芽孢染色液(Scharffer-Fulton法)
实验二细菌的革兰氏染色及芽孢染色法ppt课件
芽孢仍保留初染剂的颜色（绿色），而菌体呈复染 剂颜色（红色）。
（三）实验器材
1、活材料： ➢ 革兰氏染色：培养12h-16h枯草杆菌（Bacillus subtilis）
和培养24h大肠杆菌（Escherichia coli） ➢ 芽孢染色：培养28-36 小时 的蜡状芽孢杆菌（Bacillus
你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！
擦油镜镜头方法： A）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油 B）用擦镜纸沾少许二甲苯，擦拭镜头； C）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
资料仅供参考，实际情况实际分析
（四）实验步骤——芽孢染色
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
❖制备菌悬液 ❖染色 ❖涂片固定 ❖脱色 ❖复染 ❖镜检
芽孢染色---制备菌悬液
1、滴生理盐水 生理盐水
2、制备菌悬液 挑取2-3环菌苔
在EP管中滴2 滴生理盐水
与生理盐水混匀
芽孢染色---染色
1、滴加孔雀绿染液 5%孔雀绿染液
（四）实验步骤——革兰氏染色
3.观察实验结果 待标本自干或用吸水纸吸干后，置显微镜
下检查。
革兰阳性菌（G+）， 被染成蓝紫色。
革兰阴性菌（G-）， 被染成红色。
实验程序Ⅰ（革兰氏染色的方法和步骤）
每人取大肠杆菌和枯草杆菌，做一块混合涂片，进行革兰氏染色。
蒸 馏 水
涂片
干
涂 片
芽孢染色液使用说明
芽孢染色液使用说明
货号：G1132
规格：50ml×2/100ml×2/250ml×2
保存：室温干燥保存，有效期1年。
试剂盒组成：
染色液A：石炭酸复红染液
染色液B：碱性美蓝染色液
产品说明：
芽胞具有高度的折光性，外膜致密，渗透性低，着色和脱色均较困难。
在加热条件下进行染色时，染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料可被酒精脱色，而芽胞上的染料仍保留，经复染剂复染后，菌体和芽胞呈现出不同的颜色。
操作步骤：
1、制作一适当厚度的细菌涂片，自然干燥，通过火焰加热固定。
2、滴加适量染色液A于涂片上，在酒精灯上加热，使染液冒蒸汽但不沸腾。
必要时可续加染液以免干涸。
维持4-5分钟。
3、待标本冷却后以95%酒精冲洗至无红色染液脱出为止，水洗。
4、滴加染色液B复染约2-3分钟，水洗至无染液脱出为止。
5、待干后油镜观察。
预期结果：
菌体呈蓝色，芽孢呈红色。
注意事项：
1、供芽孢染色用的培养物应控制菌龄，要求大部分芽孢仍保留在菌体内为宜。
2、加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。
3、请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂：
G1010姬姆萨工作液
G1020瑞氏-姬姆萨复合染液
G1060革兰氏染色液
G1160石炭酸复红染液。
芽孢染色法的原理
芽孢染色法的原理
芽孢染色法是一种用于检测和鉴定芽孢形成菌类的常用方法。
其原理基于芽孢的特殊结构和反应性。
首先，芽孢是一种形成于某些细菌和真菌细胞内的一种耐受性很高的休眠状态。
在适当条件下，芽孢可以在短时间内释放，使其周围环境进行细胞增殖。
这一特性使得芽孢成为了一种理想的适应生存环境恶劣的细菌的策略，也使得芽孢形成菌类在食品、环境和医疗等领域的检测工作中具有重要意义。
芽孢染色法的目的就是通过染色方法将芽孢从其他细胞和杂质中区分开来，并使其能够进行清晰可见的观察。
其中最常用的芽孢染色方法包括热染法、抗酸染色法和国际染色法等。
热染法是基于芽孢对高温的特殊耐受性，通过将样本加热到大约80-90℃，使其他非芽孢细胞受到破坏和溶解，而芽孢则保持完整且可染色。
一般使用石碱溶液对样品进行染色，然后使用显微镜观察。
抗酸染色法是通过将样品加入酸性以及带有对比染色剂的染色液中进行染色，然后使用显微镜观察。
正常的细胞会被酸性环境破坏，而芽孢则能够在酸性环境下存活并保持染色。
最常用的抗酸染色方法是梅尔候特染色法。
