血清药理学方法体外实验系统的血清添加量问题
中药血清体外药效研究存在的问题与对策
·研究生园地·中药血清体外药效研究是近年来中药研究新的发展趋向，它模拟中药在体的吸收、转化、代谢的过程，通过采集动物含药血清，进行相关的体外药效学研究。
近年来的研究取得了一定进展，也日益引起人们关注。
但由于处于探索阶段，其理论体系和操作规范还有待完善。
本文就中药血清体外药效研究中关于中药制剂质控与含药血清药效稳定性、血清供体动物选择、给药方案与量时效、含药血清采集与处理等方面研究存在的问题与当前相应的处理对策进行概述，并抛砖引玉提出几点建议。
1中药制剂质控与含药血清药效稳定性中药制剂的质控与药效稳定性是血清药效研究的前提与基础。
体外试验反应灵敏，如果中药成分含量变化过大，则药效重复性差，难以准确地反映其药理机制。
受试药物的质控包括药材与制备工艺两个方面。
药材的质控包括种属、产地、药用部位、采收加工与含量测定等，其中成分含量测定是核心。
虽然中药成分繁多、含量低微，检测困难，但是这些化学物质成分是决定药效的重要物质基础，体外试验用量少、敏感性强，成分含量的相对稳定对于血清药理实验具有重大意义。
尽管难以弄清楚每种成分，但应尽可能对复方中各药物的主要成分建立检测质控标准。
且制备工艺必须稳定，尽量“纯化”复方粗提物，减少杂质等的影响［1］。
2血清供体动物选择不同种属、年龄、性别的血清供体动物对药物敏感程度不一样，这些因素都可能影响供体动物对中药制剂中不同组分的吸收、转化、作用靶点的相异［2］。
因此实验动物的种属和年龄性别的选择有待规范。
目前中药血清学研究的文献报告中，几乎都是选用家免、大鼠等成年正常动物来制备含药血清。
家免、大鼠存在单只血清采集量少，近年来有文献报道及我们的研究采用比格犬制备含药血清。
该动物较温顺，灌胃给药饲养方便，单只血清采集量多，血清成分与小牛血清相近，因而可能也是血清供体动物较好的选择。
但是，无论选择何种动物，用异种动物血清加入异种来源的细胞，可能会因免疫反应而影响实验结果。
中药血清药理实验方法
★★如果以不同剂量的药物给予动物，取同 体积的血清作为不同剂量药物加入体外反应 系统，则空白血清对照组可只设一组，（等 体积的空白血清）； ★★如果以一种剂量给予动物，以不同体积 的药物血清加入量作为不同剂量组，则空白 对照组应设相应不同加入量的多个对照组。
中药血清药理实验的几个关键技术
4.7.2平行研究
中药血清药理实验的几个关键技术
4.3采血时间
★★标准法 先用少量动物进行预试验，通过不同采血时间进 行比较后确定最佳采血时间。 这种方法得到的结果较为确切，但个体性较强， 同一种药物的不同指标或同一种指标在不同的药物的 达峰时间都不同，所得结果不能通用。
中药血清药理实验的几个关键技术
★★通法 将待测药每天给药2次，连续给药3d，末次给药 后1h采血。
Ⅰ
在实际操作中可以先按通法给药、采血， 如不能得到预期结果，疑为采血时间不当， 再采用标准法确定最佳采血时间。
中药血清药理实验的几个关键技术
4.4 血清预处理
4.4.1什么情况下需要预处理？
★★当空白血清出现显著的阳性反应，严重干扰实 验进行时。 ★★浴槽内的离体器官实验，特别是当浴槽中加入 血清量较多，通氧时形成的大量泡沫，严重妨碍实 验进行时。
中药血清药理实验方法若干问题探讨
谢 谢 大 家
中药血清药理实验的几个关键技术
★★临床日用量倍数法
以临床日用量的5， 10，30倍确定给药剂 量；或以整体模型动物的有效剂量（即为临 床成人剂量的8－18倍量）确定剂量为妥。
中药血清药理实验的几个关键技术 4.2.2 给药次数与时间间隔
★★单次加倍给药法 ★★2次给药法（第1次给药后2h，再以相同剂量重 复1次） ★★3次给药法（连续给药3次，第l间隔20h，第2间 隔4h） ★★7-10d法(1次/d，连用7-10 d） 由于中药及其复方成分复杂,半衰期很难测定,所 以7～10d给药为权宜之计。
中药血清药理学实验方法研究进展
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（７）：９１－９８．
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Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９８８，２３
