人脂肪组织来源的干细胞在骨组织工程中的应用
人脂肪干细胞在骨组织工程中应用的研究进展
ｒｇｌｔ ｇｏｔｏｅｅｉａ ｄｔｅｅ ｅｔ ｆ ｏｅｍｏ ｈ ｇｎ ｔ ｒｔｉ一 Ｂ Ｐ ） ｎｔｅ ｓ ｏｃ ｉ ｃｐｃｔ ｏ ｕ ｎＡ Ｓ ． ｅｕａ ｎ ｓ ｇｎｓ ｎ ｆ ｃ ｏ ｎ ｒ ｏｅｅ ｃｐｏｅ ２（Ｍ ２ ｏ ｔ ｇｎｃ ａａｉ ｆ ｍａ Ｄ Ｃ ｉ ｅ ｓ ｈ ｆ ｂ ｐ ｉ ｎ ｈ ｏｅ ｙ ｈ
ｅ ｇ ｎ ｅｉ ｇ ｍａｎ ｙ ｄ ｅ ｔ ｔ ｗｉ ｅ ａ ａｌｂ ｌ ｙ ｅ ｓ ｃ ｅ ｓａ ｄ ｔ ｅ ａ ｉ ｔ ｆｏ ｔｏ ｅ ｅ ｉ ｂ ｔ ｎ ｖ ｔ ｎ ｉｏ Ｔ ｉ ｒｖ ｅ ｎ ｉ ｅ ｒｎ ， ｉ ｌ ｕ ｏ ｉ ｄ ｖ ｉ ｉ ｔ ， ａ ｙ ａ ｃ ｓ ｎ ｈ ｂ ｌ ｙ ｏ ｓ ｇ ｎ ｓｓ ｏ ｈ ｉ ｉ ｏ ａ ｄ ｖｖ ． ｈ ｓ ｅ ｉ ｗ ｓ ａ ｉ ｉ ｅ ｒ ａｍｓ ｔ ｈ ｒ ｃ ｅ ｚ ｕ ｎ ＡＤＳ ａ ｅ ｎ ｉ ｕ ｆ ｃ ｒ ｔ ｉ ｓ ｔ ｅ ｏ ｔｏ ｅ ｅ ｉ ｉ ｉｏ ｔ ｅ ｍｏ ｅ ｕａ ｃ ａ ｉ ｏ ｉ ｏ ｃ ａ ａ ｔｒ ｅ ｈ ｍａ ｉ Ｃ ｂ ｓ ｄ ｏ ｔ ｓ ｒａ ｅ ｐ ｏ ｅｎ ， ｈ ｓ ｇ ｎ ｓｓ ｎ ｖｖ ， ｈ ｌ ｃ ｌ ｒ ｍｅ ｈ ｎ ｓ ｓ ｅ ｍ ｆ
ＤＯ ＮＧ
Ｊ ｓｅｇ Ｄ ｐ ｒ ｅｔｆＰａｔ ｎ ｅｏ ｓ ｕｔ ｎＳ ｒ ｒ Ｓ ａｇ ａ ＮｎｈＰ ｏ ｌ Ｓ ｓｉｌ Ｓ ａｇ ａ Ｊ ｏ ｎ ｉ ｈ ｎ． ｅａｔ ｎ ｌ ｉ ａ ｄＲ ｃｎｔ ｃｉ ｕｇ ｙ ｈ ｈ ｉ ｉｔ ｅｐｅ ｐｔ ， ｈ ｎｈ ｉ ｔ ｇ ａ ｍ ｏ ｓｃ ｒ ｏ ｅ， ｎ Ｈｏ ａ ｉ ａｏ 【ｕ Ｓｍｍａｙ ｒ】
人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定
中国组织工程研究 第19卷 第32期 2015–08–06出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research August 6, 2015 Vol.19, No.32ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 5155www.CRTER .org肖建红，女，1980年生，四川省绵阳市人，羌族，2012年中山大学毕业，博士，主治医师，主要从事造血干细胞抑制、干细胞与组织工程，以及免疫性血小板减少性紫癜的临床研究和基础研究。
通讯作者：张阳春，硕士，主治医师，中山大学附属第一医院东院下肢骨科，广东省广州市 510700中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2015)32-05155-07 稿件接受：2015-07-01 Xiao Jian-hong, M.D., Attending physician, Department of Internal Medicine, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaCorresponding author: Zhang Yang-chun, Master, Attending physician, Department of Lower limbs Orthopedics, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaAccepted: 2015-07-01人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定肖建红1，张阳春2，张常然1，杨 兴2(中山大学附属第一医院东院，1普通内科，2下肢骨科，广东省广州市 510700)文章亮点：1 实验通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。
