饲料中粗蛋白质测定
饲料中粗蛋白的测定
根据蛋白质的物理、化学性质直接测定蛋白质含量。
双缩脲法 Folin—酚试剂法（Lowry法） 紫外吸收法（最常见的280nm） 考马斯亮兰法（Bradford法）－染料结合法
11/21/2019
一、蛋白质的测定方法
2．间接法
通过测定样品中总含氮量推算蛋白质含量（根据：每种蛋白质的含 氮量是恒定的，N×6.25）。
（2）CuSO4的作用 ① 催化剂，加速氧化分解；
2CuSO4=CuSO4+SO2↑+O2 C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+O2↑ Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2↑ 此反应不断进行，待有机物被消化完后，不再有硫酸亚铜（褐色）生成，溶 液呈现清澈的蓝绿色。 ② 可以指示消化终点的到达； ③ 下一步蒸馏时作为碱性反应（加入碱量）的指示剂。
最后关闭电源，绝不能先关闭电源，否则吸收液 将发生倒吸！
11/21/2019
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
3. 测定步骤 第二步 氨的蒸馏
注意事项：
凯氏定氮蒸馏过程中，要求整套装置呈密闭状态，蒸馏前应检查定氮仪各导 管间的连接处是否密闭，以免产生泄露；
测定样品前应清洗蒸馏装置，即用蒸馏水空蒸一次或数次；
蒸馏后立即清洗蒸馏器。蒸馏完毕后，移取热源，夹紧蒸汽发生器和收集器 间的橡皮管，此时由于收集器温度突然下降，即可将反应室残液吸至收集器。
蒸馏时，火力稳定，蒸汽发生要均匀充足，蒸馏中途不得停火断汽，否则发 生倒吸。加碱要足量（反应室液体呈深蓝色或褐色）并且碱液不能污染冷凝 管及接收瓶。
11/21/2019
K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3
饲料中粗蛋白的测定度-不确定度评估
饲料中粗蛋白测定不确定度评定一、摘要按GB/T6432—94《饲料中粗蛋白测定方法》测定了玉米（粗蛋白10%以下）、玉米颗粒粕（粗蛋白10%~25%）、玉米蛋白粉（粗蛋白25%以上）中粗蛋白含量，按JJF1059—1999《测量不确定度评定与表示》对测定结果的不确定度进行了评定。
二、目的用国家标准方法测定饲料样品中粗蛋白。
三、测定程序按图1所示程序进行测定。
图1 粗蛋白测量程序四、被测量粗蛋白含量以占样品质量的百分比表示式中：V 1—滴定试样时所需酸标准溶液体积，mL ； V 2—滴定空白时所需酸标准溶液体积，mL ； C — 酸标准溶液浓度，mol/L ； m — 试样质量，g ；V — 试样分解液总体积，mL ； V 3—试样分解液蒸馏用体积，mL ； 0.0140— 每毫摩尔质量氮的克数；6.25— 氮换算成蛋白质的平均系数。
五、不确定度来源分析不确定度来源见图2— 因果关系图图2 因果关系图10025.60140.0)(321⨯⨯⨯⨯⨯-=Vm C V V P称样m滴定试样（空白）用标液体积V 1、V 2重复性(r)摩尔质量M(N)六、不确定度分量的量化1、 标准溶液浓度标准溶液浓度不确定度是测量不确定度的主要分量之一，同时，标准溶液浓度不确定度也是由多个分量合成所得，按GB601—88《化学试剂 标准溶液制备方法》，使用的盐酸标准溶液是采用标定法配制而成，下面详细描述配制过程。
1.1目的以无水碳酸钠（Na 2CO 3）基准标定0.1mol/L （或0.02mol/L ）盐酸溶液。
1.2标定程序见图3，按GB601—88标准有标定程序框图图3 标定程序框图 1.3被测量按下式计算盐酸标准溶液的浓度（GB601-88）05299.0)V V (m C 21⨯=-式中：m —无水碳酸钠质量，g;V 1—滴定用盐酸溶液体积，mL;量取9mL 盐酸注入1000mL 水中V 2—空白试验用盐酸溶液体积，mL;0.05299—每1/2毫摩尔质量碳酸钠的克数。
饲料分析与检测实验：饲料中粗蛋白质的测定
实验三、饲料中粗蛋白质的测定【学习目标】掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并能用此方法测定饲料中粗蛋白质的含量。
