α7nAChR在肢体缺血预处理减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用论文
缺血预处理对家兔肢体缺血再灌注后肺抗氧化系统的影响
缺血预处理对家兔肢体缺血再灌注后肺抗氧化系统的影响陈雷;金可可;潘景业;金广健;王健;许益笑【期刊名称】《中国骨伤》【年(卷),期】2005(018)010【摘要】目的:观察肢体缺血预处理对家兔肢体缺血再灌注后肺损伤时肺抗氧化系统的影响并探讨其机制.方法:健康家兔30只,随机分为假手术对照组(SC)、缺血再灌注组(IR)和缺血预处理组(IPC),每组10只.实验结束时,取肺组织测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量,同时计算肺系数及进行肺病理学检查.结果:肢体缺血再灌注后肺组织SOD、GSH-PX活性和NO含量显著下降,XOD活性和MDA含量明显增高,肺系数升高,肺组织病变明显,肢体缺血预处理可明显缓解上述变化.结论:家兔肢体缺血再灌注后,肺抗氧化功能下降参与肺脏的损伤过程,肢体缺血预处理对这种肺损伤有明显的保护作用.【总页数】3页(P607-609)【作者】陈雷;金可可;潘景业;金广健;王健;许益笑【作者单位】温州医学院附属第一医院骨科,浙江,温州,325000;温州医学院病理生理教研室;温州医学院附属第一医院骨科,浙江,温州,325000;温州医学院附属第一医院骨科,浙江,温州,325000;温州医学院附属第一医院骨科,浙江,温州,325000;温州医学院病理生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R6【相关文献】1.无创性缺血预处理对肢体缺血再灌注性肺换气功能损伤及一氧化氮/内皮素-1失衡的影响 [J], 王良荣;郑浏璞;蒋柳明;王万铁;赵喜越;熊响清;林丽娜2.肢体缺血预处理和BQ123药物后处理对大鼠肢体缺血再灌注后肝损伤的影响[J], 赵林静;王永玲;杨保胜;张金盈3.肢体缺血预处理对肺缺血再灌注兔细胞因子和肺细胞凋亡的影响 [J], 耿智隆;吴芳;曹虹;刘东;马辉兰;吴建伟4.TNF 在家兔肢体急性缺血再灌注及缺血预处理后血清中的表达和作用 [J], 韦启后;赵德海;覃淑云;黄衍强5.缺血预处理对家兔肢体缺血再灌注损伤脂质过氧化的影响 [J], 姜广建;门秀丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
α7nAChR的抗炎及神经保护作用研究进展
α7nAChR的抗炎及神经保护作用研究进展谢佳丽;刘超明;李良东;黄志华【摘要】烟碱型乙酰胆碱受体(Nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs)是配体门控离子通道蛋白,广泛分布于中枢和外周神经系统,在神经元和非神经元细胞中表达,参与各种生理反应.其亚型α7nAChR的抗炎及神经保护作用日益受到关注,被认为是一个潜在的治疗神经系统疾病和炎症的作用靶点.本文总结了α7nAChR在神经系统及非神经系统的分布和表达,在免疫反应中的作用(胆碱能抗炎通路),以及神经保护作用,并指出小胶质细胞α7nAChR可作为抗炎通路治疗靶点.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)003【总页数】6页(P471-476)【关键词】α7nAChR;炎症;神经保护作用;研究进展【作者】谢佳丽;刘超明;李良东;黄志华【作者单位】赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院,江西赣州 341000;赣南医学院基础医学院,江西赣州 341000;赣南医学院基础医学院,江西赣州 341000【正文语种】中文【中图分类】R364.5炎症是一个重要的宿主反应，对机体稳态发挥十分重要的作用。
在中枢神经系统(central nervous system, CNS)中，小胶质细胞类似固有免疫系统的巨噬细胞，虽然小胶质细胞可清除细胞碎片，进行组织愈合和修理，但其慢性激活参与了神经退行性疾病的发病过程[1]。
烟碱型乙酰胆碱受体(Nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs)属于“半胱氨酸环” 配体门控离子通道超家族，在记忆、学习、运动、关注和焦虑等多个生理进程中起着重要的作用。
其中α7nAChR参与多种生理功能，如神经保护、突触可塑性和神经元的存活等，且被认为在各种各样的精神及神经疾病中扮演重要角色。
在外周及中枢，高表达α7nAChR的免疫细胞起抑制炎症的作用[2]，被认为是一个突出的抗炎治疗靶点。
肢体缺血再灌注后肺损伤小鼠肺组织AT1R和Mas受体蛋白表达变化
肢体缺血再灌注后肺损伤小鼠肺组织AT1R和Mas受体蛋白表达变化刘帆;王枭鹰;SHAHIN Ahmed;MUHAMMED Rafi-N;李树民;杨秀红【摘要】目的: 通过观察小鼠肢体缺血再灌注(LIR)后不同时点肺组织血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)和Mas受体蛋白表达与肺损伤的变化,探讨局部组织AT1R和Mas受体蛋白表达失衡在LIR急性肺损伤(ALI)中的作用.方法:42只8周龄雄性ICR小鼠随机分为7组,每组6只,其中1组作为对照组,其余6组为再灌注0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h和12 h模型组.模型组小鼠用橡皮圈结扎双后肢根部,缺血2 h后剪断橡皮圈,分别于再灌注后不同时点眼球取血处死小鼠.取肺组织计算脏器系数和湿/干重比;肺泡灌洗液细胞计数和蛋白浓度检测;肺组织病理切片常规HE染色观察肺组织形态变化并进行病理损伤评分;Western blot检测肺组织AT1R和Mas 受体蛋白的表达.结果:模型组小鼠肺脏器系数、湿/干重比、肺泡灌洗液细胞计数和蛋白浓度在LIR后显著升高.病理学结果显示,LIR后不同时点小鼠肺组织出现肺泡壁毛细血管扩张和充血、间质和肺泡水肿、血管壁和支气管壁炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、炎症细胞浸润及肺气肿等不同程度的损伤变化,且随着再灌注时间的延长,肺损伤评分逐渐升高.Western blot结果显示,AT1R蛋白在再灌注0.5 h时开始升高,1 h达到最高,之后随再灌注时间的延长,AT1R表达逐渐降低;Mas受体蛋白随再灌注时间延长逐渐升高.结论:LIR引起急性肺损伤,并随再灌注时间的延长损伤逐渐加重;AT1R和Mas受体蛋白表达的变化可能与小鼠LIR后急性肺损伤有关.