氨苄青霉素及LB培养基的配置方法
《细胞实验》17 质粒转染实验步骤
质粒转染大肠杆菌材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml 离心管，消毒枪头，无菌操作台实验步骤：1.LB培养基的配制：在950 ml去离子水中加入: 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min.固态培养基LB固体培养基及倒板：（1）.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉（2）.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入氨苄抗生素（终浓度为50μg/ml），以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
（3）.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
（4）.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
2.从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液，室温下使其解冻，解冻后立即置冰上。
3.加入质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl），轻轻摇匀，冰上放置30分钟后。
4.42℃水浴中热击45s/90s，热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。
5.向管中加入1ml LB液体培养基（不含Amp），混匀后37℃振荡培养1小时，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr ）。
6.将上述菌液摇匀后取100μl 涂布于含Amp的筛选平板上，正面向上放置半小时，待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿，37℃培养16-24小时。
同时做两个对照：对照组1：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，其它操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2：以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液，但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
微生物实验常用抗生素浓度配制
微生物实验常用抗生素浓度配制----------四川大学生命学院-微生物代谢与工程重点实验室1、氨苄青霉素（[Amp]Ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
2、羧苄青霉素（[Car]Carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
3、甲氧西林（[Met]Methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml 终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
4、卡那霉素（[Kan]Kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
5、氯霉素（[Cm]Chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
6、链霉素（[Str]Streptomycin）（50mg/ml）溶解500mg链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
7、萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。
8、四环素（[Tet]Tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
LB培养基
LB培养基LB培养基LB培养基是一种培养基的名称，生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种，使菌种成倍扩增,达到使用要求。
培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。
通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒，工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础。
成分表(1L溶液中)：Tryptone(胰蛋白胨)：10gYeast Extract(酵母提取物)：5gNaCl(氯化钠)：10g若配制固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)，切记琼脂直接加入瓶子中，因为它很黏很难冲洗下来。
若配制低盐培养基，则全部减半。
液态培养基根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升培养基，应该在950 ml去离子水中加入：胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.4（该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长）。
用去离子水定容至1L。
121℃高压灭菌20min。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素AMP 分装100mg/ml，使用浓度100μg/ml在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液）。
瓶盖用封口膜封好，4℃保存。
固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉。
高压后一定要在温度降下之前（50℃左右温而不烫）加好抗生素（氨苄青霉素AMP 在1毫升LB培养液中加入1微升氨苄青霉素溶液），并且倒好培养皿（大约1/3高度）。
1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：121℃高压灭菌20min。
高压灭菌后，将融化的LB 固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
3.倒板：一般10ml倒1个板子。
培养基倒入培养皿后，打开盖子，紫外照射10-15分钟。
氨苄青霉素 LB琼脂产品说明书
化学品安全技术说明书第一部分化学品及企业标识产品中文名称：氨苄青霉素LB琼脂产品英文名称：LB Agar with Ampicillin产品编号：028335企业名称：广东环凯微生物科技有限公司地址：广东省广州市黄埔区广州开发区科学城神舟路788号邮编：510663公司网址电子邮件地址：*********************传真号码：************销售热线：************-8602技术热线：************-8877/8876推荐用途和限制用途：生化研究/分析第二部分危险性概述GSH危害性类别非危险物质或混合物GSH标签要素非危险物质或混合物其它危害（健康危害、环境危害）未见报道第三部分成分/组成信息混合物化学品成分：参考培养基使用说明。
有害物质成分：无第四部分急救措施一般信息：无特殊的措施要求。
皮肤接触：立即用清水彻底清洗。
眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水冲洗15min。
如不适就医。
吸入：如果吸入，将人员移动到新鲜空气处，如果没有呼吸，进行人工呼吸操作，并联系医生。
食入：如误食，用水冲洗口腔，如不适就医。
就医信息：出示产品使用说明或者此MSDS。
第六部分 泄露应急处理个人防护： 穿个人实验服,佩戴手套和口罩,避免吸入干粉。
环境保护措施： 用湿布和地拖擦拭干净。
清洁/收集措施： 保持干燥。
迅速清洗弄脏的区域。
第七部分 操作处置与储存安全操作注意事项： 防止粉尘扬起，应提供通风设备。
储存注意事项： 贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖。
第八部分 接触控制/个人防护职业接触限值 没有已知的国家规定的暴露极限。
工程控制： 提供安全淋浴和洗眼设备个人保护措施 呼吸系统防护： 在通风橱里称取产品，佩戴口罩。
眼睛防护： 佩戴安全眼镜。
身体防护： 穿实验室服。
