大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验难点
6大肠杆菌生长曲线的制作
讲授法
重点讲解光电比浊法的原理，生长曲线的原理。
讲授法
成都医学院教案续页
教学过程、内容及时间分配
教学方法与手段
三、关键步骤及注意事项
1、注意无菌操作，避免杂菌污染。
2、菌液在测量之前要充分摇匀。
讲授法
测定微生物的数量有多种不同的方法。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
二、实验材料及方法（100分钟）
实验材料
菌种：大肠杆菌
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基
4、生长量测定：将未接种的牛肉膏蛋白胨培养基（空白）倾倒入比色皿中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.2～0.8以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。
[2]沈萍编.微生物学实验.北京：高等教育出版社，2002.
实 施
情 况小 结教研室来自任签名：2011年9月10日成都医学院教案续页
教学过程、内容及时间分配
教学方法与手段
实验六大肠杆菌生长曲线的测定
一、实验原理（20分钟）
将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。
大肠杆菌生长曲线实验报告
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。
测量时要等数字变化不大时再读取，可以读三次，最后取平均值，这样能保证实验结果更加准确。
721型分光光度计要先预热，实验过程中最好使用同一台仪器，同一个比色皿，这样可以减少仪器误差，分光光度计的使用操作要规范。比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。比色皿用擦镜纸擦干净，上面不要残留有纸纤维和水珠等。
延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
改进措施:在试验过程中应严格按照标准的操作要求，在上述步骤时更加应该规范操作。
指导教师评语及评分：
签名：
年 月 日
2.营养肉汤培养基灭菌:将步骤一包好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌30min.
大肠杆菌生长曲线测定
大肠杆菌生长曲线测定一、目的要求了解大肠杆菌生长曲线的基本特征，从而认识微生物在一定条件下生长、繁殖的规律。
二、基本原理一定量的微生物，接种在适合的新鲜液体培养基中，在适宜的温度下培养，以菌数的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，做出的曲线叫生长曲线。
一般可分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数法、平板菌落计数法、称重法、比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测得的光密度值（OD值）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
现已有直接用试管就可以测定OD值的光电比色计（图Ⅶ-10），只要接种一支试管，定期用它测定，便可做出该菌的生长曲线。
三、器材培养18—20小时的大肠杆菌培养液，盛有5ml肉膏蛋白胨液体培养基的大试管12支；72型或72．1型分光光度计，自控水浴振荡器或摇床，无菌吸管等。
四、操作步骤1．编号取11支盛有肉膏蛋白胨液体培养基的大试管，用记号笔标明培养时间，即0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小时。
2．接种用1ml无菌吸管，每次准确地吸取0．2ml大肠杆菌培养液，分别接种到已编号的11支肉膏蛋白胨液体培养基大试管中，接种后振荡，使菌体混匀。
3．培养中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。
以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。
将接种后的11支试管置于自控水浴振荡器或摇床上，37℃振荡培养。
分别在0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小时将编号为对应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定光密度值。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
五、作业
1、结果 P88 记录不同大肠杆菌培养液的OD600值，并绘制 大肠杆菌的生长曲线。
2、思考题 第1题
