第二十五章 弧菌属和气单胞菌属
微生物学整理--弧菌和气单胞菌
霍乱弧菌副溶血弧菌气单胞菌属形态特征1）菌体短小，稍弯曲，格兰阴性2）无芽孢和荚膜，菌体一端有单鞭毛，运动极为活泼，在暗视野显微镜下呈流星样一闪而过3）米泔水样粪涂片呈鱼群样排列多形性，G-，液体培养基中形成极端单鞭毛G- 短杆菌，单鞭毛，运动极为活泼培养特征1）需氧或兼性厌氧2）最适温度37度，16~44度均可生长3）营养要求不高，普通培养基生长良好4）耐碱怕酸，在pH8.4~10.2的碱性蛋白胨水进行选择性增菌5）可在无盐培养基上生长，但在含有高于8%的氯化钠的培养基上不能生长6）常用的培养基及菌落特征：1.硫代硫酸钠-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS，pH8.6 指示剂溴麝香草酚蓝）霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色2.4号琼脂/庆大霉素琼脂平板因含亚碲酸钾，形成灰褐色菌落3.血平板上菌落较大，EL-Tor生物型可形成β溶血1）专性需氧或兼性厌氧，营养要求不高2）耐碱，最适pH7.7~8.0 最适温度30~37度3）具有嗜盐性，在无盐或氯化钠超过8%的培养基上不生长，最适氯化钠浓度3.5%4）菌落特征：在TCBS琼脂上可形成蔗糖不发酵的绿色菌落1）兼性厌氧2）生长温度较广（0~45度）3）营养要求不高，普通平板，微白色半透明的菌落，在血琼脂上形成灰白光滑湿润凸起的菌落，多数有β溶血，肠道选择培养基上，大多数菌株形成乳糖不发酵菌落，TCBS琼脂上生长不良生化反应1）氧化酶+；0/F：F型2）发酵蔗糖。
麦芽糖。
葡萄糖和甘露醇等，不产气3）赖氨酸。
鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性4）吲哚试验+；硝酸盐还原+，明胶液化+5）霍乱红试验+ 1)氧化酶+ ,O/F:F2)分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、不分解蔗糖（与霍乱区别）、乳糖3)甲基红、靛基质。
明胶液化、鸟氨酸脱羧、赖氨酸脱羧酶、硝酸盐还原阳性4)VP、硫化氢、尿素酶和精氨酸双水解酶阴性1）氧化酶、触酶阳性硝酸盐还原阳性2）发酵葡萄糖及其他多种糖类产酸或产酸产气3）在无盐培养基上生长抗原结构H抗原：共同抗原，特异性低O抗原：有群特异性和型特异性，是分群分型的基础抵抗力1）对干燥、热、日光均敏感，茶及一般1）抵抗力弱，不耐热的消毒剂都对其有很强的灭菌作用2）耐酸怕碱，正常胃酸中仅存活5分钟3）而在低温、潮湿、碱、盐及低营养物的不良环境下长期存活河海湖生存几周4）对大多数抗生素敏感，而对庆大霉素耐药2）淡水生存不超2天海水生存47天以上3）耐碱怕酸，醋中1分钟杀死致病性1）致病物质：菌毛、鞭毛、内毒素、外毒素（霍乱肠毒素）2）致病：上吐下泻，水样腹泻综合征，电解质紊乱，脱水主要分布在海水和水产品中，引起食物中毒霍乱红试验：霍乱弧菌分解色氨酸产生吲哚，同时能将硝酸盐还原成亚硝酸盐，在含硝酸盐的蛋白胨水中培养霍乱弧菌、两种产物生成亚硝酸吲哚，滴加浓硫酸呈蔷薇色神奈川现象KP：从腹泻病人中分离到的菌株95%以上在含高盐（7%）、甘露醇的人O型血或兔血琼脂平板（Wagatsuma血平板）上产生β溶血现象，从临床上分离出的副溶血弧菌株几乎都是KP阳性，通常认为KP阳性为产毒株，KP阴性为非产毒株。
第章 弧菌属检验、气单胞菌属检验 (一)
第章弧菌属检验、气单胞菌属检验 (一)第章弧菌属检验、气单胞菌属检验弧菌属和气单胞菌属是常见的肠道细菌，其中一些菌株会导致人类疾病。
因此，在临床和研究实验室中，检测这些菌株的存在和数量就显得尤为重要。
以下将对弧菌属和气单胞菌属的检验方法进行介绍。
1. 弧菌属检验1.1 突变检测法突变检测法是一种成功检测弧菌属的一种快速方法。
在这种方法中，使用一种称为Vibriovidae突变株的弧菌菌株作为参照标准。
任何其他弧菌菌株若由于某种原因不能进行生存和生长表明出现异变。
这个方法是一种特异性高，优点在于它能够很快地确定弧菌菌株从而进行有针对性的治疗。
1.2 生化检测法生化检测法是发酵糖类、蛋白质、氧化性、酸性和硫代谢等特性进行测试，通过特定酶活性或亚砜还原活性定量检测，从而确定弧菌菌株。
