LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用
猪瘟病毒通用型RT—LAMP方法的建立与应用
文 章 编 号 １ ６ ７ ２ — ９ ６ ９ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４ — ０ ０ ５ ０ — ０ ４
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【 摘 要】 本研究根据猪瘟病毒（ Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ ） 基 因组的Ｎ Ｓ ５ Ｂ 基因片段， 设计 了４ 条针对 Ｎ Ｓ ５ Ｂ 基因 ６ 个位 点的 Ｒ Ｔ － Ｌ Ａ Ｍ Ｐ 扩增 引物 ， 建 立的方法 能特 异性地检 测 出Ｃ Ｓ Ｆ Ｖ ， 而Ｐ Ｒ Ｖ 、 Ｐ Ｐ Ｖ 、 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 、 Ｐ Ｃ Ｖ 、 Ｆ Ｍ Ｄ Ｖ 等病毒扩增结果 均为 阴性； 该方法与猪瘟 荧光 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ 方法相 比 ， 特异性 无明显 差异 ， 敏 感性高１ ０ 倍； 另外 ， 该 方法耗 时短 ， 只需 １ ｈ ， 操作 简单 ， 不 需要 Ｐ Ｃ Ｒ 仪 等特殊仪 器， 扩 增产物 可通过 肉眼观 察 、 或加入 荧光染料在 紫外灯 下观察 特异性 荧光 、 也可通 过凝 胶 电泳检 测 ， 因 此适合从临床病料 中快速准确检 测 出猪瘟病毒感 染情 况， 适合推 广应 用于基 层和野外现场 。 【 关键词】 猪瘟 病毒 ； Ｒ Ｔ － Ｌ Ａ Ｍ Ｐ ； 快速诊 断
敏感性高 、特异 性强 、操作简单 、耗 时短、不需 因组的 Ｎ Ｓ ５ Ｂ 基 因保守 区 ６ 个位 点的 Ｒ Ｔ — Ｌ Ａ ＭＰ 反
应 引 物 ，包 括 ２条 外 引 物 Ｆ ３ ／ Ｂ ３ 和 ２条 内 引 物
［ 收稿 日期］ ２ ０ １ ３ — ０ ３ — ０ １
［ 作 者简介 ］ 兰德松 （ １ ９ ８ ２ 一） ， 男， 硕士 ， 主要从 事重重 大动物
lamp技术在家禽腹泻性疾病检测中的应用
LAMP技术在家禽腹泻性疾病检测中的应用董雯雯①张世栋①王春玲①艾洪新①李新华①潘力①朱伟②*李峰①*（①山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023②山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室山东畜牧兽医职业学院山东潍坊）中图分类号：S858.3 文献标识码：B 文章编号：1007-1733(2019)12-0092-05快速检测致病微生物是控制疾病暴发的有效方法之一。
目前，测病原体的传统方法耗时且劳动强度大，并且通常很容易失去最佳控制疾病的机会。
因此，迫切需要一种快速检测疾病的方法。
环介导等温扩增(LAMP)是近年来新建立的核酸恒温快速扩增技术。
它具有高灵敏度，特异性，视觉检测和对仪器的低需求。
它具有节省时间和精力等诸多优点，在分子诊断领域具有很大的潜力。
目前，LAMP已被广泛用于检测各种动物病原微生物。
本文主要综述了LAMP技术在家禽腹泻病原微生物检测中的应用以及LAMP技术的改进和优化，为快速检测家禽肠道疾病提供了参考。
目前，荧光定量、间接免疫荧光等分子生物学技术在家禽病原检测中起着关键作用，但都需要昂贵的仪器设备及一定操作技能。
一旦出现疫情，基层养殖场及实验室很难实现对病原的快速检测[1]。
针对这一现象，Notomi等[2]于2000年研发出一种新的DNA扩增技术-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LA MP)。
该方法在各项指标上优于传统的分子生物学检测技术，且不需要昂贵的仪器设备、简便、快速、灵敏，仅需在引物及BstDNA聚合酶的催化下，等温水浴30~ 60min，即可实现靶基因109倍扩增[3]，检测成本较低，适合基层地区开展病原微生物的早期诊断和筛查。
目前LAMP的检测对象已经覆盖了核酸、蛋白质、细胞等，展现出非常广阔的应用前景。
1 LAMP技术原理（1）LAMP技术是在等温(60~65℃)条件下利用BstDNA聚合酶和靶基因4条特异性引物进行反应，最后实现基因的指数型扩增，具有高度灵敏性和特异性。
环介导等温扩增技术
简单，快速，准确的基因扩增法
四、问题分析
1.随机采取鸽子翅或尾部羽髓样，用试剂盒提取DNA
01
2.在家鸽在W染色体上找到保守基因并以LAMP引物设计
02
软件设计引物
3.进行应用LAMP法扩增目的基因、不断优化dNTPs、
03
Mg2+、甜菜碱浓度，反应体系温度，反应结果由紫红色
变为天蓝色为雌性，否则为雄性
80℃水浴，5min，结束反应，加指示剂
LAMP反应体系
三、应用
1、LAMP在食品安全中的应用：