脂肪间充质干细胞的免疫学特性及其在组织工程中的应用
多 向分化潜能 ， 且来源广泛 、 取材方便 、 损伤小 、 增殖 迅速 、 表型稳定 ， 尤其是具有低免疫原性 ， 其在
异 源性 组织 工程 中 的研 究 已得 到人们 的广 泛关 注 。
激分子为 Ｔ细胞活化提供第二信号 。
ＭＨ Ｃ是 编码 主要 组织 相 容性抗 原 的基 因组 ， 这 些基 因彼 此连锁 在 一起 ， 具 有 控制 异 体 移 植 排斥 反 应、 免 疫应 答 和某 些 补体 组 分生 成等 功 能 ， 因 而
分化 的 多能干 细胞 ， 它可 以从 多个 部 位 获得 ，如 ： 骨
及神经细胞等多种细胞分化。例如 ， 在Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ 的基 础培养基 中加入胰 岛素 、 转化生长 因子一 Ｂ （ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ．
ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ － Ｂ， Ｔ Ｇ Ｆ — ｐ） 、 干 扰 素 和抗 坏 血 酸 ， 可 以诱 导其 向软 骨细胞 分化 。
以大 鼠 Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ为例 介 绍 其 分 离 培 养 和 分 化 如
原性 的重要因素。江丽 等 对大鼠 Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ 进行表
２ ０ １ ２—０ ９— ０ ６接收
面标 志检 测 时 发 现 ＭＨ Ｃ — Ｉ类 分 子 和 ＭＨＣ ． Ⅱ类 分
作者单位 ： 安徽 医科大学 口腔医学院 ， 安徽医科大学附属 １ ５ 腔医院牙 周黏膜 科 ， 安徽 省 Ｅ ｌ 腔 疾 病 研 究 中心 实 验 室 ， 合 肥
ＭＨ Ｃ成 为移植 排斥 反应 的关键 基 因 。与 ＭＨＣ抗原 递呈 功 能 密 切 相 关 的 主 要 是 Ｍ ＨＣ ． Ｉ类 分 子 和
目前 ， 由于异体细胞移植可能产生移植物抗宿 主病 ， 使得干细胞移植 、 组织工程仅局限于个体化治
脂肪干细胞实验报告
一、实验背景随着生物科技的发展，干细胞研究已成为医学领域的前沿课题。
脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells，ASCs）作为一种易于获取、增殖能力强、多能性的干细胞，在组织工程、再生医学等领域具有广阔的应用前景。
本研究旨在探讨脂肪干细胞的分离、培养、鉴定及其在组织工程中的应用。
二、实验目的1. 探讨脂肪干细胞的分离、培养及鉴定方法。
2. 研究脂肪干细胞在组织工程中的应用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：脂肪组织、DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、青霉素、链霉素、抗生素、鼠抗人CD105抗体、鼠抗人CD34抗体、鼠抗人CD29抗体、鼠抗人CD44抗体、鼠抗人CD45抗体等。
2. 实验仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、酶标仪、流式细胞仪等。
四、实验方法1. 脂肪干细胞的分离与培养（1）将脂肪组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，用DMEM/F12培养基清洗3次，去除多余脂肪。
（2）加入0.25%胰蛋白酶消化脂肪组织，37℃水浴消化30分钟，1000r/min离心5分钟，弃上清。
