融合蛋白
双靶点融合蛋白
双靶点融合蛋白
双靶点融合蛋白是一种生物药物设计策略，通过将两个不同的靶向分子（通常是单克隆抗体或其功能结构域）融合在一起，形成一个能够同时作用于两个不同靶点的单一治疗分子。
这种创新的药物设计方法旨在提高治疗效果和/或减少副作用，因为可以更精准地调节疾病相关的信号通路或者增强免疫反应。
例如：
1、荣昌生物研发的泰它西普（RC18），是一种全球首个双靶点B-淋巴细胞刺激因子（BLyS）融合蛋白药物，针对系统性红斑狼疮等多种自身免疫性疾病具有潜在疗效。
2、康方生物的TIGIT/TGF-β双靶点抗体融合蛋白AK130，则是用于肿瘤治疗领域，通过同时抑制TIGIT和TGF-β这两个与肿瘤免疫逃逸相关的靶点来增强抗癌免疫反应。
3、华东医药引进的AB002是一款处于临床前开发阶段的双靶点融合蛋白药物，其靶向PD-L1/L2和IL-15，有望在实体瘤治疗中发挥作用，通过抑制免疫检查点并激活自然杀伤细胞来攻击肿瘤细胞。
这些双靶点融合蛋白药物的研发代表了现代生物技术药物领域的前沿方向，为多种复杂疾病的治疗提供了新的可能性。
融合蛋白定义
融合蛋白科技名词定义中文名称：融合蛋白英文名称：fusion protein定义1：融合基因的表达产物，或通过生物学和化学方法融合的两个或两个以上蛋白质。
所属学科：免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科）；免疫学检测和诊断（三级学科）定义2：通过基因工程方法将编码不同蛋白质的基因片段按照正确的读框进行重组，将其表达后获得的新蛋白质。
所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）定义3：由两段或多段基因序列串联形成的融合基因表达所产生的蛋白质。
所属学科：细胞生物学（一级学科）；细胞培养与细胞工程（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布目录融合蛋白 - 技术概况融合蛋白技术是为获得大量标准融合蛋白而进行的有目的性的基因融合和蛋白表达方法。
利用融合蛋白技术，可构建和表达具有多种功能的新型目的蛋白。
技术特点融合蛋白融合基因可在原核细胞(如大肠杆菌) 也可在真核细胞中进行表达。
原核表达系统的特点是时程短，费用低，是科研中的主要工具。
其缺点是真核蛋白表达没有得到确切修饰；大量蛋白常常沉淀成不溶性包涵体聚合物，需要复杂的变性和复性过程；大量蛋白的分泌较困难。
真核表达系统的特点是蛋白翻译后加工机会多，甚至可被改造成人源型；真核细胞易被转染，具有遗传稳定性和可重复性；产物可被分泌，提纯简单，成本低。
技术内容构建融合蛋白的基本原则是，将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，以实现两个基因的共同表达。
具体步骤有：1.进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则，设计合适的引物序列，以cDNA为模板，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。
