实验总结的几种高效酿酒酵母转化方法
生物发酵转化实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景生物发酵转化是一种利用微生物的代谢活动，将原料转化为有价值产品的方法。
该方法广泛应用于食品、医药、化工等领域。
本实验旨在探究生物发酵转化技术在特定原料转化中的应用，并通过实验验证其效果。
二、实验目的1. 了解生物发酵转化的基本原理和方法。
2. 掌握微生物发酵过程中关键参数的检测方法。
3. 分析发酵过程中微生物的生长和代谢规律。
4. 评价生物发酵转化技术的效果。
三、实验材料与仪器1. 实验材料- 原料：玉米粉、豆粕等- 菌种：酿酒酵母、乳酸菌等- 培养基：LB培养基、MRS培养基等- 其他试剂：葡萄糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸钠、EDTA钠、氯化钠等2. 实验仪器- 锥形瓶（250ml）、移液管、pH计、生物传感仪、分析天平、发酵罐、离心机、紫外可见分光光度计等四、实验方法1. 微生物发酵（1）将原料按照一定比例混合，加入适量的水，搅拌均匀。
（2）将混合物接种适量的菌种，置于发酵罐中。
（3）调节发酵罐的温度、pH值等参数，控制发酵过程。
（4）发酵过程中，定时取样检测微生物的生长和代谢情况。
2. 产品分析（1）检测发酵液中的糖含量、酸度、蛋白质含量等指标。
（2）分析发酵产物的组成和性质。
3. 数据处理与分析（1）绘制微生物生长曲线、底物消耗曲线和产物形成曲线。
（2）分析发酵过程中微生物的生长和代谢规律。
（3）评价生物发酵转化技术的效果。
五、实验结果与分析1. 微生物生长曲线实验结果显示，在适宜的条件下，微生物生长迅速，发酵过程中菌体数量呈指数增长。
2. 底物消耗曲线实验结果显示，随着发酵时间的延长，底物消耗逐渐增加，直至发酵结束。
3. 产物形成曲线实验结果显示，发酵过程中，产物含量逐渐增加，直至发酵结束。
4. 产品分析（1）发酵液中的糖含量、酸度、蛋白质含量等指标均达到预期要求。
（2）发酵产物的组成和性质符合预期目标。
六、结论本实验成功实现了生物发酵转化技术在特定原料转化中的应用，并通过实验验证了其效果。
酿酒酵母代谢工程标准生物模块的设计与构建
一、概述酿酒酵母是一种常见的工业微生物，广泛应用于酿酒和酿酒生产。
酿酒酵母的代谢途径对酿酒酒质和酒精产量有着重要影响。
随着生物工程技术的发展，人们开始尝试通过改造酿酒酵母的代谢途径，来提高酒精产量和改善酒质。
酿酒酵母代谢工程标准生物模块的设计与构建，成为了当前研究的热点和挑战之一。
本文将针对这一问题展开讨论。
二、酿酒酵母代谢途径1. 酒精发酵途径酿酒酵母的主要代谢途径之一是酒精发酵途径。
在这一途径中，葡萄糖通过糖酵解途径转化为乙醇和二氧化碳。
乙醇是酿酒过程中的主要产物，而二氧化碳则是通过气泡释放到酒液中，形成了酒的起泡。
酒精发酵途径对酒的口感、香气和酒精含量有着重要影响。
2. 酯化代谢途径酿酒酵母还具有酯化代谢途径，这一途径涉及乙酸乙酯、异丙酸异丙酯等酯类物质的合成。
酯类物质对酒的香气和口感有着重要影响，因此酯化代谢途径也受到研究的关注。
三、酿酒酵母代谢工程1. 目标酿酒酵母代谢工程的目标是通过改造酵母的代谢途径，来提高酒精产量、改善酒质并实现其他特定功能。
这一工程需要精确设计和构建生物模块，以确保改造后的酿酒酵母能够稳定、高效地执行新的代谢途径。
2. 方法酿酒酵母代谢工程的方法包括基因编辑、代谢通路调控、蛋白工程等多种技术手段。
通过对酿酒酵母基因组的改造和对代谢途径的调控，研究人员可以实现对酿酒酵母代谢功能的精准控制。
3. 挑战酿酒酵母代谢工程中的主要挑战之一是生物模块的设计与构建。
生物模块需要具有高效的代谢功能，且需要能够在酿酒酵母中稳定地运行。
生物模块的设计还需要考虑到酵母细胞内的代谢平衡、底物和产物的输送等诸多因素。
四、酿酒酵母代谢工程标准生物模块的设计与构建1. 设计原则酿酒酵母代谢工程标准生物模块的设计需遵循一定的原则，包括模块化设计、功能清晰、稳定性和可调控性等。
模块化设计能够使得生物模块的功能分工明确，且方便后续的组合和调整。
功能清晰要求生物模块具有明确的代谢功能，并且不会对酵母细胞的其他生理功能产生负面影响。
