利用网络药理学方法研究热毒宁注射液抗流感病毒的分子作用机制
热毒宁注射液的药理作用、临床应用及不良反应
热毒宁注射液的药理作用、临床应用及不良反应摘要】目的分别总结热毒宁注射液的药理作用、临床应用及不良反应。
方法随机抽取我院2015年4月至2016年4月接收的使用热毒宁注射液患者120例作为实验对象，观察及分析热毒宁注射液的药理作用、临床应用和不良反应。
结果通过观察对比，治疗有效率为118例(98.33%)，不良反应为4例(3.33%)，不良反应较低(P<0.05)，且为轻微不良反应。
结论对热毒宁注射液在临床应用中具有较高的疗效，且不良反应较小、轻微，其用药安全性可靠。
【关键词】热毒宁注射液；药理作用；临床应用；不良反应Abstract: Objective to summarize the pharmacological action, clinical application and adverse reactions of Reduning injection. Methods 120 patients received Reduning injection from April 2015 to April 2016 in our hospital were randomly selected as experimental objects, and the pharmacological effects, clinical application and adverse reactions of Reduning injection were observed and analyzed. Results the effective rate was 118 cases ( 98.33 % ), the adverse reactions were 4 cases ( 3.33 % ), the adverse reactions were low ( p < 0.05 ), and the adverse reactions were mild. Conclusion Reduning injection has a high curative effect in clinical application, and the adverse reactions are small and mild, and its medication safety is reliable.Key words：Reduning injection; Pharmacological action; Clinical application; Adverse reaction 热毒宁注射液属于国家二类新药中药合剂注射液，主要成份有青蒿、金银花、栀子，具有清热解毒、疏风解表、祛邪化痰之功效[1]，用于治疗上呼吸道感染、感冒、肺热、肺炎等流感性疾病。
热毒宁注射液的国内专利分析
热毒宁注射液的国内专利分析热毒宁注射液是一种用于治疗感染性疾病的抗生素药物，广泛用于临床治疗各种肺部感染、泌尿系统感染、皮肤软组织感染和外伤感染等疾病。
随着中国医药产业的发展，热毒宁注射液在国内市场上的需求量逐渐增加，因此该药物的生产商不断对其进行研发和改进，以满足市场需求。
在这一过程中，专利的认证和保护起着至关重要的作用，可以保障药物的生产商在市场上的竞争优势，促进医药产业的健康发展。
目前，热毒宁注射液在国内市场上已获得多项专利保护，这些专利不仅涵盖了热毒宁注射液的制备方法和配方，还涉及到其在临床治疗中的应用。
本文将对国内专利保护下的热毒宁注射液进行分析，并就其专利保护对于医药产业发展的意义进行探讨。
一、国内专利保护情况截至目前，热毒宁注射液在国内已获得多项发明专利和实用新型专利保护，涵盖了其在制备、配方和应用等方面的技术。
这些专利的取得不仅证明了热毒宁注射液在技术上的创新性和先进性，也为其生产商在市场上获得了一定的竞争优势。
就热毒宁注射液的制备方法而言，相关的发明专利主要涉及到其生产过程中的关键技术和工艺。
这些专利内容涵盖了热毒宁注射液的提取、纯化、制备工艺等方面的创新技术，保护了热毒宁注射液的生产工艺，防止了其他厂家通过仿制来侵权，保护了生产商的利益。
热毒宁注射液在临床应用方面也获得了相应的专利保护。
这些专利内容涵盖了热毒宁注射液在治疗特定疾病、临床应用方法、疗效评价等方面的技术创新，确保了热毒宁注射液在临床应用中的安全性和有效性。
二、专利保护对医药产业的意义专利保护对于医药产业的发展有着重要的意义。
专利保护可以鼓励医药企业在技术创新上进行更多的投入。
随着专利技术的保护，企业可以更加放心地进行长期的研发投入，因为他们知道，一旦技术取得突破，就能够在一定时期内独享市场，获得丰厚利润。
这种创新动力可以推动医药技术的不断进步，促进整个医药产业的发展。
专利保护可以提升医药企业在国际市场的竞争力。
在全球化的背景下，拥有核心专利技术的医药企业可以更好地抵御来自国际竞争对手的挑战，扩大自己在国际市场上的份额。
热毒宁注射液药理作用、临床应用及不良反应分析
热毒宁注射液药理作用、临床应用及不良反应分析作者：李祥岭房增龙段成伟郭延锋来源：《中国社区医师》2017年第27期摘要目的：探讨热毒宁注射液药理作用、临床应用及不良反应发生情况。
方法：收治以热毒宁注射液治疗的患者60例，回顾性分析其临床资料。
结果：急性上呼吸道感染、病毒性肺炎及轮状病毒性肠炎患者治疗有效率分别为93.9%、93.3%及91.7%，出现过敏1例，血尿1侧，皮肤和附件损害2例，不良反应发生率6.7%。
结论：热毒宁注射液具有较高的治疗总有效率，不良反应发生率低。
关键词热毒宁注射液；药理作用；临床应用；不良反应热毒宁注射液是临床常用的中药制剂，在治疗上呼吸道感染方面作用明显，该药在治疗上呼吸道感染导致的痰黄、咳嗽、头身痛、微恶风寒及高热等临床症状方面，作用尤其明显。
栀子、金银花及青蒿是热毒宁注射液的主要成分。
该品主要为静脉滴注给药，保存时应密封、避光。
热毒宁注射液的有效期为18个月。
近年来，在临床治疗中已广泛应用热毒宁注射液，为保证患者的用药安全，必须加强对热毒宁注射液的研究。
本文主要对热毒宁注射液药理作用、临床应用及不良反应发生情况进行探究，具体内容如下。
资料与方法2016年1月-2017年1月采用热毒宁注射液治疗患者60例，男27例，女33例；年龄15～75岁，平均（45±2.1）岁；疾病类型为急性上呼吸道感染33例，病毒性肺炎15例，轮状病毒性肠炎12例。
纳入标准：①所有患者均为我院使用热毒宁注射液治疗的患者；②所有患者均同意参加本研究。
排除标准：①脑血管、心血管疾病或癌症者；②不正常的肝功能和肾功能者；③对药物易产生过敏反应者。
治疗方法：用热毒宁注射液对所有患者进行静脉滴注治疗，将热毒宁注射液20 mL溶于0.9%氯化钠注射液250 mL中，待到溶液充分稀释后，对患者进行静脉滴注治疗。
热毒宁注射液滴速30～60滴/min，1次，d，3 d为1个疗程，持续治疗1个疗程。
观察项目和指标：观察患者治疗效果及不良反应发生情况。
热毒宁注射液药理作用与临床研究进展_孙兰
*基金项目：国家重大新药创制专项（2013ZX09402203）△通信作者·综述·热毒宁注射液（国药准字Z20050217）具有清热、疏风、解毒之功效。
用于外感风热所致感冒、咳嗽，症见高热、微恶风寒、头痛身痛、咳嗽、痰黄；也可用于上呼吸道感染、急性支气管炎见上述证候者。
现就其近10年来药理作用及临床应用研究进展综述如下。
1药理作用与机制研究1.1解热作用与机制王开富等［1］用细菌内毒素制作家兔发热模型，注射内毒素后家兔肛温明显上升。