在这种方法中，使用的典型生化试剂包括氧化注射物、VC 1%溶液、CYSTINE TELLURITE PIATES和麦芽糖加蓝菌营养培养基等。
2. 气单胞菌属检验2.1 簇光滑菌滴虫染色法这个方法的优点是对于气单胞菌属的检测应该比某些其他方法要更加准确。
该方法是BF（暗场）和DF（簇光滑菌滴虫染色法）结合的方法，直接观察细胞下达到观察气泡。
在这个过程中，由于气体的释放，细胞膜膨胀，这种方法通常表现出现透亮的胞质。
2.2 生化检测法气单胞菌属的生化检测法相对于弧菌属稍微有所不同。
在这种方法中，使用的典型生化试剂是卡波腾和SIM（硫代酸盐铁）。
通常在某些情况下，依靠试剂而不是生物学外观来判断这种菌株的类型更为准确。
总之，当鉴定弧菌属和气单胞菌属时，各种技术和方法都需要结合使用，以获得最准确的结果。
许多人可能还不熟悉这两种肠道细菌和相关检验技术，但对于临床和研究实验室来说，熟练掌握检测方法对于准确诊断和治疗细菌感染是至关重要的。
弧菌
弧菌科种类
弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属
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三个菌属的鉴别
试验
肌醇 粘丝试验 鸟氨酸 精氨酸
150 μgO/129
弧菌属
－ ＋/(－) ＋/－ ＋/－ S ＋ ＋/－
气单胞菌属 邻单胞菌属
－ － － ＋/－ R － － ＋ － ＋ ＋ S － －
4
TCBS生长 耐盐（7％）
16
霍乱流行病学特点（2）
霍乱发病季节在夏秋季，本市主要在5-10月份， 7-9月为发病高峰 人群普遍易感，在同源感染因素下易造成爆发和 流行
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霍乱预后及危害
霍乱能引起机体剧烈吐泻、失水、电介质紊乱以 致死亡
病死率高低与病情轻重以及医疗条件、抢救的时 效性有关。病情重、医疗条件差、抢救不及时病 死率可高达20%-50%
霍乱流行病学特点（1）
霍乱（O139与O1群霍乱），具有传染性强、传播 迅速、易出现暴发和流行特征；世界卫生组织将 其纳入霍乱范畴，我国将它列入法定报告的甲类 烈性传染病 霍乱弧菌主要通过水、食物、日常生活接触和苍 蝇传播，以食物传播为主，常可借助食用被霍乱 弧菌污染的食物而致病
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全国霍乱O139流行情况（1）
1992年在印度、孟加拉首次发现霍乱O139后， 短期内在这两个国家造成流行，发病人数高 达10多万例，并在几年间已传入亚洲、欧洲、 美洲等20多个国家 1993年传入我国后，即在新疆南部柯坪县发 生霍乱O139引起的暴发，报告病例数202例， 死亡4例
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弧菌科及检验
弧菌科共同特征
革兰阴性菌，短小弯曲弧状,无芽胞， 多数有鞭毛、有菌毛。 需氧兼性厌氧 具有一端单一鞭毛、运动迅速 氧化酶＋ 发酵葡萄糖产酸不产气,许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
微生物检验11
弧菌科
一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的 革兰阴性细菌 兼性厌氧，发酵葡萄糖，许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠 需要2%~3%氯化钠 大多数菌株氧化酶阳性 具有一端单一鞭毛、运动迅速 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
弧菌科( 弧菌科(Vibrionaceae)
1.形态 1.形态
新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性， 弧形或逗点状 在患者“米泔水” 在患者“米泔水”样便中，可呈头尾相接的 “鱼群”样排列 鱼群” 菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭” 菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭”样运 动 有普通菌毛和性菌毛 O139群有荚膜 O139群有荚膜
