土壤稀释涂布平板法
土壤稀释法实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解土壤稀释法的原理和应用。
2. 掌握土壤稀释法的实验操作步骤。
3. 通过实验，学习如何分离和计数土壤中的微生物。
4. 分析土壤微生物的种类和数量。
二、实验原理土壤稀释法是一种常用的微生物分离和计数方法。
该方法的原理是将土壤样品进行一系列倍比稀释，然后涂布于培养基表面，经过培养后，土壤中的单个微生物细胞或孢子在培养基上形成菌落，从而可以分离和计数微生物。
三、实验材料1. 土壤样品：采集自实验基地，新鲜、无污染。
2. 营养琼脂培养基：用于培养微生物。
3. 稀释液：无菌水或生理盐水。
4. 移液器：用于准确吸取稀释液。
5. 平板计数器：用于计数菌落。
6. 灭菌器械：酒精灯、无菌操作台、镊子等。
四、实验步骤1. 样品处理：取土壤样品10g，加入90mL无菌水，充分振荡混匀，制成土壤悬液。
2. 稀释：取1mL土壤悬液加入9mL无菌水中，制成10^-1稀释液；取1mL10^-1稀释液加入9mL无菌水中，制成10^-2稀释液；以此类推，制成10^-3、10^-4、10^-5稀释液。
3. 涂布：取10^-3、10^-4、10^-5稀释液各0.1mL，分别涂布于三个营养琼脂培养基平板上。
4. 培养与观察：将涂布好的平板倒置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。
5. 计数：用平板计数器计数每个平板上的菌落数，记录结果。
6. 结果分析：根据菌落数，计算土壤样品中的微生物数量。
五、实验结果与分析1. 实验结果经过24小时培养，三个平板上的菌落数分别为：A平板30个，B平板50个，C平板80个。
2. 结果分析根据实验结果，土壤样品中的微生物数量约为30×10^4个/g。
六、实验讨论1. 实验过程中，土壤悬液的制备和稀释操作要尽量减少污染，确保实验结果的准确性。
2. 在涂布过程中，要确保稀释液均匀涂布于培养基表面，避免菌落聚集。
3. 培养过程中，要注意温度、湿度等条件，确保菌落正常生长。
【实验】测定土壤中微生物的数量
[三]微生物的培养与观察
不同菌落的鉴定指标：菌落的形状、大小、 隆起程度、颜色等。
（二）统计菌落数目
每克样品中的菌株数致 C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数
为了测定微生物的数量，接种时应采用_稀__释__涂__布__平__板___ 法，某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数为106的土 壤样液0.1 mL，培养后菌落数分别为180、155、176、 129个，则原土壤样液中上述微生物的含量为 __1_.6_×__1_0_9_个__/m__L_______，测定的活菌数比实际活菌数 ____低____(填“低”“高”“基本一致”)。
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。
尿素分子的立体结构
（一）筛选菌株
美国微生物学科布鲁克1966 年发现耐热细菌，从水生耐 热细菌Taq得到耐高温的Taq DNA聚合酶。
一、研究思路
(一)筛选菌种
1 实例：耐高温的DNA聚合酶
PCR技术：要求使用耐高温（930C） 的DNA聚合酶。
稀释度（倍）
106
107
108
平板
1 2 3 12 3 1 2 3
平板菌落数（个） 432 421 445 78 67 74 9 6 8
涂布时应当在酒精灯火焰旁 附近操作，为了保证结果准确，应选 择上述稀释度为 107 倍的平板菌落数作为统计结果，原因是 计数平板的菌落数 ，计算出样品中每毫升乳酸菌数为7.3×。109 量范围为30~300
（1）样品稀释：先将样品稀释10倍，可用无菌移液管吸取25mL 酸奶样品加入盛有 225 mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混 匀。然后进行系列稀释操作，得到稀释至106、107、108倍的样品。 （2）培养与统计：吸取不同稀释度的样品各1mL，分别置于不同
稀释涂布平板法的计算公式