结果显示，热毒宁注射液对白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、内皮素-1（ET-1）、前列腺素E2（PGE2）均有明显抑制作用，解热机理可能与拮抗IL-1、ET-1、IL-6、PGE2等炎性介质、调节内源性致热源有密切关系。
唐陆平等［2］将LPS溶液经腹腔注射入大鼠体内，持续观察并记录大鼠体温变化，以动物体温与基础体温的差值（ΔT，℃）为观察指标，测定脑cAMP的含量及肺组织中髓过氧化物酶（MPO）活性。
结果表明，热毒宁注射液可以抑制脂多糖致热大鼠温度的升高，降低中枢下丘脑的cAMP含量及肺组织MPO含量。
推测解热机制可能是由于抑制了单核巨噬细胞的活化，下调内源性致热因子的释放，进而使cAMP水平降低，使体温降低。
1.2抗炎作用与机制刘红菊等［3］静脉注射内毒素（主要成分为脂多糖，LPS）建立急性肺损伤（ALI）模型，应用热毒宁注射液治疗后，不同时间点检测外周血及支气管肺泡灌洗液（BALF）内白介素-8，10（IL-8，IL-10），肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量，并测定BALF 内磷脂酰胆碱（PC）的含量。
结果表明，热毒宁注射液对家兔ALI有一定的治疗作用，其可以抑制致炎因子活性，还可增加ALI家兔肺表面活性物质PC的含量。
范广民等［4］观察热毒宁注射液对哮喘大鼠肺组织肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF2）表达和病理改变的影响，结果表明，哮喘大鼠TRAF2的表达水平增强，其可能参与了哮喘的气道炎症过程。
网络药理学的研究方法与应用进展
网络药理学的研究方法与应用进展薛潇春;胡晋红【摘要】网络药理学是近年来研究较热的一门新兴的药理学分支学科。
以其“多基因，多靶点”的特点与复杂疾病的治疗理念相吻合。
区别于传统繁复的药理学实验方法，网络药理学以其独特的研究方法获取药物与靶点相关的信息，既节省时间又节省费用。
该文通过检索中国知网和PubM ed数据库，从网络构建、网络分析、实验验证3个方面介绍了网络药理学的研究方法，并阐述其应用进展，为深入研究药理学领域拓展新的思路。
%Recently ,network pharmacology was a pop emerging pharmacology branch .The theory of "multi-gene , multi-target"about network pharmacology was consistent with treatment of complex disease .Different from the traditional ex-perimental methods about pharmacology ,the research methods of network pharmacology uniquely obtain the information of drugs and relative targets with less time and less money .In this paper ,according to the searching of China Knowledge Re-source Integrated Database and PubMed ,three aspects about research methods of network pharmacology together with its ap-plications were introduced :network construction ,network analysis and experimental validation .The introductions of the meth-ods gave us a new vision in researching the field of pharmacology deeply .【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】5页(P401-405)【关键词】网络药理学;生物网络;网络构建;网络分析【作者】薛潇春;胡晋红【作者单位】第二军医大学附属长海医院药学部，上海 200433;第二军医大学附属长海医院药学部，上海 200433【正文语种】中文【中图分类】R96网络药理学（network pharmacology）的概念由英国药理学家Hopkins于2007年首次提出，并定义为一门以系统生物学和多向药理学为理论基础，利用生物分子网络分析方法，选取特定节点进行新药设计和靶点分析的药理学分支学科［1，2］。
热毒宁注射液的药理作用、临床应用及不良反应
热毒宁注射液的药理作用、临床应用及不良反应陈贵生【摘要】目的：探讨热毒宁注射液在临床应用中的药理作用、适应病症及不良反应。
方法收集2015年3月～2016年3月在我院收治的121名患者在使用热毒宁注射液进行治疗的临床疗效及不良反应情况，统计其药物使用性能。
结果通过对我院2015年3月～2016年3月在我院收治的121名患者治疗统计，在使用热毒宁治疗其适应症，总有效率可达到90%以上，同时，不良反应较少且较轻。
结论热毒宁在临床中具有较好疗效，可广泛应用，但针对其不良反应应采取有效措施控制，以扩大其应用范围。
%Objective To investigate the pharmacological effectsof reduning injection in clinical application,to adapt to the conditions and adverse reactions.MethodsCollected from March 2015 to March 2016 inour hospital,121 patients in the use of reduning injection treatment,the clinical curative effect and adverse reaction of the drug use performance of statistics.Results121 patients were treated in the use of reduning injection,the total effective rate can reach more than 90%,at the same time,the adverse reaction was less and less.ConclusionReduning injection has a good curative effect in clinic,can be widely used,but according to its adverse reactions should take effective measures to control,to expand its range of application.【期刊名称】《中国卫生标准管理》【年(卷),期】2016(007)015【总页数】2页(P141-142)【关键词】热毒宁;药理作用;临床医学;不良反应【作者】陈贵生【作者单位】高邮市人民医院设备科，江苏高邮 225600【正文语种】中文【中图分类】R243热毒宁注射液是采用当前先进生物提取技术从植物体中提取而成的中药注射液，该药物具有疏风、清热、解毒等功效，在当前临床上被广泛用于呼吸道感染、感冒、病毒性肠炎及肺炎等多种疾病的预防与治疗，临床疗效显著，药物不良反应少［1］。
热毒宁注射液辅助治疗流行性感冒论文
热毒宁注射液辅助治疗流行性感冒的临床效果观察【摘要】目的探讨和分析热毒宁注射液辅助治疗流行性感冒的临床效果。
