衡，从而改善肠道功能的作用。
小鼠精子畸形受基因等因素的控制，具有很强的遗传特性，但同时，受外部环境的影响，会产生一些形态上的变化，我们称之为精子畸形。
小鼠精子畸形试验可检测外部因子对精子的生成和发育的影响，是遗传毒理学评价的主要指标之一[1]。
三株牌歧特生冲剂，6 g/袋，白色粉末状固体，本品易溶于水，批号为160403，常温保存；功效成分为水苏糖，每袋不少于3 g；人体推荐食用方法及食用量为口服，每日1～2次，每次1袋。
溶媒为灭菌蒸馏水。
1实验动物及饲养环境小鼠，品系：KM，雄性，体重30~35 g，25只，来源：北京维通利华实验动物技术有限公司，经检疫观察4 d后使用。
饲养环境：屏障系统，5只/笼（同性别、同剂量组），喂食SPF鼠料，自由饮水。
温度24.7～26.0 ℃，相对湿度50～60 %，人工光照，明暗12 h/天。
SPF大小鼠生长维持饲料，来源：北京华阜康生物科技股份有限公司。
实验动物饮用水为中心提供纯化水，高压蒸汽灭菌。
饲养笼种类：PP聚丙烯鼠盒，底铺高压蒸汽灭菌的玉米芯垫料。
试验六1、小鼠采精方法的研究
实验六、小鼠采精方法中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVEMEDICINE2005年4月第15卷第2期April, 2005 Vol.15 No。
2郑新民,李聚学，魏雁，乔宪凤,周荆荣（湖北省农科院生物技术研究所，武汉430072小鼠是世界上研究最为详尽的哺乳类动物［1］.但是目前人们仍然是通过手术法从小鼠附睾中获取精子，国内外尚无小鼠非手术法采精的报道.手术法采精为众多的科学研究带来了不便：（1)手术法采精必须将雄鼠处死，分离其附睾和输精管来获取精子,过程繁琐，费时费工,且造成不必要的经济浪费［2]。
另外，从附睾中获取的精子由于缺少副性腺中的诸多有益成分，精子品质难以保证[3];（2）不利于小鼠生殖生理的研究,在医学上,人们都是通过“杀鸡取卵”式地宰杀大量的雄鼠来获取精子进行科研分析[4-6],不但造成了很大的经济浪费，而且增加了实验的误差和难度;(3)不利于某些动物模型的建立,例如，由于小鼠精子获取繁琐，人工授精技术不易建立，精子载体转基因技术尚无理想的动物模型,这极不利于该项研究的开展［7］。
由此可见,建立一种方便快速的小鼠非手术法采精技术对解决小鼠手术法采精中存在的问题、小鼠生殖生理的研究和建立某些小鼠动物模型都是很有意义的。
1 材料和方法1。
1 实验动物SPF级昆明小白鼠雄鼠,购自湖北省预防医学科学院。
合格证号为：SYXK(鄂）20035853。
1.2 小鼠假阴道抽吸器的制备小鼠假阴道的制作：取一段长约2 cm,内径8 mm的软质透明塑料管,在其内侧套上一层厚度约0.1 mm的胶膜,胶膜要求透明且有良好的弹性。
在塑料管中部钻一直径为2 mm的小孔,将一外径与小孔相当的硬质插管插入小孔中，深度与塑料管管壁厚度相当,小孔周围用强力胶水密封,向小管中轻轻吹入空气即可将塑料管内侧胶膜充起。
将制好的小鼠假阴道与胶头吸管相连,小鼠假阴道抽吸器即制作完毕。
1.3 电刺激采精仪的制备电刺激采精仪由电刺激发生器和直肠探子两部分组成。
实验四小鼠精子畸形试验演示文稿
第1页，共15页。
优选实验四小鼠精子畸形试验
第2页，共15页。
1. 实验目的
1.
