Lipstatin高产菌株筛选
漆酶高产菌株的筛选实验方案
漆酶简介漆酶是一种含铜的多酚氧化酶(Laccase, P-diphenol oxidase, EC.1.10.3.2)，广泛分布于高等动植物、昆虫、真菌分泌物和少量细菌中，其中最主要的是担子菌亚门的白腐真菌。
漆酶为含铜的糖蛋白，约由500 个氨基酸组成，多为单一多肽，个别为四聚体。
糖配基占整个分子的10%～45%，糖组成包括氨基己糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等。
由于分子中糖基的差异，漆酶的分子量随来源不同会有很大差异，甚至来源相同的漆酶分子量也会不同。
通过对漆酶蛋白质晶体结构的研究发现,漆酶具有3个铜离子结合位点,共结合4个铜离子,且这4个铜离子处于漆酶的活性部位,在催化氧化反应中起决定作用，如果除去铜离子,漆酶将失去催化作用。
漆酶具有较强的氧化还原能力，能催化多酚、多氨基苯等物质的氧化，使分子氧直接还原成水，将酚类和芳胺类化合物还原成醌类物质，没有副产物的生成。
由于漆酶具有特殊的催化性能和广泛的作用底物，使得漆酶具有广泛的应用价值。
漆酶应用主要集中在制浆造纸，特别是纸浆的生物漂白，环境保护，木质纤维素降解等方面。
造纸工业方面，由于漆酶能高效的降解木质素及与木质素具有相似结构的物质，避免造纸工序中所使用的化学物质影响环境。
环境保护方面，漆酶能有效的除去工业废水、化学农药当中的毒物酚、芳胺、单宁和酚醛化合物，生物消除有毒化合物，使得漆酶在废水处理等环保事业有广阔的前景。
分光光度法测定漆酶活力最常用的底物是2,2’-连氮一双(3-乙基苯并唆毗咯琳-6-磺酸)(ABTS)。
实验一 高产漆酶菌株酶活测定1 主要试剂的配制（1） 0.2 mmol/L pH 4.5柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液A 液：0.2 mmol/L 柠檬酸溶液：称取柠檬酸21.014 g ，加入蒸馏水溶解定容至500mL 。
B 液：0.2 mmol/L 柠檬酸钠溶液：称取柠檬酸钠29.412 g ，加入蒸馏水溶解定容至500mL 。
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定
一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定随着全球环境变化和土地盐碱化现象日益加剧，盐碱地的利用与开发成为当前生物技术领域的研究热点之一。
由于盐碱地上生长着各种耐盐植物，这些植物通常能够分泌出多种耐盐蛋白酶来适应高盐环境。
耐盐蛋白酶是一类具有较强抗盐性的酶，具有在高盐环境中稳定地保持生物体正常代谢的能力，因此对耐盐蛋白酶的研究对于开发盐碱地资源具有重要意义。
为了筛选出高产耐盐蛋白酶的菌株，本实验通过土壤微生物样本的采集和处理，利用培养基筛选、酶活性测定等方法对菌株进行筛选和初步鉴定。
下面将介绍一株耐盐蛋白酶高产菌的筛选与初步鉴定方法。
1. 土壤样品的采集与处理在盐碱地上采集表层土壤样品，将其放入密封袋中，并在4℃条件下运送至实验室。
将土壤样品经过筛选和加工处理后制备为土壤样品悬液。
2. 菌株的分离和筛选将土壤样品悬浊液进行稀释处理，将稀释液均匀的涂覆到含有不同盐浓度的LB琼脂平板上，然后分别在25℃和37℃条件下进行培养。
培养过程中观察并挑选出对盐浓度具有较强耐受能力并有较高细菌光带形成的菌落。
3. 耐盐菌菌落的增殖和纯化将所挑选出的耐盐菌菌落进行传代培养，增殖菌株。
然后将增殖好的菌株进行传代分离和纯化，选择菌落形态较好的细菌单体进行单菌分离。
最后进行双层琼脂平板法纯化和扩展培养。
4. 菌株的酶活性测定利用琼脂酶平板法对菌株进行酶活性测定。
将筛选到的菌株接种于含有抗生素和不同盐浓度的琼脂平板上，使用碘液染色观察菌落周围的透明圈的直径。
透明圈直径越大，表示菌株产生的蛋白酶活性越高。
5. 菌株的初步鉴定利用生化鉴定和16S rDNA序列分析方法对菌株进行初步鉴定。
根据菌落形态、生理生化特性和16S rDNA序列进行分析，确定菌株的属种和种属。
通过上述方法，成功筛选出了一株耐盐蛋白酶高产菌，并对其进行了初步的鉴定。
本实验为从盐碱地土壤中筛选出具有应用潜力的高产耐盐蛋白酶菌株奠定了基础，为盐碱地资源的开发与利用提供了科学依据。