方法选取我院2010年1月-9月收治的120例确诊为流行性感冒的患者，将其随机平均分为2组，即对照组60例和观察组60例，对照组采用磷酸奥司他韦（商品名：达菲，英文名：oseltamivir，上海罗氏制药有限公司生产）75mg，2次/d，共3d；治疗组在对照组的基础上，采用热毒宁注射液20ml（2支）加入0.9%生理盐水注射液250ml，静脉滴注，40-50滴/min，1次/d，3d为1个疗程。
结果（1）治疗组：痊愈56例（93.3%，56/60），好转4例（6.7%，4/60），整体有效率为100%；（2）对照组：痊愈41例（68.3%，41/60），好转6例（10.0%，6/60），无效13例（21.7%，13/60），整体有效率为78.3%；治疗组的痊愈率优于对照组（p＜0.05），且整体有效率显著高于对照组（p＜0.01）；2组患者均没有发现明显的不良反应。
结论热毒宁注射液辅助治疗流行性感冒的临床效果显著，并且作为一种纯中药制剂，几乎没有没有明显的不良反应，值得临床推广。
【关键词】流行性感冒热毒宁注射液磷酸奥司他韦（达菲）临床疗效中图分类号：r511.7文献标识码：a文章编号：1005-0515（2011）2-110-02流行性感冒（influenza，简称流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，发病率高，人群普遍易感，据统计，流感每年发病率达10%-30%[1]。
我院2010年1月-9月一共收治确诊为流行性感冒的患者120例，采用热毒宁注射液辅助治疗，临床疗效不俗，现在报告如下。
1 资料和方法1.1 一般资料我院2010年1月-9月一共收治确诊为流行性感冒的患者120例，将其随机平均分为2组，即对照组60例和观察组60例；治疗组男性32例，女性28例，年龄12-39岁，平均22.3岁，对照组男性31例，女性29例，年龄12-39岁，平均22.9岁。
热毒宁注射液在甲型流感中的临床应用
热毒宁注射液在甲型流感中的临床应用摘要：目的：2023年2-4月份甲型流感在达州市流行，为了更有效的治疗甲型流感、我们在抗流感病毒的基础上加用热毒宁注射液进行临床应用的研究，本项研究将对热毒宁注射液的临床疗效和不良反应发生情况进行分析。
方法：研究人员选取了在我院儿科接受治疗的甲型流感患儿98例，患儿接受治疗的时间是2023年2月至2023年4月，对甲流患儿给予奥司他韦、解热镇痛药的基础上，加用的热毒宁注射液和未加用热毒宁注射液的疗效进行相应的分析，并探究热毒宁注射液的不良反应、治疗效果等。
结果：热毒宁注射液治疗甲型流感有助于改善临床表现症状，起效快，疗效显著，安全性高，值得临床推广。
关键词：甲型流感，热毒宁注射液，抗病毒药物。
前言:2023年2-4月份甲型流感在达州市流行，有大规模爆发、我院儿科每天的甲型流感病人多。
为了提高我院儿科治疗甲型流感的有效率，我们儿科在患甲型流感的患儿中选用热毒宁注射液治疗进临床行对比分析。
以便选用更高效的药物治疗甲型流感，尽早控制患儿的病情、减少患儿痛苦。
结合国内外研究成果及我国既往流感诊疗经验，申报达州市通川区中医院后，进行了此项研究。
1.资料与方法1.1.病患资料2023年2-4月份甲型流感在达州市流行，为了提高我院儿科治疗甲型流感的有效率，我们儿科在患甲型流感的患儿中加用热毒宁注射液进临床行分析。
研究人员在我院就诊的甲型流感患儿中挑选出了98名（均大于3岁），将挑选的98名患儿作为本次研究目标，选取的患儿皆是2023年2月至2023年4月在本院接受的治疗。
对甲流患儿给予奥司他韦、解热镇痛药的基础上，根据是否实施热毒宁注射液患儿分为观察组和对照组各49例。
选取的98名患儿中包含男性50名，女性48名，其中年龄最大的患儿为13岁，年龄最小的患儿为3岁。
两组患者临床资料完整，性别、年龄等基本资料比较无显著差异(P〈0．05)，具有可对比性。
本研究经达州市通川区中医院伦理委员会批准，所有受试者（患儿家长）均签署知情同意书。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
利用网络药理学方法研究热毒宁注射液抗流感病毒的分子作用机制张新庄1萧伟2,*徐筱杰3,*王振中2曹亮2孙兰2(1南京中医药大学药学院,南京210046;2康缘药业中药制药新技术国家重点实验室,江苏连云港222002;3北京大学化学与分子工程学院,北京100871)摘要:采用分子对接、网络分析预测热毒宁注射液抗流感病毒的分子作用机制,并通过已建立的体外流感病毒神经氨酸酶筛选模型对网络预测结果验证.结果表明,热毒宁注射液所含化合物在化学空间上具有类药性质;网络分析揭示出热毒宁注射液是通过与流感病毒吸附、脱壳、复制以及释放等环节的多个蛋白相互作用发挥抗流感病毒作用的;对于预测的15个活性分子而言,实验结果初步证实,对A 型流感病毒,木犀草素呈现较强的抑制作用,槲皮素则呈现较弱的抑制作用,这也初步证实了预测结果.关键词:网络药理学;热毒宁;流感病毒;中药;神经氨酸酶中图分类号:O641Study on Mechanism of the Reduning Injection on the Influenza VirusUsing Network Pharmacology MethodZHANG Xin-Zhuang 1XIAO Wei 2,*XU Xiao-Jie 3,*WANG Zhen-Zhong 2CAO Liang 2SUN Lan 2(1College of Pharmacy,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210046,P .R.China ;2National Key Laboratory of Pharmaceutical New Technology for Chinese Medicine,Kanion Pharmaceutical Corporation,Lianyungang 222002,Jiangsu Province,P .R.China ;3College of Chemistry and Molecular Engineering,Peking University,Beijing 100871,P .R.China )Abstract:The mechanisms of the Reduning injection on the influenza virus were studied by computer methods at the molecular level,including docking and network analysis.A neuraminidase (NA)activity assay was used to verify the predicted results in vitro .Results show that most of the compounds in the Reduning injection exhibit good drug-like properties.The mechanism of the Reduning injection may be that it affects viral entry,RNA synthesis,or viral release,which limits influenza virus replication.Potential active molecules of the Reduning injection were found by analyzing the network parameters of compound-target interaction networks.The experimental results suggest that of the potential active molecules,luteolin displayed significant inhibitory activity toward the influenza A virus,while quercetin proved less effective,which supports the predicted results.Key Words:Network pharmacology;Reduning;Influenza virus;Traditional Chinese medicine;Neuraminidase[Article]doi:10.3866/PKU.WHXB201304171物理化学学报(Wuli Huaxue Xuebao )Acta Phys.