水产品和水体中灿烂弧菌现场可视化环介导等温扩增快检方法的建立及应用；环介导等温扩增 技术快速检测植物蛋白饮料中大豆成分等
2、LAMP在动植物疫病检测中的应用：
环介导等温扩增技术检测鼠疫感染动物敏感性的应用性研究；
感谢各位观看
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3、LAMP在人类疾病检测中的应用：
环介导等温扩增技术在新型冠状病毒检测中的应用研究进展；环介导等温扩增技术（LAMP） 在肺结核诊断中的应用研究
四、问题分析
生产上的鸽子性别 鉴定主要通过PCR 和翻肛鉴别，不太 适用于养殖户
鉴别方法比较
LAMP法
PCR法
翻肛鉴别
温度 时间 产物量 特异性 检测
试剂
二、原理
设计四条引物，包括两条内引 物和两条外引物，利用DNA链在 60-65℃的恒温条件下处于解链 和退火的动态平衡状态，在DNA 聚合酶的驱动下结合靶序列启 动DNA合成，反应中生成LAMP反 应特有的焦磷酸镁白色沉淀， 运用HNB指示剂显色反应。
二、流程
制作LAMP反应体系，12.5uL，如右图 放入200uL PCR管中，离心混匀 64℃水浴，90min
《2024年新塔拉塞维奇立克次体和山羊无形体可视化LAMP检测方法的建立与应用》范文
《新塔拉塞维奇立克次体和山羊无形体可视化LAMP检测方法的建立与应用》篇一一、引言随着分子生物学技术的飞速发展，新型的病原体的检测成为了科研与医疗领域的重点工作。
其中，立克次体和山羊无形体等病原体的快速、准确检测对预防疾病传播和及时治疗具有重要价值。
本文旨在介绍新建立的塔拉塞维奇立克次体和山羊无形体可视化LAMP（环介导等温扩增）检测方法的建立与应用。
二、新塔拉塞维奇立克次体和山羊无形体的概述塔拉塞维奇立克次体和山羊无形体均是重要的病原微生物，其感染能导致一系列的疾病。
对这两种病原体的准确、快速检测是防控疾病传播的重要环节。
然而，传统的检测方法如PCR、荧光定量PCR等虽然有其独特优势，但仍然存在着耗时长、操作复杂等缺点。
因此，发展一种新型、高效的检测方法具有重要的实践意义。
三、可视化LAMP检测方法的建立为了满足高效、准确、快速的检测需求，本研究团队成功建立了针对新塔拉塞维奇立克次体和山羊无形体的可视化LAMP检测方法。
该检测方法通过设计特异性的引物，在等温条件下，通过LAMP反应实现目的DNA的高效扩增。
同时，结合可视化的荧光探针技术，可以在不使用昂贵的荧光仪器的情况下实现实时、准确的扩增结果观察。
四、可视化LAMP检测方法的应用（一）在临床诊断中的应用本研究建立的可视化LAMP检测方法在临床诊断中得到了广泛应用。
通过该方法，医生可以在短时间内快速、准确地确定患者是否感染了塔拉塞维奇立克次体或山羊无形体，为临床治疗提供了有力的支持。
（二）在疫情监测中的应用此外，该方法也广泛应用于疫情的监测中。
通过定期的采样检测，可以及时发现并追踪感染源，有效控制疾病的传播。
在疫情爆发初期，该方法的快速检测能力对于防控工作具有重要的指导意义。
五、结论本文成功建立了针对新塔拉塞维奇立克次体和山羊无形体的可视化LAMP检测方法。
该方法具有快速、准确、操作简便等优点，能够满足临床诊断和疫情监测的需求。
通过该方法的应用，可以有效提高病原体的检测效率，为防控疾病的传播和及时治疗提供了有力的支持。
鸭坦布苏病毒可视化RT-LAMP快速检测方法的建立与初步应用
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LAMP研究中的常见问题分析及解决方法
LAMP研究中的常见问题分析及解决方法杨卓【摘要】本文通过《小反刍兽疫病毒RT-LAMP快速检测和鉴别方法的建立》研究中的相关扩增曲线和试验结论,对LAMP研究中出现的几种问题进行了初步探讨,并提出解决方案.文章从气溶胶污染、非特异性扩增、扩增效率不高和扩增曲线常见问题分析等方面,分析其产生原因并总结了相关解决办法,从而为今后的LAMP技术研究和推广做出贡献.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2016(000)007【总页数】5页(P53-57)【关键词】LAMP技术;气溶胶污染;非特异性扩增;扩增效率不高;扩增曲线【作者】杨卓【作者单位】辽宁省大连市动物疫病预防控制中心,辽宁大连116037;辽宁省大连市畜牧总站,辽宁大连116037【正文语种】中文【中图分类】S852.65环介导恒温核酸扩增技术（l oop-m edi ated i sotherm al am pl i fi cati on of DN A，LAM P）是由N otom i等于2000年发明的一种恒温、快速、高特异性和操作简便的分子生物学检测技术。
其反应原理是：根据序列保守区域设计的一对外引物、一对内引物和一对环引物特异性识别靶序列上的六个独立区域，在Bst大片段聚合酶的作用下引起自循环链置换反应，60～65℃范围60 m i n内，大量合成目标DN A，同时伴随有副产物白色的焦磷酸镁沉淀产生[1]。