根据微生物的生长曲线可以明确微生物的 生长规律，对生产实践具有重大的指导意义。 根据对数期的生长规律可以得到培养菌种 时缩短工期的方法:接种对数期的菌种,采用最 适菌龄，加大接种量，用与培养菌种相同组成 的培养基。 根据稳定期的生长规律，可知稳定期是产 物的最佳收获期，也是最佳测定期，通过对稳 定期到来原因的研究还促进了连续培养原理的 提出和延迟期 特点：生长速率常为零、菌体粗大、 RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境 的抵抗能力下降。 成因：微生物刚刚接种到培养基之上 ，其代谢系统需要适应新的环境，同时要 合成酶、辅酶、其他代谢中间代谢产物等 ，所以此时期的细胞数目没有增加。
2、对数期 特点：生长速率最快、代谢旺盛、酶系 活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、细胞 的化学组成形态理化性质基本一致。 成因:经过调整期的准备，为此时期的微 生物生长提供了足够的物质基础，同时外界 环境也是最佳状态。
3、稳定期
特点：活细菌数保持相对稳定、总细菌数 达到最高水平、细胞代谢产物积累达到最高峰 、是生产的收获期。 成因：营养的消耗使营养物比例失调、有 害代谢产物积累、PH值等理化条件不适宜。
4、衰亡期 特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、 整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细 胞死亡出现自溶现象。 成因：主要是外界环境对继续生长越 来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、 继而导致大量细菌死亡。
一、实验目的
• 了解大肠杆菌的生长特性与规律，绘制生 长曲线 • 掌握光电比浊法测量细菌数量的方法
二、实验原理
生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。 一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
大肠杆菌生长曲线实验报告
大肠杆菌生长曲线实验报告抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。
但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。
在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。
当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。
如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。
DNA对紫外线（UV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。
紫外线引起DNA 结构变化的形式有DNA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。
因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。
一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265 nm。
选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。
本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。
若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。
在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。
2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10g Nacl 5g琼脂20g蒸馏水1000ml Ph7.0 按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告思考题
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告思
考题
在大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验报告中，以下是一些可能的思考题：
1. 实验结果显示大肠杆菌细胞在培养基中的生长呈现出典型的生长曲线，包括潜伏期、指数期、平台期和死亡期。
这种生长曲线的形成是由什么因素引起的？
2. 在实验中，为了测定大肠杆菌细胞的生长曲线，我们选择了什么样的培养基和培养条件？这些选择是否对实验结果产生了影响？
3. 在实验过程中，我们通过测量光密度或细胞数量来确定大肠杆菌细胞的生长情况。
这种测量方法可能存在的缺陷是什么？有没有更准确的测量方法可以应用于该实验？
4. 实验中，我们还讨论了大肠杆菌细胞生长的影响因素，如温度、pH值和营养成分等。
在未来的研究中，我们可以采取哪些控制变量的方法来深入探究这些影响因素对大肠杆菌细胞生长的具体影响？
5. 大肠杆菌细胞生长曲线的测定在哪些领域有广泛的应用？如何利用实验结果来研究和解决实际问题，比如食品安全、环境污染等？
这些思考题可以帮助你对实验结果进行进一步的思考和讨论，深化对大肠杆菌细胞生长曲线的理解并应用于更广泛的领域。
大肠杆菌生长曲线实验报告-xiang