一、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都转变为 (NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据氮含量再乘以系数(通常为 6.25)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：催化剂1.2CH3CHNH2COOH+13H2SO (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O加热2.(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3↑+2H2O+Na2SO43.4H3BO3+NH3 NH4HB4O7+5H2O4.NH4HB4O7+5H2O+HCL NH4CL+4H3BO3系数6.25是根据饲料蛋白质平均含氮量为16.0%而来的，而实际上，各种样本的蛋白质种类不同，含氮量有差异，变动为14.7～19.5%之间，故一般饲料换算系数用6.25，已确定的最好用实际系数。
为方便使用，将已知几种饲料的系数介绍如下：肉类6.25，玉米6.00，小麦、燕麦、黑麦、大豆、箭舌豌豆、蚕豆5.70，牛奶及制品6.28，坚果及油饼类5.30。
二、仪器设备1.样品粉碎机 40目分样筛；2.分析天平感量0.0001g；3.电子天平感量0.0001g；4.工业天平感量0.01g；5.六联电炉 6×800-1000W；6.半微量凯氏定氮仪或改良式半微量凯氏定氮仪(图1、图2)；7.酸式滴定管 25.0ml或50.0ml；8.凯氏烧瓶 100.0ml；9.烧杯 250.0ml；10.三角瓶 150.0ml；11.容量瓶 100.0ml；12.移液管 10.0ml；13.量筒 10.0ml、25.0ml。
饲料粗蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握饲料粗蛋白测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解饲料粗蛋白含量的重要性及其对动物营养的影响。
二、实验原理饲料粗蛋白是指饲料样品中含氮物质的总量，包括蛋白质和非蛋白质含氮化合物。
测定饲料粗蛋白含量，可以了解饲料的营养价值，为动物饲料配方提供依据。
凯氏定氮法是测定饲料粗蛋白的常用方法，其原理如下：1. 将饲料样品与浓硫酸、无水碳酸钠混合，加热消化，使蛋白质和氨态氮转化为硫酸铵；2. 消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的氨随汽水顺着冷凝管流入硼酸吸收液中，并与其结合成硼酸铵；3. 用盐酸标准溶液滴定，求出氨的含量，再乘以一定的换算系数（6.25），即得出试样中粗蛋白的含量。
三、实验材料1. 饲料样品：玉米粉、豆粕、鱼粉等；2. 试剂：浓硫酸、无水碳酸钠、氢氧化钠、硼酸、盐酸标准溶液、甲基红-溴甲酚绿指示剂等；3. 仪器：凯氏瓶、消化炉、冷凝管、滴定管、分析天平等。
四、实验步骤1. 样品消化（1）称取0.5-1g饲料样品，置于凯氏瓶中；（2）加入0.4g无水硫酸铜、6g无水碳酸钠，与试样混合均匀；（3）加入10ml浓硫酸，摇匀；（4）将凯氏瓶置于消化炉上，加热消化，直至溶液呈透明蓝绿色。
2. 滴定（1）将消化液转移至500ml容量瓶中，用蒸馏水定容；（2）取25ml消化液于锥形瓶中，加入5ml氢氧化钠溶液、5ml硼酸溶液、1滴甲基红-溴甲酚绿指示剂；（3）用盐酸标准溶液滴定至溶液由蓝绿色变为灰绿色；（4）记录盐酸标准溶液的消耗体积。
3. 计算（1）根据滴定结果，计算氨的物质的量；（2）乘以换算系数（6.25），得出饲料样品中粗蛋白的含量。
五、实验结果与分析1. 实验数据样品名称 | 样品质量（g） | 盐酸标准溶液消耗体积（ml） | 粗蛋白含量（%）------- | -------- | ------------------- | --------玉米粉 | 0.5 | 25.00 | 9.20豆粕 | 0.5 | 30.00 | 38.40鱼粉 | 0.5 | 35.00 | 58.002. 结果分析通过实验，我们得到了玉米粉、豆粕、鱼粉的粗蛋白含量分别为9.20%、38.40%、58.00%。