-Chim.Sin .2013,29(7),1415-1420July R eceived:February 22,2013;Revised:April 17,2013;Published on Web:April 17,2013.∗Corresponding authors.XIAO Wei,Email:xw_kanion@;Tel:+86-518-85521956.XU Xiao-Jie,Email:xiaojxu@;Tel:+86-10-62757456.The project was supported by the “Innovative Drug Development ”Key Project of the Ministry of Science and Technology of China (2011ZX09304).国家科技部“重大新药创制”项目(2011ZX09304)资助ⒸEditorial office of Acta Physico-Chimica Sinica1引言流感是常见的急性呼吸道感染疾病,其主要病原体为流感病毒,属于正粘病毒科的含包膜的RNA病毒.由于其基因的高突变性以及人体对新病毒株缺乏免疫性,每年爆发的流感病毒会造成平均2-4万人死亡,并给社会带来严重的经济负担.1,2虽然现1415Vol.29 Acta Phys.-Chim.Sin.2013有的药物有生物疫苗、神经氨酸酶抑制剂(oseltami-vir和zanamivir)、M2离子通道抑制剂(金刚烷胺类)等可以预防和治疗流感病毒感染,3,4但由于流感病毒高抗原漂移性,这些针对单靶点的抗流感药物都面临着耐药性和滞后性的问题.中药,作为治疗流感症状(咳嗽、咽喉痛、头痛、流鼻涕、发烧等)的另一种治疗手段已受到研究者的广泛关注,5其中江苏康缘药业于2005年研发的用于治疗上呼吸道感染的热毒宁注射液呈现出良好的市场前景.前期的化学成分和药理作用研究表明,主要含有环烯醚萜类、黄酮类和有机酚酸类,对流感病毒呈现一定抑制作用,6但其多成分、多靶点以及多途径的作用机制使得其抗流感病毒作用机制研究面临一定的挑战.最近几年,作为基于生物信息学和系统生物学的方法,网络药理学被应用到生命科学的多个领域,如新药靶的识别、先导化合物的发现、作用机制的研究、药物临床前疗效和安全性评估等,7-11其中以分子对接、药-靶网构建以及网络特征分析为基础的多靶点整体调控的思维方法正逐渐被用于预测中药主要活性成分群和潜在靶标群,阐述中药作用机制.8,12-16这种基于系统思维的研究方法更符合中医药的思维模式:调控失衡的生物系统(疾病)恢复到固有平衡.因此,本文尝试用网络药理学方法对热毒宁注射液抗流感病毒的分子作用机制进行研究,进而为后续的临床使用提供理论支撑.2实验方法2.1分子数据集的收集和处理从SciFinder数据库收集热毒宁注射液中78个小分子化合物(见Supporting Information)的分子结构,导入Cerius2(4.10版)软件加氢后,选用CHARMm力场进行构象优化,优化时能量阈值设定为1×10-3J·mol-1,然后再将优化后的分子结构导入Discovery Studio(2.5版)中的general purpose模块来计算相关描述符.此外,根据流感病毒在宿主体内的复制过程以及药物治疗方法,选择了11个比较重要的靶蛋白(表1),并按照分辨率不高于0.25nm原则从RCSB 的PDB库17中下载含有原配体的靶蛋白非模建的晶体结构,导入Discovery studio2.5中的Clean protein 和Forcefiled中的CHARMm力场进一步对这些靶蛋白进行修饰、加氢以及自动分配原子类型和部分电荷,并根据靶蛋白复合物中配体的中心点坐标确定结合的活性位点.2.2分子对接与打分将处理过的靶蛋白和化合物分别导入Auto Dock4.0进行半柔性对接计算.对接时,对于每个化合物采用拉马克遗传算法(LGA)进行构象采样,具体参数设置如下:以蛋白-配体复合物中配体分子的坐标为盒子中心,格点数为4nm×4nm×4nm,格点间隔为0.0375nm,初始种群数为150,随机选取起始构象和取向,平移步长为0.2nm,旋转步长为50°,突变率为0.02,交叉率为0.8,局部搜索频率为0.06,其余均为默认设置.2.3分子靶蛋白作用网络的构建根据分子对接计算结果,以靶蛋白复合物中的原配体对接分数为阈值,打分高于此阈值的小分子即认为具有活性,再从中抽取较高得分(score≥5)的分子与靶蛋白导入Cytoscape2.8.1网络分析软件,18构建热毒宁注射液分子与靶蛋白作用网络(见图1),其中分子、靶蛋白用节点(node)表示,边(edge)表示分子与靶蛋白间的相互关系,某个分子与某个靶蛋表1与流感病毒复制相关的蛋白Table1Proteins related to the replication of influenzaProteinHANA(flu A)NA(flu B)PB2M2NPRdRpOMP decarboxylase IMP dehydrogenase2 IMP dehydrogenase1 SAHFull namehemagglutinininfluenza A virus neuraminidaseinfluenza B virus neuraminidasepolymerase basic protein2influenza A virus M2proteinnucleoproteinRNA polymeraseorotidine5ʹ-monophosphate decarboxylaseinosine-5ʹ-monophosphate dehydrogenase2inosine-5ʹ-monophosphate dehydrogenase1human S-adenosylhomocysteine hydrolasePDB code3EYM1XOE1NSD2VQZ2RLF3RO53HW41EIX1NF71JCN1LI41416张新庄等:利用网络药理学方法研究热毒宁注射液抗流感病毒的分子作用机制No.7白存在相互作用,则它们就会通过edge 连接起来.之后进一步通过Cytoscape 软件中的network analyzer 插件分析网络特征:网络度(degree)、介数(between-ness)、网络密度(network density)、最短路径等,预测热毒宁注射液可能的活性分子群、潜在靶蛋白等.2.4抗流感病毒活性的测定化合物的细胞毒性测定:取培养至80%-90%密度的Madin-Darby canine kidney (MDCK)细胞,0.25%胰酶消化后,用含10%胎牛血清(FBS)的Dul-becco ʹs modified Eagle medium (DMEM)调整细胞密度为1.5×105mL -1,每孔接种100µL 细胞悬液于96孔板上,CO 2培养箱中培养24h 后,弃上清,加150µL 不同浓度的含药细胞维持液(药物从500µmol ·mL -1起连续5倍梯度稀释6个梯度),CO 2培养箱中培养72h,倒置显微镜下观察药细胞病变效应(CPE),再每孔加入25µL alamarBlue ®液(Invitro-gen),继续孵育2h,用M2e 酶标仪于激发光570nm,发射光595nm 处荧光检测alamarBlue ®的还原情况,并以F (样品组)/F (正常对照组)的比值作为细胞存活率(F 为荧光强度),计算药物对细胞的半数毒性浓度(CC 50).