乳酸菌的筛选及应用
乳酸菌菌种的培养筛选方法
乳酸菌菌种的培养筛选方法
简介
本文档介绍了乳酸菌菌种的培养筛选方法。
乳酸菌是一种有益菌，常被应用于食品工业和医药领域。
通过培养筛选方法，可以有效筛选出优质的乳酸菌菌种，以满足特定需求。
培养基准备
1. 选择适合乳酸菌生长的培养基，如MRS培养基。
2. 按照培养基的使用说明准备培养基溶液。
3. 灭菌培养基溶液，可使用高压灭菌器或高温灭菌法。
菌种接种
1. 从已有的乳酸菌菌种中选择适合的菌株。
2. 取一定量的菌种，注意保持无菌操作。
3. 将菌种转移到培养基中，可采用无菌环或吸管接种法。
4. 将接种好的培养基培养物置于恒温培养箱中，保持适宜的温度和氧气条件。
筛选方法
1. pH值筛选：选择适宜pH范围的培养基进行培养，通常在
pH 4-6之间。
2. 温度筛选：通过调整培养温度来筛选适应不同温度的菌种。
3. 抗性筛选：将菌种暴露在一定浓度的抗生素中，筛选出对抗
生素具有抗性的菌株。
4. 发酵性筛选：观察菌种在培养基中发酵的能力，以选择产酸
产气能力强的菌株。
筛选结果评估
1. 观察培养基的菌落形态，如形状、颜色等特征。
2. 测定菌株的生长速度和产酸量等。
3. 利用分子生物学方法进行菌株鉴定，如PCR、16S rRNA测
序等。
结论
通过以上培养筛选方法，可以高效地筛选出优质的乳酸菌菌种。
根据特定需求，可以选择适应不同环境和具有良好生产特性的菌株，为食品工业和医药领域的应用提供基础支持。
以上为乳酸菌菌种的培养筛选方法的简要介绍，希望对您有所帮助。
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定食品是人类生活中不可或缺的一部分，而乳酸细菌则是食品产业中的重要组成部分。
乳酸细菌在食品加工过程中起着关键的作用，例如发酵乳制品、面包、啤酒等。
因此，筛选和鉴定食品中的乳酸细菌对于食品安全和质量的保障具有重要意义。
首先，筛选食品中的乳酸细菌应该从源头开始。
当我们选择原料时，应注意选择新鲜且有机的食材。
乳酸细菌通常存在于新鲜的奶制品、蔬菜和水果中。
因此，在生产过程中应该选择高质量的原料，以确保食品中含有丰富的乳酸细菌。
其次，对食品中的乳酸细菌进行鉴定也是非常重要的。
目前常用的方法有传统培养方法和分子生物学方法。
传统培养方法是通过将食品样品接种到乳酸菌富集培养基中，然后根据菌落形态和生理特性进行鉴定。
虽然该方法简单易行，但对于少数难以培养的乳酸细菌则无法准确鉴定。
分子生物学方法是近年来迅速发展的一种鉴定乳酸细菌的新方法。
这种方法基于对乳酸细菌基因组的分析，通过PCR、蛋白质电泳等技术手段来确定乳酸菌的种类和数量。
分子生物学方法具有快速、准确和高通量的特点，可以帮助我们更好地了解食品中乳酸细菌的情况。
此外，筛选合适的乳酸菌应具备以下特点。
首先，应具备较强的耐受性，能够在食品加工过程中存活和繁殖。
其次，应具备较好的产酸能力，确保食品发酵的质量和风味。
最后，应能够对食品中的有害细菌起到一定的抑制作用，从而保证食品的安全性。
乳酸细菌在食品发酵过程中起到的作用不仅仅是改善风味，还具有多种益处。
首先，乳酸细菌能够制造出多种有益物质，例如乳酸、对乳酸菌独有的多种抗菌物质等。
这些物质具有抗菌、抗氧化和免疫调节等作用，对人体健康有益。