饲料中粗蛋白质的测定课件(共25张PPT)《畜禽营养与饲料》
单元二 饲料中粗蛋白质的测定
一、适用范围
二、测定原理
凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破 坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨 逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘 以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
三、所需试剂
1、硫酸（GB 625） 2、混合催化剂 3、氢氧化钠（GB 629） 4、硼酸（GB 628） 5、混合指示剂 6、0.02mol/l盐酸标准溶液 7、蔗糖（HG 3—1001） 8、硫酸铵（GB 1396） 9、硼酸吸收液
六、分析步骤
（1）试样的消毒： 称取试样0.5~1g(含氮量5~80 mg)准确至0. 0002 g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均 匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热， 开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360~410℃ ) 直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
取蔗糖 0.5g，代替试样，按以上步骤进行空白测定，消耗 0.02mol/L的盐酸标准溶液体积不得超过 0.3ml。
（三）分析结果的表述
1、计算结果如下式
2、重复性
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为 1%。 当粗蛋白质含量在10%-25%之间时，允许相对偏差为2%。 当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。
混合催化剂氧化钠溶液
蒸馏水
四、仪器设备
电子天平
滴定筒
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通风橱内电炉及消煮架
锥形瓶
容量瓶
凯氏烧瓶
洗瓶
刻度吸管
移液管
饲料中粗蛋白的测定方法
• 蒸馏：样液中的硫酸铵在碱性条件下释放出氨
（NH4）2SO4+2NaOH→2NH3↑+Na2SO4+2H2O
• 滴定：用硼酸溶液吸收氨后，再用标准盐酸溶液滴定
2NH3+4H3BO3 ＝(NH4)2B4O7+5H2O (NH4)2B4O7+HCL +5H2O ＝2NH4CL+4H3BO3
三、消化过程
1:消化过程： 样品中的有机物和含N有机化合物，经浓H2SO4加 热消化， H2SO4使有机物脱水，炭化为碳、氢、氮； 碳将H2SO4还原为SO2，而本身则变为CO2； SO2 使N还原为NH3，而本身则氧化为SO3，消化过程中 所产生的新生态氢，加速了氨的行成。在反应中生 成物CO2、H2O和SO2、 SO3逸出，而NH3与H2SO4 结合生成（NH4)2SO4留在消化液中。 蛋白质+ H2SO4 C C+ H2SO4 SO2+ CO2 SO2+[N] NH3+ SO3 NH3+ H2SO4 （NH4)2SO4
混合指示剂
标准盐酸溶液滴定吸收液中的氨的PH值突跃 范围为6.3-4.3
指示剂名称 溴甲酚绿
甲基红 甲基红+溴甲酚绿
PH＜5.1 黄色
红色 酒红色
PH=5.1 绿色
橙色 灰色
PH＞5.1 蓝色
黄色 蓝绿色
甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：pH 5.0 以下为酒 红色，pH 5.1 为灰色，pH 5.2 以上为蓝绿色。 变色域很窄
消化过程注意点
1:加入的催化剂要适量，硫酸钾加入量不能太大，否则温
粗蛋白国标测定方法
粗蛋白国标测定方法
粗蛋白国标测定方法是指按照国家标准规定的方法来测定食品、饲料、生物、饮料等样品中的粗蛋白含量。
以下是其中一种常用的粗蛋白测定方法：
1. 原理：利用蛋白质与碱性染料结合形成染色复合物，通过比色测定复合物的吸光度来确定粗蛋白含量。