稀释涂布平板法的计算公式好的，以下是为您生成的文章：在咱这探索微生物世界的旅程中，有个超级重要的方法叫稀释涂布平板法，而围绕着它的计算公式，那可是有不少学问呢！先来说说这稀释涂布平板法是干啥的。
简单来讲，就是为了弄清楚某个样品里微生物的数量。
比如说，咱想知道一瓶牛奶里有多少细菌，就得靠它出马。
那这计算公式到底是啥呢？咱得先搞清楚几个概念。
一个是菌落数，就是咱们在平板上看到的那些小点点；另一个是稀释倍数，这就好比把一杯浓糖水不断加水冲淡，咱加了多少水，这倍数就有多大。
这计算公式呢，就像一个神奇的小钥匙，能帮咱们打开微生物数量的秘密大门。
公式是：每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 。
这里的 C代表的是某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 就是涂布平板时所用的稀释液的体积（毫升），M 则是稀释倍数。
我给您举个例子啊。
有一次我在实验室里带着学生们做实验，就碰到了一个特别有意思的情况。
我们要测一块土壤里的细菌数量。
同学们那是又兴奋又紧张，一个个摩拳擦掌的。
我们按照步骤，先把土壤样品弄成不同的稀释度，然后再进行涂布。
其中有一组同学，在计算的时候可犯迷糊了。
他们把稀释倍数给弄混了，结果算出来的细菌数量那叫一个离谱！我就过去，一点点地给他们重新梳理，告诉他们怎么去看那个稀释的梯度，怎么准确记录菌落数。
这时候我就发现，其实公式本身不难，难的是在实际操作中要特别细心，一个小数字错了，结果就差得十万八千里。
再回到这个计算公式，您看啊，如果咱们的 C 数值很大，也就是平板上的菌落数很多，那说明啥？说明样品里的微生物可能很多呀，这时候就得考虑是不是稀释度不够。
要是 V 太小，也就是涂布用的稀释液太少，那也可能影响结果的准确性。
所以说，这稀释涂布平板法的计算公式，就像是一个精密的仪器，每个参数都得准确无误，咱们才能得到靠谱的结果。
在实际应用中，这公式可帮了大忙。
比如说食品检测，得知道食物里有没有有害的微生物超标；还有环境监测，看看水里、空气里的微生物是不是在正常范围。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
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平板划线法与稀释涂布平板法地区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离地材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式地连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数地增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜地话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落.
用途：一般多用于从菌种地纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成地单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计地计数方法，即一个菌落代表一个单细胞.计数时，首先将待测样品制成均匀地系列稀释液，尽量使样品中地微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量地稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中地培养基内.经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中地含菌数.此法所计算地菌数是培养基上长出来地菌落数，故又称活菌计数.一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源地污染程度地检验.
用途：一般多用于筛选菌株.一般用于平板培养基地回收率计数.
优点：可以计数，可以观察菌落特征.
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延.如果菌液密度大地话，长不出单菌落.