抗代谢类似物筛选高产菌株的原理及具体方法
抗代谢类似物筛选高产菌株的原理及具体方法
代谢是生物内部必要的化学反应，有助于调节细胞环境和满足细胞需要。
因此，代谢物成为抑制生物体代谢的一种有效工具。
抗代谢类似物能够模拟、模拟或阻断代谢物，从而影响细胞代谢水平和产物分布，是微生物发酵过程中常用的调控手段。
高产菌株的筛选是微生物发酵过程中的重要环节，抗代谢类似物筛选高产菌株的原理是利用抑制或激活代谢途径，筛选出代谢产物相对较多的高产菌株。
具体方法如下：
1. 选择抗代谢类似物：抗代谢类似物应该具有选择性、高效性和可持续性，能够抑制或激活目标酶或代谢途径，并且无毒副作用或对宿主菌株的生长无不良影响。
2. 确定抑制或激活代谢途径：通过分析代谢途径和酶系统，确定抑制或激活哪些代谢途径可以提高目标产物的产量。
3. 筛选高产菌株：利用抗代谢类似物处理宿主菌株，通过选择性压力筛选出代谢产物相对较多的高产菌株。
通常利用高通量筛选技术，如平板筛选、液滴筛选、微流控芯片筛选等，对数以万计的菌株进行筛选。
4. 验证高产菌株：对筛选出的高产菌株进行培养和发酵实验，验证其代谢产物产量是否相对较高并且生长是否正常。
同时还需要进行代谢途径和酶活性等方面的分析，以确保高产菌株的稳定性和可靠性。
总之，抗代谢类似物筛选高产菌株的优势在于快速、高效、可持续，可应用于各种微生物发酵过程中的代谢调控和合成生物学研究中。
开菲尔粒中高产蛋白酶菌株的筛选及培养基优化
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高产漆酶菌株的筛选及对染料的降解
高产漆酶菌株的筛选及对染料的降解
高产漆酶菌株的筛选是指在自然环境中寻找出能够高效产生漆酶的菌株。
常规的筛选方法包括培养物染色法、营养物变质法、纸板涂片法等。
其中，培养物染色法是最常见的筛选方法，通过将待筛选菌株培养在含有染料的培养基上，观察染色变化来筛选出具有高产漆酶能力的菌株。
营养物变质法则是通过使用染料作为唯一碳源进行培养，筛选出能够利用染料作为唯一碳源并高效降解染料的菌株。
纸板涂片法是通过将待筛选菌株涂片于含有染料的纸板上，观察菌落生长和染料降解情况来筛选高产漆酶菌株。
高产漆酶菌株对染料的降解是指这些菌株能够将染料分子降解为无害的物质或将其转化为可再利用的物质。
漆酶是一种特殊的氧化酶，具有广谱的染料降解能力。
菌株通过产生漆酶来降解染料，漆酶可以在染料分子中引入氧原子，使得染料分子发生氧化反应，降解为低分子化合物。
高产漆酶菌株对染料的降解能力通常会通过测定漆酶活性、测定染料降解率等指标来评估。
降解染料可以有效地减少染料对环境的污染，这对环境保护和可持续发展具有重要意义。
果胶酶高产菌株的分离筛选及产酶条件优化
果胶酶高产菌株的分离筛选及产酶条件优化果胶酶是指分解果胶质的酶，是含有多种组分的复合酶。
果胶酶可裂解单糖之间的糖苷键，并脱去水分子，分解包裹在植物表皮的果胶，促使植物组织的分解。
这类酶广泛分布于高等植物和微生物中，在某些原生动物和昆虫中也有发现。
在微生物中，细菌、放线菌、酵母和霉菌都能代谢合成果胶酶。
果胶酶在工业生产领域是一种重要的新兴酶类。
据统计，目前果胶酶在全世界食品酶的销售额中占25%。
主要应用于食品工业的果汁加工和果汁果酒澄清、饲料工业以及造纸工业的纸浆脱胶和麻类加工。
1 材料与方法1．1 材料1．1．1 试验材料采集绵阳市采摘果园土壤及腐烂的苹果、梨、枣等水果的腐烂部分。
1．1．2培养基和试剂果胶酶初筛培养基: 果胶4 g，蛋白胨10 g，氯化钠0．5 g，刚果红0．15 g，琼脂20 g，定容至1 000mL，pH7．0，121 ℃灭菌20 min．2) 牛肉膏蛋白胨培养基: 牛肉膏3 g，NaCl 5 g，蛋白胨10 g，琼脂15 ～20 g，水1 000 mL，pH7．0 ～7．2，121 ℃灭菌20 min．3) PDA 培养基: 马铃薯200 g，蔗糖10 g，琼脂20 g，水1 000 mL，pH 值自然，121 ℃灭菌30 min．4) 发酵培养基: 桔皮粉10．0 g·L－1，( NH4)2SO420．0 g·L－1，KH2PO438 g·L－1，K2HPO4·3H2O2．0 g·L－1，pH5．5，121 ℃灭菌20 min．富集培养基：LB 培养基，蛋白胨 1.0 g，酵母膏0.5 g，NaCl 1.0 g，蒸馏水100 mL，灭菌。