抗流感病毒活性测定:19取培养至80%-90%密度的MDCK 细胞,0.25%胰酶消化,再用含10%FBS 的DMEM 调整细胞密度为1.5×105mL -1,接种于96孔板中,每孔接种100µL 细胞悬液,CO 2培养箱中培养24h 后,弃上清,加入流感病毒(A/PR/8/34H1N1)液,CO 2细胞培养箱中孵育1h 后,弃上清,PBS 洗涤后,加入150µL 不同浓度的含药细胞维持液(药物从100µmol ·mL -1起连续5倍稀释6个梯度),继续培养48h 后,倒置显微镜下观察细胞病变效应(CPE).然后取上清40µL 加入到含20µL 底物(60µmol ·mL -1MUNANA)MES 溶液的96孔黑色微量板中,CO 2细胞培养箱孵育60min,再加入100µL 终止液(0.014µmol ·mL -1KOH 的83%乙醇溶液),在激发波长为355nm,发射波长485nm 处测定各孔的荧光强度.设正常对照孔,病毒感染对照孔(酶活对照孔).计算不同浓度的化合物对流感病毒的抑制率.阳性对照药为利巴韦林.I nhibition rate =æèçöø÷1-F sample -F blank enzyme blank ×100%采用Origin 8.0软件分别预测药物的CC 50和对病毒的半数抑制量(EC 50),并进一步计算出化合物的选择指数(SI).(此部分的验证实验是委托中国科学院武汉病毒所完成测试,进一步的重复验证实验仍在开展过程中.)3结果与讨论3.1化学成分分子描述符的分析从表2中各分子描述符的平均值及其中位数可以看出,热毒宁注射液中大部分分子都没有违反Lipinski 的“rule of 5”规则,20表明其具有较好的类药性;而从分子极性表面积(PSA)(平均值为1.3202(≤1.4nm 2))和可旋转键数(rotatable bonds)(平均值为4.68(≤7),中位数为5)来看,热毒宁注射液中的分子图1热毒宁注射液所含化合物-靶蛋白(D-T)的作用网络Fig.1Compounds in Reduning injection-target protein (D-T)networkThe circles represent the molecules of Reduning injection,and the diamonds represent target proteins related on the replication of influenzavirus.1417Vol.29Acta Phys.-Chim.Sin.2013大多都具有较好的生物利用度(≥20%).213.2分子-靶蛋白网络特征分析网络分析既可以提供生物网络的一般特征,同时也能计算具体节点的拓扑学特征,进而有助于从复杂关系中获得潜在的生物信息.22对分子-靶标网络的总体特征分析表明(见表3),热毒宁注射液中既存在一个分子与多个靶蛋白存在较强相互作用,同时也存在不同分子作用同一个靶蛋白的现象,显示了热毒宁注射液的多活性化合物多靶点作用特点,也正符合了中药作用的特点.节点的网络度(degree)和介数(betweenness)常用于网络特征分析以评估生物网络中的药靶,23,24故又对D-T 网络中各分子与靶蛋白的作用情况做了进一步分析,部分重要节点的网络特征值见表4.从D-T 网络各节点的介数、网络度来看,热毒宁注射液抗流感病毒机制之一可能是其15个活性分子分别与流感病毒的吸附、脱壳、复制和释放等多个环节相互作用,从而降低流感病毒载量.而从化合物的网络特征分析来看,luteolin 对HA 、NA (flu A)、IMP dehydrogenase 1、IMP dehydrogenase 2、SAH 蛋白有很强的相互作用,而artemisinin 与HA 、M 2、NP 、RdRp 、IMP dehydrogenase 1蛋白存在较强的相互作用;且它们也具有较高的介数,所以推测其可能是热毒宁注射液抗流感病毒的活性成分.此外,quer-cetin 虽有高的网络度,但其介数比较低,故其对流感病毒的抑制作用可能会较弱.3.3抗流感病毒测定结果表2热毒宁注射液中78个分子的主要分子描述符Table 2Key molecular descriptors of 78compounds inReduning injectionDescriptor MWNum.of H-bond acceptors Num.of H-bond donors VmNum.of rotatable bonds PSA AlogPNum_RingsRule of 5violationsMean 343.088.034.30216.444.68132.020.212.421.15Min 138.121081.2909.23-3.8100Max 696.651710436.6316265.523.0553Median 354.3195223.635149.64-0.1021Network D-TAverage degree3.714Average shortest path3.234Network density0.045Network centralization0.275Network heterogeneity1.017表3D-T 网络总体特征Table 3Topological features of the D-T networkNodeHAIMP dehydrogenase 1IMP dehydrogenase 2RdRpOMP decarboxylase M 2NA (flu A)PB 2NPBetweenness 0.3160.3100.0980.2620.1510.1880.2120.0770.077Degree 554433222Node luteolin artemisinin quercetin cynarosideBetweenness 0.3880.5800.0530.222Degree 5533表4热毒宁注射液中D-T 网络中部分节点的网络特征分析Table 4Network features of part nodes in the D-T network in Reduning injection图2热毒宁注射液中部分化合物体外抗流感病毒活性Fig.2In vitro anti-influenza viral activity of part of compounds in Reduninginjection张新庄等:利用网络药理学方法研究热毒宁注射液抗流感病毒的分子作用机制No.7生物网络分析表明,多数情况下,疾病的产生是由于多个蛋白的“扰动”而不是单个靶蛋白的“修饰”,故对网络药理学预测结果的实验验证需要通过整体行为来进行评估.25,26在对预测出的15个活性分子的体外细胞实验结果表明高网络度和高介数木犀草素(luteolin)呈现较强的抑制A型流感病毒活性(CC50=701.219µmol·mL-1,EC50=28.44µmol·mL-1, SI=24.66)、槲皮素(quercelin)(高网络度和低介数)呈现一定的抑制病毒活性(EC50=91.284µmol·mL-1, SI>5.48)(见图2).4结论通过对分子-靶标的网络特征分析发现热毒宁注射液中的多数分子具有多靶点特性,并根据靶蛋白的网络特征预测其抗流感病毒的分子作用机制为通过HA、NA、M2、RdRp等蛋白,从而影响病毒的吸附、脱壳、复制以及释放等.