其次，乳酸细菌可以帮助消化，改善肠道菌群的平衡，增加人体对营养的吸收。
此外，乳酸细菌还可以帮助降低肠道内有害菌的数量，提高人体的免疫力。
然而，在乳酸细菌的选择过程中也存在一些问题和挑战。
首先，不同种类的食品需要不同的菌株，因此我们需要根据具体产品的特点来选择适合的乳酸菌。
食品中乳酸菌的筛选与应用研究
食品中乳酸菌的筛选与应用研究导语：乳酸菌是一种对人体健康有益的微生物，被广泛应用于食品行业中。
而乳酸菌的筛选和应用研究也成为重要的科研领域。
本文将探讨乳酸菌的筛选方法以及其在食品中的应用。
乳酸菌筛选方法：乳酸菌的筛选是研究乳酸菌应用于食品工业的基础。
常见的乳酸菌筛选方法主要有以下几种：1.传统方法：传统方法基于菌落形态、生理生化特性以及抗生素敏感性等特征来筛选乳酸菌。
该方法虽然简单易行，但耗时耗力，且对菌落形态判断依靠人眼，存在主观误差。
2.分子生物学方法：基于分子生物学技术的乳酸菌筛选方法，利用PCR、DNA 测序等技术对乳酸菌的基因信息进行分析。
这种方法高效准确，但操作复杂、设备昂贵，对实验人员要求较高。
3.生物传感器方法：生物传感器方法通过构建感知器件来筛选乳酸菌。
例如利用表达乳酸菌特异性受体的细胞表面展示库进行筛选。
这种方法具有高通量、自动化的优势，但需要对感知器件进行改造，成本较高。
乳酸菌在食品中的应用：乳酸菌在食品工业中的应用研究广泛，可以应用于乳制品、面包、蔬菜发酵等多个领域。
1.乳制品中的应用：乳酸菌可以用于酸奶、乳酸菌发酵乳等乳制品的制作。
乳酸菌能够将乳糖转化为乳酸，使得乳制品呈现酸味，增加口感的多样性。
同时，乳酸菌还能够产生多种有益物质，如维生素K、抑菌肽等，对人体健康有益。
2.面包中的应用：乳酸菌在面包的制作中可以发挥酸性发酵作用，促进面团的发酵过程，改善面包的质地和口感。
同时，乳酸菌还可以降低面包的pH值，抑制一些有害菌的生长，提高面包的品质和保质期。
3.蔬菜发酵中的应用：乳酸菌可以用于腌制蔬菜，如泡菜、酸豆等。
乳酸菌能够降低蔬菜的pH值，抑制有害菌的生长，同时产生乳酸和其他代谢产物，为蔬菜增添风味。
结语：乳酸菌的筛选与应用研究在食品工业中具有重要意义。
采用不同的筛选方法可以得到各具特色的乳酸菌株，通过将乳酸菌应用于食品制作中可以改善食品的品质和口感，并增加对人体的健康获益。
食品中嗜酸乳酸菌的筛选与应用研究
食品中嗜酸乳酸菌的筛选与应用研究引言：食品安全和营养健康一直是人们关注的焦点。
乳酸菌作为一类益生菌，具有很强的生物活性和保健功能，被广泛应用于食品行业。
本文将讨论食品中嗜酸乳酸菌的筛选与应用研究。
第一部分：嗜酸乳酸菌的筛选方法自然界中存在海量的乳酸菌，包括嗜酸乳酸菌和耐酸乳酸菌。
嗜酸乳酸菌是指在低pH环境下可以快速生长和发酵的乳酸菌。
其筛选方法包括传统方法和分子生物学方法。
传统方法主要包括菌落计数法、筛选培养基法、生理生化方法等，而分子生物学方法主要包括PCR技术、16S rRNA测序等。
这些方法可以分离出具有鲜明特点的嗜酸乳酸菌菌株，为进一步的应用研究奠定基础。
第二部分：嗜酸乳酸菌在食品中的应用嗜酸乳酸菌在食品工业中有着广泛的应用前景。
首先，嗜酸乳酸菌可以应用于发酵乳制品，如酸奶、酸乳酪等。
通过嗜酸乳酸菌的发酵作用，乳制品不仅能延长保质期，还能增强其口感和营养成分。
其次，嗜酸乳酸菌还可以用于面包、饼干等烘焙食品的制作。