2. 抗原成分
3.标本直接检查 3.标本直接检查
涂片染色镜检 取标本直接涂片，固定染色。油镜观察有无“鱼群” 取标本直接涂片，固定染色。油镜观察有无“鱼群”样排列的革兰阴 性弧菌 动力和制动试验 直接取“米泔水”样便，制成悬滴(或压滴)标本后， 直接取“米泔水”样便，制成悬滴(或压滴)标本后，在暗视野或相差 显微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌。 显微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌。 同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入1滴不含防腐剂的霍乱多 同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入1 价诊断血清(效价≥1：64)。 价诊断血清(效价≥1：64)。可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并 发生凝集，则为制动试验阳性。 发生凝集，则为制动试验阳性。可推定为霍乱弧菌存在 快速诊断 通过直接荧光抗体染色和抗O1群抗原的单克隆抗体凝集试验 群抗原的单克隆抗体凝集试验， 通过直接荧光抗体染色和抗O1群抗原的单克隆抗体凝集试验，能够 快速诊断霍乱弧菌感染 霍乱毒素的测定 用改良的ELISA法 将纯化的GM1包被 以俘获标本中的CT。 包被， 用改良的ELISA法，将纯化的GM1包被，以俘获标本中的CT。或采 用乳胶凝集测定CT， 用乳胶凝集测定CT，有较高的灵敏度和特异性
临床微生物选择题习题及答案
临床微生物选择题习题及答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、形态似奈瑟菌，但不分解任何糖类的是A、产碱杆菌属B、窄食单胞菌属C、假单胞菌属D、不动杆菌属E、莫拉菌属正确答案：E2、亚急性硬化性全脑炎(SSPE)是一种由A、脊髓灰质炎病毒引起的亚急性感染B、麻疹病毒引起的潜伏感染C、麻疹病毒引起的慢发病毒感染D、狂犬病毒引起的慢性感染E、流行性乙型脑炎病毒引起的急性感染正确答案：C3、柯萨奇病毒的主要传播途径是A、呼吸道B、母婴传播C、血液和血制品D、蚊虫叮咬E、消化道正确答案：E4、诺卡菌广泛存在于A、肠道B、土壤C、水源D、皮肤E、口腔正确答案：B5、关于凝固酶试验，描述不正确的是A、结合凝固酶用玻片法检测B、结合凝固酶被协同因子激活C、金黄色葡萄球菌产主凝固酶D、游离凝固酶可转变为凝血酶样物质E、游离凝固酶可分泌到菌体外正确答案：B6、A群链球菌感染引起的疾病不包括A、猩红热B、蜂窝织炎C、大叶性肺炎D、肾小球肾炎E、风湿热正确答案：C7、以人虱为传播媒介的微生物为A、钩端螺旋体B、鼠疫杆菌C、布鲁菌D、鹦鹉热立克次体E、普氏立克次体正确答案：E8、下列哪种方法不适用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌A、苯唑西林MIC法B、头孢西丁MIC法C、头孢西丁纸片扩散法D、苯唑西林盐琼脂筛选试验E、甲氧西林纸片扩散法正确答案：E9、脑脊液涂片查见革兰阴性，凹面相对的双球菌，该可疑致病菌是A、金黄色葡萄球菌B、肺炎链球菌C、流感嗜血杆菌D、隐球菌E、脑膜炎奈瑟菌正确答案：E10、我国钩端螺旋体的主要宿主是A、鸡和鸭B、牛和猪C、鹅和鸭D、蛇和蛙E、鼠和猪正确答案：E11、引起烧伤后败血症最常见、最严重的细菌为A、肺炎链球菌B、大肠埃希菌C、枸橼酸杆菌D、产气肠杆菌E、铜绿假单胞菌正确答案：E12、HBV的C基因编码A、HBsAgB、X蛋白C、DNA多聚酶D、HBcAbE、HBeAg正确答案：E13、抗酸性染色阳性，革兰染色阳性，在沙保罗葡萄糖琼脂培养基上生长的菌可能是A、结核分枝杆菌B、放线菌C、诺卡菌D、卡他莫拉菌E、产气荚膜梭菌正确答案：C14、判断病毒有无包膜的依据是A、对酚类是否敏感B、对酸敏感