2.在载体中进行重组：通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收，然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接，并克隆到高表达质粒载体中，构建重组质粒。
3.将重组表达载体转染宿主细胞并利用选择标志进行筛选及测序。
融合蛋白
（一）DNA疫苗
目前，疫苗已经经历了三代： 第一代疫苗是用减毒或杀死的病原体来激 活机体免疫系统； 第二代疫苗是用生物技术和重组DNA技术 研制的组分疫苗注射机体诱导免疫应答； 第三代疫苗是直接注射基因重组的抗原基 因来激活人体免疫系统，即DNA疫苗。
（一）DNA疫苗
• DNA疫苗与传统疫苗相比有着 明显的优势，如易于生产，稳 定性强，成本低廉等，并可同 时诱导体液与细胞免疫应答。
融合蛋白及其应用
07生物技术
主要内容
融合蛋白的概念
融合蛋白技术概况
融合蛋白技术的临床应用 常见的几种融合蛋白
一、融合蛋白的概念
在基因工程迅速发展的基础上， 有目的地把两段或多段编码功能蛋白 的基因连接在一起，进而表达所需蛋 白，这种通过在人工条件下将两个或 多个基因的编码区首尾连接，由同一 调控序列控制构成的基因表达后所得 的蛋白质产物称为融合蛋白(fusion protein，FP)。
真核或原核细胞中表达出的具有上 述两部分结构域的重组蛋白。据目 的蛋白与Ig不同片断相连，可将其 分为二大类 ：一类为Fab(Fv)融合 蛋白； 另一类为 Fc融合蛋白。
1、Fab (Fv) 融合蛋
Fab(Fv) 融合蛋白主要是将Fab(Fv) 段与其他生物活性蛋白结合，利用
抗体对抗原的特异识别功能将活性 蛋白导向特定部位。使活性蛋白在 特定部位发挥生物作用。常见的与 Fab融合的蛋白有毒素、细胞因子、 受体、酶等。
二、融合蛋白技术概况
融合蛋白技术是为获得大量 标准融合蛋白而进行的有目的 性的基因融合和蛋白表达方法。 利用融合蛋白技术，可构建和 表达具有多种功能的新型目的 蛋白。
（一）融合蛋白技术的特点
融合基因可在原核细胞(如大肠杆菌)
蛋白融合表达
蛋白融合表达技术的应用与挑战
引言：
蛋白融合表达是分子生物学中的一个重要技术，它通过将两个或多个蛋白质基因连接在一起，使得它们能够在同一细胞内同时表达。
这种技术在生物科学的许多领域中都有广泛的应用，包括疫苗开发、药物研发、蛋白质功能研究等。
正文：
一、蛋白融合表达的应用
1. 疫苗开发：蛋白融合表达可以用于生产重组疫苗。
例如，乙肝疫苗就是通过将乙肝表面抗原（HBsAg）基因与酵母菌的某种蛋白基因融合，然后在酵母菌中表达出HBsAg蛋白，从而制成的。
2. 药物研发：蛋白融合表达也可以用于药物的研发。
例如，一些抗体药物就是通过将抗体基因与某些能够提高稳定性和表达量的蛋白基因融合，然后在细胞中表达出来的。
3. 蛋白质功能研究：蛋白融合表达还可以用于蛋白质功能的研究。
例如，可以通过将待研究的蛋白质基因与荧光蛋白基因融合，然后观察荧光蛋白的分布和动态变化，从而推断出待研究蛋白质的功能。
二、蛋白融合表达的挑战
尽管蛋白融合表达有诸多优点，但在实际应用中也面临一些挑战。
首先，如何设计出合适的融合蛋白结构是一个重要的问题。
其次，如何提高融合蛋白的表达量和稳定性也是一个需要解决的问题。
此外，还需要考虑如何有效地分离和纯化融合蛋白。
结论：