LAM P技术以其自身的优势，在国际上已成为了分子生物学检测技术的研究热点，也被应用于多种疾病的检测，例如小反刍兽疫病毒[2]、日本脑炎病毒[3]、口蹄疫病毒[4]、H 5N1禽流感病毒[5]和结核分枝杆菌[6]等。
对于LAM P反应的结果判定，目前有四种方式：眼观白色沉淀检测法（简称“目测法”）、荧光指示剂法、传统的琼脂糖凝胶电泳检测和浊度仪的实时浊度法。
前两种方法仅通过肉眼判定，误差较大，不适用于科学研究；第三种方法无法判定反应中是否出现污染、二聚体扩增等假阳性情况，从而得不到准确、高效的反应体系；而利用浊度仪，采用实时浊度法，能够使整个反应都在密闭条件下进行，从而最大程度地避免污染，并且能够实时监测反应过程中所产生的白色焦磷酸镁沉淀，并绘制成扩增曲线。
LAMP方法及其在病原微生物检测中的应用_吴禹熹
LAMP
LAMP（环介导等温扩增）技术2011-07-28 11:46 来源：北京蓝谱点击次数：1341 关键词：LAMP PCR技术环介导等温扩增分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。
然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。
2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即LAMP (L oop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。
通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。
LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。
可以预见，在未来的基因诊断领域，LAMP方法将占据大壁江山。
目前，在万方数据库搜索LAMP文章500多篇。
详见：/paper.asp x?q=loop-mediated+isothermal+amplification&o=sortby+CitedCount+CoreRank+date+relevanc e%2fweight%3d5&f=top&n=10&p=11. 优缺点介绍：LAMP方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60min就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浑浊仪）；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于PCR管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左右保温30～60min，肉眼观察结果）。
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LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用
LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）技术是一种能够在恒温下快速、高效地进行核酸扩增的方法。
它通过特殊的引物和酶，在简单的实验条件下可以在短时间内扩增大量目标DNA序列，并且具有高度的特异性和灵敏性。
LAMP技术最早由日本学者Notomi等人于2000年首次提出，自此以后，LAMP技术在许多领域得到了广泛的应用，尤其在动物疫病检测中。
1.快速诊断：LAMP技术可以在一个小时内进行核酸扩增反应，比传统的PCR方法要快得多。
这对于迅速确定疫病的诊断结果非常重要，可以提高动物疫病的早期预警和防控能力。
2.高度特异性：LAMP技术使用多个特异性引物，在同一个反应体系中进行扩增，可以显著提高对目标序列的特异性识别能力。
这对于区分不同疫病病原体或者同一病原体的不同亚型具有重要意义，可以帮助鉴定传染病源和病原菌的变异。
3.高灵敏性：LAMP技术不仅在快速扩增速度上具有优势，还在扩增效果上具有高灵敏性。
在初始目标DNA浓度低至10个分子时，LAMP技术仍能够进行有效扩增，这对于低浓度病原体的检测非常关键。
4.操作简便性：LAMP技术不需要复杂的设备和特殊的实验条件，只需要一个简单的恒温器就可以进行核酸扩增反应。
这极大地降低了操作门槛，使得不同实验室和场所都可以进行动物疫病的检测工作。
5.物价低廉：LAMP技术所需的试剂和设备成本相对较低，特别是与PCR技术相比较，更加经济实惠。
这对于资源有限的地区和农村地区的疫病监测和防控工作尤为适用。
目前，LAMP技术已经在许多动物疫病的检测中得到了应用。
比如，它被成功用于禽流感、猪瘟、传染性胸膜炎、家禽新城疫等重大疫病的快速检测。
通过该技术，可以快速而准确地检测出病原体的存在，为疫病的早期检测和防控提供了有力的手段。
总之，LAMP技术在动物疫病检测中具有广阔的应用前景。
随着该技术的不断进步和完善，相信将能够更好地满足动物疫病检测的需求，为动物疫病的防控提供更加可靠、快速和经济实惠的手段。