%AIM: To explore the role of imbalance of local renin-angiotensin system (RAS) in lung injury by observing the changes of angiotensin Ⅱ type 1 receptor (AT1R) and Mas receptor protein expression in the lung and the degree of lung injury subject to limb ischemia-reperfusion (LIR) inthe mice.METHODS: Male ICR mice (n=42, 8 weeks old) were randomly assigned into 7 groups (6 in each group), including control group and 6 model groups with LIR of 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h and 12 h reperfusion.Tourniquets were used to block the blood flow of the hind limbs of the ICR mice and were released after 2 h ischemia to initiate reperfusion.The mice were sacrificed by eyeball blood withdrawal at different time points after reperfusion.The organ coefficient and wet/dry weight ratio (W/D) of the lung tissue were calculated.Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was taken for cell counting and protein concentration measurement.The histopathological changes of the lung tissues was observed, and the pathological score was calculated.The protein expression of AT1R and Mas receptor in the lung tissues was determined by Western blot.RESULTS: The organ coefficient, W/D of lung tissue, and cell number and protein concentration in BALF of model groups were significantly higher than those in control group after LIR.The pathological changes were found in the lung tissue of model mice, including alveolar capillary dilation and congestion, edema, inflammatory cell infiltration in peripheral vascular, alveolar and bronchial walls, alveolar septal thickening and inflammatory cell infiltration.The lung injury score was elevated gradually along with the extension of reperfusion time.The protein expression of AT1R began to increase at reperfusion time points of 0.5 h and 1 h.With the extension of reperfusion time, the protein expression of AT1R decreased gradually.Conversely, the protein expression of Mas receptor increased gradually with prolonged reperfusion.CONCLUSION:LIR induces acute lung injury gradually.The imbalance of AT1R and Mas receptor expression may be involved in the damage process.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2017(033)007【总页数】7页(P1264-1270)【关键词】缺血再灌注;肺损伤;肾素-血管紧张素系统;血管紧张素Ⅱ1型受体;Mas 受体【作者】刘帆;王枭鹰;SHAHIN Ahmed;MUHAMMED Rafi-N;李树民;杨秀红【作者单位】华北理工大学基础医学院生理学系, 河北省慢性疾病重点实验室, 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室, 河北唐山 063000;华北理工大学基础医学院生理学系, 河北省慢性疾病重点实验室, 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室, 河北唐山 063000;华北理工大学基础医学院生理学系, 河北省慢性疾病重点实验室, 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室, 河北唐山 063000;华北理工大学基础医学院生理学系, 河北省慢性疾病重点实验室, 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室, 河北唐山 063000;华北理工大学基础医学院生理学系, 河北省慢性疾病重点实验室, 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室, 河北唐山 063000;华北理工大学基础医学院生理学系, 河北省慢性疾病重点实验室, 唐山市慢性病临床基础研究重点实验室, 河北唐山 063000【正文语种】中文【中图分类】R363肢体缺血再灌注(limb ischemia-reperfusion，LIR)可引发急性肺损伤(acute lung injury，ALI)。
α7nAChR激动剂和乌司他丁对大鼠肠缺血再灌注后肺组织IL-1β、IL-6和TNF-α作用的比较
Ｔ Ｆ 的浓度 均升 高。 Ｎ— 且有统计 学意义（ Ｐ＜００ ） 与 Ｍ 组比较 ，Ｍ 组和 Ｕ ．５ ； Ｐ Ｍ组肺 组织损伤 明显减轻 ， 一ｐ Ｉ １、 Ｌ
Ｉ． Ｔ Ｆ０的浓度 均下降， Ｌ６和 Ｎ ． Ｉ 且有统计学意义（ Ｐ＜０ ５ ；Ｍ 组和 Ｕ ． ）Ｐ ０ Ｍ组之 间无ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ显差异。结论 ： ７ Ａ ｈ ａ ｎ Ｃ Ｒ激
和 Ｔ Ｆ ｏ的 影 响 。方 法 ：２只 健 康 清 洁 级 Ｓ 大 鼠 （ ０ Ｎ． ｔ ３ Ｄ ２０—２０ｇ 随机 分 为 ４组 （ ５ ） ｎ＝８ ： ） Ｓ组 （ 手 术 组 ） Ｍ 假 、
组（ 血／ 缺 再灌 注组 ） Ｐ 、 Ｍ组 （ 型＋Ｐ Ｕ ２ ２ ８ 模 Ｎ ．８ ９ ７组 ） Ｕ 组 （ 型＋ 司他 丁组 ） 、Ｍ 模 乌 。建 立肠缺 血 ７ ｎ再 灌 ５ｍｉ