蛋白融合表达是一种非常有用的技术，它在疫苗开发、药物研发、蛋白质功能研究等领域都有广泛的应用。
然而，要充分发挥其潜力，还需要解决一些技术和方法上的挑战。
未来的研究应致力于这些挑战的解决，以推动蛋白融合表达技术的进一步发展和应用。
重组蛋白和融合蛋白的关系
重组蛋白和融合蛋白的关系重组蛋白，简单说就是通过基因工程的魔法，把原本的基因重新组合一下，然后让细胞生产出我们想要的蛋白。
这就好比是搭积木，把基因这个小积木块重新排列组合，拼出一个新的造型，这个新造型就是重组蛋白啦。
那融合蛋白呢？融合蛋白就更有趣啦。
它是把两个或者更多个不同的蛋白或者蛋白的片段组合到一起，就像把不同口味的糖果粘在一起，变成一个超级糖果。
这个超级糖果就有了各个部分的特性，可神奇啦。
其实呀，融合蛋白和重组蛋白有着千丝万缕的联系。
很多时候，我们在制造融合蛋白的过程中，就用到了重组蛋白的技术。
因为要把不同的蛋白组合在一起，就得在基因层面动动手脚，这基因的重新组合不就是重组蛋白的技术嘛。
从功能上来说呢，重组蛋白可以是一个单独的、具有特定功能的蛋白。
而融合蛋白呢，它的功能就像是一个组合技能。
比如说，我们把一个能识别癌细胞的蛋白和一个能杀死癌细胞的蛋白融合在一起，这个融合蛋白就既有识别癌细胞的本事，又有消灭癌细胞的能力，就像一个超级战士。
再从结构上看，重组蛋白的结构是通过重组基因得到的新结构，可能是原来蛋白结构的改进或者优化。
融合蛋白的结构就是把不同蛋白的结构部分拼凑在一起，就像拼凑乐高积木一样，每个部分都保留着自己的特点，又组合成了一个新的整体。
在实际的应用中呀，这两种蛋白都特别重要。
重组蛋白在制药、生物研究等很多领域都是大明星。
比如说胰岛素，很多糖尿病患者用的胰岛素就是重组蛋白。
而融合蛋白呢，也不甘示弱。
在疾病诊断、治疗等方面都发挥着独特的作用。
比如说有些融合蛋白可以作为特殊的标记物，帮助医生更快更准确地诊断疾病。
总的来说，重组蛋白和融合蛋白虽然有区别，但它们更像是一家人。
它们都是基因工程这个大家庭里的重要成员，互相帮助，一起为人类的健康、科学研究等做出巨大的贡献呢。
重组gnrh融合蛋白
重组gnrh融合蛋白重组gnrh融合蛋白是一种重要的生物制剂，常用于治疗不孕症和性早熟等疾病。
它的研究和应用在生殖医学领域具有重要的意义。
本文将从不同角度介绍重组gnrh融合蛋白的相关内容，包括其定义、合成方法、应用领域以及未来发展方向等。
一、定义重组gnrh融合蛋白是通过基因工程技术将人类GnRH基因与其他蛋白质基因融合而成的蛋白质。
它具有GnRH的生物活性和其他融合蛋白的特定功能，通过改变GnRH蛋白的结构和功能，可以增强其稳定性和药效，提高治疗效果。
二、合成方法重组gnrh融合蛋白的合成方法主要有两种：原核表达系统和真核表达系统。
原核表达系统主要利用大肠杆菌等细菌进行表达，具有操作简便、成本低廉的优点；真核表达系统则主要利用哺乳动物细胞进行表达，能够保证蛋白质的正确折叠和糖基化等修饰，从而提高蛋白质的生物活性和稳定性。
三、应用领域重组gnrh融合蛋白在生殖医学领域有广泛的应用。
首先，它常用于治疗不孕症，通过调节和促进卵巢功能，提高排卵率和受孕率。
其次，它还可以用于治疗性早熟，通过抑制垂体促性腺激素的分泌，延缓性腺的发育和成熟，从而达到抑制性早熟的目的。