C、对乙醚是否敏感D、沉降系数不同E、培养有无细胞病变正确答案：C15、临床诊断病毒感染的常用试验是A、血凝抑制试验B、酶联免疫吸附试验C、补体结合试验D、中和试验E、沉淀反应正确答案：B16、对温度最敏感的细菌是A、脑膜炎奈瑟菌B、金黄色葡萄球菌C、金黄奈瑟菌D、表皮葡萄球菌E、卡他莫拉菌正确答案：A17、下列选项属于医院内感染的是A、医院输血后的丙型肝炎B、住院一周后发病的甲型肝炎C、住院三天后发病的伤寒D、住院一周后发病的麻疹E、住院三天后发病的乙型肝炎正确答案：A18、下列选项中，不属于侵袭性腹泻主要病原菌的是A、致病性大肠埃希菌B、小肠结肠炎耶尔森菌C、沙门菌属D、志贺菌属E、肠岀血性大肠埃希菌正确答案：A19、革兰染色中结晶紫染液的作用是A、复染剂B、固定剂C、脱色剂D、媒染剂E、初染剂正确答案：E20、无包膜病毒完整病毒体是A、壳粒B、包膜C、核衣壳D、衣壳E、核酸正确答案：C21、患者HBsAg+、抗HBs-、HBeAg+、抗HBe-、抗HBcIgM+表明A、患急性乙型肝炎B、患慢性乙型肝炎C、患慢性迁延性肝炎D、乙肝恢复期E、患慢性活动性肝炎正确答案：A22、乙型肝炎早期诊断的血清学指标是A、HBeAgB、HBc总抗体C、HBsAgD、抗HBc IgGE、抗HBc IgM正确答案：E23、EB病毒可引起A、唇疱疹B、生殖器疱疹C、Burkitt淋巴瘤D、水痘E、巨细胞病毒感染正确答案：C24、普氏立克次体所导致的疾病是A、Q热B、传染性单核细胞增多症C、地方性斑疹伤寒D、流行性斑疹伤寒E、沙眼正确答案：D25、油镜下呈“网球拍”状的细菌是A、炭疽杆菌B、产气荚膜杆菌C、白喉杆菌D、枯草杆菌E、肉毒梭菌正确答案：E26、通常定量接种的尿液量是A、7μIB、1μIC、5μID、2μIE、3μI正确答案：B27、外形为子弹状，有包膜的RNA病毒是A、人乳头瘤病毒B、森林脑炎病毒C、巨细胞病毒D、狂犬病病毒E、柯萨奇病毒正确答案：D28、下列与鼻咽癌病因有关的病毒是A、巨细胞病毒B、单纯疱疹病毒C、EB病毒D、鼻病毒E、水痘-带状疱疹病毒正确答案：C29、肠道病毒的核酸类型是A、单正股RNAB、单负股RNAC、双股RNAD、双股DNAE、单股DNA正确答案：A30、血平板上形成双层溶血环的细菌是A、肺炎链球菌B、产气荚膜梭菌C、金黄色葡萄球菌D、破伤风梭菌E、白喉杆菌正确答案：B31、第一个被人类发现的病原菌是A、炭疽芽胞杆菌B、破伤风梭菌C、百日咳鲍特菌D、鼠疫耶尔森菌E、霍乱弧菌正确答案：A32、诊断解脲脲原体感染时以下哪种标本不常采集A、精液B、前列腺液C、血液D、尿液E、阴道分泌物正确答案：C33、普通冠状病毒主要引起A、大叶性肺炎B、哮喘C、腹泻D、普通感冒E、原发性非典型肺炎正确答案：D34、下列说法正确的是A、Ⅲ级生物安全柜可确保人体与柜内物品完全隔绝B、实验室的生物安全防护分为三级C、Ⅲ级生物安全柜对外界应保持正压D、Ⅰ级生物安全柜能保证实验对象不受污染E、Ⅱ级生物安全柜不能保证实验对象不受污染正确答案：A35、肠道病毒不会引起的疾病是A、心肌炎B、无菌性脑膜炎C、急性出血性结膜炎D、流行性乙型脑炎E、脊髓灰质炎正确答案：E36、主要用于半固体培养基接种的方法是A、平板划线法B、涂布法C、倾注平板法D、穿刺接种法E、斜面接种法正确答案：D37、不能用于分离培养病毒的是A、鸡胚接种B、Korthof培养基C、动物实验D、细胞培养E、鸡卵黄囊正确答案：B38、立克次体与细菌之间的主要区别是A、有细胞壁、核糖体B、有DNA、RNA两种核酸C、严格的细胞内寄生D、二分裂法繁殖E、可造成自然疫源性疾病正确答案：C39、真菌对以下因素抵抗力最弱的是A、60℃加热1小时B、潮湿C、青霉素D、氯霉素E、氧气正确答案：B40、衣原体与病毒的相同点是A、有DNA和RNA两种核酸B、严格细胞内寄生C、以二分裂法增殖，有独特的发育周期D、有核糖体E、对抗生素敏感正确答案：B41、血培养的釆血量与肉汤培养基比例中，最佳的是A、1：15B、1：20C、1：25D、1：5E、1：1正确答案：D42、EBV可引起A、传染性单核细胞增多症B、细胞淋巴瘤C、慢性CD4+T细胞淋巴瘤D、带状疱疹E、生殖器疱疹正确答案：A43、HSV-2型可引起A、唇疱疹B、生殖器疱疹C、Burkitt淋巴瘤D、水痘E、巨细胞病毒感染正