手防护： 戴防化学品手套。
其他防护： 常规的工业卫生操作，工作后及时清洗双手。
第九部分 理化特性外观： 粉末 pH 值： 7.4±0.2（25℃） 颜色： 淡黄色 气味： 特征性 熔点： 无数据资料 沸点： 无数据资料 燃点： 无数据资料闪点：无数据资料爆炸限度 下限： 无数据资料 上限： 无数据资料 热分解：无数据资料第五部分 消防措施危险特性： 不助燃。
质粒蛋白提取、纯化的具体步骤及方法
质粒蛋白提取、纯化的具体步骤及方法携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。
蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。
一、试剂准备1. LB液体培养基：Trytone 10 g，yeast extract 5 g，NaCl 10 g，用蒸馏水配至1000 mL。
2. 氨苄青霉素：100 mg/mL。
3. 上样缓冲液：100 mM NaH2PO4，10 mM Tris，8M Urea，10 mM 2-ME，pH8.0。
4. Washing Buffer：100 mM NaH2PO4，10 mM Tris，8 M Urea，pH6.3。
5. Elution Buffer：100 mM NaH2PO4，10 mMTris，8M Urea，500 mM Imidazole，pH8.0。
6. IPTG：100mM IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）：2.38g IPTG溶于100ml ddH2O中,0.22 um滤膜抽滤，-20℃保存。
二、获得目的基因1. 通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2. 通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
三、构建重组表达载体1. 载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2. PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
四、获得含重组表达质粒的表达菌种1. 将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体的标志（抗Amp或蓝白斑）作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份，高压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
4、TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
5、2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
lb培养基的配制方法和过程
lb培养基的配制方法和过程嘿，咱今儿就来唠唠 lb 培养基的配制方法和过程。
lb 培养基啊，那可是微生物实验里的大宝贝哟！先来说说需要准备啥材料。
那肯定得有胰蛋白胨啦，这就好比做菜的主料，可不能少。
还有酵母提取物，它就像那调料，给培养基增添风味。
再来就是氯化钠，就像给菜加点盐，让味道更丰富。
这三样东西，那可是缺一不可呀！然后呢，咱就开始动手啦。
先找个干净的容器，就像给食材找个合适的锅一样。
把适量的胰蛋白胨倒进去，看着那白白的粉末，是不是感觉很神奇？接着再加入酵母提取物，它们在容器里相聚，就像好朋友见面一样开心。
然后把氯化钠也倒进去，这时候就像给这个小聚会加点热闹的气氛。
接下来，就是加水啦！这水可不能乱加哦，得按照一定的比例。
就好像煮汤的时候，水放多了味道淡，水放少了又煮不起来。
加好水后，就开始搅拌咯，把它们搅拌均匀，让它们充分融合在一起。
这时候你就会发现，原本各自为政的它们，现在变得那么和谐。
搅拌好了，可别着急哦。
还得调节一下 pH 值呢。
就像给菜调个合适的味道一样。
用酸碱去微调，直到达到合适的范围。
然后，把这调好的培养基放到灭菌锅里去灭菌。
这灭菌锅就像是个大烤箱，把里面的细菌啊啥的都给消灭掉，让我们的培养基干干净净的。
等灭菌完了，哇哦，那就是一份完美的 lb 培养基啦！你说这 lb 培养基的配制是不是很有趣？就像做一道特别的美食一样。
你得用心去挑选材料，精心去调配，最后才能得到让人满意的成果。
想象一下，如果没有正确地配制 lb 培养基，那实验会怎么样呢？微生物们可能就没法好好生长，就像人没吃好饭一样没精神。
所以说呀，这配制方法和过程可太重要啦！咱可不能马虎哟！总之呢，lb 培养基的配制虽然看起来有点麻烦，但只要你认真去做，就一定能做好。
就像生活中的很多事情一样，只要用心，就没有做不好的！你说是不是这个理儿呢？。
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法
细菌培养常用培养基和抗生素的配制方法、常用培养基1、LB 培养基将下列组分溶解在0.9L 水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用INNaOH （〜1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。
注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2 、SOB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L 氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份，高压灭菌。
培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L 葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
4 、TB 培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60 C , 再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4 的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
5、2X Y培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用INNaOH (〜1ml )调整pH 至7.0，再补足水至1L 。
注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。
6、YPD 培 养基将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。
建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加1.6g 色氨酸，因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。
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氨苄青霉素的配置方法
一、组分浓度100mg/ml氨苄青霉素
配置体积：50ml
1.称取取5 g 氨苄青霉素粉末，置于50ml灭菌塑料离心管中；
2.加入40ml灭菌水,充分混合溶解之后定容至50ml；
3.0.22um滤膜过滤除菌,小份分装(1ml管)后后,置于-20度保存。
4.LB培养基的氨苄青霉素浓度一般是50-100 ug/ml，采用80 ug/ml。
二、LB培养基配制方法
胰蛋白胨(tryptone) 10g
酵母提取物(yeast extract) 5g
氯化钠(NaCl) 10g
固体培养基另加琼脂粉15-20g
加双蒸水定容至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min
配制方法
（1）称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。
（2）溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。
（3）定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
（4）调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
（5）加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
（6）分装、加塞、包扎。
（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。
三、。