新生儿溶血病血型血清学检验操作规程
新生儿溶血病产前产后检测操作步骤
产前血型血清学检查标本要求：夫妻双方抗凝血2ml（尽量要求父亲抗凝血2ml，非必要），母亲促凝血3-5ml（血清）。
第一步：取两个试管分别标记 A 和BA管 700 μL生理盐水 B管（从A管取200 μL混合液+100 μL母亲血清混匀再加入200 μL血浆IgM稀释液）混匀 B管封口绑紧37℃温育1小时。
第二步:紧接着做父母ABO血型、RH型和母亲的不规则抗体。
第三步：取六个试管，分别标记123456，每管里面加200 μL盐水（父亲AB型需要同时做IgG抗A效价和IgG抗B,各做1次）。
第四步：等B管温育时间到了，从B管吸200微升到1管，混匀后从1管吸200 μL到2管........从5管吸200 μL到6管，依次添加稀释（倍比稀释）。
第五步：取不规则卡标记好 6 5 4 3 2 16 5 4 3 2 11.所有孔先分别加入50 μL父亲（与父亲同型）的0.8%红细胞悬液。
2.然后每孔再依次加入相对应管号里面的稀释液50 μL（防止交叉污染，从浓度最低往最高依次加）。
第六步：1.放到37℃温箱温育15分钟。
2.离心5分钟，取出判读结果。
注：判读结果往前推一位（例如6号孔是阳性，就报5号管是阳性）。
母亲RhD阴性血型，不用加入血浆IgM稀释液，不用37℃温育1小时。
直接第二步同上。
产后血型血清学鉴定标本要求：新生儿抗凝血2-3ml第一步：1.收到标本之后离心2分钟，取两个空试管，标记红细胞1和血浆2。
红细胞1 血浆22.将离心好的血样中血浆全部吸入空试管2中，剩余的红细胞吸入另一空试管1中。
3.向试管1中加3000μL生理盐水，进行洗涤，洗涤红细胞三次后，取压积红20μL+2480μL盐水加入新的试管中配制成0.8%红细胞。
（剩余的压积红留着做放散液）。
第二步;直抗试验、血型试验取0.8%红细胞50μL分别加入血型卡和不规则抗体卡中（只加一个孔）做好标记，直接离心五分钟看结果。
第三步：游离试验、放散试验1.取试管1中压积红1000μL+盐水1000μL（1:1适量配比）。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
❖ 二、ABO、Rh（D）血型鉴定
❖⒈ 选用经国家批准且批批检测合格的 单克隆抗-A、抗-B、抗-D(IgM)和A、B 型标准试剂红细胞。
❖⒉ ABO血型鉴定：母亲血样做正反定型； 患儿血样只做正定型。推荐使用试管法 和微柱凝胶血型卡，不推荐使用纸片或 玻片法。
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ （1）第一次检测，一般可在妊娠第1216周进行，以此作为抗体基础水平。如 果检测到ABO以外抗体，或高效价的IgG 抗A（B）抗体，建议每月复查一次。
❖ （2）第二次检测在妊娠28-30周做，以 后每隔2-4周重复测定一次，了解抗体 增加速度。抗体效价上升快，提示HDN 的可能性大。
❖ 二、证实患儿血清中是否有来自于 母亲的抗体；
❖ 三、患儿红细胞是否被来自母亲的 免疫性抗体所致敏。
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 一、标本要求 ❖ ⒈ 采样时间建议： ❖ （1）可疑ABO不合HDN患儿血清学
检查最好在出生后1-7天之内； ❖ （2）可疑Rh等其他血型系统血型
不合应在出生后尽早为好。
❖ 二、试剂与设备（查看Word文件） ❖ 三、检测方法 ❖ ⒈ 产妇血样检测： ❖ 同《HDN产前免疫血液学试验》孕妇血
样检测条目。 ❖ ⒉ 患儿血样检测： ❖ （1）红细胞：ABO正定型、RhD血型
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 说明：新生儿ABO定型，多数专家 认为反定型没有意义。
❖ （2）红细胞直接抗人球蛋白试验 （DAT）：
国内外进展 ❖⒉ 研讨：
（1）研讨内容： ① 样本采集 ② 实验项目及操作 ③ 结果判定或解释
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程
新生儿溶血性疾病产前血型血清学检测标准操作规程一、目的为规范新生儿溶血性疾病（HDN）产前血型血清学检测的技术操作，准确评估胎儿发生HDN 的危险程度，从而辅助临床正确的诊断和治疗。