2. 实验步骤：
a. 准备样品：将待测样品取适量，如食品样品需要先将其分
解提取出蛋白质。
b. 加试剂：将试样加入含有碱性染料和溶液的比色管中，混匀。
c. 反应：在适当的温度下，让样品与试剂充分反应一段时间。
d. 比色：将比色管放入分光光度计中，通过测量其吸光度值
来确定反应产物的含量。
e. 计算：根据国家标准中的计算公式，将吸光度值转化为粗
蛋白含量。
3. 注意事项：
a. 操作过程中要注意避免样品受到污染，以保证准确性。
b. 使用标准品进行校准，以确保测定结果的准确性。
c. 样品的测定要根据国家标准规定的条件和步骤进行，以保
证可比性。
需要注意的是，粗蛋白国标测定方法可能因国家标准的不同而
有所不同，具体的操作步骤和计算方式可能有所差异。
因此，在具体实验中需要参考并遵循国家标准的要求。
饲料中粗蛋白的测定(精)
饲料中粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。
二、适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
三、实验原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白含量。
四、试剂（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。
（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。
（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。
（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。
（5）混合指标剂：甲基红%乙醇溶液，溴甲酚绿%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。
（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；① L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
② L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
（7）蔗糖：分析纯。
（8）硫酸铵：分析纯，干燥。
（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。
五、仪器设备（1）实验室用样品粉碎机或研钵。
（2）分样筛：孔径0.45mm（40目）。
（3）分析天平：感量0.0001g。
（4）消煮炉或电炉。
（5）滴定管：酸式，10、25mL。
（6）凯氏烧瓶：250mL。
（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。
（8）锥形瓶：150、250mL。
（9）容量瓶：100mL。
（10）消煮管：250mL。
（11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。
六、分析步骤试样的选取和制备: 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
（1）仲裁法①试样的消煮称取试样～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
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CP(%)= (V2－V1)×c ×0.014 ×6.25/m × V/ Vˊ ×100%＝ (10.15－0.25)×0.0213 ×0.014 ×6.25/0.3002 × 100/ 10 ×100%＝61.46%
1号：
CP(%)=(V2－V1)×c ×0.014 ×6.25/m × V/ Vˊ ×100%＝(11.15 － 0.25)×0.0213 ×0.014 ×6.25/0.3270 ×
蒸 馏
★降低锥形瓶，使冷凝管末端离开硼酸液面， 再蒸馏１分钟，蒸馏水冲洗冷凝管末端。
操 作 步 骤
蒸 馏