筛选培养基：果胶1.0 g，（NH4）2SO40.2 g，KH2PO40.2 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，调pH 至中性，琼脂2.0 g，蒸馏水100 mL，灭菌，倾倒平板。
Lipstatin高产菌株筛选
Lipstatin高产菌株筛选【摘要】以毒三素链霉菌XC-lp-2的变株OT-3为出发菌株，经UV和微波复合诱变处理，并在含豆油的平板上定向筛选耐豆油突变株，获得了高产突变株XC-lp-69，其lipstatin发酵效价达到911μg/ml，较出发菌株OT-3提高了71.6%。
传代试验表明突变株XC-lp-69的高产遗传特性稳定。
【关键词】 Lipstatin；菌种选育；诱变；毒三素链霉菌ABSTRACT After Stretomyces toxytricini OT-3 was treated by UV and microwave irradiation, the soybean oil tolerant mutants were screened and a high-titre strain XC-lp-69 was obtained. The productivity of strain XC-lp-69 reached 911 μg/ml, which is 71.6% more than that of the starting stain OT-3. The subculture experiments indicated that the hereditary character of high productivity ofstrain XC-lp-69 is stable.KEY WORDS Lipstatin; Strain breeding; Inducedmutation; Streptomyces toxytricini收稿日期：2006-11-29作者简介：韩俊茹，女，生于1966年，女，硕士。
研究方向：生物制药。
Lipstatin(利普司他汀)是毒三素链霉菌(Stretomyces toxytricini)的代谢产物，能选择性抑制胃肠道中胰脂肪酶的活性，减少脂肪的分解和吸收，其四氢衍生物奥利司他(orlistat)已被Roche公司开发为减肥药(商品名：赛尼可，Xenical)［1，2］，是目前唯一一个作为非中枢神经系统作用上市的治疗肥胖症的药物［3］。
高产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及产酶条件优化
姚 瑶１，霍元鹏１，周 伟１，叶佳颖１，褚梦真１，朱森林２∗，蒋红英２
（１．浙江师范大学 地理与环境科学学院，浙江 金华 ３２１００４；２．金华职业技术学院 农业与生物工程学院，浙江 金华 ３２１００７）
摘 要：通过七叶苷平板法从腐殖质土壤中筛选得到高产 β－葡萄糖苷酶的 ２ 个菌株（ Ｈ２和 Ｈ５） ，并利用单因素法对 这 ２ 个菌株的产酶条件进行了优化。 经形态学特征初步鉴定，菌株 Ｈ２ 和 Ｈ５ 均为黑曲霉（ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ） 。 Ｈ２ 的最优发 酵条件为：以蔗糖为碳源，以硫酸铵＋尿素（１ ∶１） 为氮源，培养 ５ ｄ，培养温度 ２８ ℃ ，初始 ｐＨ ４．０。 Ｈ５ 的最优发酵条件为： 以红糖为碳源，以硫酸铵＋硝酸铵（１ ∶１） 为氮源，培养 ５ ｄ，培养温度 ２８ ℃ ，初始 ｐＨ ４．５。 在优化的各因素中，以培养温度 对菌株 Ｈ２和 Ｈ５所产 β－葡萄糖苷酶活力的影响最大。
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： β－Ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ； Ｓｔｒａｉｎ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ； Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ； Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ
β－葡萄糖苷酶可水解结合在末端的非还原性 β －Ｄ－葡萄糖苷键，同时释放出葡萄糖体和配基［１］ ，具 有良好的增香酿造潜力［２］ ，其在工业化制备、改善饮 品风味和酶解工程固化回收处理方面发挥重要的作 用。 然而天然酶活性较低往往阻滞了其大规模的工 业化生产。 国内外用于研究的 β－葡萄糖苷酶主要来 源于微生物，这与来源于植物的 β－葡萄糖苷酶活性 不高、稳定性差、产量较低有关［３－４］ 。 目前对 β－葡萄 糖苷酶的微生物来源研究较多［５－６］ ，但不同微生物合 成 β－葡萄糖苷酶的能力有差异［７］ ；Ｗｉｌｋｏｗｓｋａ Ａ 等［８］ 也指出 β－葡萄糖苷酶的活力普遍很低，产量不高。 因此，寻找一种新的高产 β－葡萄糖苷酶的真菌是极
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从图３可以观察到耐豆油突变株中，ｌｉｐｓｔａｔｉｎ合 成能力高于出发菌株的占４２％，低于出发菌株的占 １０％，与出发菌株持平的占４８％。如此高的正变率，说 明了此筛选方法的合理性。
用群体传代的方法考察了高产菌株ＸＣ—ｌｐ一６９的 斜面传代稳定性，结果见表５。
表５
ＸＣ—ｌｐ一６９高产菌株的稳定性考察（／－ｇ／ｍ［）
表５结果显示，经过连续传５代，菌株ＸＣ—ｌｐ一６９ 的生产能力基本一致，说明菌株ＸＣ—ｌｐ一６９的高产性能 遗传特性稳定。 ３讨论
通过ＵＶ和微波复合筛选得到遗传性能稳定的 ｌｉｐｓｔａｔｉｎ高产菌株ＸＣ—ｌｐ一６９。
从图１、图２可以看出，ＯＴ一６３培养至发酵结束时 （５ｄ）分泌至胞外的ｌｉｐｓｔａｔｉｎ只有３５％，而ｗ一３９达 ５０％，比原来提高了１５％，且总的发酵效价也提高了 １８％。
推测微波的作用改变了菌体细胞膜的通透性，促 进了胞内ｌｉｐｓｔａｔｉｎ的外排，减轻了ｌｉｐｓｔａｔｉｎ对其自身
表１
冰箱保存菌株产生ｌｉｐｓｔａｔｉｎ的情况Ｑｌｇ／ｍ１）
（１）斜面培养条件培养温度（３０±０．５）Ｃ，相对 湿度３５％～５０％，培养时间１２０～１５０ｈ。
（２）种子培养条件 培养温度２７ Ｃ，２５０ｍｌ三角 瓶装量２５ｍｌ，转速２４０ｒ／ｒａｉｎ，培养时间２０～２４ｔｌ。
（３）发酵培养条件 培养温度２７ Ｃ，２５０ｍｌ三角 瓶装量２５ｍｌ，转速２４０ｒ／ｒａｉｎ，培养时间１２０ｈ。
分离或其他诱变处理，经不同模型选择的较优菌株）， 连续发酵三批，其结果平均值见表１。
由表１可以看出ＯＴ一３菌株ｌｉｐｓｔａｔｉｎ发酵效价较 高，因此选择ＯＴ一３为出发菌株。 ２．２ 紫外线诱变处理结果
试验中对出发菌株ＯＴ一３进行不同剂量的ＵＶ诱 变处理，经梯度稀释后涂布平板，待菌落生长成熟后， 从每个处理剂量平板中挑取３０个单菌落分别传斜面， 逐一接种发酵瓶，考察诱变株的发酵水平，统计其致死 率、变异率（±１０％以上）和正变率，所得结果见表２。
（２）摇瓶种子培养基（ｇ／Ｉ。） 冷榨黄豆饼粉１５．０， 甘油１５．０，酵母膏７．５，豆油５．０，ＫＮ０３ ２．０，ＭｇＳ０４· ７Ｈ：Ｏ １．０，自来水配制，ｐＨ７．Ｏ～７．２。
（３）发酵培养基（ｇ／Ｉ。） 冷榨黄豆饼粉３０．０，甘油 ２０．０，大豆卵磷脂１２．０，酵母粉１０．０，豆油５．５，自来 水配制，ｐＨ７．０～７．２。 １．３培养条件
ｓｔａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｏｈｅｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ
［Ｊ］．Ｄｉａｂ ｏ ７ｆ。１ ９９８，２１（８）：１２８８ ［４］周德庆著．微生物教程［Ｍ］．北京：高等教育出版社，１ ９９８ ［５］Ｍａｒｋｕｓ Ｇ，Ｗｏｌｆｇａｎｇ Ｅ．Ａｄｅｌｂｅｒｔ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
由表３可以看出，随着微波照射时间的延长致死 率上升，正变率下降，但产量最大提高率随时间延长而 上升，故后续试验采取微波照射７ｒａｉｎ。