酿酒酵母电转感受态制备
酿酒酵母电转感受态制备的研究与应用酵母是一种被广泛应用于食品工业中的微生物，其中酿酒酵母在酿造过程中起着至关重要的作用。
近年来，随着科技的发展，研究人员发现了一种新的酿酒酵母电转感受态制备方法，为酵母的利用与应用开辟了新的途径。
电转感受态是指在外界电场的作用下，细胞膜发生结构改变，从而使细胞对化合物的感受性提高。
酿酒酵母的电转感受态制备方法主要包括电渗透法和电击法两种。
电渗透法是通过电场作用下，使细胞膜发生临时孔结构，从而增加外界物质进入细胞的渗透性；电击法则是利用电场对细胞膜施加高压脉冲，使细胞膜发生破裂，从而使细胞对外界物质的吸收能力增强。
酿酒酵母电转感受态制备方法的研究不仅提高了酿酒酵母的利用效率，还为酿酒技术的创新与发展提供了新的思路。
在酿造过程中，常常需要添加剂来改善产品的风味、稳定性等特性，传统方法通常需要较长时间才能使剂量达到预期效果。
而通过电转感受态制备的酿酒酵母，其对外界物质的感受性大大增强，可以更快速地吸收添加剂，并在较短时间内完成酿造过程。
这不仅提高了生产效率，还降低了生产成本。
此外，酿酒酵母电转感受态制备还可以应用于其他领域的研究。
例如，在药物研发中，通过对细胞膜的电转感受态制备可以提高药物的吸收率，从而提高药效；在环境保护中，酿酒酵母可以作为一种生物传感器，利用其电转感受态对环境中的污染物进行监测
与检测。
总之，酿酒酵母电转感受态制备方法的研究与应用为酿酒技术的发展带来了新的机遇。
通过提高酿酒酵母对外界物质的感受性，可以提高酿酒效率，降低生产成本，并在其他领域的研究与应用中发挥重要作用。
酿酒酵母转化方法
酿酒酵母转化方法酿酒酵母可是个神奇的小家伙呀！它在酿酒过程中可是起着至关重要的作用呢。
那怎么把其他东西转化成酿酒酵母呢？嘿嘿，这可得好好说道说道。
咱先来说说最常见的一种方法，就好像给酵母宝宝们搭了个特别的“房子”，让它们能舒舒服服地住进去，然后慢慢发生变化。
这就好比你给小猫咪准备了一个温暖的小窝，它就会在里面开心地玩耍、成长。
还有一种方法呢，就像是给酵母宝宝们送上了一顿丰盛的“大餐”，让它们吃得饱饱的，然后活力满满地开始转化之旅。
这和咱们人吃了一顿美味的食物后，会更有精神是一个道理呀。
在进行酿酒酵母转化的时候，可不能马虎哦！就像你要去参加一个重要的聚会，肯定得精心打扮一番吧。
得注意各种细节，温度呀、酸碱度呀，这些都得把握得恰到好处。
不然酵母宝宝们可不高兴啦，它们一不高兴，转化可就不顺利咯。
想象一下，如果温度太高了，那酵母宝宝们不就像在大夏天被丢在了太阳底下，热得受不了呀。
要是温度太低呢，又像是在大冬天被扔到了外面，冻得直哆嗦。
所以呀，得给它们提供一个舒适的环境。
而且哦，不同的转化方法就像是不同口味的糖果，各有各的特点和用处。
咱得根据自己的需求和情况来选择合适的方法。
这可不能瞎选哦，就像你不能随便挑一双鞋子去跑步，得选适合跑步的鞋子才行呀。
有时候，可能一次转化不成功，别灰心呀！就像你学骑自行车，一开始可能会摔倒，但多尝试几次不就会了嘛。
酿酒酵母转化也是这样，多试试，多积累经验，总会成功的。
还有呀，和酿酒酵母打交道可得有耐心。
它可不是那种一下子就能给你变出奇迹的小精灵，得慢慢等它成长、转化。
这就像种一朵花，你得天天浇水、施肥，等它慢慢开花。
总之呢，酿酒酵母转化方法可是一门大学问。
咱得认真对待，细心照料，让这些小小的酵母宝宝们发挥出大大的作用。
这样咱们才能酿出美味的酒呀！所以呀，大家可别小瞧了这个过程，好好去探索、去尝试吧！相信你们一定能掌握好酿酒酵母转化的技巧，酿出令人陶醉的美酒来！。
酵母转化--to 杜
-80℃保存的菌液要先划线活化，挑取单菌在YPD液体培养基培养。
主要试剂配制：10×YNB：134g溶解于1L去离子水，过滤灭菌4°保存。
500×B（20%Biotin）：20g Biotin溶解于100ml去离子水中，过滤灭菌后4°保存。
10×D（20%dextrose）：200gD型葡萄糖溶解于1L去离子水，121℃、15min高温灭菌，4℃保存。
10×M（10%Methanol）:10ml纯甲醇与去离子水混合，定容至100ml，过滤灭菌后4℃保存。
10×GY（10%Glycerol）:100ml纯甘油与去离子水混合，定容至1L，121℃、15min高温灭菌，室温保存。