（九）滴定
操 作 步 骤
酸式滴定管的准备 ★检查与试漏 ★涂油 ★洗涤 ★用盐酸标准溶液润洗 ★装入盐酸溶液 ★排气泡
滴 定
★酸式滴定管的准备
操 作 步 骤
滴 定
记录初读数（两位小数） 1号 0.05 ml 2号 0.20 ml （两位小数） 用标准盐酸溶液滴定锥形瓶里的硼酸溶 液，边滴边摇，由蓝色变为灰红色为滴 定终点。 记录终读数（两位小数） 1号 10.20ml 2号 11.35ml （两位小数）
平均值＝(61.46%＋62.13%)÷2＝61.79% 相对偏差＝│61.46%－61.79%│÷61.79% ×100% ＝0.53%
◆蒸汽发生器
平底烧瓶 打孔胶塞 丁形玻璃管 胶管
仪 器 设 备
◆凯氏定氮器
小玻杯、玻璃塞 反应室：内室、外室、 进汽管或废液虹吸管、 蒸汽进汽管 废液排除管
仪 器 设 备
◆冷凝器
双层套管：内管、外 管 乳胶管：连接冷凝水， 下进上出
仪 器 设 备
（十三）称样纸
长纸条：
●硼酸
2%硼酸溶液：2克硼酸 溶解在100ml水中(W/V)， 需加热溶解。加入混合 指示剂0.25%（V/V）， 摇均，硼酸溶液呈淡紫 红色
●NaOH
40% NaOH溶液(M/V)
●蒸馏水
四、主要仪器设备--（一）分析天平
分析天平：感量0.0001g
仪 器 设 备
（二）电炉
电炉：变阻电炉，可调整温度
方纸快：
仪 器 设 备
（十四）药勺、洗瓶
药勺：用于固体试剂 及饲料样品的取出 洗瓶：盛蒸馏水
仪 器 设 备
五、试样的选取与制的采集原则选 取试样 试样的制备：“四分法”缩至200克 粉碎：全部通过0.44mm筛（40目） 装瓶：装入样品瓶，贴上标签备用
六、步骤----（一）凯氏烧瓶的准备 （两个平行样）
（七）移液管
移液管：10ml
（八）刻度吸管
刻度吸管：10ml
仪 器 设 备
（九）量杯
量杯： 10ml（量取NaOH溶液） 20ml （量取硼酸溶液）
仪 器 设 备
（十）消煮架
消煮架
仪 器 设 备
（十一）通风橱
内装排气扇，排 除有毒气体
仪 器 设 备
（十二）半微量凯氏蒸馏装置
仪 器 设 备
称取0.5克蔗糖代替样品，其余步骤同样 品测定。 滴定：空白滴定消耗的0.02mol/L盐酸标 准溶液的体积 V1= 0.25 （两位小数）
八、结果计算
★
粗蛋白(%)=(V2- V1)×c ×0.014 ×6.25/M × V/ Vˊ ×100%
V2--滴定试样时消耗盐酸标准溶液体积，ml
浓HCl 1.7ml/1000ml水，C(HCl)=0.0200moL/L （密度1.18，质量分数36） 标定基准物质：无水碳酸钠 高温电炉270-3000 C灼烧40-50分钟（瓷坩埚） 称重0.O400g/份（ 3份）放入洗涤干净烘干的锥形瓶中，溶于 50ml水。 混合指示剂 5-10滴 用C(HCl)=0.0200moL/L滴定 终点由绿变为暗红色 C(HCl)= m/(V1-V2)/0.05299
V1--滴定空白时消耗盐酸标准溶液体积，ml
C --盐酸标准溶液浓度，mol/L M--试样质量，g V--试样分解液总体积， ml Vˊ--试样分解液蒸馏用体积， ml 0.0140-- 1.00 ml盐酸标准溶液[c（HCl）= 1.00 00 mol/L]相 当的、以克表示的N的质量 6.25--N换算成蛋白质的平均系数 c=0.0213
▲试样消煮液的转移
操 作 步 骤
旋摇
▲定容
试 样 消 煮 液 的 转 移 与 定 容
操 作 步 骤
用蒸馏水稀释到容量瓶容积的2/3时，将 容量瓶直立旋摇，稀释至标线时，等候 1~2分钟，控制洗瓶逐滴加水至刻度处， 摇均备用。
▲定容
容量瓶容积2/3时 直立旋摇
操 作 步 骤
▲定容 (100ml)
操 作 步 骤
蒸 馏 装 置 的 洗 涤
废液排出 同时夹住进气管、废液管，使液 体虹吸到外室，再打开废液管，排出废液。 一般洗涤3次 。
操 作 步 骤
蒸 馏 装 置 的 洗 涤
（八）蒸馏
蒸 馏
操 作 步 骤
仪器准备 锥形瓶：150毫升（装硼酸溶液）洗净烘干 移液管：10毫升（移取试样分解液） 量杯：10毫升（量取氢氧化钠溶液）20毫升 （量取硼酸溶液） 将以上仪器洗涤干净备用
方法： ⑴将盛有样品的长纸条放入粗 天平上约重。 ⑵再将盛有样品的长纸条放 入电子天平上称重