此外，重组gnrh融合蛋白还可以用于治疗子宫内膜异位症、多囊卵巢综合征等疾病。
四、未来发展方向随着生物技术的不断发展，重组gnrh融合蛋白的研究和应用也在不断深入。
未来的发展方向主要包括以下几个方面：首先，通过改变融合蛋白的结构和功能，进一步提高其生物活性和稳定性，提高治疗效果。
其次，探索新的合成方法和表达系统，提高蛋白质的产量和纯度。
此外，还可以应用基因编辑技术，通过修改GnRH基因的序列，设计出更加理想的重组gnrh融合蛋白。
重组gnrh融合蛋白是一种重要的生物制剂，具有广泛的应用前景。
通过合理选择合成方法，优化蛋白质的结构和功能，可以提高其生物活性和稳定性，从而达到更好的治疗效果。
未来的研究方向主要包括改进合成方法、优化表达系统和应用基因编辑技术等。
融合蛋白表达的优点
融合蛋白表达的优点蛋白质是生命体中最基本的分子，它们在细胞中扮演着重要的角色。
因此，研究蛋白质的表达和功能对于生命科学的发展至关重要。
在蛋白质表达领域，融合蛋白表达技术已经成为了一种常用的方法。
本文将从不同的角度探讨融合蛋白表达的优点。
一、提高表达量融合蛋白表达技术可以提高目标蛋白的表达量。
这是因为融合蛋白可以增加目标蛋白的稳定性和溶解度，从而提高其表达量。
此外，融合蛋白还可以通过增加目标蛋白的半衰期来提高其表达量。
因此，融合蛋白表达技术可以有效地提高目标蛋白的表达量，为后续的研究提供了更多的样品。
二、提高纯度融合蛋白表达技术可以提高目标蛋白的纯度。
这是因为融合蛋白可以通过亲和层析、离子交换层析等方法来纯化目标蛋白。
此外，融合蛋白还可以通过特异性结合某些亲和剂来纯化目标蛋白。
因此，融合蛋白表达技术可以有效地提高目标蛋白的纯度，为后续的研究提供了更好的样品。
三、方便检测融合蛋白表达技术可以方便地检测目标蛋白。
这是因为融合蛋白可以通过Western blot、ELISA等方法来检测目标蛋白。
此外，融合蛋白还可以通过荧光标记等方法来检测目标蛋白。
因此，融合蛋白表达技术可以方便地检测目标蛋白，为后续的研究提供了更多的手段。
四、提高稳定性融合蛋白表达技术可以提高目标蛋白的稳定性。
这是因为融合蛋白可以通过增加目标蛋白的稳定性来提高其稳定性。
此外，融合蛋白还可以通过保护目标蛋白免受蛋白酶降解等方法来提高其稳定性。
因此，融合蛋白表达技术可以有效地提高目标蛋白的稳定性，为后续的研究提供了更好的样品。
综上所述，融合蛋白表达技术具有提高表达量、提高纯度、方便检测和提高稳定性等优点。
因此，融合蛋白表达技术已经成为了一种常用的方法，为生命科学的发展做出了重要的贡献。
Fc融合蛋白
什么是Fc融合蛋白？
Fc融合蛋白是一种新型的重组蛋白，是利用基因工程技术把免疫球蛋白的Fc段结合到某种具有生物学活性的功能蛋白分子上形成的，为原来的功能蛋白附加了抗体的性质。
Fc融合蛋白的优点
长效性
这类蛋白制成的药物在血浆内有比较长的半衰期，Fc 片段通过CH2-CH3 与FcRn 结合并呈pH 依赖性：在pH 7.4 的生理条件下，FcRn 与Fc 不结合；在细胞内涵体pH 6.0~6.5 的酸性条件下，两者结合，从而避免融合分子在细胞内被溶酶体等快速降解。
稳定性
Fc融合蛋白可以通过Fc 铰链区的二硫键连接形成稳定的二聚体，进一步通过对二硫键的基因工程改造和修饰，还可以使Fc 融合蛋白聚集成六聚体复合物。