1M potassium phosphate buffer,pH6.0:132ml1M K2HPO4与868ml1M KH2PO4混匀，以磷酸和KOH调节pH至6.0，121℃、15min高温灭菌，室温保存。
YPD培养基：10g酵母提取物，20g蛋白胨，定容至900ml，121℃、15min高温灭菌，冷却至60℃在超净台上加入100ml10×D，轻微摇匀，常温保存（固体另加琼脂粉15g/L）。
MD培养基：80ml离子水加1.5g琼脂粉，121℃、15min高温灭菌，冷却至60℃在超净台上加入10ml10×D、10ml10×YNB和200微升500×B，迅速摇匀后倒平板，4℃保存。
BMGY培养基：10g酵母提取物，20g蛋白胨溶解于水，定容至700ml,121℃、15min高温灭菌，冷却至60℃在超净台上加入100ml10×YNB、100ml的1M potassium phosphate buffer，100ml10×GY和2ml500×B，轻微摇匀，4℃保存。
BMMY培养基：10g酵母提取物，20g蛋白胨溶解于水，定容至700ml,121℃、15min高温灭菌，冷却至60℃在超净台上加入100ml10×YNB、100ml的1M potassium phosphate buffer，100ml10×M和2ml500×B，轻微摇匀，4℃保存。
酵母转化
酵母转化方法步骤1.YPD固体培养基Yeast Extract：10 g；Peptone：20 g；葡萄糖：20 g；Agar：20 g2.1M LiAcLiAc：10.2 g；加水到100 ml高压蒸汽灭菌，4℃保存。
100 mM的LiAc只需将1M LiAc稀释10倍即可。
3.50% PEG3350（50% W/V）4.鲑鱼精DNA（2 mg/ml）i.鲑鱼精DNA：2 mg；加TE缓冲液至10 mlii.振荡溶解后用注射器剧烈抽吸30-40次，沸水浴20分钟后马上置于冰上降温，分装100 μl到1.5ml离心管中-80℃保存。
5.SD-Trp培养基（1L, pH6.8）无氨基氮源（含硫胺酸）：6.7g；葡萄糖：20g；-Trp DO supplement：0.74g。
调节pH，121℃高压灭菌20分钟。
酵母热激转化1.将酵母XK1-35在YPD固体培养基划线活化，3-4天菌落长到直径大约2-3 mm待用（菌落平板可放在4℃冰箱保存2至3周）。
2.将单菌落挑到含有50 ml YPD的100 ml三角瓶中，30℃, 220 rpm摇12 h。
3.用分光光度计测量OD值到1.0（即5×107个/ml）,吸取5ml培养液加入到含有45 ml YPD的100 ml三角瓶中，终浓度约为5×106个/ml。
4.置于30℃摇床中，200rpm摇至OD值为0.4-0.6（即2-3×107个/ml），约用时3小时（2.5小时测一次OD值防止浓度摇过）。
5.将OD值为0.4-0.6的培养物转移到预冷的50ml的离心管中，置于冰上冷却15分钟，3000g离心5分钟。
后面用到的试剂和仪器都要预冷，所有操作都要在冰上或者4℃。
6.倒掉上清液，加入30 ml预冷的无菌水并将酵母悬浮，同上步离心。
7.倒掉上清液，将酵母悬浮于1 ml 100 mM的LiAc中并转移到一个预冷2 ml无菌离心管中。
实验总结的几种高效酿酒酵母转化方法
实验总结的几种高效酿酒酵母转化方法电转法设计方案一：感受态制备：1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜；2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mLYEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养约16-18h(OD:1.3-1.5)；3.于4℃离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤一次后，细胞用10ml冰无菌水重悬，可换成较小的离心管；4.加入1ml，pH7.5，10×TE缓冲液，摇晃均匀，再加入1ml 10×LiAc，旋转摇匀，于30度轻轻摇动45min；5.再加入0.4ml 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30度轻轻摇动15min；6.于4℃离心，弃上清（用枪吸），再用25mL冰无菌水洗涤；7.2.5ml冰冷的1mol/L山梨醇洗涤，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）；8.每管用100ul山梨醇溶解，分装于EP管中（80ul/管），于-70℃冰箱保存。