操 作 步 骤
样品的称量
⑶凯氏烧瓶横置，小心将盛有样品的长纸条放入凯氏烧瓶中，凯 氏烧瓶竖立样品倒入凯氏烧瓶底部，勿使样品倒入凯氏烧瓶颈部。
操 作 步 骤
样品的称量
⑷再将凯氏烧瓶横置，水平移出长纸条，放入天平回称纸重
操 作 步 骤
★移液管漂洗
蒸 馏
操 作 步 骤
操 ★加试样液：准确移取10毫升试样液，从玻璃 作 杯入口处放入反应内室，用少量蒸馏水（10ml 步 骤 左右）冲洗入口
蒸 馏
★加碱
蒸 馏
操 作 步 骤
用量杯量取10毫升氢 氧化钠溶液，加至入 口处，小心提起玻璃 塞，使之快速流入反 应室，迅速塞好玻璃 塞，在入口处加水密 封。
凯氏烧瓶洗涤干净， 1050C烘箱中烘干（1 小时） 凯氏烧瓶编号备用1号、 2号
操 作 步 骤
样品的称量
（二）样品的称量
天平的准备： 接通电源，预 热20分钟 称样纸约重： 天平调零后， 将称样纸放入 称盘上
操 作 步 骤
样品的称量
样品
鱼粉
操 作 步 骤
样品的称量
称样
称样：称取样品0.2-0.5g(四位 小数)无损的放入凯氏烧瓶中
三、试剂
●硫酸钾（或硫酸钠） ●五水硫酸酮
●混合催化剂：
五水硫酸铜∶硫酸钾 (或硫酸钠)=1∶15 （W/W）研碎混均
●混合指示剂
甲基红0.1%乙醇容液、 溴甲酚绿0.5%乙醇容液， 两溶液等体积混合
●盐酸标准溶液
C(HCl)=0.0213moL/L
盐酸标准溶液配制与标定
操 作 步 骤
准备10ml刻度吸管，洗涤干净备用。 移取10ml硫酸放入凯氏烧瓶中：将刻度吸
管放入凯氏烧瓶颈上部，微微松开食指缓缓放 出硫酸，并不断转动烧瓶。 注意：凯氏烧瓶口与硫酸瓶口靠近，食指紧按 刻度吸管管口，勿使硫酸外滴到他处。
★加入硫酸的操作
硫酸移取
操 作 步 骤
（五）消煮
消 煮
★夹住排废液管
蒸 馏
操 作 步 骤
★蒸馏过程
蒸 馏
操 作 步 骤
硼酸溶液吸收氨液， 由红色变为蓝色，计 时，蒸馏四分钟，降 低锥形瓶，使冷凝管 末端离开硼酸液面， 再蒸馏１分钟，用蒸 馏水冲洗冷凝管末端， 洗液流入锥形瓶，蒸 馏结束。 排除废液 并冲洗。
操 作 ★反应室液体沸腾。（注意：不超过反应室） 步 骤 硼酸溶液吸收氨液由红色变为蓝色
2号：
100/ 10 ×100%＝62.13%
★重复性：试样取两个平行样，其算术 平均值为结果。 CP在25%以上，允许相对偏差为1% CP在10-25%之间，允许相对偏差为2% CP在10%以下时，允许相对偏差为3% 相对偏差=│测定值-平均值│/平均值
平均值、相对偏差计算
操 作 步 骤
样品的称量
记录：
⑴称样纸+样品重（m1） 1号：0.8835g 2号：0.9112g（取四位小数） ⑵回称纸重（m2） 1号：0.5833g 2号：0.5842g（取四位小数） ⑶计算试样质量（m） m= m1 —m2 1号：0.3002g 2号：0.3270g（取四位小数）
操 作 步 骤
将凯氏烧瓶放入 通风橱内的消煮 架上，倾斜60度 左右。打开排风 扇，排出有害气 体及酸雾。
电炉加热：
开始小火，待样品焦化泡沫消失， 再加强火力(酸雾在颈部2/3处泠凝)直至 呈透明的蓝绿色，再继续加热2h。消煮 过程中要不断转动凯氏烧瓶，以使焦化 的样品浸入硫酸溶液加速消煮过程。 消煮过程溶液颜色的变化： 黑色→深褐色→浅褐色→黄色→黄绿色 操 →蓝绿色→蓝色
饲料中粗蛋白质测定 凯氏定氮法
山东畜牧兽医职业学院饲料营养系 饲料营养教研室
一、适用范围
★配合饲料 ★浓缩饲料 ★单一饲料
二、原理
饲料在催化剂的作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸 铵，加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，在用盐酸滴定，测 出含氮量。 CP =含N量×6.25 主要化学反应如下： 2CH3CHNH2COOH+13H2SO4→ (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O (NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+2H2O+Na2SO4 H3BO3+NH3→NH4H2BO3 NH4H2BO3+HCl=H3BO3+NH4Cl