在这些制品中，嗜酸乳酸菌能够增加产品的口感、改善口味，并提高产品的质量和食品安全。
此外，嗜酸乳酸菌还可以用于肉制品的发酵腌制，如腊肠、腊肉等。
乳酸菌的发酵作用不仅可以提高产品的风味，还能促进蛋白质降解，增加产品的储存稳定性。
第三部分：嗜酸乳酸菌的保健功能研究嗜酸乳酸菌除了在食品加工中的应用外，其保健功能也备受重视。
嗜酸乳酸菌含有丰富的益生物质和乳果糖，能够改善肠道菌群结构，增强免疫力，同时还对抗肠道疾病有一定的预防作用。
此外，乳酸菌还具有排毒、抗氧化、抗菌等多种保健功效。
因此，人们开始将乳酸菌应用于保健品、营养补充剂的制作中，以满足现代人们对健康饮食的需求。
结论：食品中嗜酸乳酸菌的筛选与应用研究在食品工业中具有重要的意义。
通过选择适合的筛选方法，可以分离出优良的嗜酸乳酸菌菌株，并将其应用于食品工业中，以提高产品的质量和食品安全。
此外，嗜酸乳酸菌还具有丰富的保健功能，可以改善肠道菌群结构，增强免疫力，并对抗肠道疾病。
【课件】乳酸菌的筛选及应用PPT
2、筛选过程
样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适 的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙 圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单 菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏 阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。
（二）溴甲酚绿指示剂法
1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长
3、 双歧杆菌
样品来源：婴儿新鲜粪便 培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、
PTYG培养基
培养温度：37℃ 需氧情况：严格厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法
第三部分、乳酸菌的应用
一、乳酸菌的生理功能
①维持肠道菌群的微生态平衡； ②增强机体免疫功能； ③预防和抑制肿瘤发生； ④提高营养利用率、促进营养吸收； ⑤控制内毒素、降低胆固醇； ⑥ 延缓机体衰老。
聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学 合成方法聚合而成的一种高分子材料，它无毒、无 刺激性。
聚乳酸制品废弃后在土壤或水中，30天内会在 微生物、水、酸和碱的作用下彻底分解成CO2和H2O， 不会对环境产生污染，因而是一种完全可生物降解 的材料。
（2）聚乳酸的生产过程
目前聚乳酸的生产和制备主要有：
（4）前景
PLA作为一个新型的医用、生物可降解塑料在 我国有广阔的市场发展前景。生物降解塑料大多数 是天然高分子与常用塑料复合体系，或基于天然高 分子(主要是淀粉、纤维素)的改性。
PLA合成直链脂肪族聚酯，在医用领域是最重 要的可降解高分子材料，已越来越受到重视。PLA 树脂替代现有降解材料已成为市场发展的必然趋势， 并具有与烯烃类聚合物竞争的能力，“绿色生态塑 料”的市场前景将十分看好!