二、适用范围输血科进行新生儿HDN产前血型血清学检测。
三、原理通过鉴定孕妇及其胎儿父亲的血型，推测胎儿可能的血型，进一步检测孕妇体内是否有针对胎儿红细胞血型抗原的抗体及其效价来评估胎儿发生HDN的危险程度。
四、步骤和方法1、检测孕妇ABO、RhD血型，红细胞不规则抗体及其丈夫ABO、RhD血型。
根据夫妇ABO 血型组合来推测母婴ABO血型是否相合：如果母婴血型配合则不需检测孕妇ABO血型IgG 抗体效价；如果母婴血型不配合（可能不配合）则需检测孕妇可能致敏胎儿红细胞的ABO 血型IgG抗体效价。
2、由于抗-A或者抗-B主要为IgM类，ABO血型不合极少发生胎儿HDN，故除有死胎史或者新生儿黄疸史的孕妇外，不需检测IgG抗-B及抗-A的效价。
3、如果孕妇为RhD阴性，丈夫RhD为阳性，孕妇不规则抗体阴性，建议孕妇以后每个月复检不规则抗体直至分娩。
4、如果孕妇不规则抗体为阳性，则需鉴定其特异性、Ig类型、37℃反应情况及其效价和丈夫红细胞是否表达对应的抗原，来评估抗体引起的HDN危险程度。
5、结果判定：效价>143有临床意义。
五、质量控制1、用于试验的试剂都在有效期内使用。
2、严格试验操作，设置阴、阳对照，结果符合预期才可判定试验结果。
六、注意事项1、HDN产前血型血清学检测结果只能为评估胎儿发生HDN的风险提供依据，并不能确定HDN 。
母婴ABO血型不合且孕妇IgG类ABO血型抗体效价在妊娠期持续升高或者检出了IgG类红细胞不规则抗体都是HDN的风险因素。
2、传统认为ABO血型系统IgG抗体效价高于64具有临床意义。
随着检测水平得的提高，其作为临床参考意义不大。
3、抗体效价与HDN的发生有一定的相关性，但是抗体效价的高低与HDN的严重程度并不完全一致，可能与IgG抗体亚类不同有关。
新生儿溶血病血型血清学检查
冲洗， 再用生理盐水清洗擦干。在褥疮表面涂一层 血活素软膏， 再以无菌纱布砚益， 胶布固定， 每天 ２ 次。严重者可根据褥疮的程度外涂 ３－ 次 ， －６ 如有感 染者加用抗生素。用此方法治疗 Ｉ 一ｉ’ ‘ ｎ褥疮 ４例
净后 ， 不必消毒， 将湿润烧伤青涂于褥疮创面， 厚度 约 １ 每天 ４ ｍ ｍ， －６次。治疗 Ｉ’ ｌ０ 一 ｌ褥疮 １ 例， １ ７ 一３ ２ 天治愈。 ， 京万红及伤， 京万红具有活血止痛、 祛腐解毒、 排脓生肌作 用， 促进肉芽组织生长。将褥疮局部消毒、 除腐， 清 洗擦净后将烫伤青涂于褥疮创面， 每天 ２ 次。治 一３ 疗 １ 例，－４ ７ ２－ 周内治愈 ， 治愈率为 ９ ％． ６
红细胞继续破坏。同时用 Ｏ型试剂红细胞是否存 在 Ａ Ｏ系统以外的同种抗体。Ａ型婴儿血清中检 Ｂ 出抗 Ａ， Ｂ型婴儿 检 出抗 Ｂ 或 检 出 Ａ Ｏ 以外 的抗 ， Ｂ 体， 都是新生儿溶血病的重要证据 。 （） ３抗体放散试验。用间接抗人球蛋 白试验检 查放散液中的 Ｉ ｇ Ｇ抗体， 以确定婴儿红细胞上是否 包被 了抗体。Ａ Ｏ血型不合 的新生儿 溶 血病 用热 Ｂ 放散法 ， ｈ Ｒ 及其他系统 的溶血病用 乙醚放散法。Ａ 型婴儿红细胞 上放散 出抗 Ａ， 婴儿红 细胞放散 Ｂ型． 出抗 Ｂ 或放散 出 Ａ ｏ以外 的抗体都是阳性指征。 ， Ｂ
医生在线
１ ０
中国乡村医生杂志 条件可再用远红外线加热器或频谱治疗仪照射 ２ ０ －０ ３ 分钟， 再以医用生理盐水湿润创面， 撤上抗生
制其分解； 阿米卡星具有抗菌防治感染的作用。取 注射用正规腆岛素８０ ， ０ｕ阿米卡星８０ ｇ ０ｍ 加人生理 盐水５０ １ ０ｍ 备用。治疗时先用生理盐水清创， 祛除 腐烂组织， ３ 并 ％过氧化氮液冲洗 ， 再用生理盐水清 洗擦干。用 ２－ 层无菌妙布浸润配制好的腆岛家 － ３ 溶液紧贴于创面组织， 其上可夜益无菌凡士林纱布， 最上层用无菌干纱布彼益胶布固定。开始 １ 周内因 分泌物多， 浦每天换药 ４ －６次 ， 周后视分泌物的 １ 减少而减少。用此方法治疗 ｎ 一田’ ’ 褥疮创面 １ ６ 例 ２ 处， ５ 治疗 ３ 周 ， 一６ 结果治愈率为 ７ ．％， ８６ 好转 率为 １ ．％， 例死于原发病。 ３７ ２
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程本文介绍了红细胞血型抗体效价测定标准操作规程，以规范输血科医务科护理部的技术操作，并适用于评估母婴血型不合的新生儿溶血病的风险程度及产前检查等其他临床需要。