（收稿日期：２００８－１０－２２）
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Ｂｕｌｌ，１９９２，钧（５）：１３３５—
给药前禁食饮食可能影响中药复方体内动力学和临
床疗效。如食物对口服小柴胡汤者体内甘草甜索、甘草次酸 和黄芩素等的吸收影响明显…。因此应根据中药复方的功 效特点、实验要求，决定给药前禁食与否，并拟订给药后采血 时间。目前，给药前实验动物多禁食６—１２ ｈ，不禁水旧ｏ。 ２．２给药剂量以临床等效剂量为基准，注意适当控制药 物剂量。计算方法包括临床等效剂量、临床常用量×动物等 效面积系数×培养基内血清稀释度，或临床Ｅｔ用量的５、１０、 ３０倍¨３等。对过高剂量（如临床等效剂量５倍或１０倍等） 所得阳性结果，下结论时应慎重或留有余地¨１。 ２．３给药次数包括１次给药Ｂ ｏ；２次给药（间隔２ ｈ或４ ｈ）；１—２次／ｄ，连续３ ｄ¨ｏ；１次／ｄ，连续７～１０ ｄ等。中药复 方制剂的有效化合物含量较低，作用广泛而缓和，可调节机 体多系统功能，起效相对较慢，故ｌ临床用药时间相对较长。 单次给药较多次给药药理活性明显低，或单次给药制备的含 药血清产生作用的给药剂量极大（临床等效剂量５倍以 上）。如单次予桂枝汤水煎剂后１、２、３ ｈ采集的含药血清及 正常血清均有显著抑制副流感病毒Ｉ型致病变作用，且两者 无显著差异，说明血清产生的药效不全是药物作用的结果， 主要是正常血清本身含有的抗病毒成分所致。因此单次给 药后ｌ、２、３ ｈ采血方式不能反映药物本身在体内的作用规 律。每日１次连续３ ｄ给药后采血的方式可反映药效产生 的时间点，突出含药血清本身的作用，基本排除正常血清对
中药体外药效试验新的加药方法的设想
时珍 国医国药 ２ ０ ０７年第 ｌ ８卷第 ８期
ＬＳ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ Ｓ Ａ Ｃ ０ Ｖ Ｌ １ Ｎ ． Ｉ Ｚ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ２ ７ Ｏ ．８ Ｏ８ Ｈ ０
体外药理实验具有快捷 迅速 、 敏感特异 、 条件易控等优点 ， 在 应用不少 ， 但该 系统与药 物的分 离没有肝 微粒体 容易。 目前 药物筛选 、 毒理评价 与深入 的细胞分 子药效 等研究 中起重 要作 采用较 多、 法较 成熟 、 果重 现 性好 的 要数肝 微 粒体 代谢 系 方 结 用 。和大多数化学 药不 同， 中药 （ 包括单 体和／ 复方 ， 同） 或 下 成 统 。该系统主要优点 有 ： 谢过 程易于 控制 ； 代 操作 简便 ； 代 分复杂 ， 内代谢过程不清楚 ， 体 药效成分不明确 ， 以何种形式加入 谢率高 ； 代谢体系 比较纯 净 ； 更重要 的是通过 差速离心技术 易与 到体外药效实验的反应体系中是 中医药研究者感到头痛 的问题。 其它化合物分离 ， 比较符合对体外代谢 系统的要求 。 因为 目前的两种药物添加方式 ： 添加 和含药血清添加都有一 直接 最初体 外肝微粒体代谢系统并 不是为 中药体外药效实 验而 定 的弊端… 。由于很多 中药是药 效活性 和毒性 成分 的前体 ， 直 设 ， 故直接将该系统 搬来 ， 让其与 中药共育 ， 直接将代谢系统 与中 接添加方式虽药物体系较纯净 ， 能较稳定地 进行药物量 效观察 ， 药的混 合物一起加入体外实验体 系中是不适宜的 ， 因为代谢系统 但不能反应药物在体 内经 生物转 化后起 作用 的真实 药物成 分。 本身可能对 药效实验产生影 响。如何 去除代谢 系统对体外 实验 采用血清药理学方法制备含药血清进 行体 外药效实验 克服 了直 的影响以及如何使原代谢系统更好 地满足成 分复杂的 中药 的代 接添加方式 的不足 ， 一度受到推崇 。但随着研究 的深 入 ， 发现该 谢要求 ， 是这种新方法要解决的关键问题 。 目前 尚未见到国内外 方法同样存在 问题 Ｊ血清成分 复杂 ， 清中固有成分 对体外药 有 去除方法及对 中药与肝微粒体共育这种加药方式研究 的报道。 ： 血 效实验的影响可能会超过药物本身 ； 反应体系 中的药物浓度很难 我们从 １９ ９ ９年开始 ， 将肝 ｓ ９作为代谢 系统与 中药共育进行体 外 达到有效的血药浓度等。