精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏 哺乳动物精子正常形态的实验方法。通过实验， 学习和掌，共15页。
2. 实验原理
精子畸形是指精子的形状异常和异常精子数
2．在镜检时要注意鉴别制片过程中人为造成的精子 损伤。特别要注意由于精子重叠和交叉所造成的如多 头、双头、双尾及多尾畸形等假象。
3．在结果判定时，要注意排除机体某些如缺血、变态 反应、感染和体温增高等可能导致精子畸形率增高的因 素，以免造成假阳性结果。
第15页，共15页。
第5页，共15页。
2. 实验原理
精子畸形，Y-性连锁基因控制畸形精子的表现。
某些特异的染色体重排，如性、常染色体易位， 是化学毒物诱发哺乳动物畸形率增高的主要机制 。
由于精子畸形有可能影响生殖。因此，当受检
物引起精子畸形率增高，即使不一定是化合物 诱发生殖细胞突变的结果，但也表明受试物 直接或间接损害精子，从而可能影响生殖。
为敏感，故一般采用雄性小鼠，年龄宜在6～8周。
2.剂量与分组试验至少应设3个以上剂量组，并同时设 立阳性对照组和阴性对照组。接触化学毒物后每组至 少应存活5只动物。最高剂量组5d总剂量应能使部分动
物死亡。
一般可采用LD50的2～4倍剂量，或预先给予化学毒 物的LD50，以求得最高总剂量，然后以它的1/2（或 1/5、1/10）作为下一剂量组的接触剂量，依此类 推。
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量组 的精子畸形率与阴性对照组之间的差异分析采用秩和检
验。
由于不同品系小鼠的精子畸形率本底值差异较大，且 影响的因素也较多，故在结果分析时，应首先观察阳性 和阴性对照组的试验结果。阳性对照组精子畸形率的增高 应在本实验室的历史记录范围之内，并与阴性对照组有显
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轻冲洗，晾干。
标本制备
颈椎脱臼处死小鼠
取双侧附睾， 纵向剪开被膜
+ NS 1ml，静置5min 轻摇，剔除大的组织, 收集悬液于1.5ml EP 管，加300 µl NS清洗
1000 rpm离心5 min 弃上清, 余0.15 ml液体
将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行 比较。 阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组 的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应 关系者。
一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%
结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量组的精子畸 形率与阴性对照组之间的差异分析采用秩和检验。
精子畸形发生率和畸形类型分析
试验报告
(1)受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； (2)动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号
和动物级别）； (3)实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度
、实验动物室合格证号； (4)剂量分组，染毒途径和方式； (5)试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； (6)结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率
有条件时，可于给受试物后第1、4和10周处死动物，检查 精子形态 (各种致突变物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种 致突变物后不同时间出现精子畸形)
动物染毒情况记录
操作步骤
标本制备
制片：用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分 离两侧附睾，放入盛有1 mL 生理盐水(37℃预热)的平皿中 。用眼科剪剖开附睾组织，室温下静置5 min ，轻轻摇动 ，用镊子将大的组织块挑出；收集悬液于1.5 mL 离心管 中；另取300 µL生理盐水冲洗平皿，收集于同一离心管中 ；1000 rpm离心5 min；弃上清，余约0.15 mL液体，吹打 混匀，常规涂片；
精子畸形的类型
精子 畸 形 ，主要表现在头部，其次为尾部。 可分为：无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、
双尾等。
操作步骤
阅片注意事项
无尾精子、头部重叠的或整个与另一个重叠的精子均不计 数。
判断双头、双尾精子时，要注意与两条精子的部分重叠相 区别。
数据处理和结果判断
每只动物应按精子畸形类型分别记录，以便计算各实验组 的精子畸形发生率和精子畸形类型的构成比。 利用 Wilcoxon秩和检验法和其他适当的统计学方法。
可检测环境Leabharlann 子对精子生成、发育的影响，而且对已知的 生殖细胞致突变物有高度敏感性，故本试验可用作检测环 境因子在体内对生殖细胞的致突变作用。
化学毒物 → 精子畸形率 → 生殖毒性、生殖细胞潜在致突变性
实验动物
成年雄性小鼠，6～8周龄、体重 25 g~35 g
剂量及分组
受试物设三个剂量组： 最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和/或个别 动物出现死亡的剂量，一般取1/2 LD50 低剂量组应不表现出毒性，分别取1/4和1/8 LD50作为中、 低剂量
▪ 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果。
结果分析
出现可重复的剂量反应关系时，可判断试验结果为阳性。 但要判定某一化学毒物为精子畸形诱变剂，至少应该有两 个相邻剂量组的精子畸形率比阴性对照组显著增高 （P<0.01）；或达到阴性对照组的2倍或2倍以上，并且试 验结果能够重复。如果试验组的染毒剂量已使动物发生死 亡，而精子畸形仍未见增加，则可判定试验结果为阴性。 在受试化学毒物的毒性作用较低而不至于引起动物死亡时， 应当记录最大的染毒剂量。
混匀 涂片
阅片 1%伊红染色1 hr 甲醇固定10 min
操作步骤
阅片
在 低 倍 镜下找到背景清晰、精子重叠较少的部位，用高 倍镜顺序检查精子形态，计数结构完整精子。
精子有头无尾(轮廓不清)或头部与其他精子或碎片重叠， 或明显是人为剪碎者，均不计算，每只动物至少检查1000 个精子。
操作步骤
同时设 阴性对照组(溶剂对照) 阳性对照组(环磷酰胺、丝裂霉素C，等)
每组至少有5只存活动物。
操作步骤
实验动物的处理
经口灌胃染毒，连续５天，每天一次。 (环磷酰胺120 mg/kg，蒸馏水，按体重的2%给予)
首次给受试物后的第35天处死 (大部分化学致突变物对精原细胞后期或初级精母细胞早期 的生殖细胞较敏感)
和精子畸形类型分析的结果(表1和表2）； (7)结论。
注意事项
▪ 辨别小鼠附睾； ▪ 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣后再推
片效果更好，注意推片的质量；
▪ 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的精子损伤。 ▪ 处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感，因此在
染毒后3～5周时精子畸形率最高，必要时可作动态观察 有助于全面评价；
小鼠精子畸形试验
(Mice sperm abnormality test)
实验目的
精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏哺乳动物 精子正常形态的实验方法。
通过实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验的原理和步 骤。
实验原理
精子畸形主要指精子形态的异常改变，是决定精子形成的 基因发生突变的结果。→ 形态改变提示有关基因及其蛋白 质产物的改变。