电转化：1．向感受态细胞中加入约5～10ug（体积小于10ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移至预冷的电转杯中，静置5min；2．擦干电转杯，电击，电击参数：1.5KV，25uF，200xx；3．立即加入1ml预冷的山梨醇，转移至EP管中，于30℃静置1h；4．离心，弃上清，加入1mL YEPD后，于30℃、200rpm培养2h；5．离心得菌体后，吸除550 ul上清液，然后按150 ul/板进行涂板。
说明：该方法可直接采用50或100mL体系的一步法，即直接挑单菌落于YEPD中培养至预定菌浓，也可采用试管摇菌收集菌体制备感受态。
设计方案二：感受态制备：1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜；2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mLYEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养约16-18h(OD:1.3-1.5)；3.于4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤后，细胞重悬于8ml处理液中（处理液配方：100 mM LiAc，10 mM DTT，0.6 M山梨醇，10 mM Tris-HCl，pH7.5），室温静置30min；4.4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用1.5mL1mol/L预冷的山梨醇洗涤三次，离心条件一样；5.每管用100ul山梨醇溶解（以黄枪头能吸取为宜，菌浓低时可适量少加入山梨醇），最后以80ul的终体积转移至EP管中（菌体太多可适当放弃部分），置于-70℃冰箱保存。
质粒的酿酒酵母转化实验报告
酿酒酵母转化实验报告摘要本文介绍了酿酒酵母转化实验的实验步骤和实验结果。
首先，介绍了实验所使用的材料和器材，以及实验的准备步骤，包括菌株的提取、培养基的种植和抗生素的添加等。
其次，介绍了质粒转化的步骤，包括提取质粒、构建质粒等。
最后，介绍了实验结果，包括质粒转化后酵母菌株的抗性检测和质粒转化效率的估算等。
关键词：酿酒酵母，质粒转化，抗性检测，质粒转化效率1. 实验简介酿酒酵母转化实验是一种常用的基因工程实验，它是将外源基因转入酿酒酵母中，以改变酵母的生理特性和功能的一种方法。
通过质粒转化，可以将外源基因转入酿酒酵母，从而改变酵母的生理特性和功能，为酿酒酵母的改良和研究提供了便利。
2. 实验材料和器材（1）材料：酿酒酵母菌株，质粒，抗生素，营养培养基，细胞溶解剂；（2）器材：离心机，离心管，烧杯，热水浴，烧杯架，离心瓶，烧杯支架，温度控制器，离心管支架，摇床，培养箱等。
3. 实验步骤（1）菌株提取：将酿酒酵母菌株放入营养培养基中，摇床培养24小时，然后用离心机离心提取菌液；（2）培养基种植：将菌液滴入营养培养基中，放入培养箱培养24小时；（3）抗生素添加：将抗生素添加到营养培养基中，放入培养箱培养24小时；（4）质粒提取：将质粒放入烧杯中，加入细胞溶解剂，热水浴溶解，然后用离心机离心；（5）构建质粒：将质粒和菌液混合，放入烧杯中，加入CaCl2，放入热水浴37℃反应30min，然后用离心机离心；（6）质粒转化：将离心后的质粒液滴入培养基中，放入培养箱培养24小时；（7）抗性检测：将质粒转化后的酵母菌株放入营养培养基中，添加抗生素，放入培养箱培养24小时，观察菌株是否有抗性。
4. 实验结果（1）质粒转化后酵母菌株具有抗性：质粒转化后的酵母菌株在抗生素的作用下仍能够正常生长，表明质粒转化后的酵母菌株具有抗性。
（2）质粒转化效率估算：通过对质粒转化后的酵母菌株的抗性检测，估算出质粒转化的效率为85%。