（3）加入DMEM/F12培养基重悬细胞，吹打均匀，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 脂肪干细胞的鉴定（1）采用免疫荧光染色法检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。
（2）采用流式细胞术检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。
3. 脂肪干细胞在组织工程中的应用（1）将脂肪干细胞接种于生物降解支架材料上，构建组织工程化脂肪组织。
（2）将组织工程化脂肪组织植入小鼠皮下，观察其成活情况。
五、实验结果1. 脂肪干细胞的分离与培养成功分离出脂肪干细胞，细胞呈梭形，生长旺盛。
2. 脂肪干细胞的鉴定免疫荧光染色和流式细胞术结果显示，脂肪干细胞表达CD105、CD34、CD29、CD44，不表达CD45。
脂肪干细胞在组织工程中的研究进展
１ 引 言
组 织 工程 的兴 起 和 迅 猛 发 展 为组 织 或 器 官 缺 损 的 修 复重 建 带来 了新 的治 疗 途 径 ，并 已逐 渐 成 为 目前 最 有 前景 的 生理 性 修 复 技 术 。应 用 组 织 工 程 的 方 法 再 造 组 织 与器 宫所 用 的各 类 细 胞 统 称 为种 子 细 胞 。 种 子 细 胞 研 究 的 目的在 于获 取 足 够 数 量 的接 种 细 胞 ，防 止 细 胞 老 化 并 同 时保 持 细胞 增殖 、合 成 基 质 等 生 物 功 能 。
裂 相 。 ５ｄ 细 胞 呈 团簇 状 生长 ，形 成 集 落 。 约７ ｄ 后 后 细 胞 融 合 超 过 ９ ％ 。经 １ 次 传 代 后 ，脂 肪 间 充 质 干 ０ ～２
细 胞 形 态 均 一 、增 殖 迅 速 ，能 稳 定 传 代 １ 代 以 上 ， ０ 这 说 明脂 肪 间 充 质 干 细 胞 生 物 学 特 征 稳 定 ，能 在 体 外 培 养 的 环 境 下 实 现 数 目扩 增 ， 为 组 织 修 复 提 供 了
胶 原 酶 ＋１ ％ＢＳ Ａ在 ３ ｏ ７ Ｃ下 消 化 皮 下 脂 肪 ６ ｎ ， ０ ｍｉ后 也 可 得 到 Ｓ 细 胞 ，这 种 ＳＶ ￣ 胞 具 有 于 人 骨 肪 基 质 ＶＦ Ｆｍ 细 胞 相 似 的 表 面 标 记 。 此 外 ，Ｃｏ ｓｎ ＿采 用 ０２ ｕ ｉ等 ７ ］ ＿％胶 原 酶 ｇ ｏ２ ｕ ％ＢＳ Ａ在 ３ ｏ ７ Ｃ下 消 化 小 鼠 腹 股 沟 皮 下 脂 肪 ４ ｎ ，过 ２ ５ｍｉ后 ５ ｕｍ滤 筛 ，得 到 的 细 胞 可 重 建 小 鼠 的 造 血 系统 。 Ｒａ ｇ ｐ ａ ［采 用 胰 酶 、胶 原 酶 和 Ｂ Ａ ｎ ａ ｐ 等 ８ ］ Ｓ 在 ３ ℃ 联 合 消 化 新 西 兰 大 白兔 腹 股 沟 皮 下脂 肪 ２． ７ ５ｈ 后 ，得 到 的ＡＤＳＣｓ 目前 一 般 采 用 胶 原 酶 消 化 ，离 。 心 ，用 培 养 基 重 悬 细 胞 后 ，接 种 到 培 养 瓶 中 ，通 过 细 胞 贴 壁 从 而 得 到 ＡＤＳ ［ Ｃｓ 。 ＤＭＥＭ。ａ —ＭＥ ，ＲＰ ６ ０ ＡＤＳ 的 常 用 Ｍ Ｍｌ１ ４ 是 ＣＳ 培 养 基 。 培 养 ＡＤＳ 时 一 般 只 添 加 １ Ｃｓ ￣牛 血 清 ， ｏ％／ ｉ ｆ 并且 血 清 无 生 产 批 号 限 制 …，体 外 易 于 培 养 ，营 养 需 求低 ，在 培 养 基 中 生 长 旺 盛 。 在 ３ ℃ 、 ５ ７ ％Ｃ０２ 、饱 和 湿 度 条 件 下 ，ＡＤＳＣｓ 壁 生 长 ，并 呈 现 成 纤 维 细 贴 胞 样 形 态 。体 外 倍 增 时 间 约 １ ６ ｈ， 快 于 同 步 培 养 的 ＭＳ ，并且 保 持 稳 定 的倍 增 率 。 Ｃｓ
