性病实验室检查

原理 如果标本中有淋球菌，则细菌在适当的培
养基（血琼脂培养基及巧克力琼脂培养基） 上和适宜的培养条件下能生长繁殖，根据 其菌落形态、大小、边缘、颜色及生化反 应可以作出细菌的鉴定。
方法 1、标本采集：淋球菌非常娇嫩，对环境抵抗力低，ＰＨ值
温度、营养物质等均可影响淋球菌的检查结果，如采集不
。 当，就会出现阴性结果
二、支原体实验诊断
分离培养：
原理
生殖道支原体主要有三种，即解脲支原体(Uu)、人型支原体(Mh)、生 殖支原体(Mg)，其中Uu与Mh较常见。支原体肉汤培养基中含有酚红 指示剂，并含有尿素、精氨酸或葡萄糖。Uu有尿素酶，分解尿素产 生氨，使pH值上升，培养基的颜色由黄变为粉红色。Mh分解精氨 酸产生氨，也使培养基变为粉红色。而Mg分解葡萄糖，产生乳酸， 使SP-4肉汤培养基由粉红变为黄色，可初步判定有支原体生长，再 将液体培养物转种到固体培养基，在合适的条件下，形成具特征性 油煎蛋样集落。但Mg较Mh、Uu培养不易生长。
结果：
显微镜下革兰氏染色淋球菌和多形核白细胞均染为红 色，但淋球菌色较浓。急性男性患者尿道分泌物中见大 量白细胞及细胞内Ｇ－双球菌，即镜检阳性。
意义
1.直接涂片染色检查简便、快速、低廉、且具有一定的敏感 性和特异性。对急性男性尿道炎患者敏感性可 > 90％； 镜检阳性可诊断淋球菌感染，但阴性不能除外诊断，需作 培养检查。
一、淋球菌实验诊断
（一）、涂片染色检查：
原理
淋病是由淋球菌感染引起的泌尿生殖道化脓性 炎症的一种常见性病。淋球菌为革兰氏染色阴 性双球菌，位于脓细胞内，呈肾形成双成对排 列。淋病患者的尿道或宫颈脓性分泌物中有大 量脓细胞，可通过分泌物涂片革兰氏染色直接 镜检查找到典型的细胞内革兰氏阴性双球菌， 可作出初步诊断。
淋球菌的鉴定特征
菌落形态 革兰染色 氧化酶试验 过氧化物酶试验 快速糖发酵试验 β-内酰胺酶
淋球菌样 革兰阴性双球菌 阳性 阳性 G+ L- M- S阳性﹙PPNG﹚或阴性
氧化酶实验
意义
1. 培养及鉴定结果阳性可确诊淋球菌感染。分离培养、 鉴定淋球菌是诊断淋病的“金标准”，也是目前ＷＨ Ｏ推荐的诊断淋病的方法。
（3）.肛门直肠标本：将棉拭子插入肛门1－2ｃｍ，轻轻
转动，停留20钞钟取出。如果棉拭子碰到粪便应换一根拭子重 取。必ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ时可用直肠镜取材。
（4）.其它部位标本：眼结膜炎者取结膜分泌物，淋菌性咽
炎用无菌棉拭子取喉、咽部脓性分泌物，播散性淋球菌感染的病 人取静脉血5ｍl进行细菌培养。
2、培养基：国外常用的有Ｔhａｙｅｒ－Ｍａｒｔｉｎ（Ｔ－Ｍ）
方法
首先用无菌生理盐水拭子洗尿道口，然后用手由后 向前挤出其脓性分泌物，再用棉拭子插入尿道口 取材，将分泌物均匀薄层涂布于载玻片上。女性 取宫颈或尿道分泌物涂片。凉干作革兰氏染色。
(革兰氏染色法：标本涂片，干燥，火焰固定，依次行结晶紫液初染， 碘液媒染，酒精脱色，，复红复染，水洗后凉干，油镜检查)
