南医微生物实验课件五
微生物实验5PPT课件
2021/3/12
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甲→黄色菌液 乙→白色菌液 丙→紫黑菌液 丁→粉红菌液
灭菌
取样
6ul+6ul
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纸片扩散法：菌液→ 密集涂布平板 → 标记:青、 链、庆 →贴青霉素、链霉素、庆大霉素纸片→ 按压→ 倒置培养18～24小时→ 观察结果。
青
链
庆
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标记
青
链
庆
贴抗菌素纸片
12
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血浆凝固酶试验P17
❖ 致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，凝固人或家 兔血浆。
❖ 在体内，凝固的血浆沉积在菌体表面，阻碍吞噬 细胞的吞噬和杀菌物质的破坏，从而有利于细菌 的生长繁殖、引起感染。
❖ 体外试验有试管法和玻片法两种。
❖ 血浆凝固酶试验观察完毕，应将载玻片立即放入 消毒缸内，为什么?
❖ 半固体穿刺接种时，为什么要强调“原路返回”?
❖ 为保证实验结果的可靠性，你认为上述试验应还 设立哪些对照?
❖ 为了避免抗菌药物使用的盲目性，防止因不合理 用药，导致耐药性细菌的增多、药物中毒、治疗 失败、菌群失调等问题的发生，用药前（时）， 做药物敏感性试验。
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药物敏感性试验—纸片扩散法
❖ 将含有定量抗菌素的纸片，平贴在已经接种了试验细菌 的平板上。纸片中的抗菌素吸收培养基的水分，溶解后 不断向周围扩散，形成递减的梯度浓度。敏感细菌在纸 片周围的生长受到抑制，而形成没有细菌生长的抑菌圈
动扩散生长，培养基呈扩散云雾状混浊状态。
❖ 无鞭毛不能运动的细菌，只能沿着穿刺线生长 繁殖，穿刺线边缘清晰，周围培养基清澈透明。
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
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目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
微生物实验ppt课件
基础生物学r footer
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验原理
在我们周围环境中存在着种类繁多、数量庞大的微 生物，他们很小，人们用肉眼看不到，将他们在一定 的温度下培养一段时间，可繁殖成一个个肉眼可见的 细胞群体，就可以进行鉴别。
接种是指在无菌操作条件下，将某种微生物的纯种 移接到适合微生物其生长的新鲜培养基中或生物体内 的一种操作过程。
分装时不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免引起污 染。
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验一 培养基的配置、分装与灭菌 思考题
1.思考牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？
2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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表面（根霉点一点，曲霉、酵母可点3-4点）。 （2）平板接斜面
实验二 环境中微生物的监测与菌落识别
实验目的 实验原理 实验器材 实验方法 实验结果 注意事项 思考题
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验目的
掌握各种微生物接种的基本操作技术； 初步了解周围环境中微生物的分布状况； 熟悉四大类微生物菌落的形态特征。
穿刺接种
用接种针挑取菌种后，插入固 体培养基内（不要刺到底部）， 再沿原路拔出。 此法用于厌气性细菌接种、检 查细菌的运动能力。
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法
南医微生物实验肥达、肠道等ppt课件
生 理 盐 水
1 1：40
2 1：80
3 1：160
4
5
1：320 1：640
6 对照
加菌液0.5ml/管（6→1），震荡混匀，43℃水浴1.5 h，观察结果
细菌生化反应
一、糖发酵试验 由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类 的分解能力不尽相同。
产酸产气 — 指示剂变色，小倒管内有气泡； 以＋ 表示
多细胞真菌 菌丝和孢子 丝状菌(filamentous fungus)
交织成团
或霉菌(mold)
真 菌（fungus ）
大分生孢子
厚膜孢子
白假丝酵母菌（白色念珠菌）— G+
新生隐球菌（新型隐球菌）— 墨汁负染
真菌培养物
新生隐球菌：表面粘稠 白假丝酵母菌：浓厚的酵母气味
第6管
均匀混浊
＋
少量凝集
栅栏状或英文字母样，如V、W、X等
革兰染色
Albert染色 观察白喉杆菌异染颗粒——一端或两端
鉴别选择培养基 含0.03%～0.04%亚碲酸钾血平板
亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落
Elek平板
炭疽杆菌：G＋ 粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状； 有荚膜，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央
30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状
可疑的乳白色菌落
双糖铁培养基初步鉴定
其他生化反应鉴定
血清学鉴定
SS培养基
胆盐
枸橼酸盐
抑制杂菌生长
煌绿
乳糖 被非致病菌分解产酸 蛋白胨 被致病菌分解产碱
中性红 酸：红
碱：黄
双糖铁培养基
上层
（固体）
下层
南医微生物实验课件肥达、肠道等