在材料和设备方面，需要3%～5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-Me)应用液、抗球蛋白试剂、待检者血标本、微柱凝胶抗球蛋白卡等。
在检测环境方面，室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。
在检测原理方面，对于IgM类红细胞血型抗体，将受检血清经连续倍比稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
对于IgG类红细胞血型抗体，则先用巯基试剂2-Me裂解其中的IgM型抗体，经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞血型抗体。
在操作步骤方面，盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价。
具体操作为将受检血清加入一系列稀释盐水中，分别加入A、B型反定型试剂红细胞，静置30分钟后观察凝集情况，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
7.1.1.对12支试管进行排列编号，第2至第12管每管加入0.1ml生理盐水，第1管及第2管分别加入受检者血清0.1ml，混匀后吸出0.1ml移至第3管内，以此类推，连续倍比稀释至第12管（2048倍）。
7.1.2.在12支试管中，分别加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架。
7.1.3.使用血型血清学专用离心机进行离心，离心速度为120g，离心时间为1min，观察并记录有无溶血及凝集情况。
7.1.4.结果判读：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”进行评分。
新生儿溶血病检测作规程
新生儿溶血病检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称：新生儿溶血病检测（包括直接抗人球蛋白试验、游离试验和放散试验三项）2.检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌：美国强生奥索2.代号：BioVue-po1yCassettes3.包装规格：400卡/箱试剂卡（707300）；100卡/箱试剂卡（707350）4.试剂成分:抗人球蛋白（1gG,C3b∕C3d）检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.0IM的EDTA.成分描述第1〜6柱：抗人球蛋白、抗抗一IgG（兔）-IgG.-C3d；多特异性抗一C3b（鼠单克隆）（克隆F7G3）抗一C3d（鼠单克隆）（克隆C4C7）FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期：储存条件：2〜25。
C环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVUe专用离心机；BiOVUe专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2—8。
C保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白（IgG,C3b∕C3d）检测卡为即用型产品。
试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。
试剂卡经过运输颠簸后，需倒置一下，然后重新离心以备用。
ABO血型鉴定标准操作程序
SOP_10-1 ABO血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。
许多组织细胞上有规律地存在着A、B、H抗原，以及分泌型的分泌液中存在着A、B、H物质。
红细胞上的A/B /D抗原与抗B/A /D标准血清发生凝集反应。
ABO血型的分类及其与抗血清的反应：红细胞与抗血清反应表型红细胞上抗原血清中抗体抗A 抗BO 无抗A、抗B ――A A 抗B + ―B B 抗A ―+AB A、B 无+ +2 试剂：A、B、O标准血清；A、B、O定型红细胞；生理盐水。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 ABO血型盐水介质鉴定（试管法）：3.2.1制备患者3~5%的红细胞盐水悬液。