Fc 区域可以独立折叠，保证伴侣分子体内外的稳定性。
简化纯化流程
疫苗领域
Fc融合蛋白的功能蛋白部分可以是细胞因子、毒素、受体、酶、抗原肽等，因此我们可以通过一系列方法得到相应的抗原以后加上Fc段作为抗原的运载工具，靶向结合上APC（表面能表达FcR），缩短抗原在血浆中的游离时间，减少蛋白酶对抗原的降解，提高抗原半衰期，从而加强抗原的呈递。
随着细胞内能够结合Fc并影响免疫反应的受体蛋白不断被发现，Fc融合蛋白类疫苗能结合的受体将不仅仅局限于APC，应用前景也将大大扩展。
其他应用Fc融合蛋白稳定性相较于单一的功能蛋白更好，并且可以通过Fc与protein A/G 的结合作用，将Fc融合蛋白绑定在连有protein A/G的固相载体上，构建蛋白微阵列或微。
融合蛋白沉降技术
融合蛋白沉降技术
融合蛋白沉降技术是一种广泛应用于生化分析、药物筛选和蛋白质纯化等领域的分离技术。
该技术利用融合蛋白的特殊性质，通过其与亲和柱或凝胶的相互作用，实现对融合蛋白的高效分离纯化。
融合蛋白通常由目的蛋白和标签蛋白组成，标签蛋白可以是多个不同种类的蛋白，如GST、His、MBP等。
利用亲和柱或凝胶的特异性，可以选择性地捕获融合蛋白，从而实现对目的蛋白的纯化。
融合蛋白沉降技术具有高效、简便、灵敏和可重复性等优点，已被广泛应用于各种蛋白质的纯化和研究。
在药物筛选中，利用融合蛋白沉降技术可以快速、准确地鉴定与目标蛋白相互作用的小分子化合物，为新药研发提供了有力的支持。
- 1 -。
融合蛋白连接原则
融合蛋白连接原则1. 引言融合蛋白连接是指将两个或多个不同的蛋白质序列连接在一起，形成一个新的融合蛋白。
融合蛋白连接在生物医学研究、药物开发和生物工程领域有着广泛的应用。
融合蛋白连接的设计和构建需要遵循一定的原则，以确保融合蛋白的稳定性、可溶性和功能。
本文将介绍融合蛋白连接的原则和方法，包括连接位点选择、连接序列设计、连接方式选择以及连接后的蛋白质表达和纯化方法等。
2. 连接位点选择连接位点的选择对于融合蛋白的稳定性和可溶性至关重要。
通常情况下，选择在两个蛋白质序列中间的松弛区域作为连接位点，以避免对两个蛋白质的结构和功能造成不利影响。
连接位点的选择应考虑以下几个因素：•松弛区域：连接位点应选择在两个蛋白质中间的松弛区域，避免对两个蛋白质的结构和功能造成不利影响。
•酶切位点：连接位点的选择还应考虑到酶切位点的位置，以方便后续的蛋白质表达和纯化。
•亲水性：连接位点的选择还应考虑到亲水性的变化，以确保连接后的融合蛋白在水溶液中的稳定性和可溶性。
3. 连接序列设计连接序列是指连接位点之间的氨基酸序列。
连接序列的设计应考虑到以下几个因素：•连接位点的氨基酸残基：连接序列的设计应根据连接位点的氨基酸残基来选择合适的连接序列。
连接序列的氨基酸残基应具有良好的溶解性和稳定性。
•连接序列的长度：连接序列的长度应适中，过短可能导致融合蛋白的稳定性和可溶性下降，过长可能影响蛋白质的折叠和功能。
•连接序列的氨基酸组成：连接序列的氨基酸组成应选择具有良好的溶解性和稳定性的氨基酸。
4. 连接方式选择连接方式是指连接位点之间的化学键的形成方式。
常见的连接方式包括：•肽键连接：通过形成肽键将两个蛋白质连接在一起。
肽键连接是最常用的连接方式，具有较好的稳定性和可溶性。