ｗ ｓ ｅ ｔ ｂ ｉｈ ｄ ｂ ｌ ｍｐ ｎ ｈ ｕ ｅ ｏ ｓ ｎ ｅ ｉ ｒ ｒ ｏ ５ ｍｉｕ ｅ ｎ ｈ ｎ ｒ ｐ ｒｕ ｉｎ ｆ ｒ２ ｈ ｕ ｓ Ｌ ｎ ａ ｓａ ｌ ｅ ｙ ｃａ ｉ ｇ ｔ ｅ ｓ ｐ ｒ ｒｍｅ ｅ ｔｒ ａｔ ｙ ｆ ｒ７ ｎ ｔｓ ａ ｄ ｔｅ ｅ ｅｆ ｓｏ ｏ ｏ ｒ ． ｕ ｇ ｓ ｉ ｃ ｅ
注 ２ｈ损 伤模 型 。所 有 大鼠 均 于肠 系膜 上动 脉 开放后 ２ｈ处 死 ， 标本 进行 肺 组 织的病 理 学检 查 ； 用 取 采 Ｅ Ａ法测定肺组织 中 Ｉ．Ｂ Ｉ．、 Ｎ ．ｔ Ｕｓ Ｌ１ 、Ｌ６Ｔ Ｆｏ的浓度。结果 ： Ｓ组比较 ， 与 Ｍ组肺组织损伤明显加重 ， －ｐ Ｉ－和 Ｉ １、 ６ Ｌ Ｌ
ｎ ｃ ｏ ｉ ｃ ｏ － ｌ ｈ ｎ ｓｕ ｆ ａ ｘ ｅ ｉｎ ｅ ｔ ｓ ｎ ｌ ｓ ｈ ｍ ｉ －ｅ ｅ ｆ ｉ ｎ Ｚ Ｕ Ｇｕ －ｏ ｇ ｅ ｒ ｓｓ ａ ｔ ｒ ａ ｐ ａ ｉ ｌ ｇｔ ｓ ｅ ｏ ｔ ｅ ｐ ｒｅ ｃ ｄ ｉ ｅ ｔ ａ ｃ ｅ ａ ｒ ｐ ｒｕｓｏ Ｈ ｏｓ ｎ ， Ｌ ｆ ｎ ｕ ｉ ｒｓ ｎ ｉ ｉ ＵＯ
NAC对MTⅠⅡ敲除小鼠脑缺血再灌注后脾细胞损伤的影响的开题报告
NAC对MTⅠⅡ敲除小鼠脑缺血再灌注后脾细胞损
伤的影响的开题报告
标题： NAC对MTⅠⅡ敲除小鼠脑缺血再灌注后脾细胞损伤的影响
背景：脑缺血再灌注（I/R）损伤可以引起神经元死亡，导致神经功能丧失。
此外，I/R进一步激活免疫细胞，诱导炎症和细胞凋亡。
脾脏是免疫系统的重要器官，也是免疫细胞的主要来源。
因此研究I/R后脾细胞的影响具有重要意义。
MT ⅠⅡ是脑缺血再灌注损伤中的一种重要因素，可以引起氧化应激和细胞死亡。
N-乙酰半胱氨酸（NAC）是一种强效的抗氧化剂，具有保护细胞免受氧化应激和细胞死亡的能力。
因此，本研究
旨在评估NAC对MT ⅠⅡ敲除小鼠脑缺血再灌注后脾细胞损伤的影响。
方法：使用MT ⅠⅡ敲除小鼠进行脑缺血再灌注模型。
小鼠随机分
为3组：对照组（假手术+生理盐水处理），MTⅠⅡ敲除组（脑缺血再
灌注+生理盐水处理）和NAC组（脑缺血再灌注+NAC治疗）。
在24h
后采集小鼠脾脏组织，制备单细胞悬液，并使用流式细胞术检测细胞凋
亡和坏死，以及免疫细胞亚群的变化。
预期结果：预计MTⅠⅡ敲除小鼠脾细胞中会观察到明显的细胞损伤。
NAC的应用预计可以减轻脾细胞损伤，同时降低免疫细胞的细胞凋亡和
坏死。
此外，预计NAC可以改变脾细胞免疫细胞亚群的比例，从而减轻
脾脏免疫功能的不良影响。
意义：本研究将展示NAC作为一种潜在的治疗手段，可以降低MT
ⅠⅡ敲除小鼠脑缺血再灌注损伤后脾细胞的损伤，并改善免疫细胞的亚
群比例。
这将有助于深入了解I/R损伤在多器官系统中的影响，并为寻找新的治疗策略提供新的科学依据。
缺血后处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护效应的实验研究
缺血后处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护效应的实验研究库玛;夏中元;高瑾;孟庆涛【期刊名称】《中国医药导刊》【年(卷),期】2009(11)5【摘要】目的:研究缺血后处理(IPO)对在体大鼠肺缺血/再灌注损伤(IRI)的作用及机制.方法:健康SD大鼠48只,随机分成6组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理组(IPO组).采用开胸夹闭和开放左肺门建立大鼠IRI模型,S组持续灌注150min;I/R组缺血40min.再灌注105min;IPO组缺血40min后,短暂再灌注30s和缺血30s,反复3次,然后再恢复灌注102min.测定各组动脉血氧分压(PaO2)、肺组织湿/干重比(W/D)、血清丙二醛(MDA)含量、HO-1蛋白表达,并观察肺组织病理变化.结果:与S组比较,I/R组、IPO组动脉血PaO2下降,而肺组织W/D、血清MDA含量增加(P<0.05或0.01);与I/R组比较,IPO组动脉血PaO2显著增高,肺组织W/D、血清MDA含量明显降低(P<0.05);肺组织病理损伤:IPO 组明显轻予I/R组.绪论:缺血后处理明显减轻在体大鼠肺缺血/再灌注损伤,其机制与其减轻脂质过氧化有关.【总页数】3页(P796-798)【作者】库玛;夏中元;高瑾;孟庆涛【作者单位】武汉大学人民医院麻醉科,武汉,430060;武汉大学人民医院麻醉科,武汉,430060;武汉大学人民医院麻醉科,武汉,430060;武汉大学人民医院麻醉科,武汉,430060【正文语种】中文【中图分类】R563;R473.6;R619+.9【相关文献】1.尼可地尔后处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 时应路;葛圣林;张成鑫2.七氟烷预处理联合后处理对肺缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制 [J], 刘备;唐冬梅;杜宁;徐桂萍3.缺血后处理对肺缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用 [J], 孙雷;李文雅;刘文科;张林4.缺血后处理对肺缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用 [J], 孙雷;李文雅;刘文科;张林;5.远隔缺血后处理对大鼠深低温肺缺血再灌注损伤的保护机制研究 [J], 李博文;王志维;吴智勇;任伟;刘化刚;昌金星因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
七氟烷预处理对缺血性脑损伤小鼠神经保护作用及与TREK-1通道的关系
１ ． ２ 动物分组及预处理
将野生型小 鼠随机分为
醉药如氟烷 、 七氟烷、 乙醚等激活。Ｔ Ｒ Ｅ Ｋ 一 １ 通道 开 放后 ， 介导 线性 Ｉ ， Ｖ关 系 的背景 Ｋ 电流 和 低 的膜 电 位， 有助于调控水及离子动态平衡、 清除； 兴奋性毒性 物质 及 氧 自由基 ， 发 挥 神经 保 护作 用 ２ ０ １ ６年 １
１ ． １ 动物 、 材料及仪器 健康雄性 ８ 周龄野生型和 Ｔ Ｒ Ｅ Ｋ ． １ 基因敲除型 Ｃ ５ ７ Ｂ Ｉ Ｚ ６ Ｊ 小 鼠各 ３ ６只， 体 质 量２ １ — ２ ９ ｇ ， 由赣南医学院动物实验 中心提供 。七
氟烷 （ 美 国 Ｂ ａ ｘ ｔ ｅ ｒ公 司 ） ， 氯 化 三 苯 基 四 氮 唑 （ Ｔ Ｉ ＇ Ｃ） 、 ４， ６ 一 二 脒基 ＿ ２ － 苯基 吲 哚 （ Ｄ Ａ Ｐ Ｉ ） （ 美国Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ 公司） ， 兔抗 Ｔ Ｒ Ｅ Ｋ 一 １ （ 以色 列 Ａ ｌ ｏ ｍ ｏ ｎ ｅ Ｌ ａ ｂ ｓ 公 司） ， Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ试剂 盒 （ 美国 Ｍ ｉ ｌ ｉ ｐ ｏ ｒ ｅ公 司 ） ， 花青 素 （ Ｃ ｙ ３ ）
用 的关 系 。
１ 材 料与 方法
３ ０ ｍ ｉ ｎ ／ 次， １次／ 链续 处 理 ４ ｄ 。 预 处理 结束 后 ２ ４ ｈ ， 进行 局灶 性脑缺 血再 灌 注 （ ＭＣ ： Ａ Ｏ） 模型制备。
预处 理期 间监测 各 组 生 理 指标 （ ｐ Ｈ、 Ｐ ａ Ｃ Ｏ 、 Ｐ ａ Ｏ ） ， 维持 肛温 （ ３ ７±０ ． ５ ） ｑ Ｃ。 １ ． ３ ＭＣ Ａ Ｏ模 型制 备 应 用 线 栓 法建 立 ＭＣ Ａ Ｏ模