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分离土壤中微生物的方法
分离土壤中微生物的方法土壤中的微生物是土壤生态系统中非常重要的组成部分，对土壤的物质循环、生态功能以及农田生产等都有着重要的影响。
因此，分离土壤中的微生物并进行研究是了解土壤微生物群落结构和功能的重要手段。
下面将介绍一些常用的分离土壤中微生物的方法。
1.稀释涂平法：稀释涂平法是最为常用的一种分离培养微生物的方法。
首先，将土壤样品稀释成一定的浓度；然后，将适量的稀释液均匀地涂布在培养基平板上；最后，将培养基平板的菌落进行分离鉴定。
优点是简单易行，适用于常见的土壤微生物；缺点是只适用于可培养的微生物。
2.筛选技术：筛选技术通过筛选和培养特定类型的微生物，实现对土壤微生物的分离。
常用的筛选技术有选择性培养基筛选、酶基因筛选、菌落形态和色素筛选等。
优点是可以选择性培养其中一类型的微生物；缺点是存在选择性偏倚和培养基有限性。
3.海绵法：海绵法通过悬浮土壤样品，利用海绵吸附和负压吸附的原理，分离土壤中的微生物。
首先，将土壤样品加入海绵中；然后，通过一定的操作将海绵中的微生物分离出来；最后，对分离出的微生物进行鉴定。
优点是可以分离植物根际微生物和陆地微生物；缺点是操作复杂。
4.聚合物链式反应（PCR）和16SrRNA基因测序：PCR和16SrRNA基因测序是一种通过分子生物学手段分离和鉴定微生物的方法。
首先，从土壤中提取微生物的DNA；然后，利用PCR方法扩增16SrRNA基因片段；最后，对扩增产物进行测序并分析。
优点是可以快速分离和鉴定微生物，无需进行培养；缺点是依赖于标准数据库的准确性。
5.激光共聚焦显微镜技术：激光共聚焦显微镜技术可以直接观察土壤中的微生物，并通过分析其形态特征对微生物进行分类和分离。
优点是可以快速直观地观察微生物；缺点是无法进行鉴定和培养。
综上所述，分离土壤中微生物的方法有许多种，分别适用于不同的研究目的和需求。
可以根据具体情况选择适合的方法。
同时，需要注意的是，单一的方法可能无法完全反映土壤微生物多样性，因此最好结合多种方法进行研究，以全面了解土壤中微生物的群落结构和功能。
土壤稀释涂布平板法实验报告
土壤稀释涂布平板法实验报告一、实验目的本实验旨在通过土壤稀释涂布平板法，了解土壤中细菌总数及不同细菌群落的数量和结构，以分析不同土壤样本中微生物多样性。
二、实验原理土壤稀释涂布平板法是一种常见的微生物计数方法。
通过将土壤样品在一系列不同浓度的液体稀释后，将其均匀涂布在含有富营养培养基的平板上，使微生物在培养基上生长。
在培养时间后，通过对平板上不同生长的菌落形态、颜色进行观察和编号，计算出不同土壤样品中微生物的总数和不同菌群落的丰度和多样性指数。
三、实验过程1.准备土壤样品：从不同地点收集5份土壤样品，并混合均匀，制备出一份混合土壤样品。
2.制备稀释液：取10ml的稀释液管，加入9ml的无菌蒸馏水，再加入1ml的土壤样品，轻轻震动均匀。
3.制备平板：取富含营养的琼脂，于100℃高压灭菌后，冷却至50℃左右，倒入培养皿中，放置平板机中。
4.涂布：在培养皿表面均匀涂布1ml的上述稀释液，旋转培养皿，使其充分涂布。
5.反复稀释：将起初的土壤样品经反复稀释后，制备出稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，分别涂布至琼脂平板上，进行培养。
6.培养：将制作好的平板在恒温培养箱中，以30℃恒温培养48h。
7.观察：观察不同菌落形态、色泽，并执行数量统计和分析。
四、实验结果1.菌落计数和统计：通过实验，我们制备了稀释液100、1000、10000等多个浓度的稀释液，并分别涂布至琼脂平板上，进行培养。
培养后，我们对不同菌落形态、色泽进行观察，并进行数量统计和分析。
根据实验数据，我们得出了以下结果：（1）在稀释液100下，我们共计算出了50个菌落，其中以白色为主，数量较多；（2）在稀释液1000下，我们共计算出了12个菌落，数量明显下降，以黄色和灰色为主；（3）在稀释液10000下，我们共计算出了3个菌落，数量极低，以蓝色为主。
2.微生物多样性分析：根据实验结果，我们可以初步分析出不同细菌群落的结构和多样性。
稀释涂布平板法原理
