粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白含量的测定
饲料粗蛋白测定的测定方法Method for the determination of crude protein in feedstuffs本标准参照采用ISO5983-1979《动物饲料-氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。
1 主题内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
2 引用标准GB 601 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备3 原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收液吸收后，再用酸滴定。
测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白的含量。
4 试剂4.1硫酸（GB625）:化学纯，含量为98%，无氮。
4.2混合催化剂0.4g 硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g 硫酸钾（HG3-920）或硫酸钠（HG3-908），均为化学纯，磨碎混匀。
4.3 氢氧化钠（GB629）：化学纯，40%水溶液（M/V）。
4.4硼酸（GB628），化学纯，2%水溶液（M/V）。
4.5混合指示剂溶液甲基红（HG3-958）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3-1220）0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
4.6盐酸标准溶液，c(HCl)=0.1mol/L、0.02mol/L配制如下：移取8.3mL 盐酸(分析纯)，于1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
此溶液为c(HCl)=0.1mol/L。
移取1.67mL 盐酸(分析纯)，于1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。
此溶液为c(HCl)=0.02mol/L。
4.7蔗糖，分析纯。
4.8硫酸铵，分析纯，干燥。
4.9硼酸吸收液1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1% 甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂2.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。
2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3—920）或硫酸钠（HG3—908），均为化学纯，磨碎混匀。
2.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。
2.4硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
2.5混合指示剂：甲基红（HG3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。
2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。
8.3mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。
1.67mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.7蔗糖（HG3—1001）：分析纯。
2.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
2.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。
3.3分析天平：感量0.0001g。
3.4消煮炉或电炉。
3.5滴定管：酸式，10、25mL。
3.6凯氏烧瓶：250mL。
3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。
粗蛋白测定方法
粗蛋白测定方法一凯式定氮法粗蛋白crude protein ；crude matter (DM)食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物(氮化物)。
换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。
所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。
然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16% (这已通过多次试验得出)，再用凯氏法测出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。
一、实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50〜55%、氢6〜8%、氧20〜23%、氮15〜17% 和硫〜％。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15〜17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。
含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