＜ ０ ． ０ ５ ） ， 实验 ２组 以上 指标 与对 照 ２组 比较差异无统计学意义 （ Ｐ均 ＞ ０ ． ０ ５ ） 。结论 七氟烷预处理对 缺血性脑
α7nAchR烟碱型乙酰胆碱受体拮抗剂对高氧保护脓毒症小鼠效应的影响
α7nAchR烟碱型乙酰胆碱受体拮抗剂对高氧保护脓毒症小鼠效应的影响摘要】目的：观察小鼠皮下注射α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAchR）拮抗剂甲基牛扁亭对100%氧吸入后酵母多糖所诱导的脓毒症小鼠的变化及其意义。
方法：腹腔注射酵母多糖或等容量生理盐水，随机分组为：(1)生理盐水+空气；(2)酵母多糖+空气；(3)酵母多糖+空气+甲基牛扁亭组；(4)酵母多糖+100%氧气；(5)酵母多糖+100%氧气+甲基牛扁亭组。
观察7天动物存活率，注射酵母多糖后24小时取心、肝、肺、肾，做组织病理学以及病理学评分，测定15小时血气和24小时血浆中生化指标及炎症因子。
结果：100%氧吸入可提高脓毒症动物的存活率，改善其肝肾生化指标，降低病理评分，减低炎症因子TNF水平。
给予α7nAchR受体拮抗剂甲基牛扁亭后，脓毒症动物第7天存活率由80%下降到40%，各器官病理评分显著升高，测定血浆中各项生化指标显著增高，血浆中肿瘤坏死因子-α水平显著增高，且与脓毒症+100%氧气组比较，其差异均有显著统计学意义(p<0.05)。
结论：100%氧对酵母多糖所致脓毒症小鼠有保护作用。
α7nAchR受体拮抗剂甲基牛扁亭可逆转100%氧气对酵母多糖所致脓毒症小鼠的保护作用，表明胆碱能抗炎通路参与100%氧对酵母多糖所致脓毒症小鼠的保护效应。
【关键词】脓毒症 100%氧气胆碱能抗炎通路α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAchR）肿瘤坏死因子α【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）03-0044-03【Abstract】 Objective: Studies have shown that 100% oxygen inhalation has a protective effect on murine sepsis model, without causing oxidative stress and organ damage, suggesting that high oxygen may become an important treatment for sepsis. This article was scheduled to observe the effects of subcutaneously injecte d α7 nicotinic acetylcholine receptor (α7nAchR) antagonist methyllycaconitine on protective action against zymosan-induced sepsis by 100% oxygen in mice. Methods: Animals having intraperitoneal injection of zymosan or the same volume of normal saline, were randomly divided into five groups: (1) normal saline + air; (2) zymosan + air; (3) zymosan + air + methyllycaconitine; (4) zymosan +100% oxygen; (5) zymosan +100% oxygen + methyllycaconitine groups. 7-day animal survival rate, heart, liver, lung, kidney tissue pathology and pathological scores as well as plasma biochemical indices and inflammatory factors at 24 hours after zymosan injection were determined. Results: 100% oxygen inhalation improved the survival rate of animals with sepsis, improved liver and kidney biochemical indicators, and reduced the pathologic scoreand the level of inflammatory cytokine TNF. Given α7nAchR receptor antagonist methyllycaconitine, the7-day animal survival rate decreased from 80% to 40%, organ pathology score was significantly increased, measured plasma biochemical indexes and plasma tumor necrosis factor-α levels were significantly increased, when comparedwith those in the zymosan +100% oxygen group, with statistically significant differences (P <0.05). Conclusion: 100% oxygen has a protective effect on zymosan induced septic mice which was reversed by α7nAchR antagonist, indicating that the cholinergic anti-inflammatory pathway is involved in the protective effect of 100% oxygen on zymosan-induced sepsis.引言脓毒症（sepsis）是是住院病人死亡的一个主要原因[1, 2]。
大鼠肢体缺血再灌注急性肺损伤细胞自噬及其相关蛋白的表达
大鼠肢体缺血再灌注急性肺损伤细胞自噬及其相关蛋白的表达李跃兵;康于庆;叶靖;赵振龙;林春水;秦再生;古妙宁【摘要】目的：研究大鼠双下肢缺血再灌注所致急性肺损伤（LIR‐ALI）肺组织细胞早期自噬及其相关蛋白的表达。
方法采用LIR‐ALI模型，12只雄性SD大鼠，以随机数字表法分为假手术（Sham）组，肢体缺血再灌注（I/R）组，每组6只。
采用ELISA检测血清白乳酸脱氢酶（LDH）和免疫荧光法检测肺组织病理变化，利用RT‐PCR检测各组肺组织Beclin1和Atg5mRNA表达及Westernblot检测LC3蛋白的表达。
结果与Sham组比较，I/R组LDH值升高，显示大鼠LIR‐ALI模型造模成功且肺组织免疫荧光特异性标记抗体高表达（P＜0．01）。