原理基于抗原抗体反应，伤寒细菌的菌体抗原O抗原和鞭毛抗原H抗原刺激机体后可 产生特异性抗体，通过检测抗体效价即可推断是否感染伤寒细菌。
肥达试验具有较高的特异性和敏感性，是临床常用的诊断方法之一。
微生物致病性原理
微生物致病性是指微生物在一定条件下对宿主造成损伤或引发疾病的能力。
微生物致病性的机制主要包括粘附、侵入、繁殖和毒素产生等环节。
粘附是微生物附着在宿主细胞或黏膜表面并开始繁殖的第一步；侵入则是通过侵袭力突破宿 主防御屏障进入组织或血液；繁殖是微生物在宿主体内大量扩增的过程；毒素则是微生物产 生的具有毒性的代谢产物，可对宿主造成损伤。
南医微生物实验课 件
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握微生物实验的基本操作
01
02
03
04
培养基制备
掌握不同类型培养基的配制方 法和注意事项，如营养肉汤、
SS琼脂等。
微生物接种
学会使用接种环、涂布棒等工 具进行微生物的接种操作。
THANKS
感谢观看
肥达试验是一种用于诊断伤寒和副伤寒的实验方法。 通过比较患者血清与伤寒、副伤寒菌体的凝集反应程 度，可以辅助诊断伤寒和副伤寒。
需要注意的是，肥达试验阳性结果并不能完全确诊伤 寒，还需要结合临床表现和其他实验室检查结果进行 综合判断。
肠道致病菌的分离与鉴定结论
01
肠道致病菌是一类引起肠道感染的细菌，常见的有沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱 弧菌等。
步骤三
对可疑菌落进行生化试验和血 清学试验，以确定致病菌的种 类。
医学微生物学实验课件
医学微生物学实验课件xx年xx月xx日contents •实验准备•细菌的分离与培养•细菌的鉴定•病毒的分离与鉴定•医学寄生虫实验•医学微生物学实验总结目录01实验准备1 2 3通过本次实验，学生将学习到微生物学实验的基本技能，包括实验操作、显微观察、分离培养等。
掌握微生物学实验基本技能通过实验过程中的生理生化反应，学生将了解微生物的生理生化特性，初步掌握微生物分类鉴定的基本方法。
了解微生物的生理生化特性通过本次实验，学生将了解微生物在医学中的应用，包括致病微生物的检测、防治和免疫等方面的应用。
认识微生物在医学中的应用微生物学实验基本原理微生物学实验的基本原理包括显微镜技术、无菌技术、分离培养技术、生理生化反应等。
这些技术的基本原理是进行微生物学实验的基础。
微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应是微生物学实验中的重要内容。
通过观察和测定微生物的生理生化反应，可以初步鉴定微生物的种类和特性。
微生物在医学中的应用微生物在医学中有着广泛的应用，例如致病微生物的检测、防治和免疫等。
通过本次实验，学生将了解这些应用的基本原理和方法。
实验前的准备包括实验器材和试剂的准备、实验室环境的消毒等。
分离培养将样品接种在适宜的培养基上，分离培养出特定的微生物。
样品采集和预处理根据实验目的和要求采集样品，并对样品进行预处理，以备后续实验使用。
生理生化反应将分离培养出的微生物接种在适宜的生理生化反应管中，观察和记录微生物的生理生化反应结果。
显微观察将样品制成涂片或压片，在显微镜下观察微生物的形态和结构。
数据分析和总结对实验数据进行整理和分析，得出结论，并撰写实验报告。
实验步骤02细菌的分离与培养选择适合细菌生长的培养基，通常包含碳源、氮源、无机盐、水等。
培养基成分按照规定的步骤，将所需成分按比例混合、溶化、调PH值、过滤、分装等步骤制备成培养基。
制备流程确保培养基的质量和无菌，需要进行灭菌处理和细菌学检测。
质量控制培养基制备根据不同的分离要求，可采用划线分离法、稀释分离法、组织研磨法等。
《微生物学实验》PPT课件
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2
一.药品的微生物限度检查（一）
1.口服药物的微生物检查: ①大肠杆菌的检查： ②细菌总数的检查
2.外用药物的微生物检查: ①绿脓杆菌的检查： ②金黄色葡萄球菌的检查：
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3
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
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32
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33
1、制片 涂片、干燥、固定
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34
2.结晶紫初染 1min——水洗
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35
3. 碘液媒染
1min——水洗
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36
4. 95% 酒精脱色 30s——水洗
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37
5.沙黄复染 1min——水洗、滤纸吸干
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28
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29
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30
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31
※革兰染色步骤
• 1.制片：取标本（球杆混合物、牙垢） 涂片、干燥、固定
• 2.初染：结晶紫——1min——水洗 • 3.媒染：碘液——1min——水洗 • 4.脱色：95% 酒精——30s——水洗 • 5.复染：沙黄——1min—水洗、滤纸吸干 • 6.油镜观察：
对照菌
(产气杆菌)
蛋白胨水培养 接种1支管 基2支管
接种1支管ห้องสมุดไป่ตู้
葡萄糖蛋白胨 接种2支管 水培养基4支管
接种2支管
枸橼酸盐培养 接种1支管 基2支管
接种1支管