确答案：B44、埃希菌属与志贺菌属的鉴别试验是A、动力试验B、染色性C、细菌形态D、荚膜肿胀试验E、氧化酶试验正确答案：A45、IMViC试验常用来鉴定A、革兰阴性球菌B、肠道杆菌C、非发酵菌D、革兰阳性杆菌E、厌氧菌正确答案：B46、含有宿主细胞成分的是A、核酸B、包膜C、壳粒D、衣壳E、核衣壳正确答案：B47、气单胞菌属与弧菌属的鉴别常用A、霍乱红试验B、多黏菌素B敏感试验C、耐盐试验D、氧化酶试验E、黏丝试验正确答案：C48、副溶血弧菌的致病因子为A、TSST-1B、CTC、TOHD、STE、LT正确答案：C49、不适应病毒感染快速诊断的是A、形态学检查B、病毒核酸检测C、病毒抗原检测D、早期抗体检测E、晚期抗体检测正确答案：E50、乙型肝炎病毒学检验最常用的方法是A、免疫电镜HBV的病毒颗粒B、测定血清中HBV DNA含量C、测定血清中蛋白酶活性D、测定血清中HBV抗原抗体E、测定血清中HBV的DNA多聚酶活性正确答案：D51、苯丙氨酸脱氨酶试验阳性的细菌是A、大肠埃希菌B、变形杆菌C、阴沟肠杆菌D、肺炎克雷白菌E、痢疾志贺菌正确答案：B52、有荚膜的是A、新生隐球菌B、曲霉菌C、卡氏肺孢子菌D、毛霉菌E、白假丝酵母菌正确答案：A53、潜伏于脊髓后根神经节的病原体A、HSV-1型B、HSV-2型C、VZVD、HCMVE、EBV正确答案：C54、下列微生物中，可导致患者粪便呈“米泔水”样的是A、伤寒沙门菌B、霍乱弧菌C、痢疾志贺菌D、金黄色葡萄球菌E、大肠埃希菌正确答案：B55、抗生素相关性腹泻的主要病原菌是A、小肠结肠炎耶尔森菌B、金黄色葡萄球菌C、霍乱弧菌D、铜绿假单胞菌E、艰难梭菌正确答案：E56、ESBLs的描述,不正确的是A、能水解青霉素类、头孢菌素类和单环β内酰胺类药物B、能水解头霉素类和碳青霉烯类药物C、能被克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦等β内酰胺酶抑制剂所抑制D、主要见于大肠埃希菌和肺炎克雷白菌E、由质粒介导正确答案：B57、在血平板上生长形成黄色菌落，培养48小时菌落可出现“猫眼”现象的是A、鲍曼不动杆菌B、铜绿假单胞菌C、洛菲不动杆菌D、粪产碱杆菌E、嗜麦芽窄食单胞菌正确答案：E58、既能分解色氨酸又能还原硝酸盐的试验是A、苯丙氨酸脱氨酶试验B、七叶苷试验C、霍乱红试验D、甲基红试验E、ΟNPG试验正确答案：C59、培养支原体的培养基不含有A、血清B、酵母浸液C、青霉素D、红霉素E、琼脂正确答案：D60、真空冷冻干燥保存法保存菌种一般能保存的时间是A、1〜5年B、1〜6个月C、5〜15年D、15〜20年E、6〜12个月正确答案：C61、分枝杆菌感染常用的检查方法是A、负染色法B、异染颗粒染色法C、抗酸染色法D、革兰染色法E、悬滴法或压滴法正确答案：C62、下列哪组革兰阳性需氧杆菌可以引起食物中毒A、志贺菌属，霍乱弧菌B、蜡样芽胞杆菌，产单核细胞李斯特菌C、产气荚膜梭菌，蜡样芽胞杆菌D、白喉棒状杆菌，红斑丹毒丝菌E、产单核细胞李斯特菌，肉毒梭菌正确答案：B63、灭菌物品每月监测一次，其合格标准为：每件细菌总数≤多少cfu 不能检出致病菌A、20B、10C、40D、30E、50正确答案：A64、下列哪组细菌IMViC反应模式相同A、肠杆菌属与肺炎克雷白菌B、沙雷菌属与克雷白菌属C、肠杆菌属与埃希菌属D、肠杆菌属与志贺菌属E、摩根菌与变形杆菌属正确答案：A65、脊髓灰质炎活疫苗采用口服途径主要是因为A、免疫维持时间长B、最省人力C、既能产生血清中和抗体又能获得局部免疫D、最易为儿童接受E、不易发生干扰正确答案：C66、白假丝酵母菌所引起的鹅口疮多见于A、青少年B、幼儿C、儿童D、初生婴儿E、成人正确答案：D67、下列选项中，不属于脑脊液标本的采集指征的是A、头痛、发热或全身性感染症状B、腹痛C、颈项强直D、头痛、喷射状呕吐E、昏迷、抽搐正确答案：B68、真菌细胞不具有的结构或成分是A、细胞核B、内质网C、线粒体D、叶绿素E、细胞壁正确答案：E69、串珠试验是哪种细菌的鉴定试验A、蜡样芽胞杆菌B、金黄色葡萄球菌C、产气荚膜梭菌D、炭疽芽胞杆菌E、产单核细胞李斯特菌正确答案：D70、患者女，22岁。
【微生物学】9弧菌属
免疫性
❖ 可获得牢固免疫，再感染少见 ❖ 可出现保护性抗肠毒素抗体（抗B亚单位）、