以致于在无 更佳选择 的情况下 ， 直接加 药效实 验， 做了一些尝试性中药与肝微粒体共育这种新的加药方 药方式的应用 近来有上升趋势 。ＭＥ ＬＮ Ｄ Ｉ Ｅ近四年收录的 中药体 式具有重要意义 。首先 ， 可以打破由加药方式而导致 的中药体外 外实验的文章全部采用直接加药法。 目前 的现状是 ： 无论采取两 药效实验广泛应用受限的局 面， 使体外实验深入研究中药药效成 种加药方式的哪一种 ， 中药体外药效实验得出的结 果往往受到质 为可能 。更重要的是 ， 采用中药与肝微粒体共育这 种加药方式进 疑， 严重阻碍 了体外实验方法在 中药药效研究 中的应用 ， 对深入 行体外 实验 ， 现重要的药效作 用后 ， 以在相 同的代 谢条件下 发 可 揭示中药的作用机理极为不利 。 获取 大量药物 （ 母体和／ 代谢产物 ） 进行化学 分析 ， 出药效 或 ， 找 许多外来化合物也是以毒性 的前体形 式存在的 ， 毒理学在研 成分。因为从体外代谢 系统 获得大量代谢 产物要 比从 含药生物 究它们的致 癌 、 致畸 、 突变时 ， 用 了体外 代谢 活化 系统 （ 致 采 肝 样 品（ 、 血 尿等 ） 中容易得 多。中药与肝微 粒体共 育犹如一 架桥 ｓ） ９ 来模拟体内过程 。能否借鉴毒 理学研究方法 ， 国际上 公认 梁把 药 物 效 应 与 相 应 的物 质 基 础 联 在 了一 起 ， 药 效实 验 与 药 物 将 把 的体外代谢 系统引入中药体外药效实验中来 ， 建立一种新 的加药 化学分析联在 了一起 ， 对寻找中药药效物质基础有深远 的意义 。 方式 ， 使之取 上述两种加药方式之 长， 并避免 它们 的不足正 是众 参考文 献 ： 多致 力于该领域研究人 员所苦苦寻求 的方法。新加药方式 的设 ［１ 刘成海．中药复方体外药效研究思 考 ［］ ］ Ｊ ．中药新药 与临床药理 ， 想是 ： 中药与体外代谢系统温孵一定时 间后 ， 中药（ 将 母体 和／ 或 ２ ０ ， １ １ ：３ ０ ０ １ （ ）５ ．
中药含药血清制备的思考与探讨
中药含药血清制备的思考与探讨作者：郭迎超梁爽周波来源：《云南中医中药杂志》2021年第09期摘要：中药含药血清作为干预手段在中药药理研究体外实验中越来越受到广大科研工作者的重视，并取得一定的进展。
科学、严谨、标准的实验设计方案贯穿于整个中药含药血清制备的全过程，直接影响到血清中药物有效成分的含量、活性等，对于模拟中药在体内真实药理活动过程至关重要，也是中药及复方体外实验研究取得成功的关键点。
基于课题组在进行中药复方养营活血汤含药血清制备的过程中，查阅相关文献及制备方法，对中药含药血清制备进行详细的梳理，并提出一些见解，以飨同道。
关键词：含药血清;制备方法;研究中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2021）09-0051-05中药含药血清是指根据实验设计的需要用中药（单味或复方）按照一定的剂量、规定的剂型（大多用中药煎汤）和预定的给药次数、给药时间等对特定的动物如大鼠、小鼠、豚鼠和兔等进行灌胃后，选择适宜的采血法在拟定的时间内采集动物的血液并对其进行分离，最后得到的含有药物本身、药物代谢产物、活性成分、杂质成分和一定酸碱度变化等的血清复合物。
中药含药血清是用于代替原药物的粗提物作为供试材料进行体外实验的，其可避免中药复方粗提物本身的理化性质等对实验结果的干扰[1]。
1 中药含药血清制备的研究现状1.1 动物种属的选择中药含药血清的制备首先要考虑供体动物的选择，不同种属、年龄的动物对药物吸收也不相同，因而造成血药成分、浓度的差异[2]。
有报道因药物不同、被采血动物的种属差异及同一种属间的个体差别而获得的含药血清中各种因子含量也不尽相同，并由此在后续的试验中可能会影响到细胞贴壁[3]。
所以，欲获得合理可信的实验结果，必须在一开始就有较为合理的实验设计。
动物种属的选择要求同质性。
所谓的同质性即含药血清的供体动物需要与体外试验用的离体器官、组织和细胞的供体动物能够保持统一的标准，只有在标准相同的前提下实验结果才最有意义。
中药血清药理方法学的研究概况