E.coli growth curve measurement一、目的1、瞭解細菌生長曲線特徵，測定細菌繁殖的代時；2、學習液體培養基的配製以及接種方法；3、反復練習無菌操作技術；4、瞭解不同細菌，不同接種方法在同一培養基上生長速度的不同；5、掌握利用細菌懸液混濁度間接測定細菌生長的方法6、複習光電比濁法測量細菌數量的方法7、學習平板塗布技術二、原理1、大腸桿菌生長：將一定量的細菌接種在液體培養基內，在一定條件下培養，可觀察到細菌的生長繁殖有一定的規律性，如以細菌的活菌數的對數作縱坐標，以培養時間作橫坐標，可繪成一條曲線，成為生長曲線（如圖一）。
圖一微生物生長曲線示意圖單細胞微生物的發酵具有四個階段，即Ⅰ調整期（延滯期）、Ⅱ對數期（生長旺盛期）、Ⅲ平衡期（穩定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生長曲線可表示細菌從開始生長到死亡的全過程的動態。
不同的微生物有不同的生長曲線，同一種微生物在不同的培養條件下，其生長曲線也不一樣。
因此，測定微生物的生長曲線對於瞭解和掌握微生物的生長規律是很有幫助的。
測定微生物生長曲線的方法很多，有血球計數板法、平板菌落計數法、稱重法和比濁法等。
本實驗採用比濁法測定，由於細菌懸液的濃度與混濁度成正比，因此，可利用分光光度計測定細菌懸液的光密度來推知菌液的濃度。
將所測得的光密度值（OD600）與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線。
注意，由於光密度表示的是培養液中的總菌數，包括活菌與死菌，因此所測定的生長曲線的衰亡期不明顯。
2、平板塗布技術：塗布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用於計算活菌數，還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用於檢測化學因素對微生物的抑殺效應。
原理:將一定濃度，一定量的待分離菌懸液加到已凝固的培養基平板上，再用塗布棒快速地將其均勻塗布，使長出單菌落或菌苔而達到分離或計數的目的。
其目的:用於目的微生物的分離；用於藥物的抑菌試驗；觀察菌苔的形狀和特點。
实验4测定细菌生长曲线
测定（OD）
每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇匀， 以蒸馏水为对照，选420nm波长进行光密度（OD 值）的测定（注意应测定0h的光密度值）。
每台分光光度计固定在1个参比杯，每人只能在同 一台分光光度计上测量（注意波长调好后，不要动 波长旋钮）。
精品课件
六、结果与讨论
1）绘制大肠杆菌和枯草杆菌在两种接种方法下的生长曲线。 （标出生长曲线中四个时期的位置和名称）
2）为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长状 况？
3）生长曲线中为什么会出现稳定期和衰退期？在生产实践中怎 样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰退期？
4）接种时种子在什么条件下为宜，液体种子比斜面种子为什么 优越？
精品课件
实验4、测定细菌生长曲线
精品课件
一、识微生物在一定条 件下生长繁殖的规律。
2.掌握用细菌悬液的浑浊度间接测定细菌生长的方 法。
3.学习液体培养基的配制及接种方法。
二、 实验内容
测定大肠杆菌、枯草杆菌的生长曲线
精品课件
三、实验原理
将一定量的细菌接种在液体培养基内，一定条件下 培养，细菌的生长繁殖具有一定的规律性。 以细菌活菌数的对数作纵坐标，培养时间作横坐标， 可绘成一条曲线，称为生长曲线。
• 将所测的光密度值（OD）与其对应的培养时间作图， 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线（注意：由于 光密度表示的是培养液的总数，包括活菌与死菌所测 的生长曲线衰亡期不明显）。
精品课件
微生物的典型生长曲线图 Ⅰ.延滞期，Ⅱ.指数期，Ⅲ.稳定期，Ⅳ.衰亡期
精品课件
四、实验仪器、材料和用具
仪器： 摇床、分光光度计、取液器。
细菌的生长曲线分为：迟缓期、对数期、稳定期和 衰退期。其表示细菌从开始生长到死亡全过程的动 态。测定微生物的生长曲线对于了解和把握生物的
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验难点
大肠杆菌细胞生长曲线的测定实验涉及到多个步骤,其中有几个难点：
1. 培养基的选择：大肠杆菌在不同的培养基条件下生长的情况会有所不同,因此在进行生长曲线实验前需要选择一个合适的培养基。
同时,培养基的质量对实验结果也会有影响,需要注意使用新鲜的培养基。
2. 细胞密度的准确测定：测定生长曲线需要准确地确定细胞数量,但直接计数难度较大。
在实验中常用的方法是通过测量细胞培养液的浓度或浊度来间接估算细胞数。
但这些方法也有一定的局限性,需要严格按照方法操作并进行多次检测。
3. 实验条件的控制：细胞生长曲线的测定需要严格控制温度、湿度、氧气含量等多个生长条件。
如果实验条件不稳定,会导致数据的误差增大。
4. 数据处理的准确性：测量出的生长曲线数据需要经过统计学处理和分析,并进行可靠性检验。
在处理数据的过程中,需要避免人为因素的影响,以保证实验结果的准确性。