稀释涂布平板法原理
稀释涂布平板法是以涂布平板（DPP）技术为基础，将蛋白质或碳水化合物稀释溶液均匀地涂布在一个平板上，再经过烘干以获得具有高灵敏度的蛋白质或碳水化合物样品的分析方法。
稀释涂布平板法的最终目的是通过检测样品中的活性，得到样品的成分及含量，从而有效获取分析结果。
稀释涂布平板法工艺主要包括以下几个步骤：首先，将蛋白质或碳水化合物标本稀释成相同浓度的溶液；其次，将溶液均匀的涂布在涂布平板上；再次，将涂布后的涂布平板放入烘干箱，以自动烘干室温至所需；最后，将稀释后的样品放入检测仪器，进行成分及含量的测定。
稀释涂布平板法的优点主要有以下几个方面：首先，样品涂布均匀且节省人工；其次，操作简单，快速方便；再次，样品分析灵敏度高，反应时间短；最后，可以连续分析数个样品，反复实验，提高分析效率。
稀释涂布平板法在生物医药分析领域广泛应用，已成为医药检测领域中不可缺少的分析方法。
在医学研究中，它可以用于检测血清中的抗体程度；在食品分析中，它可以用于检测食品中的污染物及添加剂；在医药制造中，它可以用于检测制剂中的有效成分含量。
稀释涂布平板法的应用不仅仅限于上述几个领域，还可以用于检测有机物，特别是有机污染物的检测。
例如，它可以用于检测水体中的微量有机污染物，如挥发性有机化合物和氯代烃；也可以用于检测
空气中的有机污染物，如多氯联苯、六六六和其他高毒有机物。
此外，它还可以用于检测土壤中的有机污染物，如多氯联苯、苯胺和其他有机物。
综上所述，稀释涂布平板法是一种快速、准确、可重复性高的检测方法，可有效地检测多种蛋白质或碳水化合物、有机污染物等物质，在生物医药领域得到广泛应用。
实验四、土壤中放线菌的分离
实验四、土壤中放线菌的分离一、实验目的1、从土壤中分离、纯化放线菌；初步掌握药用微生物的分离纯化方法和操作技术。
2、了解不同生境条件中土壤放线菌的种类与数量。
二、实验内容筛选放线菌永远是新抗生素研究的课题之一。
迄今为止，已发现的抗生素约有80%来自于放线菌。
土壤中放线菌最丰富，品种齐全。
通常情况下，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。
随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。
从堆肥或过热的材料中如干草或蔗渣中可分离到大量的嗜热放线菌，从淡水和海洋环境中可分离到嗜碱性的和嗜酸性的菌种。
土壤中含有的放线菌主要是链霉菌，人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌，如小单孢菌、游动放线菌、诺卡氏菌等，它们是生物活性物质重要的产生菌。
但往往由于样品中稀有放线菌的数量太少，常规的分离方法很难得到。
对样品进行风干、干热处理、培养基添加重铬酸钾等方法可以减少细菌和真菌的数量，以提高放线菌的获得率。
用干热和苯酚处理可减少链霉菌数量和比例的方法，可以分离得到更多种类的放线菌。
土壤中分离放线菌的方法很多，其中包括稀释法、弹土法、混土法和喷土法等，本实验主要采用稀释法来获得放线菌。
注：从土壤中分出的放线菌要进一步鉴别是否为抗生菌。
首先应根据筛选目的确定试验模型，然后利用培养基平板进行拮抗性测定。
常用的方法有琼脂块法和滤纸片法。
其主要依据是扩散原理，即观察在抗生菌周围是否会出现明显的抑菌圈。
抑菌圈的大小和透明度则表明了该菌株抗菌活性的强弱。
三、实验原理、方法和手段原理一：稀释涂布平板法；如图1。
原理二：对样品进行风干、干热处理以减少细菌和真菌的数量；原理三：向培养基添加适量的重铬酸钾能抑制其他细菌、真菌的生长，但不影响放线菌的生长。
图1 稀释涂平板法示意图四、实验组织运行要求根据本实验的特点、要求和具体条件，采用“采用集中授课形式，分组试验进行”的组织运行模式。
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实验概要
分离、纯化及初步鉴定土壤中的拮抗植物病原菌的放线菌。
实验原理
土壤是微生物的“天然培养基”，也是最丰富的菌种资源库，我们可以从中分离出众多放线菌，尤其是可以从耕作土壤中筛选出拮抗植物病原菌的放线菌。
以耕作有武运粳和苏沪香粳的土壤为样品，应用稀释涂布平板法分离各种微生物。