中药血清药理方法学的研究概况柯玮;朱建华【摘要】中药血清药理学是指将中药、中药复方以及不明成分的药物给动物灌服一定时间后,采集动物血清,用此含药成分的血清进行体外实验的一种实验方法学.本文就该方法学在动物选择、给药方案、含药血清的处理等方面的研究进展进行综述,阐明了血清药理学在中药药效研究的重要性.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2011(009)006【总页数】2页(P24-25)【关键词】血清药理学;给药方案;血清处理;采血时间【作者】柯玮;朱建华【作者单位】皖南医学院医学三系,安徽芜湖241002;皖南医学院医学三系,安徽芜湖241002【正文语种】中文【中图分类】R285由于中药粗制剂中含有大量杂质，另外，中药作用人体后发挥作用的具体成分不详，若直接加入体外反应系统，其pH、鞣质、无机盐等许多非特异性理化因素，都会干扰实验，产生假阳性或假阴性结果；另外，中药口服后其有机成分在胃肠内会受到消化液和肠道菌微生态转化，特别是苷类化合物，其糖基使之不易从肠道吸收，肠道菌使苷分解，释放的苷元易被肠道吸收而成为真正产生药效的物质。
所以中药直接用于体外实验因其科学性较差，难以得到认可。
而血清药理学的实验方法克服了这些问题。
血清药理学是指将中药、中药复方以及不明成分的药物给动物灌服一定时间后，采集动物血清，用此含药成分的血清作为药物源加入离体反应系统中研究其药理作用的实验方法[1]。
血清药理学是日本学者Hiroko Iwama在1984年第一届和汉医学会上首次提出的，近年来，我国越来越多的中药专家应用此法来研究中药药理作用。
从而避免了中药体外用药的干扰，直接反映中药及其代谢产物的药理作用。
本文就关于血清药理实验的报道加以综述。
1 实验动物的选择常用实验动物为小鼠、大鼠，也可用兔、豚鼠等。
不同种属的动物血清成分不同，所以应尽量选用与人类生物学特性近似的物种[2]，从而缩小动物血清和人类血清在生理、生化等状态下的差异，减少因种属差异而造成的免疫反应，提高实验结果的可靠性[3]。
关于血清的一些问题
实验室里常会遇到的关于血清的问题1.血清的运用领域血清：离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩释出的液体，即血清。
血清可以抗病毒,增强抵抗力血清属于生物制剂.小牛血清含在离开母体后自身产生的一些代谢物质，当然也包括一些生长激素，而胎牛血清绝大部分的物质来自于母体。
血液凝固析出的淡黄色透明液体。
如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。
凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。
在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。
而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。
这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。
这些也都是与血浆区别之处。
但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。
为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。
血清(serum)细胞培养的发展，培养基的质量又是关键，而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。
在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的，所以血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。
保证血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
1.血清种类:目前用于组织培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。
选择用牛血清培养细胞的原因：来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。
牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。
牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。
胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。
显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
中药血清药理学方法的研究进展
中药血清药理学方法的研究进展陈宁;宋冬雪;凌娜;徐昶儒【摘要】目的:阐述中药血清药理学在中医药基础研究中的进展,探讨如何确立最佳实验方案,为中药复方药理作用研究提供科学可靠的实验方法.方法:通过查阅文献,主要从血清药理学方法中的实验动物、给药途径、剂量、方案、采血时间、血清灭活与保存、血清添加量和对照组的设立等方面进行阐述.结果:随着血清药理学研究方法的不断细化和完善,使中药及其复方这种复杂药物的研究具备更强的可信性和科学性.但是该方法实验技术的操作方法尚待规范,同时,其在注重研究药效的基础上也应该对血清中的有效成分进行分析.结论:中药血清药理学在抗肿瘤、心血管、免疫、消化系统等方面都得到充分应用,如对其缺陷加以改进,定能为中药研究的发展探索出一系列新的科学方法.【期刊名称】《北京联合大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(028)001【总页数】4页(P40-43)【关键词】血清;体外实验;中药复方;实验方法【作者】陈宁;宋冬雪;凌娜;徐昶儒【作者单位】哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,哈尔滨 150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,哈尔滨150076;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,哈尔滨 150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,哈尔滨150076;黑龙江省农业科学院信息中心,哈尔滨 150086;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心,哈尔滨 150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,哈尔滨150076【正文语种】中文【中图分类】R285长期以来，中药药效的研究一直都是用体外实验结果代表药物的体内药效，存在一定的偏差和不确定性。
由于中药的化学成分较为复杂，包括有效成分和一些其他成分，如果将中药直接加入体外系统，会使其渗透压、酸碱度等理化因素发生改变而影响实验结果。
另一方面，由于体内肝脏的代谢酶系统对药物的代谢以及胃肠道菌群对药物中各种成分吸收程度的差异，都会导致中药体外实验结果与体内实验结果不一致，无法完全再现药物在体内的表现，难以反映实验研究的可靠性、客观性和精确性。
中药药理学考试题
2013届研究生考试题一、什么是血清药理学？试述该研究方法的优点与应用。
答：（1）血清药理学是指将中药或中药复方经口给动物灌服一定时间后采集动物血液、分离血清，用此含有药物成分的血清进行体外实验的一种实验技术。
1984年由日本学者首次提出，国内90年代初开始探索，近10年来越来越多地应用于中药药理的研究。
（2）中药血清药理学的优点：1.可以排除中药复方粗制剂本身理化性质的干扰。
中药粗制剂中含有的各种电解质、鞣质、不同的pH值、渗透压等都会在一定程度上给中药复方研究带来干扰。
2.避免了直接体外实验可能得出的错误结论。
含药血清含有中药制剂真正有效成分，克服了中药制剂的体内代谢物或机体反应物等有效成分引起的假阴性及机体非吸收物质的体外作用造成的假阳性，真实体现了复方药物的体内生化转化效应。
3.可以真实的反映体内血药浓度及其变化，是研究中药药动学的有力工具。
4.实验结果与在体实验有较好的一致性，能够通过有效成分在血中的动态变化更好地反映中药复方的配伍原则和药物的量效关系；而且还能反映有可能由药物诱导机体内源性成分所产生的作用及中药和其可能的代谢产物的药理作用，为复方制剂的药理研究奠定了基础。