•二硫键连接：通过形成二硫键将两个蛋白质连接在一起。
二硫键连接具有较好的稳定性，适用于一些较大的蛋白质。
•化学交联：通过化学反应将两个蛋白质连接在一起。
化学交联可以实现更多样化的连接方式，但需要考虑到反应条件和副反应的影响。
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（1）抗病毒感染
目前IL-2已用于临床治疗HIV和癌 症，但由于 IL-2在活体内半衰期短， 有毒性作用及成本高，其临床治疗 作用受限。而用 IL2- Ig融合蛋白， 它有 IL-2的免疫刺激活性且半衰期 长 ， 用它注入健康恒河猴可诱导T 细胞数目增加并表达CD25 。
（2）治疗痛觉过敏
Etanercept ， 一个重组 TNFR-Fc融 合蛋白， 可竞争性抑制TNF，它已成 功用于治疗类风湿性关节炎的病人， 能减少疼痛和炎症，在神经损伤后， 由于局部产生前炎性细胞因子对疼痛 产生起一 个主要作用。给坐骨神经慢 性压缩性损伤的鼠注射 Etanercept 可 减少热痛觉过敏和机械性异常性疼痛。
一般来说， 3-5 个氨基酸的Linker 可满足大部分融合蛋白的正确折叠的 要求。 有人尝试在融合蛋白间加入一 段有疏水性和一定伸展性的较长肽链， 如(Gly4Ser1)，目的是将两者分开， 以缓解相互干扰作用， 并获得了满意 的结果。
（三）融合蛋白技术的关键
但具体涉及到每种蛋白时，需具体分 析。当我们构建融合蛋白时，应多选 择几种融合方式， 从中优化出理想的 连接方式。 另外，大量研究表明连接肽的柔性和 疏水性对不扰乱蛋白质的功能结构域 是十分重要的。
（二）双功能酶（多功能酶）
目前研究发现，
β-半乳糖苷酶-半 乳糖脱氢酶融合蛋白在一定条件下， 其偶联反应产生 NADH 的速度是 同时加入这两种酶的反应速度的两 倍以上。同时过渡态时间缩短近四 倍。
（三）定向药物
定向药物一般由两部分组成：一部
分是药物；另一部分是可以与病灶 特异性结合的配基。通过融合蛋白 技术将这两部分融合在一起， 即 可构成一个具有独特构象与功能的 蛋白质。
（四）溶栓剂
但两者化学结合不仅产量低，而且
在生产过程中部分损失了水蛭素的 溶栓活性。 利用基因融合技术， 把水蛭素和mAb59D8的纤维蛋白 原片段融合，融合蛋白在稳态时无 作用，只有用凝血酶原激酶(Ax) 对它进行切割激活后，才有活性。
（四）溶栓剂
利用分子克隆技术，
这种融合 蛋白能成功 转录并高效表达于 59D8杂交瘤细胞系，这种策略 结合了靶向溶栓和 Ax因子激活， 有效地在血栓处发挥作用，对 全身的副作用很小。
二、融合蛋白技术概况
融合蛋白技术是为获得大量 标准融合蛋白而进行的有目的 性的基因融合和蛋白表达方法。 利用融合蛋白技术，可构建和 表达具有多种功能的新型目的 蛋白。
（一）融合蛋白技术的特点
融合基因可在原核细胞(如大肠杆菌)
也可在真核细胞中进行表达。原核表 达系统的特点是时程短，费用低，是 科研中的主要工具。其缺点是真核蛋 白表达没有得到确切修饰；大量蛋 白常常沉淀成不溶性包涵体聚合物， 需要复杂的变性和复性过程；大量蛋 白的分泌较困难。
（一）DNA疫苗
• DNA疫苗的免疫方法是将带 有目的基因并能在真核细胞 中表达的细菌质粒直接导入 动物体内，通过在体内表达 目的蛋白以引起机体对该蛋 白的免疫应答。