国际染色法则是通过将芽孢样品加入固定剂中，使其固定在载玻片上，然后使用Grocott染色进行处理。
这种染色法的优点是可清晰显示芽孢内部的结构，并能够区分不同种类的芽孢形
成菌类。
综上所述，芽孢染色法利用了芽孢的特殊结构和反应性，通过不同的染色方法能够使芽孢与其他细胞和杂质进行区分，并能够进行清晰可见的观察和鉴定工作。
芽孢染色法实验报告
一、实验目的1. 掌握芽孢染色法的原理和操作步骤。
2. 观察芽孢和菌体的形态结构，了解芽孢的染色特点。
3. 提高实验操作技能和显微镜观察能力。
二、实验原理芽孢是细菌在不良环境中形成的一种休眠体，具有厚而致密的壁，对高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。
因此，在常规染色方法中，芽孢不易着色或仅显很淡的颜色。
芽孢染色法是利用芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，通过特殊染色方法使芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于区分。
三、实验材料1. 菌种：枯草芽孢杆菌、炭疽芽孢杆菌等。
2. 染料：孔雀绿染液、番红染液、酒精、蒸馏水等。
3. 仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯等。
四、实验步骤1. 涂片：将菌种接种于营养琼脂平板，37℃培养24小时后，用接种环挑取少量菌体，滴加无菌水于载玻片中央，混匀后涂成薄膜，室温干燥。
2. 固定：将涂片菌面朝上，通过火焰2-3次固定，使菌膜牢固地贴在玻片上。
3. 初染：在涂片上滴加孔雀绿染液，染色5分钟。
4. 水洗：倾去染液，用蒸馏水冲洗玻片，直至水流无色。
5. 复染：在涂片上滴加番红染液，染色1分钟。
6. 水洗：倾去染液，用蒸馏水冲洗玻片，直至水流无色。
7. 镜检：在显微镜下观察，观察芽孢和菌体的形态结构，记录实验结果。
五、实验结果与分析1. 观察到枯草芽孢杆菌的芽孢呈绿色，菌体呈红色，芽孢形态为椭圆形，大小约为菌体的1/3-1/2。
2. 观察到炭疽芽孢杆菌的芽孢呈绿色，菌体呈红色，芽孢形态为椭圆形，大小约为菌体的1/2-2/3。
3. 通过芽孢染色法，成功地将芽孢和菌体区分开来，观察到了芽孢的形态结构。
六、实验讨论1. 芽孢染色法是细菌学中常用的染色方法，通过特殊染色方法使芽孢和菌体呈现不同的颜色，便于区分。
2. 在实验过程中，应注意染液的浓度、染色时间、水洗次数等因素，以保证实验结果的准确性。
3. 通过芽孢染色法，可以观察芽孢的形态结构，为细菌分类、鉴定和研究提供依据。
还原糖含量测定--学生
实验七 肉制品中还原糖含量测定一、实验目的1.掌握费林试剂的配制和还原糖快速热滴定的原理和方法2.掌握热滴定操作和终点判断。
二、实验原理将费林试剂的甲液和乙液混合后，CuSO 4·5H 2O 和氢氧化钠反应生成Cu(OH)2沉淀，Cu(OH)2在酒石酸钾钠存在时呈溶解状态，生成深蓝色的酒石酸钾钠铜。
酒石酸钾钠铜与还原糖共热时，还原糖可以将Cu2+还原成为Cu +，生成Cu 2O 红色沉淀。
费林试剂中Cu 2+的氧化能力比次甲基蓝强，所以滴入的标准葡萄糖溶液首先使Cu 2+还原，当Cu 2+被还原完毕后，才使次甲基蓝还原为无色，因此反应终点可以由次甲基蓝指示。
由于次甲基蓝遇空气即氧化变蓝色，所以整个实验过程必须隔绝空气（测定过程使反应液持续沸腾，使水蒸气不断溢出，防止空气干扰）。
另外，Cu 2O 红色沉淀的存在会干扰终点的判定，需加入亚铁氰化钾，使Cu 2O 和亚铁氰化钾生成淡黄色的可溶性化合物，使终点敏锐可见。
2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2 + Na 2SO 4Cu 2O + K 4Fe(CN)6 + H 2O K 2Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH（氧化亚铜） （淡黄色）三、实验器材及试剂① 费林试剂甲液：称取15.0g 硫酸铜（CuSO 4·5H 2O ），0.05克次甲基蓝，用水溶解并稀释到1000ml.乙液：称取50.0g 酒石酸钾钠，54g 的氢氧化钠，54 g 的亚铁氰化钾，用水溶解并稀释到1000ml 。