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44
抗酸染色步骤
《医学免疫学与医学微生物学》课件第五章-免疫应答
《医学免疫学与医学微生物学》课件第五章-免疫应答xx年xx月xx日•免疫应答概述•T细胞介导的免疫应答•B细胞介导的免疫应答•固有免疫应答目•异常免疫应答•免疫应答在医学中的应用录01免疫应答概述免疫应答概念及分类免疫应答是机体在接触抗原后，产生一系列特异性防御反应的过程。
固有免疫应答是机体在长期进化过程中形成的，针对微生物和毒素等抗原物质的天然防御反应。
根据免疫应答发生的时间和免疫效应，可分为固有免疫和适应性免疫应答。
适应性免疫应答是机体在接触抗原后，由淋巴细胞活化、分化并产生特异性抗体和致敏淋巴细胞的过程。
免疫应答可分为三个阶段：固有免疫应答、适应性免疫应答和免疫记忆。
适应性免疫应答包括淋巴细胞的激活、分化、凋亡和记忆细胞的产生。
免疫记忆是指机体在适应性免疫应答后，记忆细胞可长期存在，当相同抗原再次刺激机体时，可迅速激发适应性免疫应答。
固有免疫应答包括吞噬细胞吞噬和清除抗原、炎症反应等。
免疫应答的基本过程01免疫应答是机体对外来抗原物质的一种防御反应，具有重要的生物学意义。
免疫应答的意义02通过免疫应答，机体可识别并清除入侵的微生物、突变细胞等抗原物质，维持体内环境稳定。
03免疫应答还可刺激机体产生特异性抗体和致敏淋巴细胞，在再次接触相同抗原时，迅速激发机体产生更强的防御反应，保护机体健康。
04但免疫应答也可能会导致自身免疫性疾病、超敏反应等病理过程，对机体造成损伤和危害。
02T细胞介导的免疫应答T细胞只能识别处理后的抗原肽-MHC复合物，而不能直接识别抗原。
MHC限制性T细胞通过TCR（T细胞抗原受体）对抗原肽-MHC复合物进行识别。
TCR识别T细胞对抗原的识别T细胞的活化、增殖与分化活化信号T细胞在识别抗原肽-MHC复合物后，需要协同刺激信号才能被活化。
增殖与分化活化的T细胞会经历迅速的增殖和分化，产生效应T细胞和记忆T细胞。
1T细胞介导的免疫应答的调节23具有抑制免疫应答功能，防止过度免疫损伤。
微生物实验ppt课件
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
图14-1 从土壤中分离微生物操作过程
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实验三 微生物的纯种分离法 实验方法
平板划线分离法
交叉划线法
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
连续划线法
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实验三 微生物的纯种分离法 实验结果
2。酵母菌的假菌丝是怎样形成的?与霉菌的真菌丝有 何区别?
基础生物学实验教学中心
ห้องสมุดไป่ตู้
教师：姚璐晔
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实验三 微生物的纯种分离法
实验目的 实验原理 实验器材 实验方法 实验结果 注意事项 思考题
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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液体接种
斜面
接种环
液体培养基
将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接 触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再 轻轻摇动均匀，即可培养。如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或滴管接种。
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验方法
实验室常用的接种方法有斜面接种、穿刺接种、三 点接种和液体接种。
基础生物学实验教学中心
教师：姚璐晔
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实验二 环境中微生物的监测与菌落识别 实验器材
菌种：
实验室环境微生物、大肠杆菌、酿酒酵母、放线菌及霉菌。
培养基：
马铃薯固体培养基、牛肉膏蛋白胨固体培养基、高氏一号固体培养 基
南医微生物实验课件
录像：化脓性球菌 示教：化脓性球菌形态、培养特性
白喉棒状杆菌的形态、生长特性 炭疽杆菌生长特性 操作：革兰染色
医学ppt
1
葡萄球菌G＋
链球菌G＋
肺炎链球菌G＋
淋病奈瑟菌G－
医学ppt
2
培养特性：金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌 甲型、乙型、丙型链球菌 肺炎球菌
致病物质：透明质酸酶
医学ppt
3
白喉棒状杆菌：G+ 一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏
状或英文字母样，如V、W、X等
革兰染色
医学ppt
4
Albert染色
观察白喉杆菌异染颗粒——一端或两端
医学ppt
5
鉴别选择培养基 含0.03%～0.04%亚碲酸钾血平板
亚碲酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落
医学ppt
6
Elek平板
医学ppt
7
炭疽杆菌：G＋ 粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状； 有荚膜，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央
12
实验报告
七张示教图 革兰染色步骤、结果（图示）
医学ppt
13
此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！
医学ppt
11
革兰染色操作步骤
【涂片】
取载玻片 接种环取混合菌液1-2环涂片（直径 约1cm） 自然干燥 固定（通过火焰三次）
【染色】
结晶紫1min 水洗 碘液1min 水洗 酒精 脱色30S 水洗 稀释复红1min 水洗 吸水纸 印干 油镜观察
*注意无菌操作！
有菌玻片放在水池旁玻片缸内!