3、明串珠菌属（Leuconostoc）
乳酸菌菌种的分离筛选原理
乳酸菌菌种的分离筛选原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，广泛应用于食品、饲料、医药等领域。
乳酸菌菌种的分离筛选是乳酸菌应用研究中的重要一环，其目的是从大量的混合菌群中筛选出具有优良特性的菌株。
乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括以下几个方面：1. 选择合适的培养基：乳酸菌菌种对营养要求较高，因此选择适宜的培养基是分离筛选的首要步骤。
常用的培养基有MRS培养基、DC培养基等，它们含有适宜乳酸菌生长的营养成分，能提供所需能量和营养物质。
2. 适宜的培养条件：乳酸菌对培养环境的温度、pH、氧气和二氧化碳等条件有一定要求。
通常情况下，乳酸菌分离筛选需要在适宜的温度（一般为30-40）下进行，pH值保持在4.5-7.0之间，氧气和二氧化碳含量适中。
3. 分离方法：乳酸菌菌种的分离常采用传统的分离培养技术，如层析法、稀释平板法、摇瓶培养法等。
其中，层析法是一种常用的快速分离方法，通过将混合菌群在筛选培养基上涂抹或刺激，使不同菌株在筛选培养基上形成分离的菌落。
4. 鉴定鉴别：乳酸菌菌种的筛选与鉴定是不可分割的一步，只有确定菌株的种属和特性才能真正确认其乳酸菌的菌种类型。
目前，常用的鉴定方法包括形态学观察、生理和生化特性检测、分子生物学方法（如PCR技术、16S rDNA序列分析）等。
在乳酸菌菌种的分离筛选过程中，还需要注意以下几个问题：1. 选择样品：样品的选择对于乳酸菌菌种的分离筛选至关重要。
通常情况下，从乳制品、肠道、土壤等环境中寻找潜在的乳酸菌菌种，可以提高分离到优良菌株的几率。
2. 优化培养条件：对于特殊的乳酸菌菌种，可能需要优化培养条件，如调整温度、添加特定的营养成分等，以促进其生长和繁殖。
3. 评价筛选结果：乳酸菌菌种的分离筛选结果需要综合考虑其特性和应用价值。
如菌株的酸奶生产能力、耐酸碱能力、抗菌能力、抗氧化能力等。
总结起来，乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括选择合适的培养基和培养条件、采用适当的分离方法和鉴定鉴别技术。
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程1. 引言1.1 背景介绍乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们能够以乳酸为代谢产物进行无氧发酵，并且在食品工业、农业和医学领域具有重要的应用价值。
乳酸菌不仅能够促进食品品质的改善和保鲜，还对人体健康具有积极影响。
然而，目前市面上存在许多商业化的乳酸菌制剂，其有效成分及效果并不尽相同。
因此，研究和筛选出优质活性的乳酸菌种类，具有重要意义和广阔前景。
1.2 研究意义本研究旨在通过分离与筛选方法得到高活性的乳酸菌。
通过该研究可以加深我们对乳酸菌及其作用机制的理解，并为特定领域如食品工业、农业等提供先进的技术支持和解决方案。
此外，筛选出具有优良特性的乳酸菌株也将为开发新型功能性食品、生物农药等领域的产品提供重要支持。
因此，本研究对于推动食品工业、农业发展具有积极意义。
1.3 实验目的本实验主要目的如下：- 收集和处理样品：收集富含乳酸菌的样品，并经过适当处理以提高分离效果。
- 选择与制备分离培养基：根据乳酸菌的特性选择适合的培养基并进行制备。
- 设定分离培养条件：通过调控温度、pH值等参数，确定适宜的乳酸菌分离培养条件。
- 鉴定活性乳酸菌指标：确定评价乳酸菌活性和质量的指标，并进行相关试验和检测。
- 设计与实施筛选试验：根据所选指标设计筛选试验，并在实验中采用相应方法进行实施。
- 可行性评估与结果分析：对筛选试验结果进行评估和分析，并总结可行性及相关优化建议。
通过以上实验流程，我们旨在深入了解乳酸菌的特点及其在不同领域中应用潜力，并为进一步研究和开发具有市场竞争力的乳酸菌产品提供理论和实践基础。
2. 乳酸菌的分离方法2.1 样品收集与处理在乳酸菌的分离研究中，样品的选择和处理十分重要。
我们可以选择不同来源的样品，如发酵食品、生态环境等。
收集样品后，需要进行适当的处理以消除非目标微生物对于乳酸菌生长和筛选的干扰。
常见的样品处理方法包括冷藏、过滤、稀释等。
2.2 分离培养基选择与制备为了促进乳酸菌的分离和生长，在实验中需要选择适宜的分离培养基。
食品中乳酸菌的筛选与活性鉴定
食品中乳酸菌的筛选与活性鉴定乳酸菌是一类对人体健康具有益处的细菌，在许多食物中都可以找到它们的踪迹。
从酸奶到发酵食品，乳酸菌都发挥着重要的作用。
然而，如何筛选出具有较高活性的乳酸菌，并对其进行鉴定，这是一个令人感兴趣的话题。
首先，我们需要选择适当的食品样本进行筛选。
常见的食品包括酸奶、奶酪、纳豆等发酵产品。