干细胞技术在组织工程中的应用
干细胞技术在组织工程中的应用近年来，干细胞技术在组织工程领域的应用越来越广泛，成为医学界的研究热点之一。
干细胞是一种具有自我更新和分化能力的特殊细胞，可以分化为多种类型的细胞，如神经细胞、心肌细胞等。
这使得干细胞成为组织工程的理想来源，以修复受损组织及治疗各种疾病。
一、干细胞的基本特性干细胞是一类具有自我更新和分化能力的细胞，它们可以在体内或外部环境中自行分化为多个细胞类型，如肌肉细胞、脂肪细胞和神经元等。
与其他成体细胞相比，干细胞有着明显的优势，因为它们有以下特点。
1. 自我更新能力干细胞具有自我更新能力，能一直分化生成相同的干细胞。
这种自我更新机制使得干细胞能长时间存活，并保持其细胞模式，具有长期分化能力。
2. 分化能力干细胞分化成为多种细胞类型的能力被称为分化能力。
通过改变其环境中的化学因子、生物因子或生理因素，干细胞可以分化为不同种类的细胞，如心肌细胞、神经元和骨细胞等。
这使得干细胞成为非常有用的资源。
3. 改性和操纵能力干细胞可以通过分离、分化和组装，改变其特定的分化模式和任意组织模式。
利用这种能力，可以让干细胞像基因工程实验中的工具一样，来调控组织工程中的成体细胞。
二、干细胞技术在组织工程中的应用由于干细胞具有多样性和自我更新能力，因此被广泛应用于组织工程。
组织工程通常包括三个步骤：细胞分离、细胞扩增和移植。
干细胞可被用来代替或促进这三个步骤。
1. 替代性注射替代性注射是一种将干细胞直接注入受损组织的方法，以促进其自我修复和再生。
该方法已经成功应用于体表和内部组织的再生，如骨骼、心肌和大脑等。
因此，干细胞注射被广泛应用于组织修复和再生的研究。
2. 组织工程的预制构件组织工程预制构件是一个特殊的组织工程领域，它利用干细胞来生产组织上的特定成分。
人工预制构件可以用于支持成体细胞在3D环境中的生存和分化。
3. 组织修复和再生干细胞可用于组织修复和再生。
组织修复和再生通过将干细胞定向分化成特定种类的细胞来实现，以生成受损组织所需的细胞类型和组织结构。
脂肪干细胞研究进展与应用前景
新、 具有 多向分化潜能 的成 体干 细胞 ， 在一定 的条 件下 可 以
分化成许多有特定功 能 的细 胞系 ， 具有 一般干 细胞 的特 点 ，
失， 形成的脂肪组织与新鲜分离 的 Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ 形成 的一 样 。这使 得 建 立 脂 肪 来 源 干 细 胞 库 成 为 可 能 ， 为
Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ 的应 用提 供 了广 阔的前景 。
２ ＡＤ Ｓ Ｃ ｓ 的 生物 学特性
ｉ ｒ ｖ ｅ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ， Ａ Ｄ Ｓ Ｃ ｓ ） 不 仅 在 体 内外 具 有 多 向分 化 潜 能， 在不 同 的诱 导 因子作 用 下可 以像脂 肪 细胞 、 软骨
血干 细胞 的标 记 ， 包 括 普通 白细 胞 的抗 原 Ｃ Ｄ ４ ５ 、 单 核／ 巨噬 细 胞标 记 Ｃ Ｄ１ １ ａ和 Ｃ Ｄ１ ４ 、 ＭＨＣ Ｉ Ｉ 类 Ｄ Ｒ组
的差 异 ， 发 现两 类 细胞 的表 面标 记相 似 ， 都 表 达
Ｃ Ｄ １ ３ 、 Ｃ Ｄ ２ ９ 、 Ｃ Ｄ ４ ４ 、 Ｃ Ｄ ５ ８ 、 Ｃ Ｄ ９ ０ 、 Ｃ Ｄ １ ０ ５和 Ｃ Ｄ１ ６ ６ ，
均不 表 达 Ｃ Ｄ １ １ Ｃ 、 Ｃ Ｄ １ ９ 、 Ｃ Ｄ ３ １ 、 Ｃ Ｄ ３ ３ 、 Ｃ Ｄ ３ ８ 、 Ｃ Ｄ ４ ５
细胞 、 肌 细胞 、 成骨 细胞 、 神 经细胞 、 神 经胶 质 细胞及 胰 岛细胞 分化 ， 而 且 可 以分 泌 多 种 促 血 管 生 成 因子 和抗 凋 亡 因子 。现就这 一领 域新 的研 究进 展 与应用 作 一综 述 。