医学ppt
医学ppt
8
30~35℃，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状
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抗酸染色
材料：涂片1张/人 1%石炭酸复红、3%盐酸酒精、吕氏美兰 酒精灯、显微镜
注意：1、载玻片扔进后面的玻片缸里！
2、泡手、洗手、做作业！
步骤
石炭酸复红加入涂片 间隙加热5分钟，勿持续加热 冷却5分钟 水洗 盐酸酒精2－3滴脱色30S，轻轻 晃动玻片 重复脱色一次至涂片无色 水洗 加入吕氏美兰1滴复染1分钟 水洗 吸干，油镜观察
四、尿素酶试验
有些细菌具有尿素酶， 能分解尿素形成大量的氨， 使培养基PH上升，而变成 碱性，使含有酚红指示剂的 培养基呈红色为阳性；不变
色为阴性。
生化反应表
葡 大肠
痢疾 伤寒 变形 -
乳
麦
甘
蔗 -
H2S 尿素 -/+
靛
-
霍乱弧菌（G—）
厌氧芽胞梭菌
产气荚膜梭菌
破伤风梭菌
庖肉培养基
破伤风梭菌、产气荚膜梭 菌
微生物与免疫学实验（五）
主要内容
一、示教：肠道杆菌、霍乱弧菌
破伤风梭菌、产气荚膜梭菌
病毒CPE（包涵体） 罗氏培养基、庖肉培养基 生化反应（四种肠道杆菌） 二、操作：抗酸染色
肠道杆菌（G—）
肠道杆菌的鉴定
标本增菌培养
有菌
接种SS平板
可疑的乳白色菌落
双糖铁培养基初步鉴定
其他生化反应鉴定
血清学鉴定
SS培养基
胆盐 枸橼酸盐 抑制杂菌生长
煌绿
乳糖 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸：红
蛋白胨
中性红
碱：黄
双糖铁培养基
乳糖 上层
（固体）
硫酸亚铁
酚红
葡萄糖
下层
（半固体）
细菌生化反应
一、糖发酵试验
由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类
的分解能力不尽相同。
产酸产气 — 指示剂变色，小倒管内有气泡；
胞浆、胞核 内出现的圆 形或椭圆形、 嗜酸或嗜碱 性的小体
狂犬病毒包涵体—内基小体 （Giemsa染色）
病毒培养：鸡胚接种
鸡胚培养 鸡胚绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊 鉴定：病毒增殖，鸡胚发生异常变化或羊水、 尿囊液出现红细胞凝集现象 意义：常用于流感病毒等的分离培养
结核杆菌：罗氏培养基
作业
示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、破伤风梭菌、
产气荚膜梭菌、内基小体
抗酸染色步骤、结果（图示）
病 毒（Virus）
病毒感染的检测方法 细胞培养—病毒在敏感细胞内增殖引起细胞病变 （CPE—细胞病变效应；包涵体） 动物接种—选用敏感动物及适宜部位接种 （乙脑病毒—小白鼠脑内） 鸡胚培养—孵化9-12天的鸡胚，接种鸡胚不同部位 （流感病毒—尿囊腔）
病毒感染细胞（CPE） 正常细胞
包涵体
以＋ 表示
产酸 — 指示剂变色；以＋表示
不能分解 — 指示剂不变色；以－表示
指示剂为酸性复红
二、硫化氢试验
硫化氢遇铅盐或 铁盐形成黑色硫基质）试验 有些细菌分解色氨酸 生成吲哚（靛基质），与 加入的二甲基氨基苯甲醛 反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰 红色为阳性；黄色为阴性。