5. 结论通过本实验，我们可以得出结论：酿酒酵母质粒转化实验成功，质粒转化后的酵母菌株具有抗性，质粒转化效率估算为85%。
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电转法
设计方案一：
感受态制备：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜；
2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm
培养约16-18h(OD:1.3-1.5)；
3.于4℃离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤一次后，细胞用10ml冰无菌水
重悬，可换成较小的离心管；
4.加入1ml，pH7.5，10×TE缓冲液，摇晃均匀，再加入1ml 10×LiAc，旋转摇
匀，于30度轻轻摇动45min；
5.再加入0.4ml 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30度轻轻摇动15min；
6.于4℃离心，弃上清（用枪吸），再用25mL冰无菌水洗涤；
7. 2.5ml冰冷的1mol/L山梨醇洗涤，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）；
8.每管用100ul山梨醇溶解，分装于EP管中（80ul/管），于-70℃冰箱保存。
电转化：
1．向感受态细胞中加入约5～10ug（体积小于10 ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移至预冷的电转杯中，静置5min；
2．擦干电转杯，电击，电击参数：1.5KV，25uF，200欧姆；
3．立即加入1ml 预冷的山梨醇，转移至EP管中，于30℃静置1h；
4．离心，弃上清，加入1mL YEPD后，于30℃、200rpm培养2h；
5．离心得菌体后，吸除550 ul上清液，然后按150 ul/板进行涂板。
说明：该方法可直接采用50或100mL体系的一步法，即直接挑单菌落于YEPD中培养至预定菌浓，也可采用试管摇菌收集菌体制备感受态。
设计方案二：
感受态制备：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm培养过夜；
2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm
培养约16-18h(OD:1.3-1.5)；
3.于4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤后，细胞重悬
于8ml处理液中（处理液配方：100 mM LiAc，10 mM DTT，0.6 M山梨醇，
10 mM Tris-HCl，pH 7.5），室温静置30min；
4.4℃，5000rpm，5min离心收集菌体，用1.5mL 1mol/L预冷的山梨醇洗涤三
次，离心条件一样；
5.每管用100ul山梨醇溶解（以黄枪头能吸取为宜，菌浓低时可适量少加入山
梨醇），最后以80 ul的终体积转移至EP管中（菌体太多可适当放弃部分），置于-70℃冰箱保存。
电转化：
1.向感受态细胞中加入约3ug（体积小于10ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移
至预冷的电转杯中，静置5min；
2.擦干电转杯，电击，电击参数：2.0KV，25uF，200欧姆；
3.立即加入1ml 预冷的山梨醇，转移至EP管中，于30℃静置1h；
4.离心，弃上清，加入1mL YEPD后，于30℃、200rpm培养2h；
5.离心得菌体后，吸除550 ul上清液，然后按150 ul/板进行涂板。
说明：处理液中的DTT是在使用前加入，其它配好后于4度保存，DTT单独于-20度保存，可配成100倍的贮备液。
制备体系可按比例放大。
设计方案二特别适合于采用一步法制备感受态细胞
具体如下：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中或转接于50mL YEPD中，在30℃、