3.2.2 正定型：抗-A 抗-B 抗-A、B 标准血清(μl) 100 100 100受检者RBC悬液(μl) 50 50 503.2.3 反定型：Ac Bc Oc 定型红细胞(μl) 50 50 50受检者血清(μl) 100 100 1003.2.4混匀。
3.2.5 以1000r/min离心1min。
3.2.6 取出试管，轻摇，使沉管底的红细胞浮起，认真观察有无溶血和/或凝集。
3.3 ABO血型正反定型结果判断：分型血清+受检者红细胞受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A、B 受检者血型Ac Bc Oc + –+ A –+ ––+ + B + –––––O + + –+ + + AB –––3.4 正反定型不一致的原因：（1）技术和管理工作的错误①血样试管及玻片混淆②书写错误③红细胞过浓或过淡④未注意样品溶血现象⑤漏加试剂⑥未按试剂说明操作⑦试剂血清效价低、亲和力不强或污染/过期/失效⑧离心速度/温度改变（2）血清异常等其它原因①抗体：新生儿、老年人、白血病、肿瘤、免疫缺陷、骨髓移植、嵌合体双生子、异型输血交换、胎盘出血等引起的抗体改变。
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新生儿溶血病血型血清学检验操作规程 SXYJ-GZ-0219
1目的辅助临床诊断母婴血型不合导致的新生儿溶血病。
2适用范围母婴血型不合新生儿黄疸者或产妇产前检出免疫性血型抗体且伴有母婴血型不合者。
3职责检测者负责依据此程序进行HDN产前血型血清学检验操作。
4材料与设备抗-A、抗-B血清、反定型试剂红细胞、血型物质或二硫苏糖醇（DTT）；实验室常规应用的耗材备品准备充分、仪器设备运行状态正常。
5操作方法
5.1检查父亲、母亲及新生儿标本血型
5.1.1ABO血型鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0202）；
5.1.2RhD抗原鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0205）。
5.2新生儿标本的三项试验
5.2.1直接抗人球蛋白试验：（方法参见SXYJ-GZ-0210）。
ABO新生儿溶血病时，直接Coomb’
T的结果只起参考作用；ABO以外的新生儿溶血病标本的直抗结果，对临床诊断起决
定作用。
5.2.2游离IgG抗体测定：（方法参见SXYJ-GZ-0211）。
测定新生儿血清中是否存在游离的
IgG抗体。
用A型、B型红细胞检测可发现，A型新生儿血清中可有少量抗A和较多
抗B；B型新生儿血清中可有少量抗B和较多的抗A，抗体筛选红细胞用来筛选ABO
以外的IgG抗体，结果阳性时需要用谱细胞鉴定其特异性。
5.2.3放散试验：（方法参见SXYJ-GZ-0209）。
采用热放散方法，放散液中抗体鉴定用间接
Coomb’T法（方法参见SXYJ-GZ-0211）。
患儿红细胞上放散出抗A、抗B或放散出
ABO以外抗体，都是阳性指征。
5.3母亲标本的检查方法参见SXYJ-GZ-0218
6结果判定
6.1根据凝集强度(方法参见SXYJ-GZ-0202:5.2.1.6)对结果进行判读
6.2ABO HDN
6.3其它血型系统HDN
7报告发放根据检测结果形成报告，报告发放至检验申请送检人。
8注意事项
8.1如果新生儿标本检测游离抗体阳性，直抗应该阳性，放散试验也应该是阳性，故在直
抗阳性、游离抗体阳性时，放散试验可省去不做。
8.2母亲标本一般情况下只检测ABO以外红细胞血型抗体的筛选和鉴定，必要时检测免疫
性抗A（B）抗体。
若检测出免疫性抗体，同时应检测抗体效价。
8.3新生儿标本三项试验报告凝集强度，不测效价。
8.4如果母亲和新生儿标本不是同时送检，新生儿标本若已明确为HDN，母亲标本可暂不
做。
8.5已证实存在ABO以外的免疫性特异性抗体（以抗D为例），可先用聚凝胺技术快速鉴定，
解决配血，同时抗人球蛋白试验也进行，并以抗人球蛋白试验结果发放报告。
9相关记录
输血相关免疫学检测会诊申请单（JL-SXYJ-0501-1）
新生儿溶血病血清学检验记录（JL-SXYJ-0110）。