抗菌抗体（抗O抗原） ❖ 肠腔中SIgA
四、微生物学检查法
病人粪便，肛拭
（流行病学调查包括水样）
标本
直接镜检
涂片见G-性弧菌，鱼群状排列 悬滴法观察细菌呈穿梭样运动
弧菌属
❖菌体短小、弯曲呈弧状的革兰阴性菌 ❖大多数是非致病菌 ❖致病菌主要是霍乱弧菌和副溶血弧菌
霍乱弧菌（V.cholerae）
形态与染色
革兰染色阴性 弧型或逗点状，单鞭毛
液体中 运动非常活泼 呈穿梭样 涂片中 排列整齐 呈鱼群状 培养特性 耐碱不耐酸
在pH8.8~9.0的碱性蛋白胨水/碱性琼脂平板上生长良好
抗原构造
Ｏ抗原: 分成155个血清群
O1群与O139群引起霍乱
古典生物型 O1群
El Tor生物型
抵抗力
较弱，不耐热 对酸敏感，耐碱耐低温 对一般消毒剂都敏感 对链霉素、氯霉素敏感
二、致病性与免疫性
1、致病物质 鞭毛与菌毛 鞭毛－－运动、穿透 菌毛－－粘附作用
霍乱肠毒素
霍乱肠毒素(CT)： 蛋白质, 不耐热
分离培养
碱性蛋白胨水增菌 选择培养基为TCBS 玻片凝集反应
五、防治原则 控制传染源 切断传播途径 改善社区环境，加强水源管理， 提高易感者免疫力 疫苗预防接种
治疗霍乱的关键
及时补充液体和电解质
副溶血性弧菌
❖嗜盐性弧菌 ❖海产品中，食用污染食物引起食物中毒 ❖沿海较常见
Ｂ亚单位与受体结合
结合部位B 毒性部位A
Ａ亚单位作用于腺苷环化酶
ATP转化成cAMP， cAMP
《气单胞菌》PPT课件
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嗜水气单胞菌致病因子
❖ 胞外酶 是嗜水气单胞菌重要的致病因子之 一， 研究得较多的是金属蛋白酶和丝氨酸蛋 白酶。 G o b i u s、A n g u i t a等分别克隆得 到了嗜水气单胞菌的胞外淀粉酶、 蛋白酶、 脂肪酶及磷脂酶。
❖ 用铂金耳取A H M鉴别培养基表面菌落少许。接种蔗 糖胰蛋白胨肉汤, 2 8 ℃摇床( 3 0 r / mi n ) 培养4 8 h。 1 0 0 0 0 r / mi n离心 1 0 mi n ， 取上清。
❖ 用微量加样器取5 μL点样于硝酸纤微素膜光面，3 7 ℃烘干。
❖ 置2 0 %脱脂奶中， 3 7 ℃封闭1 h 。 ❖ 用含吐温- 2 0的磷酸盐缓冲液洗5次，每次 2 min。 ❖ 置1：5 0 兔抗嗜水气单胞菌蛋白酶抗血清中， 3 7
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➢ 国际上对气单胞菌的血清学分型研究比较系统的是 日本国立康复研究院 (N I H)和荷兰国立公共健康和 环境卫生研究院 (N IPHEH)对嗜温群气单胞菌的血 清学分型 ,前者共分 44个 O抗原血清型 ,后者分 30 个 O抗原血清型。
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么么么么方面
❖ Sds绝对是假的
血清分型
➢ 英国学者 Thomas等将 N I H系统在原有 44个 O型血 清基础上扩大到 96个。Thomas的分型结果显示 03、 016、 017和034是优势血清型 ,其中 011、 016和 034毒力强大 ,被认为是引起人类腹泻的重要病原 。
➢ 在瓶装天然矿泉水中 ,甚至手术使用的医疗用品中 也能检出气单胞菌。
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致病因素
在温血和冷血脊椎动物 (包括青蛙、 鱼、 爬虫、 蛇、 鸟和人 )中 ,气单胞菌与许多种类的疾病有关 , 对人感染主要有两类:
霍乱弧菌课件
霍乱弧菌
二、微生物学检验
1.标本采集： 采集粪便标本，采集的标本应及时接种于碱性蛋白 胨水增菌。不能及时接种者，应将标本置于文-腊二氏保存液或卡布运送培养基中由专人运送 2. 涂片染色镜检：取标本直接涂片革兰染色，油镜下观察到呈鱼 群状排列的革兰阴性弧菌可初步报告 3.动力及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细 菌动力，见穿梭或流星样运动，O1群霍乱弧菌多价血清制动试验阳 性，可早期报告
Q1、患者最有可能患有何种疾病？ Q2、如何确诊？
霍乱弧菌
三、临床意义