250-300rpm 条件下培养至OD=6-10（为防止菌体老化，可将50mL培养体系提早收获细胞，取菌体时，以1mL/次，取菌两次或三次不等，使用菌浓达到预定的OD:6-10）；
2.取1mL菌液分装于EP管中，于4℃，12000rpm离心30s，弃上清；
3.收集菌体，用预冰的无菌水洗涤两次，离心条件一样；
4.所得菌体用1mL处理液（配方同上）于室温下处理30min；
5.离心，弃上清，加入1ml 1M 预冷山梨醇，离心，弃上清，重复两次；
6.最终用1M 预冷山梨醇溶解菌体至终体积为80 ul，于-70℃冰箱保存；
7.电转方法同上。
8.每一步的离心均30s即可，在较短的时间内制备出的感受态转化效率特别高。
备注：OD检测均为600nm，空白参比为：YEPD，高浓测定时应稀释测定。
所有无菌水与山梨醇均在冰上预冷处理；在制备感受态阶段，所有离心均在4℃条件下。
醋酸锂转化法
方案一：
1.挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30℃、200rpm培养过夜；
2.取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm
培养约5h(OD:0.5-0.8)；
3.于4℃，5000rpm，5min离心收集菌体；
4.25mL冰无菌水洗涤两次，离心条件一样；
5.用1mL 0.1M LiAc悬浮，离心收集菌体；
6.再用0.5mL 0.1M LiAc悬浮，以50 ul/管分装于EP管中，置于冰上备用；
7.依次向上述50 ul感受态细胞中加入50% PEG3350 ：240ul、1M LiCl：36ul、
2mg/ml 单链DNA：50ul、转化DNA（5-10ug）：50ul；
8.剧烈旋涡混匀直至沉淀菌体完全分布均匀（约1min）；
9.30℃水浴孵育30min；
10.42℃水浴热休克20～25min；
11.13000rpm离心30s收集酵母菌体，重悬酵母于1ml YEPD培养基，30℃摇床
孵育4h；
12.离心收集沉淀菌体，取除约800 ul上清液，然后按每100 ul/板进行涨涂板。
方案二：
1、接种液体YEPD培养基，过夜培养至1-2×107cells/ml；
2、取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30℃、250-300rpm
培养约5h(OD:0.5-0.8)；
3、收集细胞，并用无菌水清洗，之后用1ml无菌水重悬，并转移到1.5ml离心
管；
4、1ml TE/LiAC（10×TE[0.1 M Tris-HCI,0.01 M EDTA,pH 7.5]；lO×LiAc[1 M
LiAc pH 7.5）清洗细胞，然后用1×TE/LiAC重悬至2×109 cells/ml；
5、1.5ml离心管中取50u悬浮液，用1ug转化片段和50ug单链鲑鱼精DNA混
合；
6、加入300ul灭菌的40%PEG溶液，剧烈混匀；
7、30度振荡培养30min；
8、42度水浴热击15min；
9、离心5s，用1ml 1×TE重悬，适当稀释后涂布于选择培养基。
附：
电转法方案二中的处量液配制方法：
1.A液成份：100 mM LiAc，0.6 M山梨醇，10 mM Tris-HCl，pH 7.5；配制量：
500mL。
1.1 称取54.654g山梨醇，用适量dd无菌水溶解于500 mL容量瓶中；
1.2 事先配制1 M LiAc母液，再从LiAc母液中取50mL至1.1所述容量瓶中；
1.3 事先配好1M Tris-HCl（pH 7.5），再取5mL至1.1所述容量瓶中；
1.4 用dd无菌水定量至500mL，转移至试剂瓶中，于4℃保存。
2.B液成份（母液）：1 M DTT 配制量：20mL。
2.1称取
3.09g DTT，加入到50mL小烧杯内；
2.2加入20 mL的0.01M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0.22um滤器过滤除菌；
2.3适量分成小份后，-20℃保存。
3.在使用时按每50mL菌体量用8mL处理液（A+B）。
以50mL菌体为例：取A
液8mL ，再取80ul 1 M DTT 于小三角瓶中混匀，备用。