（一）DNA疫苗
• 目前利用基因工程成功制成的多价 重组抗体融合蛋白 CYF196(国内尚 未上市)就是一种DNA疫苗， 它能 有效防治下呼吸道感染和哮喘。因 为CYF196对病毒的主要受体-位于 呼吸道上皮中的细胞间黏附分子有 高度亲和力，对鼻病毒感染有较强 • 的防御功能。
（四）溶栓剂
新型溶栓剂的要求是具有多种功能，
既有较高的溶栓活性，又有较强的 纤维蛋白的亲和性或抑制血栓的功 能，从而使溶栓剂具有较高的纤维 蛋白专一性，减少出血副作用，降 低溶栓药物使用后再栓塞形成的可 能性。
（四）溶栓剂
凝血酶在血小板激活后促进纤维蛋 白酶原转化为纤维蛋白，在凝血过程 中起主要作用，在动物模型和人体中， 肝素是凝血酶间接抑制剂，水蛭素则 是其直接抑制剂。单克隆抗体 mAb59D能靶向血块， mAb59D8与 纤溶酶原活化因子偶合能达到靶向治 疗 和 有 效 溶 栓 的 目 的 。
（二）双功能酶（多功能酶）
以往研究发现 ， 在利用基因 融合所构建的大的酶分子中，如果 用以构成融合蛋白的各个酶分子的 整个编码序列均保留于新的酶分子 中，则融合蛋白一般均保留所构成 的酶分子各自的酶活性。
（二）双功能酶（多功能酶）
并且发现在这些新构建的融合蛋 白中，蛋白的正确折叠以及各个酶 的活性部位均未受到影响，与单个 酶相比，融合蛋白的酶的比活力为 50%-100%，对于催化连续反应的 两种或几种酶， 利用基因融合的方 法构成的融合蛋白可产生“ 邻近效 应” （proximity effect）。
（一）DNA疫苗
目前，疫苗已经经历了三代： 第一代疫苗是用减毒或杀死的病原体来激 活机体免疫系统； 第二代疫苗是用生物技术和重组DNA技术 研制的组分疫苗注射机体诱导免疫应答； 第三代疫苗是直接注射基因重组的抗原基 因来激活人体免疫系统，即DNA疫苗。
（一）DNA疫苗
• DNA疫苗与传统疫苗相比有着 明显的优势，如易于生产，稳 定性强，成本低廉等，并可同 时诱导体液与细胞免疫应答。
肿瘤靶向免疫治疗
而将T细胞共刺激分子B7与抗瘤抗 体结合就可将B7导向肿瘤细胞。
B7-抗瘤抗体，一方面与肿瘤细胞表 面抗原结合，一方面提供共刺激信 号给T细胞能有效触发肿瘤特异细胞 毒T细胞反应。
2、Fc融合蛋白
Fc融合蛋白主要是将生物活性蛋白 与 Ig的绞链区及 CH2、CH3区结合。
肿瘤靶向免疫治疗
将一些生物活性蛋白(如毒素、
细胞因子等)与抗肿瘤抗体的 Fab段融合， 利用抗体对肿瘤抗 原的识别作用而进行靶向免疫治 疗。
肿瘤靶向免疫治疗
如Forsberg G等利用抗癌胚抗原 (CEA) 抗体的Fab段与葡萄球菌肠
毒素(SEA) 融合组成 一个超抗原 ， 融合超抗原可导向肿瘤细胞并激活 T细胞杀死表达有癌胚抗原肿瘤细胞。
（二）融合蛋白技术的内容
2.在载体中进行重组：通过限制 内切酶将两个DNA片段进行酶 切并回收，然后通过连接酶将 两个具有相同末端酶切位点的 基因片段进行体外连接，并克 隆到高表达质粒载体中，构建 重组质粒。
（二）融合蛋白技术的内容
3.将重组表达载体转染宿主细胞 并利用选择标志进行筛选及测 序。 4.融合基因的诱导表达及表达蛋 白的纯化 。
（二）PTH融合蛋白
甲状旁腺激素