② 0.10%标准葡萄糖溶液：精密称取1.000g 经95~105℃烘干的无水葡萄糖，用少量水溶解，移入1000ml 容量瓶中，加入5ml 盐酸，用水稀释到刻度，摇匀。
③ 滴定管、电炉、锥形瓶等。
四、实验步骤1. 样品溶液的配备(由李迪老师准备)称取样品1g ，加6mol/L 盐酸10ml 、蒸馏水15ml 混匀，沸水中煮30min ，冷却后用10%NaOH 中和溶液，使溶液PH=7，过滤样品，用容量瓶定容至100ml 。
试验五细菌的芽孢染色法
芽孢染色法的应用范围
芽孢染色法广泛应用于细菌分 类学、生物学和医学领域。
它可以帮助研究人员确定细菌 的种类，了解细菌的生物学特 性，以及在疾病诊断和治疗中 的应用。
此外，芽孢染色法还可以用于 环境监测和工业微生物控制等 方面。
03 试验步骤
样品制备
试验五细菌的芽孢染 色法
目录
CONTENTS
• 试验目的 • 试验原理 • 试验步骤 • 结果分析 • 试验注意事项
01 试验目的
了解芽孢染色法的原理
芽孢染色法原理
芽孢染色法是一种用于观察和鉴别细菌芽孢的染色技术。通 过使用特定的染色剂，能够将芽孢染成与菌体不同的颜色， 从而在显微镜下清晰地观察到芽孢的存在和分布。
芽孢染色法的应用
芽孢染色法在微生物学领域中具有广泛的应用，如环境监测 、食品安全、医学诊断等。通过芽孢染色法，可以快速鉴别 出细菌的种类，判断其是否具有芽孢，从而评估其对环境的 适应能力和潜在的危害。
学习并掌握芽孢染色法操作步骤
准备试剂和材料
选择适当的染色剂（如孔雀绿或品红），准备 显微镜、载玻片、盖玻片、细菌培养物等。
05 试验注意事项
实验前的准备
实验器材
试剂
确保所有实验器材清洁、干燥，无菌，包 括显微镜、染色架、染色缸、盖玻片、载 玻片、吸管、培养皿等。
确保所有试剂质量合格，无菌，包括染色 液、缓冲液、清洗液等。
实验环境
实验人员
保持实验室整洁、干燥，避免尘埃、杂菌 污染。
实验人员应具备相关实验技能和知识，熟 悉实验操作流程和注意事项。
02 试验原理
芽孢染色法定义
芽孢染色法是一种用于检测和鉴别细 菌芽孢的染色技术。
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法一、实验目的1.学习掌握芽孢染色法并了解芽孢的形态特征2.学习并掌握荚膜染色法并了解荚膜的形态特征3.学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征4.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理1.细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
2.芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色又难以脱色这一特点而设计的。
3.所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而更能明显地衬托出芽孢，便于观察。
4.染色方法：改良后的Schaeffer-Fulton氏染色法三、实验仪器及材料1.菌种：枯草芽孢杆菌2.染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液3.仪器或其他用具：Eppendorf管架、载玻片、显微镜、电磁炉、搪瓷杯等。
四、实验步骤1.制备菌悬液：在EP管中滴两滴生理盐水，挑取2-3环菌苔加入到含生理盐水的EP管中，混合均匀。
2.染色：在EP管中滴加2-3滴孔雀绿染液，盖紧EP管，将EP管插入浮筏中，放进沸水中加热15-20分钟，加热过程需要有人看护，随时控温，防止沸水进入EP管。
3.涂片固定：取半滴经孔雀绿染色的菌悬液在载玻片的中央，用接种环将菌液涂抹均匀，将载玻片用法电风机冷风吹干，经过酒精灯火焰固定三次。
4.脱色：待玻片冷却后，水洗脱色。
5.复染：滴加数滴0.5%番红水溶液在菌膜上，染色2min，再水洗。
6.镜检：将晾干后放在显微镜下观察。
五、实验结果结果描述：大部分菌体被染成红色，少部分被染成绿色，说明有芽孢产生，但是芽孢的数量没有菌体多，芽孢被染成绿色，菌体被染成红色，由绿色芽孢的外面还包裹着一层淡红色带可知，该芽孢是内生芽孢，芽孢呈椭圆形，位于菌体的中央，是中央生的芽孢，同时可以观察到枯草芽孢杆菌的大小比平常的小得多。
试验细菌的芽孢染色法
5
细菌芽孢的基本特性
芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力，尤其耐高温。 有的芽孢可耐100℃沸水煮沸数小时。在一定条件下， 芽孢保持活力数年至数十年之久。高温灭菌的判断标 准就是细菌的芽孢是否被杀灭。
6
细菌芽孢的基本特性
芽孢在适宜条件下，营养物如葡萄糖、乳酸和水分， 会发芽形成菌体，但细菌的数量并未增加，所以芽孢 不是一种繁殖方式。
实验五、细菌的芽孢染色法
1
一、实验的目的要求
学习并掌握芽孢染色法 初步了解芽孢杆菌的形态特征
2
二、实验原理
芽孢又称内生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形状、芽孢在孢囊的位置、 芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
芽孢壁厚，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽孢不 着色（芽孢呈无色透明状），而一旦染上色后又难以脱色。
3.仪器、材料：二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙 醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、 擦镜纸、吸水纸。
四、实验方法（Schaeffer－Fulton氏染色法）
1.制片：常规方法涂片、干燥、固定。 2.染色：(1) 涂片上滴加3－5滴5%孔雀绿水溶液。 (2)用试管夹夹住载玻片一端，微火加热，自载玻
片上出现蒸汽时，计时5min。加热过程中切勿使 染料蒸干，及时补加染液。待玻片冷却后，用自 来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 (3)0.5%碱性番红复染2min，水洗。 (4) 制片干燥后油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色
五、实验报告
绘图标识枯草芽孢杆菌及芽孢形态，芽孢的着生位 置。
六、思考题
1．为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体能 染成不同的颜色?
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芽孢染色液(Scharffer-Fulton 法)
简介：
Leagene 芽孢染色液(Scharffer-Fulton 法)主要由孔雀绿染色液和芽孢复染色液组成，因此该法又称为孔雀绿法，芽孢会被染成绿色，营养体呈红色，试剂比较灵敏，操作简单，结果判断更可靠。
但应注意，观察芽孢应在成熟期，但也不能过久，否则只能看到芽孢，而营养体已经消失。
该染色液仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 在洁净无油脂的载玻片上滴加1滴蒸馏水。
2、 用接种环挑取少许巨大芽孢杆菌斜面的菌体，与蒸馏水混合，
3、 制成涂片，自然干燥。
4、 在涂液处滴加孔雀绿染色液，使细菌分布均匀。
5、 弱火间断加热染色。
6、 用水轻轻冲洗。
7、 用芽孢复染液染色，用水冲洗。
8、 镜检：干燥后镜检，观察芽孢的形状、大小，在菌体中的位置以及是否使菌体胀大。
染色结果：
芽孢 绿色 营养体
红色
附注：镜检应注意观察：
形态 圆形或卵圆形 位置 中央，末端，次末端 大小
菌体细胞是否膨大
编号 名称
DM0025 2×20ml
DM0025 2×50ml
Storage 试剂(A): 孔雀绿染色液 20ml 50ml RT 避光 试剂(B): 芽孢复染液 20ml
50ml RT 避光
使用说明书
1份
注意事项：
1、玻片应洁净，无油污。
2、染色过程应小心操作，防止菌脱落。
3、固定时不宜用高热火焰固定。
4、添加孔雀绿染色液，请勿使涂片干燥。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DC0032 Masson三色染色液
DC0041 天狼星红染色液
DG0005 糖原PAS染色液
DM0002 姬姆萨染色液(1:9)
PS0013 RIPA裂解液(强)
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。