脂肪间充质干细胞在组织工程中的应用
合治疗疾病的效果。
检索策 略：以 ａ ｉｏ ｅ ｔ ｓ ｅ ｄ ｒ ｅ ｔ ｍ ｅｌ ｄｐ ｓ ｉ ｕ — ｅ ｉ ｄ ｓｅ ｃ ｌ ｓ ｖ ，
此外 ，国外有文献综述报道 ：脂肪 来源的间充质干
（９ ９ ０ ／０ ８ １ ） １ ９ — １２ ０ — 。 ２
生长动力学、细胞衰亡 、表 面标志等方 面没有显著的差
异 【９ ６】 ＿。
近年来 ，有 关学者根据组织来 源不 同及基 因表达倾
向问题 ，认为不 同来源的 间充质干细胞其分化能力是不 同的，在基 因方面脂肪来源的 间充质干细胞更容 易向成
细胞 ，引起 了各 国研 究者 的广泛关注。
１ 目的
脂肪组 织来源的 间充质 干 细胞具有 以下优 点 ：①
脂肪组 织来源广泛、取材容 易，只需要对 患者进行局部
麻 醉后 吸脂术 即可 。②相 比较骨 髓 来源的 间充质干 细 胞 ，脂肪来源的间充质 干细胞含量丰富。③与骨髓来源 的间充质干细胞具有相似 的生物特性及 多系分化能力， 且与骨髓 间充质干 细胞相 比，脂肪干细胞不 易受到肿瘤 细胞 的污染 ，更容 易进行 体外净化 。④具有免 疫抑 制作
文 献 ，中文 ４ ５篇 ，英 文 ８ ４篇 。阅读 标 题 和 摘要 进 行 初
不同来源干 细胞郝有 多向分化 的潜 能，但 由于组 织起 源 不同， 其基 因、 细胞 因子和表面受体存 在着细微 的差别。
筛，排 除因研 究 目的与此 文无 关的 ８ ０篇 ，内容重复性
的研 究 １ ９篇 ，共 保 留 ３ ０篇 文 献进 行 综 述 。
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・综 述・人脂肪组织来源的干细胞在骨组织工程中的应用冯 林综述 张锡庆审校中图分类号 R687 文献标识码 A 文章编号 1005-8478(2005)08-0620-02作者单位:苏州大学附属儿童医院骨科, 215003作者简介:冯林,女,河南郑州人,在读博士。
研究方向:小儿矫形。
1987年,美国国家科学基金会(NSF )在加利福尼亚举行的专家讨论会上,首次提出了“组织工程”的概念,其定义为[1]:组织工程就是运用工程学和生命科学的原则和方法,研究哺乳类动物正常和病理组织的结构与功能的相互关系,并发展可恢复、保留或改善组织功能的生物替代品。
骨组织工程是组织工程的一个重要分支,并且被认为是目前最具有前途和可行性的一个领域。
骨组织工程学的研究中种子细胞、支架材料和细胞与材料的相互作用是研究重点。
其中种子细胞是组织工程研究中最基本也是首要的环节。
脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一群多能干细胞,具有向多种组织分化的潜能。
2001年,Zuk 等[2]从人抽脂术中抽取的脂肪组织悬液中第一次分离取得了多向分化干细胞,命名为Pr ocessed L i poas p irate (P LA )。
研究发现这些P LA 细胞可以在体外稳定的增殖且衰亡率低。
免疫荧光和流式细胞仪检测表明P LA 细胞中的大部分来源于中胚层或间质。
因为脂肪组织取材容易,因此虽然发现较晚,但研究非常迅速深入,目前已证实脂肪组织来源的干细胞能向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞及心肌细胞定向转化,可作为组织工程的种子细胞,有很重要的研究价值。
1 人脂肪组织来源干细胞的多向分化能力1.1 向成骨细胞的定向分化Zuk 等[2]通过实验发现:在向成骨方向诱导4d 后,P LA细胞的结构开始发生变化,由一个狭长的类成纤维细胞形态转变为一种圆形、立体的形状。
7d 后,这些细胞开始分泌出岛状的细胞外基质。
2周后内源性碱性磷酸酶染色阳性并形成矿化结节。