菌落计数后，通过菌落形态观察并挑取放线菌进行划线分离纯化，多次重复后得到单菌落。
在进行放线菌形态等初步鉴定后，将纯化的菌株接入斜面传代保藏。
最后，分离纯化的放线菌，初步鉴定其拮抗性。
拮抗植物病原菌的放线菌的分离纯化在农业增产、作物种植等方面都有着重要的意义。
主要试剂
1. 培养基：
高氏1号培养基、马铃薯葡萄糖培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基
2. 其他试剂：
银染液A液B液（细菌鞭毛染色） 40%KOH 5%α-萘酚（V.P.实验）
主要设备
培养皿
试管
锥型瓶
接种环
移液管
震荡器
电炉
载玻片
超净工作台
恒温培养箱
高压蒸汽灭菌锅
显微镜等
实验材料
土样：
苏沪香粳1，2组
杨稻6号93113，4组
武运粳5，6组
实验步骤
1.稀释涂布平板法(Spread Plate Method)
稀释涂布平板法是一种将菌体按比例制备成若干个稀释度，再分别经涂棒涂布培养而进行微生物分离纯化的方法。
(1) 倒平板；
(2) 制备土壤稀释溶液连续不断稀释，得到不同稀释度的土壤溶液；
(3) 涂布分别吸取三种稀释度菌液，均匀涂于培养基表面；
(4) 培养；
(5) 划线分离，直到获得纯培养。
2. 平板菌落计数法
平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。
此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
对每个平板上的菌落计数，计算每克或每毫升土壤样品中含有细菌、放线菌的数量。
公式如下：
菌体数量cfu/g（mL）土样== 同一稀释度重复的菌落平均数×稀释倍数
3. 平板划线分离法（Streak Plate Method）
平板划线分离培养法对混有多种菌的平皿，用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料,在无板表面进行平行划线和培养，使原来混杂在一起的菌种沿划线在琼脂平板表面分离，得到分散的单个菌落，以获得纯种。
(1) 倒平板；
(2) 划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述的土壤悬液一环在平板上划线，从而将样品在平板上进行稀释，形成单个菌落；
(3) 挑菌落同稀释涂布平板法，一直到分离的微生物认为纯化为止。
4. 插片显微观察法（放线菌）
插片培养法是实验室观察放线菌形态的一种基本方法，其步骤是：挑取青铜小单孢菌（Micromonospora chalcea）的少量孢子丝，将菌丝块接种于高氏一号培养基的中间，然后，用小镊子夹起一块无菌的盖玻片，以45度角的角度斜插入培养基中，不要插入培养基太深，让菌丝爬上盖玻片；于37℃下培养3～5天后，再用小镊子将盖玻片取出，显微镜下观察基内菌丝、气生菌丝和孢子丝的形状。
5. 斜面传代保藏法
斜面传代保藏法是指将菌种（细菌和酵母菌宜采用对数生长期细胞，放线菌和丝状真菌宜采用成熟的孢子）接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2-8℃的冰箱中保藏。
保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2-4个月，移种1次。
酵母菌2个月，移种1次。
细菌最好每月移种1次。
此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。
缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。
6. 放线菌形态观察
(1) 放线菌菌落观察
放线菌的菌落质地致密，表面呈紧密的绒状，或坚实、干燥而多皱。
由于基内菌丝长在培养基内，所以菌落与培养基结合较紧，不容易被挑起，或者被挑起后不容易破碎。
当孢子丝形成大量孢子布满菌落表面时，使菌落呈絮状、粉末状或颗粒状，而与细菌菌落判然有别。
此外，如用放大镜仔细观察，可以看见菌落周围有放射状菌丝。
(2) 放线菌主要通过形成无性孢子的方式进行繁殖。
其孢子丝成熟时，分化形成许多孢子，称为分生孢子。
分生孢子常具色素，呈白、灰、黄、橙黄、红、蓝、绿等颜色。