由大分子分解成小分子的过程通常称为”肖化”为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290C-400C )，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。
反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3) 在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。
由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定（精）主要是测量饲料中的蛋白质含量，以便更好地了解饲料的营养成分，为合理饲养和饲料配方提供基础数据。
本文将介绍几种常见的饲料中粗蛋白的测定方法，包括Kjeldahl法、Dumas法、Kjeltec自动消解仪法等。
一、Kjeldahl法
Kjeldahl法是测定饲料中粗蛋白含量的经典方法，该方法通过将饲料样品经过消解、蒸馏和滴定等步骤，测定其中的氨基含量，再计算得出粗蛋白含量。
具体步骤如下：
1. 取适量的饲料干样，加入适量的硫酸和氧化剂，进行消解，将其变为无机氮。
2. 在消解的样品中加入适量的碱液，使其中和，然后加入酚酞指示剂，在滴定时视颜色变化为终点，计算出氨基含量。
3. 将氨基含量乘以蛋白质的氮含量比例（通常为6.25），即可得到粗蛋白含量。
二、Dumas法
1. 取适量的饲料干样，放入Dumas燃烧管中，加入硼酸和催化剂等。
2. 将燃烧管加热，将样品完全燃烧，并将其中的氮转化成NO。
3. 将生成的NO经过固定，再经过电导检测器测定其含量，计算出氮含量。
三、Kjeltec自动消解仪法
2. 稍作冷却后，将消解液放入自动蒸馏装置中，进行蒸馏，将其中的氨基捕集在酸性溶液中。
综上所述，饲料中粗蛋白的测定方法有很多种，其中Kjeldahl法、Dumas法和Kjeltec自动消解仪法是较为常见的。
在测定时需严格按照操作步骤进行，确保测量结果的准确性和可靠性。
请写出完整的饲料粗蛋白测定流程
请写出完整的饲料粗蛋白测定流程
饲料粗蛋白测定是一种常用的饲料分析方法，用于测定饲料中的粗蛋白含量。
它可以帮助我们更好地控制饲料的质量，以满足动物的营养需求。
饲料粗蛋白测定的流程如下：
1. 准备样品：将饲料样品经过研磨、筛选和称量，放入容器中，准备进行测定。
2. 水解：将样品加入硫酸铵溶液，经过加热水解，使蛋白质分解成氨基酸。
3. 测定：将水解后的样品加入硫氰酸钠溶液，经过加热，使氨基酸发生反应，形成一定的比例的硫氰酸钠，然后用硫氰酸钠溶液测定硫氰酸钠的浓度，从而计算出样品中粗蛋白的含量。
4. 数据处理：将测定结果进行数据处理，计算出样品中粗蛋白的含量。
饲料粗蛋白测定是一种简单、快速、准确的饲料分析方法，可以帮助我们更好
地控制饲料的质量，以满足动物的营养需求。
但是，在进行饲料粗蛋白测定时，应注意实验室的清洁卫生，以及样品的准备和处理，以确保测定结果的准确性。
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量,即在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵.加入强碱进行蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数,计算出粗蛋白含量.2、试剂硫酸GB625：化学纯,含量为98％,无氮.混合催化剂：硫酸铜,5个结晶水GB665,6g硫酸钾HG3—920或硫酸钠HG3—908,均为化学纯,磨碎混匀.氢氧化钠GB629：化学纯,40％水溶液m/V.硼酸GB628：化学纯,2％水溶液m/V.混合指示剂：甲基红HG3—958％乙醇溶液,溴甲酚绿HG3—1220％乙醇溶液,两溶液等体积混合,在阴凉处保存期为三个月.盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定,按GB601制备. 2.6.1盐酸标准溶液：cHCl=L.盐酸GB622,分析纯,注入1000mL蒸馏水中.盐酸标准溶液：cHCl=L.盐酸GB622,分析纯,注入1000mL蒸馏水中.蔗糖HG3—1001：分析纯.硫酸铵GB6：分析纯,干燥.硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL,加入％溴甲酚绿乙醇溶液10mL,％甲基红乙醇溶液7mL,4％氢氧化钠水溶液,混合,置阴凉处保存期为一个月全自动程序用.3、仪器设备实验室用样品粉碎机或研钵.分样筛：孔径40目.分析天平：感量.消煮炉或电炉.滴定管：酸式,10、25mL.凯氏烧瓶：250mL.凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式.锥形瓶：150、250mL.容量瓶：100mL.消煮管：250mL.定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动.4、试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过40目筛,装于密封容器中,防止试样成分的变化.5分析步骤试样的消煮称取试样～1g含氮量5～80mg准确至,放入凯氏烧瓶中,加入混合催化剂,与试样混合均匀,再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠,将凯氏烧瓶置于电炉上加热,开始小火,待样品焦化,泡沫消失后,再加强火力360～410℃直至呈透明的蓝绿色,然后再继续加热,至少2h.氨的蒸馏：将试样消煮液冷却,加入20mL蒸馏水,转入100mL容量瓶中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,做为试样分解液.