( Parathyroid Hormone， PTH) 是由甲状旁腺主细胞合成和分泌的一 种单链多肽激素，成熟PTH含84个氨基酸 残基， 分子量约为 9500，是人体内调节钙 磷代谢及骨转换的最为重要的激素之一。 它主要通过作用于靶细胞膜上腺苷酸环化 酶系统， 增加胞浆内cAMP及焦磷酸盐 (PPi) 的水平来发挥作用。
类风湿性关节炎(RA) 是一个系统 性疾病， 以关节滑膜慢性炎症反 应为特征并有软骨变性和关节旁骨 的侵蚀 。
（3）类风湿性关节炎的治疗
已知TNF与RA的发病机理有很大关系， 许多实验证实用人可溶性重组TNF受 体与 IgFc段蛋白融合可完全竞争性抑 制TNF结合到细胞表面受体， 使TNF 无生物活性。给病人注射 Etanercept 可减少关节肿胀及炎症 ， 减少关节腔狭窄。临床上已用于治疗 类风湿性关节炎。
真核或原核细胞中表达出的具有上 述两部分结构域的重组蛋白。据目 的蛋白与Ig不同片断相连，可将其 分为二大类 ：一类为Fab(Fv)融合 蛋白； 另一类为 Fc融合蛋白。
1、Fab (Fv) 融合蛋
Fab(Fv) 融合蛋白主要是将Fab(Fv) 段与其他生物活性蛋白结合，利用
抗体对抗原的特异识别功能将活性 蛋白导向特定部位。使活性蛋白在 特定部位发挥生物作用。常见的与 Fab融合的蛋白有毒素、细胞因子、 受体、酶等。
与 Fc段融合的蛋白种类很多，其作 用也各不相同，归纳起来有如下几 方面：
（1）抗病毒感染
目前发现使用DNA疫苗加上IL-2Ig融合蛋白注射到实验用的恒河 猴 ， 然后高剂量静脉内给恒河猴 注射 SHIV病毒。虽然它们不能阻 止猴被 SHIV病毒感染， 但确实可 控制病毒血症到几乎测不到的水平， 并预防免疫缺陷和临床症状。
融合蛋白及其应用
07生物技术
主要内容
融合蛋白的概念
融合蛋白技术概况
融合蛋白技术的临床应用 常见的几种融合蛋白
一、融合蛋白的概念
在基因工程迅速发展的基础上， 有目的地把两段或多段编码功能蛋白 的基因连接在一起，进而表达所需蛋 白，这种通过在人工条件下将两个或 多个基因的编码区首尾连接，由同一 调控序列控制构成的基因表达后所得 的蛋白质产物称为融合蛋白(fusion protein，FP)。
（三）定向药物
特点：它可以特异性地与靶细胞或
致病因子结合，并把药物引导至病 灶处，从而大大提高药物的效力。 可以选择性地杀伤相应的抗原相关 细胞或受体相关细胞，对其他无关 细胞影响较少或无影响。
（三）定向药物
配基常是肿瘤特异性抗体、细
胞因子或激素等导向物质，药 物常是毒性分子（如动植物毒 素、 放疗、化疗药物或细菌毒 素等）。
（五）抗菌肽
肽类抗生素又名抗菌肽，机体天然 产生的抗菌肽由于其对耐药菌的强 大抗菌作用而受到人们关注。它广 泛存在于动植物体内，是由生物体 特定基因编码的一类阳离子小分子 多肽，具有广谱抗菌活性，抗菌肽
研究结果表明，抗菌肽可以在亚 毒性浓度下抑制 HIV-1的基因 表达， 减少 HIV-1的增殖。而 人源溶菌酶除了具有一般溶菌酶 的抗菌活性外， 也具有抗病毒 的特性， 已有研究证实人源溶 菌酶具有抗HIV-1的作用。
（一）融合蛋白技术的特点
真核表达系统的特点是蛋白翻
译后加工机会多，甚至可被改 造成人源型；真核细胞易被转 染，具有遗传稳定性和可重复 性；产物可被分泌，提纯简单， 成本低。
（二）融合蛋白技术的内容