5.采用含药血清培养细胞，便于应用细胞学和分子生物学手段，从基因、基因产物、药物受体和酶活性等诸方面阐述药理机制。
6.操作相对简单，费用较低。
7.使现代科学技术与传统医学有了一个切实可行的结合点，推动中医中药的科技进步。
(3)应用：1.对神经系统作用的研究,例如王宁宁等通过对癫痫大鼠给予复方中药提取物，分离血清，将含药血清加到癫痫大鼠离体海马脑片系统进行研究，证明复方中药的抗癫痫作用。
杨胜等应用血清药理学和电生理方法研究六味地黄汤益智作用的机理。
2.对心血管系统作用的研究，例如刘红等观察家兔灌胃给予生脉散后，其含药血清对豚鼠离体工作心脏血流动力学的影响，结果表明生脉散含药血清具有正性肌力和负性频率作用。
3.对呼吸系统作用的研究例如有学者利用中药血清药理学的方法，对豚鼠用药后取血清，观察用血清处理后的豚鼠离体气管条受氯化乙酰胆碱(Ach)诱发的收缩情况，结果表明中药循经敷贴法有预防哮喘的作用。
哮喘外敷方的豚鼠血清药理学实验
药学服务与研究ＰｈａｒｍＣａｒｅ＆．Ｒｅｓ２００８Ａｕｇ；８（４）李祠；群．等．哮喘外敷方的豚鼠血清药理学实验・２４９・哮喘外敷方的豚鼠血清药理学实验李袢群，沈惠风’（上海交通大学医学院附属仁济医院中医科。
上海２００１２７）・论著・［摘要］目的：采用血清药理学方法考察哮喘外敷方的抗乙酰胆碱作用。
方法：４０只豚鼠随机分为正常对照组、模璎对照组、中药贴敷１ｄ，７ｄ和１４ｄ组。
以Ｈｕｌｓｏｎ法诱导哮喘模型。
模型对照组贴敷生理盐水，中药贴敷组贴敷中药膏（１ｄ、７ｄ和１４ｄ）。
测定各组豚鼠血清对离体气管条收缩力的影响。
结果：中药贴敷１ｄ组和空白对照组与模型对照组无显著性差异，中药贴敷７ｄ组和１４ｄ组显示出抗乙酰胆碱作用。
结论：贴敷哮喘外敷方７ｄ后。
豚鼠血清显示出抗乙酰胆碱作用。
［关键词］哮喘；中药敷贴；血清药理学；气管条；乙酰胆碱；豚鼠［中图分类号］Ｒ９７４．３，Ｒ９６５［文献标识码］Ａ［文章编号］１６７卜２８３８（２００８）０４—０２４９—０３ＳｅｒｕｍｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｔｅｓｔｏｆｅｘｔｅｒｎａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｔｈｍａｐｌａｓｔｅｒｉｎｇｕｉｎｅａｐｉｇｓＬｌＹｉ—ｑｕｎ．ＳＨＥＮＨｕｉ—ｆｅｎｇ。
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌａｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００１２７，Ｃｈｉｎａ）［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｎｔｉ—ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｅｆｆｅｃｔｏｆｅｘｔｅｒｎａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｔｈｍａｐｌａｓｔｅｒｂｙｓｅｒｕｍｐｈａｒｍａ－ｃｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｆｏｒｔｙｇｕｉｎｅａｐｉｇｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｉｎｔｏｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ（ｆｏｒＩｄ，７ｄａｎｄ１４ｄ）．ＡｓｔｈｍａｍｏｄｅｌｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＨｕｌｓｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗａｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｅｘｔｅｒｎａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｅｘｔｅｒｎａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｔｈｍａｐｌａｓｔｅｒｆｏｒ１ｄ。