以ＯＴ一６３为出发菌株，进行微波诱变，微波处理 后的孢子悬浮液经适当稀释后涂布于分离平板，待菌 落成熟后，挑单菌落传斜面，进行摇瓶发酵初筛和复 筛。得到高产菌株ｗ一３９，总发酵效价和胞外发酵效价 均高于菌株ＯＴ一６３，结果见图１、图２。
表４ 不同浓度豆油对ｌｉｐｓｔａｔｉｎ产生菌生长的影响
经过５轮ＵＶ和微波交替处理，高浓度豆油平板 选择，得到菌株ＸＣ—ｌｐ一６９发酵效价达９１１弘ｇ／ｍｌ，较原 始菌株ＸＣ—ｌｐ一２（３００＞ｇ／ｍ１）提高了２倍多。推测这种 诱变和筛选方法有助于提高菌体的脂肪酶的合成能力 或活性，或提高脂肪酶的分泌速度，增加ｌｉｐｓｔａｔｉｎ合成 所需前体浓度，提高ｌｉｐｓｔａｔｉｎ的效价。 ２．５高产菌株ＸＣ—ｌｐ一６９的稳定性考察
＋＋＋：长得好； ＋＋：长得一般； ＋：长得差； ～：几乎不长。 ４０
一 琶 ３０
暴 惫２０ ： 牲 通ｌＯ
０ ７０
９０
１１０
１３０
１５０
荆ｌＸ，Ｊ效价（％）
圈３
耐豆油变株产量分布图［耐受剂量１．５％（Ｖ／Ｖ）］
万方数据
参考文献 ［１］Ｗｅｎｄｙ Ｍ，Ｐａｕｌ Ｂ．Ｏｌｉｓｔａｔａｔ口］．Ｄｒｕｇｓ，１９９８，５６（２）：２４１ ［２３ Ｍｅｌｉａ Ａ Ｔ，Ｚｈｉ Ｊ，Ｚｅ ｌａｓｋｏ Ｒ，ｅｌ ａ１．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ
油突变株，获得了高产突变株ＸＣ—ｌｐ一６９，其ｌｉｐｓｔａｔｉｎ发酵效价达到９１ｌｐｇ／ｍｌ，较出发菌株ＯＴ一３提高了７１．６％。传代试验表明突变
株ＸＣ—ｌｐ一６９的高产遗传特性稳定。
关键词：Ｌｉｐｓｔａｔｉｎ； 菌种选育； 诱变； 毒三素链霉菌
中围分类号：ＴＱ４６５
文献标识码：Ａ
Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ｌｉｐｓｔａｔｉｎ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ
由表２可知，随紫外线照射时间的延长，致死率、 变异率相应增加，但正变率较高出现在偏低剂量 ．（６０ｓ），这与有关报道［４］一致，故后续试验中均采用 ＵＶ照射６０ｓ。经多次ＵＶ诱变选得菌株ＯＴ一６３，较出 发菌株ＯＴ一３效价提高２０％，达到６３６９９／ｍｌ。 ２．３微波诱变处理结果
试验中对出发菌株进行了不同时间的微波照射处 理，稀释涂平板，待菌落成熟后转接斜面，摇瓶发酵考 察。统计致死率、正突变率和产量的最大提高率，结果 见表３。
中国抗生索杂志２００７年８月第３２卷第８期
·４５９·
文章编号：１００１—８６８９（２００７）０８—０４５９—０３
Ｌｉｐｓｔａｔｉｎ高产菌株筛选
韩俊茹 陈锡永 （浙江医药股份有限公司新昌制药厂， 新昌３１２５００）
摘要： 以毒三素链霉菌ＸＣ—ｌｐ一２的变株ＯＴ一３为出发菌株，经ＵＶ和微波复合诱变处理，并在含豆油的平板上定向筛选耐豆
§６０ 一 墨 皇ｄＯ 叁 裁 越２０ 蜊
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图２
菌株ｗ一３９和ＯＴ一６３分泌ｌｉｐｓｔａｔｉｎ至胞外
比例的比较
生物合成途径的反馈调节作用，促进ｌｉｐｓｔａｔｉｎ的合成。 ２．４耐豆油突变株筛选
文献报道，豆油为ｌｉｐｓｔａｔｉｎ的合成提供前体［５“］。 通过选育耐豆油突变株，能充分利用培养基中的豆油 合成大量前体物质参与ｌｉｐｓｔａｔｉｎ的生物合成，大幅度 提高产量。以ＯＴ一６３的单孢子悬浮液经适当稀释后， 涂布于含不同浓度豆油的分离平板上，培养观察，结果 如表４。
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ｔｅｅｒｓ口］．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ。１９９８，５４（９～１０）：７７３ ［３］Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ Ｐ Ａ，Ｅｌｂｅｉｎ Ｓ Ｃ，Ｈｉｒｓｃｈ Ｉ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｏｒｌｉ—
将经过ＵＶ照射、微波处理或两者交替处理后得 到的孢子悬液梯度稀释后，分别涂布于含一定豆油浓 度的分离平板上，３０℃培养。 １．６分析方法