从第2～4周,培养孔中钙化的细胞外基质的量明显增加,具有统计学意义。
而且,P LA 细胞向成骨细胞分化的能力可以维持相当长的时间,其表达碱性磷酸酶活性最迟可达培养的175d 。
研究证明了P LA 细胞向成骨细胞分化的能力。
1.2 向软骨方向诱导Huang 、Zuk [3]等应用组织学和分子生物学的方法证实在高密度的培养条件下,培养基中加入TGF 2β、胰岛素、干扰素和抗坏血酸,48h 内可以诱导P LA 细胞形成明显的软骨结节并表达软骨特异性标记Ⅱ型胶原,硫酸软骨素-4和硫酸角质素。
逆转录多聚酶链反应分析也确认了Ⅱ型胶原和软骨特异性蛋白聚糖—聚集蛋白聚糖的表达。
因此认为这种多能干细胞确实具有向软骨方向转化的能力。
尽管P LA 细胞不是真正的软骨细胞,但是它们所显示出来的原始软骨组织的特征使得其有望成为软骨组织工程的种子细胞。
国内的余方圆等[4]从新西兰大白兔体内切取的脂肪组织进行一系列处理后,将获得的脂肪组织干细胞向软骨方向进行了诱导分化,结果发现细胞逐渐变圆,并聚集形成软骨样结节,Ⅱ型胶原呈强阳性、聚集蛋白聚糖表达阳性、番红0、阿利新蓝染色阳性,也说明了干细胞向软骨的定向分化。
1.3 向肌肉方向诱导M izuno 等[5]将P LA 细胞置于肌源性诱导条件下6周后通过结构学、组织学和逆转录多聚酶链反映观察到肌源性标记MyoD1和肌球蛋白重链的表达。
研究者发现,诱导3周后,P LA 细胞形成多核巨细胞并提示有肌管形成。
另外;MyoD1和肌球蛋白重链表达的时间不同,在P LA 细胞分化的过程中MyoD1的表达先于肌球蛋白重链。
研究结果揭示:大约有15%的P LA 细胞在诱导6周后向肌肉方向分化。
目前,骨骼肌组织工程主要用来治疗原发性的骨骼肌病变和因创伤和缺血继发的骨骼肌的丧失。
对于这些疾病现今尚无有效的治疗,尽管P LA 细胞向肌肉方向分化与其向脂肪组织和成骨方向分化的水平相比较低,但通过应用一些外源性的因素进行干扰以及改善培养条件有希望提高P LA 的分化水平,提高其临床应用价值。
1.4 向非中胚层组织的分化P LA 细胞为多能干细胞,它可以分化成为多种中胚层来源的组织,如骨、软骨、脂肪和肌肉。
A shjian 等[6]则通过研究发现P LA 细胞可以诱导分化为外胚层来源的早期神经祖细胞。
未分化的P LA 细胞本身就表达一些特征性的神经细胞标记,如神经原特异性烯醇化酶(NSE )、波形蛋白和神经原特异性核蛋白(Neu N )。
在用异丁基甲基黄嘌呤(I B MX )吲哚美辛和胰岛素诱导2周后,大约20%～25%的P LA 分化形成具有典型神经细胞形态特征的细胞;同时伴随着NSE 、波形蛋白和神经生长因子受体tr12A 表达增加。
但是,诱导后的P LA 细胞并没有表达成熟神经原标记MAP 或成熟星型细胞标记GF AP 。
而且向神经原方向诱导的P LA 细胞出现了一个延迟的整流器即K +电流(一种早期发育的离子通道),同时伴有形态学的改变和神经原特异性标记表达的增加。
研究结果揭示,尽管向神经原方向诱导的P LA 细胞并未表现出成熟神经原细胞和神经胶质的特异性标记,但其表现出的早期神经原细胞的特征不容忽视。
因此需要进一步研究体外的培养条件以及活体模型(如中枢神经系统损伤模型)中P LA细胞最终是否能形成成熟的神经原或神经胶质细胞,并且参与中枢神经系统的整合和修复。
这些发现表明,P LA细胞可能具有治疗神经系统疾病的潜能。
2 人骨髓间充质干细胞(MSCs)与P LA的比较De Ugarte等[7]将从人类同一个样本获得的M SCs和P LA 进行了以下几个方面的比较:2.1 细胞的采集和分离平均采集的标本量骨髓为7g,脂肪组织17g。
每克骨髓分离出的有核细胞的平均数量远高于脂肪组织。
分离培养后,骨髓和脂肪都在2周内达到了亚融合状态。
并且,对于同一个样本,骨髓和脂肪组织在采集的标本量、有核细胞的个数、贴壁的细胞数和平均每克组织的贴壁细胞数均无差异。