采用2－△△CT法分析肺组织Beclin1和Atg5mRNA相对表达量，在I/R组较Sham组升高（P＜0．01）；Westernblot法检测显示，I/R组较Sham组LC3‐Ⅰ、LC3‐Ⅱ高表达、LC3‐Ⅱ/GAPDH亦明显升高（P＜0．01）。
结论大鼠LIR‐ALI后激活肺组织细胞自噬及其相关蛋白高表达。
%Objective To explore the early expression of autophagy associated proteins in lung tissues in acute lung injury in‐duced by remote limb ischemia reperfusion(LIR‐ALI)inRats .Methods Twelve adult male SD rats weighting 220-250 g were made LIR‐ALI models and divided randomly into two groups(6 in each group):Sham operation group and ischem ia‐reperfusion(I/R)group .Therats were anesthetized and the tissues of lung were removed at the end of 4 hours of reperfusion after 3 hours of is‐chemia .The serum lactate dehydrogenase(LDH) were detected with ELISA and the pathological changes of lung ti ssues were ob‐served by immunofluorescence techniques ;the expression of Beclin1 protein and Atg5 mRNA in the lungtissues were detected by reverse transcription PCR(RT‐PCR) .Microtubules associated protein light chain 3(LC3)in the lung tissues were detected by West‐ern blot test .Results Compared with Sham group ,the level of serum LDH in I/R group were very higher than Sham group(P<0 .01) ,which showed that the rats models of LIR‐ALI were established .The expression of specific antibody ,Beclin1 protein ,Atg5 mRNA and LC3‐Ⅰ ,LC3‐Ⅱ and the ratio of LC3‐Ⅱ /GAPDH in lung tissues were all very higher in I/R group than in Sham group (P<0 .01) .Conclusion ALI can be induced by LIR and the expression of autophagy associated proteins in lung tissues in LIR‐ALI model is very higher in rats .【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2014(000)032【总页数】4页(P4280-4282,4287)【关键词】呼吸窘迫综合征 ,成人;自噬;肢体缺血再灌注;Beclin1;LC3【作者】李跃兵;康于庆;叶靖;赵振龙;林春水;秦再生;古妙宁【作者单位】南方医科大学附属南方医院麻醉科，广州510515; 浙江中医药大学附属第二医院麻醉科，杭州310005;南方医科大学附属南方医院麻醉科，广州510515;南方医科大学附属南方医院麻醉科，广州510515;南方医科大学附属南方医院麻醉科，广州510515;南方医科大学附属南方医院麻醉科，广州510515;南方医科大学附属南方医院麻醉科，广州510515;南方医科大学附属南方医院麻醉科，广州510515【正文语种】中文【中图分类】R563.9Abstract:Objective To explore the early expression of autophagy associated proteins in lung tissues in acute lung injury induced by remote limb ischemia reperfusion(LIR-ALI)in Rats.Methods Twelve adult male SD rats weighting 220-250 g were made LIR-ALI models and divided randomly into two groups(6 in each group):Sham operation group and ischemia-reperfusion(I/R)group.The rats were anesthetized and the tissues of lung were removed at the end of 4 hours of reperfusion after 3 hours of ischemia.The serum lactate dehydrogenase(LDH) were detected with ELISA and the pathological changes of lung tissues were observed by immunofluorescence techniques；the expression of Beclin1 protein and Atg5 mRNA in the lung tissues were detected by reverse transcription PCR(RT-PCR).Microtubules associated protein light chain 3(LC3)in the lung tissues were detected by Western blot test.Results Compared with Sham group,the level of serum LDH in I/R group were very higher than Sham group(P<0.01),which showed that the rats models of LIR-ALI were established.The expression of specific antibody,Beclin1 protein,Atg5 mRNA and LC3-Ⅰ，LC3-Ⅱ and the ratio of LC3-Ⅱ/GAPDH in lung tissues were all very higher in I/R group than in Sham group(P<0.01).Conclusion ALI can be induced by LIR and the expression of autophagy associated proteins in lung tissues in LIR-ALI model is very higher in rats.肢体缺血再灌注(limb ischemia-reperfusion，LIR)在临床外科中较常见，如动脉损伤或栓塞后再通、断肢再植、肢体创伤及止血带的长时间应用等；特别是在地震灾难中，肢体缺血损伤的致死、致残率非常高，值得关注。