将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内.蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补加硫酸.准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气.蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏.5.1.2.3蒸馏步骤的检验精确称取硫酸铵,代替试样,按步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为±％,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确.滴定用或法蒸馏后的吸收液立即用L或L盐酸标准溶液滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点.6、空白测定称取蔗糖,代替试样,按第5章进行空白测定,消耗L 盐酸标准溶液的体积不得超过.消耗L盐酸标准溶液体积不得超过.7、分析结果的表述计算见下式：粗蛋白质％=V2-V1·c××m×V＇/V×100式中：V2──滴定试样时所需标准酸溶液体积,mL；V1──滴定空白时所需标准酸溶液体积,mL；c──盐酸标准溶液浓度,mol/L；m──试样质量,g；V──试样分解液总体积,mL；V──试样分解液蒸馏用体积,mL；──与盐酸标准溶液〔cHCl=L〕相当的、以克表示的氮的质量.──氮换算成蛋白质的平均系数.重复性每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果.当粗蛋白质含量在25％以上时,允许相对偏差为1％.当粗蛋白含量在10％～25％之间时,允许相对偏差为2％.当粗蛋白质含量在10％以下时,允许相对偏差为3％.。
饲料中粗蛋白测定
• 9 标准滴定溶液的浓度小于或等于0.02mol/L时(除0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠、 氯化锌标准滴定溶液外),应于临用前将浓度高的标准滴定溶液用煮沸并冷却的水稀释 (不含非水溶剂的标准滴定溶液),必要时重新标定。当需用本标准规定浓度以外的标 准滴定溶液时,可参考本标准中相应标准滴定溶液的制备方法进行配制和标定。 • 10 贮存: • a) 除另有规定外,标准滴定溶液在10℃~30 ℃下,密封保存时间一般不超过6个月;碘 标准滴定溶液、亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]密封保存时间为4个 月;高氯酸标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液、硫酸铁(Ⅲ)铵标准滴定溶液 密封保存时间为2个月。超过保存时间的标准滴定溶液进行复标定后可以继续使用。 • b) 标准滴定溶液在10℃~30℃下,开封使用过的标准滴定溶液保存时间一般不超过2 个月(倾出溶液后立即盖紧);碘标准滴定溶液、氢氧化钾-乙醇标准滴定溶液一般不超 过1个月;亚硝酸钠标准滴定溶液[c(NaNO2)=0.1mol/L]一般不超过15d;高氯酸标准 滴定溶液开封后当天使用。
• NH4H2BO3+HCl=NH4Cl+H3BO3
仪器设备：
• 分析天平：感量0.0001g
• 消煮炉或电炉
• 酸式或通用滴定管：25mL，50mL
• 消化管或者凯氏烧瓶：250mL
• 开始蒸馏装置：常量直接蒸馏或半微量蒸馏式 • 三角瓶：150mL，250mL • 容量瓶：100mL • 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动和全自动蛋白质测 定仪。
测定原理：
• ① 样品消化 • ② 氮的蒸馏
浓硫酸的脱水 性与强氧化性
• 2NH2(CH)2COOH ＋ 13H2SO4 ＝ (NH4)2SO4 ＋ 6CO2 ＋ 12SO2 ＋ 16H2O
饲料中粗蛋白的测定方法
• 蒸馏：样液中的硫酸铵在碱性条件下释放出氨
（NH4）2SO4+2NaOH→2NH3↑+Na2SO4+2H2O
• 滴定：用硼酸溶液吸收氨后，再用标准盐酸溶液滴定
2NH3+4H3BO3 ＝(NH4)2B4O7+5H2O (NH4)2B4O7+HCL +5H2O ＝2NH4CL+4H3BO3
三、消化过程
1:消化过程： 样品中的有机物和含N有机化合物，经浓H2SO4加 热消化， H2SO4使有机物脱水，炭化为碳、氢、氮； 碳将H2SO4还原为SO2，而本身则变为CO2； SO2 使N还原为NH3，而本身则氧化为SO3，消化过程中 所产生的新生态氢，加速了氨的行成。在反应中生 成物CO2、H2O和SO2、 SO3逸出，而NH3与H2SO4 结合生成（NH4)2SO4留在消化液中。 蛋白质+ H2SO4 C C+ H2SO4 SO2+ CO2 SO2+[N] NH3+ SO3 NH3+ H2SO4 （NH4)2SO4
混合指示剂
标准盐酸溶液滴定吸收液中的氨的PH值突跃 范围为6.3-4.3
指示剂名称 溴甲酚绿
甲基红 甲基红+溴甲酚绿
PH＜5.1 黄色
红色 酒红色
PH=5.1 绿色
橙色 灰色
PH＞5.1 蓝色
黄色 蓝绿色
甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：pH 5.0 以下为酒 红色，pH 5.1 为灰色，pH 5.2 以上为蓝绿色。 变色域很窄
消化过程注意点
1:加入的催化剂要适量，硫酸钾加入量不能太大，否则温
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粗蛋白测定方法—凯式定氮法粗蛋白crude protein；crude matter（DM）食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物（氮化物）。