1.致病物质：菌毛定植、霍乱肠 毒素 2.所致疾病：引起霍乱，为肠道 烈性传染病，主要是通过污染的 水源或食物经口摄入。临床表现 为剧烈上吐下泻，严重脱水、酸 中毒、痉挛、尿闭、休克、死亡
• 致病物质： 鞭毛与菌毛：运动并粘附至小肠粘膜 肠毒素： A—A1：毒性组分，使腺苷酸环化酶活 性增高，cAMP 大量增加。 A2：与 B 结合 B—与小肠上皮细胞神经节苷脂受体结合
/碱性琼脂平板上生长良好
碱性蛋白胨水—运送标本/增菌
碱性琼脂平板—透明/半透明
无色扁平菌落
霍乱弧菌在TCBS琼脂平板上形成
发酵蔗糖的较大的黄色菌落
霍乱弧菌
霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成 原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落
霍乱弧菌
3. 抗原构造与分型：根据O抗原的不同将霍乱弧菌分为155个 血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，O2群～O138群只引起 人类胃肠炎，不引起霍乱流行，称之非O1群霍乱弧菌 4. 抵抗力： 霍乱弧菌在淡水及海水中存活1～3周。对热、 干燥、日光、酸、消毒剂敏感，耐碱力较强。100℃，1～ 2min即死亡；在正常胃酸中仅能生存4min；0.5ppm氯15min能 杀死；对链霉素、氯霉素和四环素敏感，对庆大霉素耐药
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4．生化反应
❖ 氧化酶阳性 ❖ 发酵蔗糖，动力阳性 ❖ 赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性 ❖ 可以在无盐培养基上生长
在含有高于6%氯化钠的培养基上不能生长
特征 羊红细胞溶血 鸡红细胞凝集 V-P 试验 多粘菌素B敏感试验 Ⅳ组噬菌体裂解 Ⅴ组噬菌体裂解
古典生物型 — — — + + —
❖ 兼性厌氧，发酵葡萄糖，许多菌株生长 需要2%~3%氯化钠
❖ 大多数菌株氧化酶阳性 ❖ 具有一端单一鞭毛、运动迅速
❖ 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中 最为多见。其中有一些种对人类致病。
第一节 弧菌属
❖ 弧菌属（Vibrio）共有36个种。其中有12个 种与人类感染有关，最重要的为 霍乱弧菌 引起霍乱 副溶血弧菌 引起食物中毒
特别谨慎，需结合其他试验结果如耐盐生长试验等综合 考虑。
（4）耐盐试验
（5）鸡红细胞凝集试验
El Tor生物型阳性，古典生物型阴性
1.形态
新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性，弧 形或逗点状
在患者“米泔水”样便中，可呈头尾相接的“鱼 群”样排列
菌体一端有单鞭毛，长为菌体 3～5 倍，“蝌蚪 状”。悬滴观察时呈“穿梭”样运动
有普通菌毛和性菌毛 O139群有荚膜
2. 培养特性
❖ 营养要求不高，在普通琼脂上生 长良好
❖ 多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血 平板上可呈现α、β或不溶血菌落。
❖ 在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康 凯平板，许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发酵
的菌落
一、霍乱弧菌
（ Vibrio cholerae）
霍乱的病原菌。 肠道传染病，发病急、传播快、 死亡率高。
（一）生物学特性
可引起人类的胃肠炎，不引起霍乱流行，称之为非 O1群霍乱弧菌。
分型
❖ O1群霍乱弧菌菌体抗原的3种抗原因子A、B、C有 不同的组合，根据此可分为3个血清型： 小川型（AB）、稻叶型(AC)、彦岛型(ABC)
❖ 根据同一血清型的表型差异，每一个血清型又可分 为2个生物型： 古典生物型 (classical biotype) 不溶解羊红细胞，不凝集鸡红细胞 埃尔托生物型 (ElTor biotype) 溶解羊红细胞，凝集鸡红细胞
( 蔗糖 双氢链霉素
洗衣粉 亚碲酸钾)