七氟烷预处理联合后处理对肺缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制
七氟烷预处理联合后处理对肺缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制刘备;唐冬梅;杜宁;徐桂萍【摘要】Objective To explore the protective effect of sevoflurane preprocessing combined with postprocessing on lung ischemia-reperfusion injury ( IRI) in rats and its mechanism .Methods Fifty-four adult male SD rats were randomly divided into three groups.Rats in the sham operation group (group S) only received dissociation of the left pulmonary hi-lum without blocking .The lung ischemia-reperfusion group ( I/R group) received blocking the left pulmonary hilum for 45 minutes and reperfusion for 120 minutes for establishment of the rat model of IRI .The sevoflurane preprocessing combined with postprocessing group (SP group) received inhalation of 2.1%sevoflurane for 30 minutes prior to blocking the left pul-monary hilum, then blocking the left pulmonary hilum for 45 minutes, and inhaling 2.1%sevoflurane again for 30 minutes in the immediate release of the vascular clamp for establishment of the IRI model .Six rats were randomly sacrificed after reperfusion for 30, 60 and 120 minutes, respectively.Their lung tissues were taken for measuring the wet-to-dry weight ra-tio ( W/D ratio ) .The superoxide dismutase ( SOD ) activity was detected by colorimetry .The tumor necrosis factor-α( TNF-α) level was detected by enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA) .The mRNA expression of angiotensin-con-verting enzyme ( ACE) was measured by RT-PCR.The lung histopathology results were observed under the lightmicro-scope.Results Compared with group S , the W/D ratios, TNF-αlevels and ACE mRNA expression in the lung tissues were increased at each reperfusion time point in the I /R group and SP group (all P<0.05), and the SOD activities were decreased (all P<0.05).Compared with the I/R group, the W/D ratios, TNF-αlevels and ACE mRNA e xpression in the lung tissues were decreased at each reperfusion time point in the SP group (all P<0.05), and the SOD activities were elevated (all P<0.05).Under the light microscope, the lung histopathological injuries in the SP group were alleviated as compared with those of the I/R group.Conclusion Sevoflurane preprocessing combined with postprocessing may have a protective effect on lung IRI in rats by inhibiting the oxidative stress responses and inflammatory responses .%目的探讨七氟烷预处理联合后处理对大鼠肺缺血再灌注损伤( IRI)的保护作用及其机制. 方法选择成年雄性SD大鼠54只,采用随机数字表法将其分为3组:假手术组( S组)仅游离左肺门,不阻断;肺缺血再灌注组( I/R组)采用阻断左肺门45 min后再灌注120 min的方法制备IRI模型;七氟烷预处理联合后处理组( SP组)阻断左肺门前吸入2.1%七氟烷,阻断左肺门45 min,于松开血管夹即刻再次吸入2.1%七氟烷30 min制备IRI模型. 分别于再灌注30、60和120 min时随机取6只大鼠处死,取肺组织,测定湿/干重比( W/D比) ,比色法检测超氧化物歧化酶( SOD)的活性,ELISA法测定TNF-α表达,RT-PCR法测定血管紧张素转化酶( ACE) mRNA表达. 光镜下观察肺组织病理学检查结果. 结果与S组相比,I/R 组和SP组再灌注各时点肺组织W/D比、TNF-α水平及ACE mRNA表达均升高(P均<0.05),SOD活性均降低(P均<0.05);与I/R组比较,SP组再灌注各时点肺组织W/D比、TNF-α水平及ACE mRNA表达均降低(P均<0.05),SOD活性均升高(P 均<0.05). 光镜下SP组肺组织病理学损伤较I/R组减轻. 结论七氟烷预处理联合后处理可能通过抑制氧化应激反应及炎症反应对大鼠肺缺血再灌注损伤发挥保护作用.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2015(055)017【总页数】3页(P17-19)【关键词】缺血再灌注损伤;七氟烷;超氧化物歧化酶;肿瘤坏死因子α【作者】刘备;唐冬梅;杜宁;徐桂萍【作者单位】石河子大学医学院,石河子832000;新疆维吾尔自治区人民医院;石河子大学医学院,石河子832000;新疆维吾尔自治区人民医院【正文语种】中文【中图分类】R563肺缺血再灌注损伤(IRI)多发生于肺移植、失血性休克、体外循环后，IRI发生时，肺组织缺血后的再灌注不仅不能使肺功能恢复，反而可加重肺功能障碍和结构损伤，并最终发展为急性肺损伤(ALI)或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)［1］。