这些食品中含有大量的乳酸菌，因此是我们进行筛选的理想选择。
此外，还可以考虑其他一些食物，如蔬菜和肉类，它们也可能含有乳酸菌。
接下来，我们需要从样本中分离出乳酸菌。
这可以通过培养基选用和分离培养来实现。
培养基的选用非常重要，它应提供乳酸菌所需要的营养物质。
我们可以选择常用的乳酸菌培养基，如MRS培养基。
通过将样品接种于MRS培养基中，我们可以让乳酸菌生长并形成可见的菌落。
然后，通过将这些菌落转移至其他培养基中，可以进行单菌落分离，确保我们获得的是纯种的乳酸菌菌株。
鉴定乳酸菌的活性也是我们的重点之一。
活性乳酸菌可以产生乳酸、酶和抗菌物质，这些物质对人体健康有益。
因此，我们想要筛选出活性较高的乳酸菌菌株。
常见的活性鉴定方法包括测定乳酸产量、酶活性和抗菌活性。
乳酸产量是乳酸菌活性的重要指标之一。
我们可以通过高效液相色谱法（HPLC）来测定乳酸的含量。
通过将培养基或发酵物转移到HPLC系统中，我们可以分析出乳酸的浓度。
通过与不同菌株之间的比较，我们可以确定哪些菌株产乳酸的能力更强。
酶活性是另一个衡量乳酸菌活性的重要指标。
乳酸菌常常能够产生多种酶，如蛋白酶和纤维素酶。
我们可以使用相应的酶活性试剂盒来检测其酶活性。
高酶活性的乳酸菌意味着它们能够更好地消化蛋白质和纤维素，从而提高食物的可消化性和营养吸收能力。
除了乳酸和酶活性外，抗菌活性也是评估乳酸菌活性的重要指标之一。
乳酸菌可以产生抗菌物质，对抗病原菌的侵袭。
我们可以通过抗菌活性试验来评估乳酸菌的抗菌能力。
将不同乳酸菌菌株与病原菌一起接种在琼脂平板上，观察是否形成抑制区域。
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2、乳酸菌在医药中的应用
（1）乳酸菌素；（2）γ -氨基丁酸(GABA)
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3、开发可降解的聚乳酸塑料
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（1）聚乳酸（PLA）简介
落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。
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（三）几种乳酸菌筛选举例
1、嗜热链球菌
样品来源：市售酸奶 培养基： M17改良培养基
培养温度：42℃
需氧情况：兼性厌氧
筛选方法：常规的稀释涂布
和划线分离
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2、 保加利亚乳杆菌
样品来源：市售酸奶
培养基：牛肉浸膏 1.5％，酵母浸膏 0.5％，葡萄糖 3.0％，柠檬酸三铵 0.2％，七水硫酸镁 0.02％，琼 脂 1.5％，pH 5.1。 培养温度：42℃
二、筛选方法
（一）溶钙圈法
利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生 CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用 于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是： ①鉴别能产生酸的细菌； ②中和产生的酸，以维持培养基的PH。
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1、乳酸菌筛选培养基（MRS培养基）
配方（1L）:
形态：细胞呈多样形态：Y字形、
V字形、弯曲状、勺形，典
形形态为分叉杆菌
运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：专性厌氧
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5、片球菌属（Pediococcus）
形态：细胞球形，成对或四联状
排列
运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧
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第二部分、乳酸菌的筛选 一、乳酸菌的分布
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（4）前景
PLA作为一个新型的医用、生物可降解塑料在 我国有广阔的市场发展前景。生物降解塑料大多数 是天然高分子与常用塑料复合体系，或基于天然高 分子(主要是淀粉、纤维素)的改性。
PLA合成直链脂肪族聚酯，在医用领域是最重 要的可降解高分子材料，已越来越受到重视。PLA 树脂替代现有降解材料已成为市场发展的必然趋势， 并具有与烯烃类聚合物竞争的能力，“绿色生态塑 料”的市场前景将十分看好!