2.除男性急性淋病外，男性慢性淋病、女性淋病及其它部 位标本如咽部、眼结膜、直肠、肛门淋球菌感染应采 用培养法确诊。
3.培养的敏感性81~100%。 4.培养的优点有： — 特异性极高（100%）； — 可发现无症状淋球菌感染患者； — 可用于进一步作药敏试验； — 可用于治疗后的判愈试验。
（1）.尿道标本：急性尿道炎有脓性分泌物，可用棉拭
子伸入尿道2－4cm，停留数秒钟取分泌物进行检查。无尿道 分泌物或分泌物少时，取前列腺液检查。
（2）.宫颈标本：取宫颈分泌物培养时不能消毒，先用无菌棉
拭子擦去宫颈表面分泌物，再用另一根棉试子插入宫颈口1－2 ｃｍ，轻轻转动，停留20－30秒钟，让拭子充分沾取较多的分 泌物
3、培养基发生颜色变化后取0.2ml转种到固体培养基， 在固体培养基上，Uu培养3—5天，Mh培养4—5 天，Dienes染色，低倍显微镜下观察。
结果
1、液体培养基培养：Uu、Mh液体培养基颜 色由黄色变红，透明无混浊，则可初步判 断Uu或Mh生长 ；若颜色无改变，则为阴 性。
2、固体培养基培养：固体培养基培养后， 经Dienes染色，低倍显微镜下观察，见 具特征性油煎蛋样集落，可初步确诊，必 要时行PCR鉴定。
等均可影响淋球菌生长，繁殖。
最适生长条件：
35 ℃ ～36℃，含5%～10% CO2，湿 润（70%湿度）的环境。
使用CO2培养箱最佳,若无可用虹缸培养。
结果：
淋球菌在平皿培养基上培 养24－48小时后，形成直 径0.5-1mm左右的圆形,半 透明或灰白色,表面光滑， 湿润，凸起，边缘整齐的 菌落，用接种环触之有粘 性。菌落形态特征也为细 菌鉴定的标准之一。涂片 作革兰染色发现有肾形成 对的革兰阴性双球菌。
2.对于女性病人宫颈分泌物中杂菌较多，不易分辨，易造成 假阳性，ＷＨＯ不推荐用镜检而用培养法作为女性淋病的 诊断依据。
3.慢性病人或用药后的病人因症状不典型，不易查到细胞及G －双球菌，故以培养法进行诊断；
4.其它部位标本如咽部、眼结膜、直肠肛门等部位标本一般 不采用直接镜检而采用培养法确诊。
（二）、培养检查
方法
1、标本采集：男性用无菌棉拭子插入尿道2—
4cm，轻轻转动取出分泌物，或取前列腺液；女 性先用无菌的脱脂棉擦去阴道内粘液，用无菌棉 拭子插入宫颈内1—2cm处旋转取材；或无菌试 管收集清晨首次中段尿离心沉渣。标本采集后立 即接种培养，不能立即培养的要放入运送培养基 或保存液中。
2、将标本分别洗人Uu、Mh、Mg（SP-4）液体培养基， 置 3 7 ℃ 温 箱 培 养 ， 每 日 观 察 。 Uu 培 养 1 — 2 天 ， Mh培养2—3天，Mg培养约35—140天颜色才会 变化。
培养基、Ｎｅw Yｏｒk Ｃｉｔｙ（Ｎ．Ｙ．Ｃ）培养基、Ｍ ａｒｔｉｎ－Ｌｅｗｉｓ（Ｗ－Ｌ）培养基。国内的有桂敏培 养基,巧克力琼脂培养基。均应为选择性培养基,在培 养基中加入抗生素(如多粘菌素,万古霉素、制霉菌素 等)抑制杂菌生长,同时加入促淋球菌生长的增菌剂(如 氨基酸、维生素、嘌呤等)。
3、培养条件： 淋球菌培养条件高，温度、湿度、ＰＨ值