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ＡＬＩ，ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｊｄｅ ５ ｍｇ／ｋｇ
ｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｌｙ ｍｉｃｅ
ｗｅｒｅ
ｉｎｓｔｉｌｌｅｄ（ｉｎ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ
ｔｈｅ
ｔｏ
ｓａｌｉｎｅ）ｔｏ
ｏｆ ５－ｍｉｎ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｉｓｃｈｅｍｉａ
ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＡＬｌ．Ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｐ，ｔｈｅ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ｔｘｌ）。注射完成后，用１ ｍｌ注射器滴入０．５
ｍｌ
空气并轻轻旋转小鼠以保证脂多糖均匀分布在 肺内。 标本采集 于气管内滴人脂多糖后２４ ｈ时每
公司，美国），抗高迁移率族蛋白１（ＨＭＧＢｌ）抗体 （批号：ａｂｌ８２５６，Ａｂｃａｍ公司，美国），抗ｐ—ａｃｔｉｎ抗体 （批号：ＢＭ０６２７，武汉博士德生物工程有限公司）。 动物选择及分组 清洁级健康雄性Ｃ５７ＢＬ／６
万方数据
主堡壁醛堂苤查！！！！生！旦笙！！鲞箜！塑
！！尘！垒！竺些！！垫！！！！！！！！！！！！！！：！！！堕！：！
７６７
肺水含量的测定各取１００ ｍｇ右上肺叶组织， 放人温度设定在８５℃的烤箱中７２ ｈ后称重（即干 重）。计算肺水含量＝（湿重一干重）÷湿重Ｘ
１００％［川．
１
结
果
与ｃ组比较，ＡＬＩ组肺水含量、ＭＰＯ活性、ＩＬ一 Ｂ、ＴＮＦ—ｄ、ＩＬ．６含量和ＨＭＧＢｌ表达水平升高，
ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝１６ ｅａｃｈ）ｕｓｉｎｇ
ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｄ—ＢＧＴ
ａ
ｒａｎｄｏｍ
ｎｕｍｂｅｒ ｔａｂｌｅ：ｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ Ｃ），ＡＬｌ
ｌｉｍｂ
ｇｒｏｕｐ，ｌｉｍｂ ｉｓｃｈｅｍｉｃ
ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ Ｐ），ｄ—ｂｕｎｇａｒｏｔｏｘｉｎ（０【－ＢＧＴ）ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ
急性肺损伤模型；ｏ【一ＢＧＴ组于模型制备前腹腔注射 ｄ一银环蛇毒素１¨ｇ／ｋｇ；Ｐ＋ｄ—ＢＧＴ组行肢体缺血预 处理，随后腹腔注射ｄ．银环蛇毒素１斗ｇ／ｋｇ并制备 小鼠内毒素性急性肺损伤模型。 小鼠内毒素性急性肺损伤模型的制备参照文 献［１，４］，于模型制备前１２ ｈ禁食水。称量体重后， 腹腔注射１％戊巴比妥钠３０ ｍｇ／ｋｇ麻醉小鼠，固定后 用拔出管芯的２２ Ｇ静脉留置针经声门向小鼠气管 内滴人脂多糖５ ｍｇ／ｋｇ（溶于无菌生理盐水，体积
ｓａｌｉｎｅ １００“１
ｗａｓ
ｉｓｃｈｅｍｉｃ
ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ＋
ｇｒｏｕｐ Ｃ．Ｉｎ ｇｒｏｕｐ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｇｈｔ Ｏｔ—ＢＧＴ，
ｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐ Ｐ＋ｄ—ＢＧＴ）．Ｎｏｒｍａｌ
ｗａｓ
ｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｌｙ ｉｎｓｔｉｌｌｅｄ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ６
缺血５ ｒａｉｎ、再灌注５ ｒａｉｎ），随后制备小鼠内毒素性
一 ～一 一 一～ 一 一 一 ～一
死亡的主要原因…。革兰氏阴性菌产生的内毒素 是急性肺损伤发病的重要诱因‘２。当肺部细胞与 内毒素接触时会诱发肺内中性粒细胞浸润、促炎因 子释放，导致肺泡结构破坏和低氧血症的发生。３‘４。 研究表明，肢体缺血预处理可减轻大鼠内毒素性急 性肺损伤。５。，明确其机制具有重要意义。旺７型烟碱 乙酰胆碱受体（ｃＪｎＡＣｈＲ）参与了内毒素性急性肺 损伤的发生发展６：本研究拟评价ａ７ｎＡＣｈＲ在肢 体缺血预处理减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作
【关键词】
受体，烟碱；
缺血预处理；
呼吸窘迫综合征，成人；
炎症
Ｒｏｌｅ
ｏｆ胡ｎＡＣｈＲ
ｍｉｃｅ
ｉｎ
ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ
ｉｎｊｕｒｙ
ｂｙ
ｌｉｍｂ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｐｒｅｃｏｎｄｉ－
ｔｉｏｎｉｎｇ ｉｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
Ｇｏｎｇ Ｈｏｎｇｙａｎ，Ｚｈｅｎｇ Ｆａｎｇ，Ｌｉｕ Ｈｏｓｐｉｔａｌ
性急性肺损伤中的作用。方法
用随机数字表法分为５组（ｎ＝１６）：对照组（Ｃ组）、急性肺损伤组（ＡＬＩ组）、肢体缺血预处理组（Ｐ 组）、Ⅱ一银环蛇毒素组（ｄ．ＢＧＴ组）和肢体缺血预处理＋ｄ－银环蛇毒素组（Ｐ＋Ｏｒ－ＢＧＴ组）：ｃ组气管内 滴人１００ Ｉｘｌ生理盐水；ＡＬｌ组通过气管内滴人５ ｍｇ／ｋｇＪ］旨多糖（溶于生理盐水）制备小鼠内毒素性急
像中心（郑芳）；４５０００３
通信作者：董铁立，Ｅｍａｉｌ：ｔｌｄｄｔｌ＠１６３．ｃｏｎ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４－１４１６．２０１６．０６．０３
１
【摘要】
目的评价ｄ７型烟碱乙酰胆碱受体（ａ７ｎＡＣｈＲ）在肢体缺血预处理减轻小鼠内毒素 清洁级健康雄性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠８０只，８～１０周龄，体重２２～２６ ｇ。采
１００