换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。
所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。
然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。
总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。
我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16%（这已通过多次试验得出），再用凯氏法测出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。
一、实验原理蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。
这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50～55%、氢6～8%、氧20～23%、氮15～17%和硫～%。
此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。
由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15～17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。
所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。
含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。
由大分子分解成小分子的过程通常称为”消化”。
为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290℃→400℃)，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。
反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。
由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。
硫酸铵与浓碱作用可游离出氨，借水蒸气将产生的氨蒸馏到一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的H+浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来H+浓度为止，最后根据所用标准酸的量计算出待测物中总氮量。
二、仪器和试剂1、仪器:消化管或凯氏烧瓶、凯氏定氮蒸馏装置、电炉、100mL 锥形瓶、100mL 量筒、表面皿、酸式滴定管、小漏斗、玻璃珠等。
2、试剂:（1）血清或卵清蛋白等其他含蛋白质样品；（2）消化液：30%过氧化氢、硫酸与水的比例为3∶2∶1，临用时配制；（3）催化剂：硫酸铜(CuSO45H2O)与硫酸钾(K2SO4)以1：3配比研磨混合；（4）50%氢氧化钠溶液；（5）2%硼酸溶液;(6)标准盐酸溶液(约L);(7)混合指示剂(田氏指示剂)混合指示剂由50mL %甲烯蓝乙醇溶液与%甲基红乙醇溶液混合配成贮于棕色瓶中配用。
这种指示剂酸性时为紫红色，碱性时为绿色，变色范围很窄且很灵敏。
三、实验步骤(一)安装微量凯氏定氮仪定氮仪由蒸汽发生器、反应室、冷凝管三部分组成。
蒸汽发生器包括一个电炉及一个3～5升容积的烧瓶。
反应室上边有两个小烧杯，一个供加样，一个盛放碱液。
样品和碱液由此可直接到反应室中。
反应室中心有一长玻璃管，其上端通到反应室外层，下端靠近反应室的底部。
反应室下端底部有一开口，上有橡皮管和管夹。
由此放出反应废液。
反应所产生的氮可通过反应室上端细管经冷凝管通入收集瓶中。
反应室与冷凝管之间由橡皮管相连。
安装仪器时，将蒸汽发生器垂直地固定在铁架台上，用橡皮管把蒸汽发生器、反应室、冷凝管连接起来。
橡皮管连接的部位应在同一水平位置。
冷凝管下端与实验台的距离以放得下收集瓶为准。
安装完毕后，不得轻易移动，以免仪器损坏。
要认真检查整个装置是否漏气，以保证所测结果的准确性。
(二)样品的处理(1)固体样品:随机取一定量研磨细的样品放入恒重的称量瓶中，置于105℃的烘箱中干燥4h，用坩埚钳将称量瓶取出放入干燥器内，待降至室温后称重，随后继续干燥样品，每干燥1h，称重一次，恒0重即可。
(2)血清样品: 取人血(或猪血)放入离心管中，与冰箱中放置过夜。
次日离心除去血凝块，上层透明清液，即为血清。
吸出1mL 血清加到50mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀备用。
溶液如果显混浊，加少量氯化钠再混匀。
(3)卵清蛋白: 取2g 卵清蛋白溶于%NaCl 溶液并稀释至100mL。
如有不溶物，离心取上清液备用。
(三)消化取5支消化管并编号，在1、2、3号管中各加入精确称取干燥样品(注意：加样品时应直接送入管底，避免沾到管口和管颈上)，加催化剂，混和消化液3mL，在4、5号管中各加相同量的催化剂和混合消化液(若样品是液体时，还要加与样品等体积的蒸馏水)作为对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质。
摇匀后，将5支消化管放在通风厨内的远红外消煮炉上消化。
先用小火加热煮沸，不久看到消化管内物质变黑，并产生大量泡沫，此时要特别注意，不能让黑色物质上升到消化管的颈部，否则将严重地影响样品测定结果。