2.2 生长动力学和衰亡在细胞密度为1.85～103/c m2时,P LA细胞和MSCs都在第13d融合传代。
平均倍增时间在对数生长间期内从3～9d 不等,无统计学意义。
细胞的衰亡亦无差别。
2.3 在体外的分化P LA细胞和MSCs在向脂肪组织和成骨细胞分化上未观察到明显差异。
P LA细胞能够成功的形成阿利新蓝染色阳性的微量结节,但是MSCs在同样的培养条件下则不能形成。
2.4 基因转染P LA细胞和MSCs都能够成功的转染腺病毒、慢病毒和逆转录病毒。
M SCs腺病毒转染的效率高于P LA细胞且具有统计学差异;而对于慢病毒和逆转录病毒二者的效率相似。
3 展 望脂肪组织来源丰富,容易获取,痛苦小,对培养基的要求低,体外扩增能力强且具有多向分化潜能。
因此,脂肪组织来源的干细胞有望成为新的组织工程的种子细胞。
参考文献:[1] Heineken FG,Skalak R.Tissue Engineering.A B rief Overview[J].Journal of B i omechanical Engineering,1991,113:111.[2] Zuk P A,M.Zhu,H.M izuno,et al.Multilineage cells fr om humanadi pose tissue:I m p licati ons f or cell2based therap ies[J].TissueEng,2001,7:211～226.[3] Huang J I,Zuk P A,Jones NF,et al.Chondr ogenic potential of mul2ti potential cells fr om human adi pose tissue[J].Plast Reconstr Surg,2004,113:585～594.[4] 余方圆,卢世璧,袁玫,等.脂肪干细胞向软骨方向诱导的初步研究[J].中国矫形外科杂志,2004,12(10):762～764.[5] M izuno H,Zuk P A,M.Zhu,et al.Myogenic differentiati on by hu2man p r ocessed li poas p irate cells[J].Plast Reconstr Surg,2002,109:199～211.[6] A shjian PH,Elbarbary AS,et al.I n vitr o differentiati on of humanp r ocessed li poas p irate cells int o early neural p r ogenit ors[J].Plast Reconstr Surg,2003,111:1922～1931.[7] De Ugarte DA,Moriz ono K,et paris on of multi2lineage cellsfr om human adi pose tissue and bone marr ow[J].Cells Tissue O r2 gans,2003,174:101～109.(收稿:2004212220)・读者、作者、编者・标注参考文献要规范准确标注参数文献是科技论文重要组成部分。
科技论文参考文献著录格式要求十分严谨。
结合本刊近年来审读来稿情况,在标注参考文献方面主要存在以下问题:(1)无引文题目、题目错误或刊名错误;(2)引文的杂志无卷次/页码或书写错误;(3)正文中无标注符号和标注错误;(4)引用文献在检索系统查不到;(5)缺少引用文献类别标识码;(6)引用文献书写格式不规范,排列次序不对或标点符号不对。
为避免以上问题,希望作者在投稿前务必对已完成的论文参考文献进行认真仔细的检查、再检查,确实做到准确无误。
否则将失去参考文献的功能和使用价值。
《中国矫形外科杂志》编辑部。