（１）Ｉ．ｉｐｓｔａｔｉｎ发酵效价测定 试样制备 取发酵液１０ｍｌ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心 １５ｍｉｎ，上清液用丙酮１：４的比例稀释摇匀浸泡１ｈ， 取上清液再次１００００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ或膜过滤，取清 液进行ＨＰＩ。Ｃ测定胞外效价，并用同样的方法测定菌 丝体沉淀中的产物量（胞内效价）。本文中发酵效价为 胞内外效价之和。 ＨＰＩ。Ｃ色谱条件 色谱柱Ｃ，。ＯＤＳ（４．６ｍｍ× ２５０ｍｍ，５肛ｍ），柱温３５‘Ｃ，检测器ＤＡＤ（ＨＰｌｌ００），检 测波长２１０ｎｍ，流动相为乙腈：水（８６：１４），流速 ０．８ｍｌ／ｍｉｎ。 （２）ｐＨ测定用酸度计测定。 （３）菌丝浓度测定 取１０ｍｌ发酵液，４０００ｒ／ｍｉｎ 离心１５ｍｉｎ，测定沉淀物在发酵液中所占比例作为菌 丝浓度。 ２结果与讨论 ２．１ 出发菌株的选择 取４＋Ｃ冰箱保存的１０株菌（ＸＣ—Ｉｐ一２经多次自然
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ Ｉ。ｉｐｓｔａｔｉｎ； Ｓｔｒａｉｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ； Ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ； Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｔｏｘｙｔｒｉｃｉｎｉ
Ｌｉｐｓｔａｔｉｎ（利普司他汀）是毒三素链霉菌（Ｓｔｒｅｔｏ— ｒｎｙｃｅｓ ｔｏｘｙｔｒｉｃｉｎｉ）的代谢产物，能选择性抑制胃肠道中 胰脂肪酶的活性，减少脂肪的分解和吸收，其四氢衍生 物奥利司他（ｏｒｌｉｓｔａｔ）已被Ｒｏｃｈｅ公司开发为减肥药 （商品名：赛尼可，Ｘｅｎｉｃａｌ）［１．ｚ３，是目前唯一一个作为 非中枢神经系统作用上市的治疗肥胖症的药物［３］。因 此，发酵法生产ｌｉｐｓｔａｔｉｎ备受关注。
Ｈａｎ Ｊｕｎ—ｒｕ ａｎｄ Ｃｈｅｎ Ｘｉ—ｙｏｎｇ （Ｘｉｎｃｈａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆａｃｔｏｒｙ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．，Ｘｉｎｃｈａｎｇ ３１２５００）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ａｆｔｅｒ Ｓｔｒｅｔｏｍｙｃｅｓ ｔｏｘｙｔｒｉｃｉｎｉ ＯＴ一３ ｗａｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ＵＶ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｗａｖｅ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｓｏｙ— ｂｅａｎ ｏｉｌ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｍｕｔａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ａｎｄ ａ ｈｉｇｈ—ｔｉｔｒｅ ｓｔｒａｉｎ ＸＣ—Ｉｐ一６９ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＸＣ—ｌｐ一６９ ｒｅａｃｈｅｄ ９１ １ ｔｌｇ／ｍｌ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ７１．６％ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｓｔａｉｎ ＯＴ一３．Ｔｈｅ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒ ｏｆ ｈｉｇｈ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＸＣ—ｌｐ一６９ ｉｓ ｓｔａｂｌｅ．