根据预测出的15个活性分子,通过体外细胞实验对网络预测进行了验证,结果表明,对于A型流感病毒,木犀草素呈现较强的抑制作用,而预测结果表明木犀草素与HA、NA以及病毒复制时的酶都有较强的作用,且在整个网络的信息流中处于重要的地位,这也比较符合实验结果.网络药理学研究方法作为中药研究的一种新思路,虽存在不少有待解决的问题,但其借助网络分析预测出中药基于信号通路模式的作用机制,并通过对信号通路终端因子和关键靶蛋白实验验证来阐明中药作用机制,26,27从而来大大减少实验工作量,同时也从新的层面为中药赋予新的科学内涵.Supporting Information:The chemical information of chemical molecules in Reduning injection and the biological test results of some compounds have been included.This infor-mation is available free of charge via the internet at http://www. .References(1)Fraser,C.;Donnelly,C.A.;Cauchemez,S.;Hanage,W.P.;VanKerkhove,M.D.;Hollingsworth,T.D.;Griffin,J.;Baggaley,R.F.;Jenkins,H.E.;Lyons,E.J.;Jombart,T.;Hinsley,W.R.;Grassly,N.C.;Balloux,F.;Ghani,A.C.;Ferguson,N.M.;Rambaut,A.;Pybus,O.G.;Lopez-Gatell,H.;Alpuche-Aranda,C.M.;Chapela,I.B.;Zavala,E.P.;Guevara,D.M.;Checchi,F.;Garcia,E.;Hugonnet,S.;Roth,C.Science2009,324(5934),1557.doi:10.1126/science.1176062(2)Palese,P.Nat.Med.2004,10(Suppl.12),S82.(3)Subbarao,K.;Joseph,T.Nat.Rev.Immunol.2007,7(4),267.doi:10.1038/nri2054(4)Kim,A.;Lee,J.Y.;Byun,S.J.;Kwon,M.H.;Kim,Y.S.Antiviral Res.2012,94(2),157.doi:10.1016/j.antiviral.2012.03.007(5)Tian,L.;Wang,Z.;Wu,H.;Wang,S.;Wang,Y.;Wang,Y.;Xu,J.;Wang,L.;Qi,F.;Fang,M.;Yu,D.;Fang,X.J.Ethnopharmacol.2011,137(1),534.doi:10.1016/j.jep.2011.06.002(6)Zu,M.;Zhou,D.;Gao,L.;Liu,A.L.;Du,G.H.ActaPharmaceutica Sinica2010,45(3),408.(7)Fang,Y.J.Pharmacol.Toxicol.Methods2013,67(2),69.doi:10.1016/j.vascn.2013.01.004(8)Wang,X.;Xu,X.;Tao,W.;Li,Y.;Wang,Y.;Yang,L.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine2012,2012,15.(9)Campillos,M.;Kuhn,M.;Gavin,A.C.;Jensen,L.J.;Bork,P.Science2008,321(5886),263.doi:10.1126/science.1158140 (10)Daminelli,S.;Haupt,V.J.;Reimann,M.;Schroeder,M.Integrative Biology2012,4(7),778.doi:10.1039/c2ib00154c (11)Mestres,J.;Gregori-Puigjane,E.;Valverde,S.;Sole,R.V.Mol.Biosyst.2009,5(9),1051.doi:10.1039/b905821b(12)Barlow,D.J.;Buriani,A.;Ehrman,T.;Bosisio,E.;Eberini,I.;Hylands,P.J.J.Ethnopharmacol.2012,140(3),526.doi:10.1016/j.jep.2012.01.041(13)Wu,D.H.;Xu,X.J.Acta Phys.-Chim.Sin.2010,25(3),446.[吴钉红,徐筱杰.物理化学学报,2010,25(3),446.]doi:10.3866/PKU.WHXB20100218(14)Gu,J.Y.;Yuan,G.;Zhu,Y.H.;Xu,X.J.Sci.China Ser.B-Chem.2009,39(11),1415.[古江勇,袁谷,朱永宏,徐筱杰.中国科学B辑:化学,2009,39(11),1415.](15)Gertsch,J.Planta Med.2011,77(11),1086.doi:10.1055/s-0030-1270904(16)Tao,W.;Xu,X.;Wang,X.;Li,B.;Wang,Y.;Li,Y.;Yang,L.J.Ethnopharmacol.2012,145(1),1.(17)Deshpande,N.;Addess,K.J.;Bluhm,W.F.;Merino-Ott,J.C.;Townsend-Merino,W.;Zhang,Q.;Knezevich,C.;Xie,L.;Chen,L.;Feng,Z.;Green,R.K.;Flippen-Anderson,J.L.;Westbrook,J.;Berman,H.M.;Bourne,P.E.Nucleic.Acids Res.2005,33(Database issue),D233.(18)Smoot,M.E.;Ono,K.;Ruscheinski,J.;Wang,P.L.;Ideker,T.Bioinformatics2011,27(3),431.doi:10.1093/bioinformatics/btq675(19)Liu,A.L.;Wang,H.D.;Lee,S.M.;Wang,Y.T.;Du,G.H.Bioorg.Med.Chem.2008,16(15),7141.doi:10.1016/j.bmc.2008.06.049(20)Lipinski,C.A.;Lombardo,F.;Dominy,B.W.;Feeney,P.J.Adv.Drug Deliv.Rev.2001,46(1-3),3.doi:10.1016/S0169-409X(00)00129-0(21)Meanwell,N.A.Chem.Res.Toxicol.2011,24(9),1420.1419Vol.29 Acta Phys.