需氧情况：兼性厌氧
筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法
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3、 双歧杆菌
样品来源：婴儿新鲜粪便
培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、
PTYG培养基
培养温度：37℃
需氧情况：严格厌氧
筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法
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第三部分、乳酸菌的应用
1、乳酸菌在食品、饮料中的应用
聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学合 成方法聚合而成的一种高分子材料，它无毒、无刺 激性。 聚乳酸制品废弃后在土壤或水中，30天内会在微 生物、水、酸和碱的作用下彻底分解成CO2和H2O， 不会对环境产生污染，因而是一种完全可生物降解 的材料。
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（2）聚乳酸的生产过程
目前聚乳酸的生产和制备主要有：
形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列
运动性：一般不远动
营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型
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3、明串珠菌属（Leuconostoc）
形态：细胞球形或豆状，成
对或成链排列
运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型
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4、双歧杆菌属（Bifidobacterium ）
①直接聚合法；
②间接法；
③聚合法。
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（3）聚乳酸的应用
①医用领域：如生产一次性输液用具、免拆型手术缝 合线、骨科用固定件及手术器件、医用支架、生物 导管等； ②包装材料：目前，各种包装材料是聚乳酸最大、最 有潜力的应用市场。适合于加工一次性饭盒以及其 他食品、饮料等外包装材料等； ③纤维：聚乳酸纤维是由聚乳酸经常规纺丝工艺制得 的生物合成纤维，可制成复丝、单丝、短纤维、针 织物、非织造布等，还可用作建筑材料、农业用材 等。
乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养菌。 生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的 环境中。具体如下： （1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等；
（2）பைடு நூலகம்植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实 损伤部位等；
（3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等； （4）乳酸饮料：酸奶等。
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蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母提取物 5.0g， K2HPO4 2.0g，柠檬酸三铵 2.0g，乙酸钠 5.0g，葡萄糖 20.0g，吐温80 1.0mL，MgSO4· 7H2O 0.5g，MnSO4· 4H2O 0.25g
配制：
1.调PH至6.2～6.4； 2.称取20g CaCO3加入到100mL蒸馏水中，制成CaCO3 乳浊液； 3.将MRS培养基和CaCO3乳浊液分开灭菌； 4.倒平板前，待培养基融化冷却后，平板上加入一定量 的CaCO3乳浊液，晾干了以后再接种。
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2、筛选过程
样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适
的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶
钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起 单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰 氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。
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（二）溴甲酚绿指示剂法
1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌
乳酸菌的分离筛选
乳酸菌的分类 乳酸菌的筛选 乳酸菌的应用
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第一部分、乳酸菌的分类
1、乳杆菌属（Lactobacillus）
形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状,一
般成链状排列 运动性：通常不运动，有的能
够运动,具有周生鞭毛。
营养类型：化能异氧型
需氧情况：微好氧性
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2、链球菌属（Streptococcus）
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