主要试剂及仪器
脂多糖（Ｅ．Ｃｏｌｉ ０５５：Ｂ５，批
号：Ｌ２８８０，Ｓｉｇｍａ公司，美国），ＩＬ一１ Ｂ、ＴＮＦ—ｄ及ＩＬ一６ ＥＬＩＳＡ检测试剂盒（批号分别为ＥＫ０３９８、ＥＫ０５２７、 ＥＫ０４１２，武汉博士德生物工程有限公司），ＢＣＡ试剂 盒（批号：ＡＲｌｌｌ０，武汉博士德生物工程有限公司）， ｄ一银环蛇毒素（批号：Ｔ０１９５，Ｓｉｇｍａ公司，美国），抗 ａ７ｎＡＣｈＲ抗体（批号：ＢＳ６０３９１，Ｂｉｏｗｏｒｌｄ
平。
Ｌａｂ
仅一ＢＧＴ组肺水含量、ＭＰＯ活性、ＩＬ一１Ｂ、ＴＮＦ一仅、ＩＬ．６ 含量和ＨＭＧＢｌ表达水平升高，ａ７ｎＡＣｈＲ表达下调，
７
ｄ生存率降低（Ｐ＜０．０５）。见表１．４。
表１五组小鼠肺水含量及ＭＰＯ活性的比较（％，ｎ＝６，Ｙ＋ｓ）
注：与Ｃ组比较，８Ｐ＜Ｏ ０５ 较，。Ｐ＜０ ０５
与ＡＬｌ组比较，。Ｊｐ＜Ｏ．０５
ｃｙｃｌｅｓ
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ｈｉｎｄｌｉｍｂ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ
ｄ－ＢＧＴ １ ｉ．ｒｇ／ｋｇ
ｗａｓ
５－ｍｉｎ
ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ａｎｄ
ｔｈｅｎ
ｍｏｄｅｌ ｏｆ
ＡＬｌ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｉｎ
ｇｒｏｕｐ
ｉｎｊｅｃｔｅｄ
ｉｎｔｒ８ｐｅｒｉ【ｏｎｅａｌｌｙ ｂｅｆｏｒｅ
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ．Ｉｎ ｇｒｏｕｐ Ｐ＋ｏｒ－ＢＧＴ，ｌｉｍｂ
中华麻醉学杂志２０１６年６月第３６卷第６期
Ｃｈｉｎ Ｊ
Ａｎｅｓｔ生！！！！！！！！！！！！！！！！！：！！！塑！：！
７６５
重症医学・
ｏＬ７ｎＡＣｈＲ在肢体缺血预处理减轻小鼠 内毒素性急性肺损伤中的作用
巩红岩
４５３０００
郑芳
刘景景
张宏伟
岳修勤
董铁立
新乡医学院第一附属医院麻醉科（巩红岩、刘景景、张宏伟、岳修勤），医学影 郑州大学第二附属医院麻醉科（董铁立）
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｄｏｎｇ
Ｔｉｅｌｉ，Ｅｍａｉｌ：ｔｌｄｄｔｌ＠１６３．ｃｏｒｎ Ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ
ａｃｕｔｅ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ
ｔｈｅ
ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｔ７ ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ ｌｉｍｂ
与Ｐ组比
３．０软件进行灰度分析。以目标蛋
表２五组小鼠肺组织ｄ７ ｎＡＣｈＲ及ＨＭＧＢｌ表达 的比较（％，ｎ＝６，Ｙｅｓ）
万方数据
７６６
中华麻醉学杂志２０１６年６月第３６卷第６期
Ｃｈｉｎ Ｊ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌ，Ｊｕｎｅ ２０１６，Ｖ０１．３６， 一 ，一 一一 一一～ 一一～一 一 ～ 一 ～ 一 一～，一 一～ 一一 一 一～一 一 一 一～一
用，为明确其机制提供参考。
材料与方法
ｆｉｎｇｆｉｎｇ，Ｚｈａｎｇ ｏｆ
Ｘｉｎｘｉａｎｇ
Ｈｏｎｇｗｅｉ，Ｙｕｅ Ｘｉｕｑｉｎ，Ｄｏｎｇ Ｔｉｅｌｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ）’，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３０００，
ｏｆ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇ）’，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
ＨＹ，Ｌｉｕ
Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｃｈｉｎａ（Ｇｏｎｇ
ＪＪ，Ｚｈａｎｇ
Ｈ形，Ｙｕｅ ＸＱ）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ
Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３０００，Ｃｈｉｎａ（Ｚｈｅｎｇ Ｆ）；Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａ ｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆ
Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ
４５０００３，Ｃｈｉｎａ（Ｄｏｎｇ ＴＬ）
ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ａ７ｎＡＣｈＲ）ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｌｕｎｇ
ｉｎｊｕｒｙ（ＡＬＩ）ｂｙ
ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｉｎ
Ｅｉｇｈｔｙ ｈｅａｌｔｈｙ ｍａｌｅ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ，ａｇｅｄ ８—１０ ｗｅｅｋｓ，ｗｅｉｇｈｉｎｇ ２２—２６ ｇ，ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ５
一一～一一一～ 一 一～ 一 一 一
急性肺损伤及急性呼吸窘迫综合征是重症患者
（ｎ＝１６）：对照组（Ｃ组）、急性肺损伤组（ＡＬＩ组）、 肢体缺血预处理组（Ｐ组）、“一银环蛇毒素组（ａ－ＢＧＴ 组）和肢体缺血预处理＋仪一银环蛇毒素组（Ｐ＋ｄ— ＢＧＴ组）。ｃ组气管内滴人１００“ｌ生理盐水；ＡＬＩ组 通过气管内滴入５ ｍｇ／ｋｇ脂多糖（溶于生理盐水）制 备小鼠内毒素性急性肺损伤模型；Ｐ组行肢体缺血 预处理（小鼠右后肢绑上止血带，６个循环的右后肢
ｂｌｏｔ
达上调，７ ｄ生存率升高（Ｐ＜０．０５）；与Ｐ组比较，Ｐ＋
法，取右肺组织约１２０ ｍｇ，使用ＲＩＰＡ裂解液匀浆， 用ＢＣＡ试剂盒检测各样本蛋白浓度。将蛋白匀浆 上清液平均分成４份，其中２份分别采用浆蛋白或 总蛋白提取试剂盒分别提取浆蛋白和总蛋白，另外 ２份分别用于ＥＬＩＳＡ检测和ＭＰＯ活性测定。蛋白 样本经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳后电转至０．４５仙ｍ孔径的 ＰＶＤＦ膜上。５％的脱脂牛奶中室温封闭１ ｈ后， ＰＶＤＦ膜孵育一抗（抗ｃｔ７ｎＡＣｈＲ抗体，１：４００；抗Ｂ— ａｃｔｉｎ抗体，１：５００；ＨＭＧＢｌ抗体，１：１ ０００），４℃冰箱 中孵育过夜。次日，加入辣根过氧化物酶标记的相 应生物二抗（１：５ ０００稀释）室温孵育２ ｈ，ＴＢＳＴ液 洗涤３次后行ＥＣＬ显色，在凝胶成像系统中成像， 采用Ｉｍａｇｅ