↓
↓
抑制其他G－菌 十二烷基磺酸钠（SDS）
∵ 降低表面张力；抑制 G＋菌 ∴ 是较好的强选择性培养基
大Hale Waihona Puke 圆形、扁平或稍凸、无色或微带蓝灰色中心、透 明或半透明、表面光滑湿润、似水滴状菌落。
❖ 在 0%--6% NaCl 上生长， > 6% NaCl 不生长
❖ 兼性厌氧。16~44℃均可生长，以 37℃为适宜
❖ 具耐碱性，在pH6.8~10.2范围均 可生长
在pH8.2~9.0的碱性胨水或碱性平板 上生长迅速，其他杂菌被抑制生长
在pH8.5的碱性胨水中经35℃4~6h 增菌后可在液体表面大量繁殖形成菌 膜
❖ TCBS 琼脂平板
( 硫代硫酸盐- 柠檬酸纳 - 胆盐 -- 蔗糖)
+ + +
+ ++
+ + +
主要临床标本
粪便 粪便
粪便、脓液、血液
粪便 粪便 粪便 粪便 脓液、血液 脓液 脓液
共同特点
❖ 氧化酶均阳性
除麦氏弧菌外
❖ 能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129敏感
❖ 钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下 不能生长，称为嗜盐菌（halophilic bacteria）
❖ 在血琼脂平板上菌落较大, El-Tor生物型可形成β溶 血环
❖ 在含明胶的培养基上O139群霍乱弧菌可形成不透明 的浅灰色菌落，周围有一圈不透明带，此菌落涂片 观察可发现荚膜
3.抗原构造及分型
❖ O抗原：耐热，具有群特异性和型特异性，是霍乱
弧菌分群和分型的基础
❖ H抗原：不耐热，无特异性，所有霍乱弧菌
第二十五章 弧菌属和气单胞菌属
弧菌科(Vibrionaceae)
❖ 弧菌属（Vibrio） ❖ 气单胞菌属（Aeromonas） 气单胞菌科 ❖ 邻单胞菌属（Plesiomonas） 肠肝菌科 ❖ 发光杆菌属（Photobacterium）
发光杆菌属主要存在于海水中，对人类不致病
弧菌科
❖ 一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的 革兰阴性细菌
临床常见弧菌及所致疾病
菌种
霍乱
O1 群霍乱弧菌
+++
O139 群霍乱弧菌 +++
非 O1 群霍乱弧菌
副溶血弧菌
霍利斯弧菌
拟态弧菌
河弧菌
创伤弧菌
溶藻弧菌
少女弧菌
麦氏弧菌
辛辛那提弧菌
弗尼斯弧菌
鲨鱼弧菌
胃肠 炎
+++ +++ ++ ++ ++ + +
+
+
所致疾病
伤口感 中耳
染
炎
++
+
++
++
++
++
+
败血 症
拥有相同的H抗原
分群
❖ 根据O抗原的不同，现有155个血清群 ❖ O1群、O139群引起霍乱
O139血清群的抗原编码基因中出现了36kb的新基因 缺少了O1群高分子量的O抗原侧链 与O1群抗血清无交叉反应，但可与O22血清群和
O155血清群产生交叉反应，遗传学特征和毒力基因 与O1群相似。
❖ O2群~O138群血清群
去氧胆酸钠+菌→浓悬液→粘丝现象
弧菌属细菌除副溶血性弧菌部分菌株外，均有此 反应
(3)O/129敏感试验
O/129（2，4－Diamino－6，7－ Diisopropylpteridine，2，4二氨基－6，7－二 异丙基喋啶）
10μg及150μg纸片周围出现任何大小的抑菌环均为敏感。 O1群和非O1群霍乱弧菌均敏感。 但已有对O/129耐药的菌株出现。用此试验作鉴定时，需
El-Tor生物型 D + + — — +
用于霍乱弧菌的鉴别试验
（1）霍乱红试验 在含硝酸盐 蛋白胨水中
↓
↓
能还原硝酸盐为 亚硝酸盐，＋ 同时使色氨酸产生了靛基质
↘↙ 亚硝基靛基质，
滴加浓硫酸 ↓H2SO4 即：出现蔷薇色，
霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性。
（2）粘丝试验（String Test）
（thiosufate citrate bilt sucrose ）
胆盐: 抑制 G＋菌 ;
蔗糖: 鉴别作用
分解蔗糖 PH ↓＋ 麝香草酚兰
→ 形成较大黄色菌落。 碱性 → 蓝/绿色 (副溶血弧菌)
❖ 碱性琼脂平板: （强选择性培养基）
① 庆大霉素平板
（ 无水亚硫酸钠、蔗糖、枸橼酸钠、庆大霉素）
② 糖双洗琼脂平板