-Chim.Sin.2013doi:10.1021/tx200211v(22)Berger,S.I.;Iyengar,R.Bioinformatics2009,25(19),2466.doi:10.1093/bioinformatics/btp465(23)Hwang,W.C.;Zhang,A.;Ramanathan,M.Clin.Pharmacol.Ther.2008,84(5),563.doi:10.1038/clpt.2008.129(24)Zhu,M.;Gao,L.;Li,X.;Liu,Z.;Xu,C.;Yan,Y.;Walker,E.;Jiang,W.;Su,B.;Chen,X.;Lin,H.J.Drug Target.2009,17(7),524.doi:10.1080/10611860903046610(25)Hopkins,A.L.Nat.Chem.Biol.2008,4(11),682.doi:10.1038/nchembio.118(26)Pujol,A.;Mosca,R.;Farrés,J.;Aloy,P.Trends Pharmacol.Sci.2010,31(3),115.doi:10.1016/j.tips.2009.11.006(27)Dai,W.;Chen,J.X.;Lu,P.;Gao,B.Y.;Chen,L.;Liu,X.;Song,L.J.;Xu,Y.H.;Chen,D.;Yang,P.Y.;Yang,J.H.;Huang,Q.L.Molecular BioSystems2013,9(3),375.doi:10.1039/c2mb25372k1420Supplementary Information for Acta Phys. -Chim. Sin. 2013, 29 (7): 1415-1420 doi: 10.3866/PKU.WHXB201304171利用网络药理学方法研究热毒宁注射液抗流感病毒的分子作用机制张新庄1萧伟2,*徐筱杰3,*王振中2曹亮2孙兰2 (1南京中医药大学药学院, 南京 210046; 2康缘药业中药制药新技术国家重点实验室, 江苏连云港222002; 3北京大学化学与分子工程学院, 北京 100871)Study on Mechanism of the Reduning Injection on the Influenza Virus Using Network Pharmacology Method ZHANG Xin-Zhuang1 XIAO Wei2,* XU Xiao-Jie3,* WANG Zhen-Zhong2CAO Liang2 SUN Lan2(1College of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, P. R. China; 2National Key Laboratory of Pharmaceutical New Technology for Chinese Medicine, Kanion Pharmaceutical Corporation, Lianyungang 222002, Jiangsu Province, P. R. China; 3College of Chemistry and Molecular Engineering, PekingUniversity, Beijing 100871, P. R. China)∗Corresponding authors. XIAOWei, Email: xw_kanion@; Tel: +86-518-85521956. XU Xiao-Jie, Email: xiaojxu@; Tel: +86-10-62757456.Table S1 78 molecules contained in Reduning injection[a] Chemical_Nameindex CAS_NO. UNPD_IDProtocatechuicacid1 99-50-3 UNPD60430scopoletine2 92-61-5 UNPD123796coumarin3 91-64-5 UNPD21132acid4 906-33-2 UNPD129293neochlorogenicKryptochlorogensaeure5 17608-52-5 UNPD84139Cryptochlorogensaeure6 6049-17-8 UNPD69393acid4-O-trans-caffeoylquininc7 82638-23-1 UNPD626623alpha,5alpha-dihydroxy-4alpha-O-caffeoyl 8 82638-22-0 UNPD164733quinic acidacid4-O-caffeoylquinic9 905-99-7 UNPD49725(3R)-()-Linalool10 78-70-6 UNPD106513(3S)-()-Linalool11 126-90-9 UNPD139439acid12 77-92-9 UNPD145647citric13 76-22-2 UNPD59933 Camphoracid14 69-72-7 UNPD59192 salicylic15 6902-77-8 UNPD70448 Genipin16 63968-64-9 UNPD189689Artemisinacid17 62218-53-5 UNPD24300 Picrocrocinic18 62218-53-5 UNPD125855O-beta-D-Glucopyranoside-4-Hydroxy-2,6,6-trimethyl-1-cyclohexenecarboxylic acid 19 60077-47-6 UNPD86130 7-epi-vogeloside7alpha-methoxysweroside20 118627-52-4 UNPD181272Vogeloside21 60077-47-6 UNPD13695522 58822-47-2 UNPD26834 SecoxyloganinketoneArtemisia23 546-49-6 UNPD10203524 5373-11-5 UNPD51223 CynarosideLuteolin25 491-70-3 UNPD149880Hyperoside26 482-36-0 UNPD12716827 480-19-3 UNPD60650 IsorhamnetinCasticine28 479-91-4 UNPD18635329 470-82-6 UNPD63596 Cineoleacid30 331-39-5 UNPD133665Caffeicacid31 327-97-9 UNPD106185chlorogenicScoparin32 301-16-6 UNPD13056333 29307-60-6 UNPD31542 Genipin-1beta-D-gentiobiosidgenipin-1-beta-gentiobioside34 29307-60-6 UNPD158162tetraacetate35 27856-66-2 UNPD197203secologaninO',O',O',O'-tetraacetylsecologanin36 27856-66-2 UNPD197202geniposidicacid37 27741-01-1 UNPD162860acidgeniposidic38 27741-01-1 UNPD155880Geniposidinsaeure39 27741-01-1 UNPD10658340 25694-72-8 UNPD29278 Veronicastroside41 25694-72-8 UNPD12881 luteolin7-O-beta-D-neohesperidosideGeniposide42 24512-63-8 UNPD120048acid 43 16758-05-7 UNPD18949 3,5-di-O-trans-caffeoylquininc44 89919-61-9 UNPD101522 isochlorogenic acid A45 2450-53-5 UNPD138107 