当混合物停止冒泡，蒸汽与二氧化碳也均匀地放出时，适当加强火力。
在消化时，应是全部样品都浸泡在消化液中，如在瓶颈上发现有黑色颗粒，应小心地将消化倾斜振摇，用消化液将它冲洗下来。
通常消化需要1～3h(对于那些赖氨酸含量较高的样品需要更长的时间)。
待消化液变成褐色后，为了加速消化完成，可将消化管取出，稍冷，加30%过氧化氢溶液1～2滴于管底消化液中，再继续加热。
消化完毕，取出消化管冷却至室温。
(四)蒸馏(1)仪器的洗涤:仪器应先经一般洗涤，再经水蒸气洗涤。
目的在于洗去冷凝管中可能残留的氨。
对于处于使用状态的仪器(正在测定中的仪器)加样前使蒸汽通过1～2min 即可，对于较长时间未使用的仪器，必须用水蒸气洗涤到吸收蒸汽的硼酸—指示剂混合液中指示剂的颜色合格为止。
洗涤方法如下：取2～3个100mL 锥形瓶，加入10mL 2%硼酸、2滴混合指示剂，用表面皿覆盖备用。
现煮沸蒸汽发生器，其中盛有2/3体积的用几滴硫酸酸化过的蒸馏水，样品杯中也加入2/3体积蒸馏水进行水封。
关闭夹子使蒸汽通过反应室中的插管进入反应室，再由冷凝管下端逸出。
在冷凝管下端放一空烧杯以承受凝集水滴。
这样用蒸汽洗涤5min 左右，在冷凝管下口放一个准备好的盛有硼酸—指示剂的锥形瓶，位置倾斜，冷凝管下口应完全浸泡于液体内，继续用蒸汽洗涤1～2min，观察锥形瓶中的溶液是否基本上不变色，若不变色，则证明蒸馏器内部已洗涤干净。
下移锥形瓶，使硼酸液面离开冷凝管口约1cm，继续通蒸汽1min。
最后用蒸馏水冲洗冷凝管外口，排废开始。
用右手轻提样品杯中棒状玻塞，使水流入反应室的同时，立即用左手关闭夹子，盖好玻塞。
由于反应室外层中蒸汽冷缩、压力降低，反应室内废液通过反应室中插管自动抽到反应室外壳中，再在样品杯中加入2/3体积蒸馏水，如此反复三次既可排尽废液及洗涤液。
打开夹子将反应室外壳中积存的废液排出，关闭夹子再使蒸汽通过全套蒸馏仪1~3min，可进行下一次蒸馏。
(2)样品及空白的蒸馏: 取5个100mL 锥形瓶，分别加入2%硼酸10mL，混合指示剂2滴，溶液呈紫红色，用表面皿覆盖备用。
把消化管中的消化液全部转移到样品杯中，用约2mL 蒸馏水冲洗消化管，重复3次，把洗涤液都倒入样品杯中，打开样品杯的棒状玻塞，将样品放入反应室，用少量蒸馏水冲洗样品杯后也使之流入反应室，盖上玻塞，并在样品杯中加约2/3体积的蒸馏水进行水封。
而后将装有硼酸—指示剂的锥形瓶放在冷凝管口下方，打开存放碱液杯下端的夹子，放10mL40%氢氧化钠溶液于反应室后，立即上提锥形瓶，使冷凝管下口浸没在锥形瓶的液面下。
反应液沸腾后，锥形瓶中的硼酸—指示剂混合液由紫红色变为绿色，自变色时开始计时，蒸馏3～5min。
移动锥形瓶，使硼酸液面离开约1cm，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管下口外面，继续蒸馏1min，用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端尖嘴，将锥形瓶取出，用表面皿覆盖以待滴定。
排液和洗涤等操作与前面相同。
排废洗涤后，可进行下一个样品的蒸馏(每一个样品要同时做三份，以求得准确结果)。
待样品和空白消化液蒸馏完毕后，同时进行滴定。
(五)滴定全部蒸馏完毕后，用L 标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸—指示剂混合液由绿色变回淡葡萄紫色，即为滴定终点，记录所耗HCl 溶液量。
五、计算样品的总氮含量(%)=(A—B)×××100/1000×C若测定的样品含氮部分只是蛋白质(如血清)，则：样品中的蛋白质含量(%)=(A－B)××14××100/1000×CA－滴定样品用去的盐酸体积(mL)；B－滴定空白用去的盐酸体积(mL)；C－称量样品的量(g)；－盐酸的摩尔浓度(mol/L)；14－氮原子量；－系数L 盐酸相当于氮)。
若样品中除有蛋白质外，尚有其它含氮物质，则样品蛋白质含量的测定要复杂一些。
首先，需向样品中加入三氯乙酸，使其最终浓度为5%，然后测定未加入三氯乙酸的样品及加入三氯乙酸后样品的上清液中的含氮量，得出非蛋白氮量，从而计算出蛋白氮，再进一步折算出蛋白质含量。
蛋白氮=总氮－非蛋白氮粗蛋白质含量(%)=蛋白氮×粗纤维测定方法粗纤维(Crude Fiber,缩写CF，是膳食纤维的旧称，现已不用。
）粗纤维是植物细胞壁的主要组成成分，包括纤维素、半纤维素、木质素及角质等成分。
吃些含粗纤维的食物可以帮助消化，加强肠胃功能，是有益处的，但是吃多了很明显会因无法消化而造成腹胀。
1、原理用浓度准确的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醇除去可溶物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余量为粗纤维。
它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下测出的概略成分，其中以纤维素为主，还有少量半纤维素和木质素。
2、仪器和试剂试剂本方法试剂使用分析纯，水为蒸馏水(1）硫酸溶液（±）mol/L；(2) 氢氧化钠溶液（±）mol/L；(3）酸洗石棉，加5% 氢氧化钠浸泡．在水浴上回流8h以上，再用热水充分洗涤．然后用20%盐酸干燥，在600--700℃下灼烧后．加水使成混悬物，储存于玻璃瓶中；(4) 95% 乙醇；(5）乙醚；（6）正辛醇（防泡剂）。
（丙酮、十氢奈）仪器设备(1) 实验室用样品粉碎机，分样筛，孔径1mm(18目)；(2）分析天平，感量0.0001g；(3）电力热器（电炉），可调节温度；(4)电热恒温箱（烘箱），可控制温度在130℃，高温炉，可控制温度在500-600℃。
(5）消煮器；（6）抽滤装置；（7）干燥器。
(8)古氏坩埚[预先加入酸洗石棉悬浮液30ml（内含酸洗石棉-0.3g再抽干，以石棉厚度均匀，不透光为宜。