3,5-dicaffeoyl quinic acidSecologansaeure46 22864-93-3 UNPD138269alcohol47 21149-19-9 UNPD49553 SantolinaEupatin48 19587-65-6 UNPD13532249 1632-73-1 UNPD26605 (-)-beta-fenchol50 470-08-6 UNPD22238 (+)-beta-Fenchol51 4695-62-9 UNPD30210 (-)-alpha-fenchol52 2217-02-9 UNPD7069 (+)-alpha-FencholRutin53 153-18-4 UNPD150726Chrysosplenol-D54 14965-20-9 UNPD186030acid3,4-dicaffeoyl-quinic55 14534-61-3 UNPD192822acid56 17912-89-9 UNPD13564 4,5-di-O-caffeoylquinic57 14259-55-3 UNPD93830 10-Deacetylasperulosidinsaeure58 18842-99-4 UNPD24222 Scandosideacidasperulosidic59 18842-99-4 UNPD163595desacetylacidDecetylasperulosidic60 14259-55-3 UNPD14747161 117-39-5 UNPD49205 Quercetinegentiobiosidegenipin6''-p-coumaroyl62 114653-46-2 UNPD125055acid(Z)-ferulic63 1014-83-1 UNPD142498acid64 537-98-4 UNPD12047 (E)-ferulic3-O-methyl caffeic acid65 1135-24-6 UNPD168255Geraniol66 106-24-1 UNPD17163467 118627-52-4 UNPD123 7-epi-vogeloside4-O-caffeoylquinate68 123372-74-7 UNPD128 Methyl69 29708-87-0 UNPD1210 Methyl5-O-caffeoylquinateC70 2450-53-5 UNPD1212 Isochlorogenicacid3,5-di-O-caffeoylquinate71 879293-21-7 UNPD1213 Methyl72 114637-83-1 UNPD1214 4,5-di-O-caffeoylquinate73 471271-55-3 UNPD1218 (E)-aldosecologaninUNPD1219 6’’-O-trans-sinapoylgenipin gentiobioside74 1174662-63-575 82474-97-3 UNPD1224 (Z)-aldosecologanin76 1782-55-4 UNPD1225 3-(3,4-dihydroxy-5-methoxyphenyl)-Cinnamic acid3,4-di-O-caffeoylquinateUNPD1229 Methyl77 1340540-40-478 123150-12-9 UNPD1230 5H,8H-Pyrano[4,3-d]thiazolo[3,2-a]pyridine-3-carboxylic acid[a] UNPD: universal natural product database, which is constructed by Xiao-Jie Xu professor et al.Table S2 The predicted CC50, EC50, SI of the compounds in Reduning injection compound CC 50 EC 50 SI compound CC 50 EC 50 SI luteolin 701.219 28.44 24.66crytochlorogenic acid - ND NDquercetin - 91.284 >5.48hyperoside - ND NDgenipin - 104.355>4.79cynaroside - ND ND Isochlorogenic acid B-113.143>4.42caffeic acid-NDNDscopoletin - ND NDNeochlorogenic acid- ND NDgeniposide - ND ND chlorogenic acid - ND ND isorhamnetin - ND ND rutin - ND ND Isochlorogenic acid A-NDNDcitric acid-NDNDcoumarin - ND ND artemisinin - ND ND camphor - ND ND linalol - ND ND geniposide acid - ND ND artenisia ketone - ND ND protocatechuic acid - ND ND secoxyloganin -NDNDSalicylic acid - ND ND ferulic acid-NDNDGenipin1-gentiobioside- ND ND“-”-no significant cytotoxicity(CC 50>>100µmol.L -1). “ND”-not determined antiviral activity.neochlorogenic acidP e r c e n t a g e （%）cryptochlorogenic acidP e r c e n t a g e （%）isochlorogenic acid AP e r c e n t a g e （%）caffeic acidP e r c e n t a g e （%）chlorogenic acidP e r c e n t a g e （%）secoxyloganinP e r c e n t a g e （%）geniposideP e r c e n t a g e （%）genipin 1-gentiobiosideP e r c e n t a g e （%）geniposide acidP e r c e n t a g e （%）cynarosideP e r c e n t a g e （%）scopoletinP e r c e n t a g e （%）salicylic acidP e r c e n t a g e （%）isorhamnetinP e r c e n t a g e （%）coumarinP e r c e n t a g e （%）camphorP e r c e n t a g e （%）protocatechuic acidP e r c e n t a g e （%）ferulic acidP e r c e n t a g e （%）hyperosideP e r c e n t a g e （%）rutinP e r c e n t a g e （%）citric acidP e r c e n t a g e （%）artemisininP e r c e n t a g e （%）linalolP e r c e n t a g e （%）artenisia ketoneP e r c e n t a g e （%）Fig.S1 The dose-response curve of compounds in Reduning injection。