人来源脂肪干细胞的培养
人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定
中国组织工程研究 第19卷 第32期 2015–08–06出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research August 6, 2015 Vol.19, No.32ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 5155www.CRTER .org肖建红，女，1980年生，四川省绵阳市人，羌族，2012年中山大学毕业，博士，主治医师，主要从事造血干细胞抑制、干细胞与组织工程，以及免疫性血小板减少性紫癜的临床研究和基础研究。
通讯作者：张阳春，硕士，主治医师，中山大学附属第一医院东院下肢骨科，广东省广州市 510700中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2015)32-05155-07 稿件接受：2015-07-01 Xiao Jian-hong, M.D., Attending physician, Department of Internal Medicine, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaCorresponding author: Zhang Yang-chun, Master, Attending physician, Department of Lower limbs Orthopedics, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaAccepted: 2015-07-01人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定肖建红1，张阳春2，张常然1，杨 兴2(中山大学附属第一医院东院，1普通内科，2下肢骨科，广东省广州市 510700)文章亮点：1 实验通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。
人脂肪间充质干细胞来源的外泌体对非小细胞肺癌细胞转移的影响
人脂肪间充质干细胞来源的外泌体对非小细胞肺癌细胞转移的影响摘要：外泌体是一种近年来广受关注的生物学小分子，由于其具有保护性低、摄取高、细胞来源广泛等特点，因此成为极为热门的研究对象。
本文旨在探究外泌体对非小细胞肺癌细胞转移的影响，采用人脂肪间充质干细胞作为外泌体来源，通过实验验证得出，外泌体可以抑制非小细胞肺癌细胞的转移，并对细胞的凋亡和增殖产生影响。
关键词：外泌体、人脂肪间充质干细胞、非小细胞肺癌、转移。
人脂肪间充质干细胞来源的外泌体对非小细胞肺癌细胞转移的影响一、引言非小细胞肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，常常导致病人死亡，因而引起了广泛的研究。
随着生物学研究的深入，外泌体也逐渐成为研究的热门之一。
外泌体是一种由细胞分泌的小颗粒体，其中的生物活性分子可以向周围环境释放，并通过受体介导的途径传递到接收细胞中，从而产生一定的生物学效应。
外泌体具有许多独特的特点，如大小相对稳定、寿命长、成分复杂多样性等，已成为目前研究生物学领域的热门话题之一。
二、实验方法为探究外泌体对非小细胞肺癌细胞转移的影响，我们选用了人脂肪间充质干细胞作为外泌体来源，建立了非小细胞肺癌细胞模型。
将外泌体添加到非小细胞肺癌细胞中，观测细胞的迁移、增殖、凋亡和管状结构形成情况，以及对相关蛋白表达的影响。
三、实验结果与讨论实验结果表明，添加外泌体可抑制非小细胞肺癌细胞的转移能力，同时也会对细胞的增殖产生一定的抑制作用。
添加外泌体，可以明显降低细胞迁移能力，进一步减少外泌体凋亡。
同时，外泌体还可以提高细胞的管状结构形成，增强细胞的向心性，使细胞聚集成团，不同于对照组。
通过Western blot检测相关蛋白的表达水平，可以发现，外泌体的添加可以提高TGFβ、TIMP1、MMP9等蛋白的表达，从而对非小细胞肺癌细胞的转移能力产生影响。
四、结论人脂肪间充质干细胞来源的外泌体可以抑制非小细胞肺癌细胞的转移能力，并对细胞的增殖和凋亡产生影响。
抗衰神器：svf脂肪干细胞是什么？为何最近这么火？
抗衰神器：svf脂肪干细胞是什么？为何最近这么火？Svf脂肪干细胞是什么？为何最近这么火？我们都知道自体脂肪被誉为美容界中的“人体软黄金”，一直是绿色安全的代名词，但是很多人不了解svf脂肪干细胞，脂肪干细胞胶（SVF-gel），颗粒精细，通过诱导永久脂方再生，完成中面部填充支撑。
而且含有丰富的自体脂肪胶原和脂方来源干细胞，有助于恢复皮肤活力。
首先，为了提升脂方填充的存活率，应该严格遵照医嘱在手术前10-20天口服脂方填充手术专用营养ACME-TE-A细胞激活能量蛋白【存活太】，术后1~2个月持续使用，逐渐减量。
手术专用营养除了修复手术过程带来的细胞损伤外还可以为新移植的脂方细胞提供基础营养。
同时可以起到消炎去除红肿淤青，预防脂方坏死的作用。
Svf脂肪干细胞为了提高注射脂方的成活率，日本东京医科大学整形外科主任吉村浩太郎(Kotaro Yoshimura)于2008年提出了细胞辅助脂方移植技术(Cell-assisted lipotransfer)，即所谓的CAL技术。
该技术将自体脂方中分离出的SVF(Stromal vascular fraction，直译为“基质血管成分”)混合入要移植的脂方中，SVF中富含的干细胞成分能促进脂方细胞的存活，从而提高脂方移植的存活率。
这里要明确的是，SVF并不是脂方干细胞，SVF的全称是Stromal vascular fraction，直译为“基质血管成分”，是自体脂方中新鲜分离出来的多种细胞混合物，其中包括内皮细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、前脂方细胞和脂方干细胞。
所以CAL技术是在脂方移植的同时提取脂方干细胞成分，回植入体内，未经过任何的体外培养和外界干预，所以是很安全的。
脂肪填充过程1、手术康复的护理是提高效果的重要环节为了提升脂方填充的存活率，应该严格遵照医嘱脂方填充在手术前10-20天口服脂方填充手术专用营养细胞激活能量蛋白【存活太】。
术后1~2个月持续使用，逐渐减量。
干细胞流程及注意事项说明
干细胞流程及注意事项说明干细胞流程及注意事项说明引言：干细胞是一种具有自我更新和分化成各种细胞类型的特殊细胞。
它们在医学和生物科学研究中具有巨大的潜力。
干细胞疗法被视为未来医学的重要突破，可以用于治疗多种疾病和损伤。
然而，干细胞研究和应用过程中需要遵循一定的流程和注意事项，以确保安全和有效性。
本文将深入探讨干细胞的流程，并提供相关注意事项的说明。
一、干细胞获取流程1. 采集来源干细胞可以从多种来源获得，包括胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能干细胞。
每种来源有其特定的流程和技术要求。
2. 胚胎干细胞的获取胚胎干细胞主要来自胚胎发育的早期阶段。
在获得胚胎干细胞时，需要注意以下事项：- 获得捐赠的胚胎，并经过捐赠者的知情同意和伦理审查。
- 将胚胎培养到适当的发育阶段。
- 从发育早期的胚胎中分离出内胚层细胞，并将其培养为干细胞系。
3. 成体干细胞的获取成体干细胞存在于成人体内的各种组织和器官中。
获取成体干细胞时，需要注意以下事项：- 通过医疗手段或手术采集组织，如骨髓或脂肪组织。
- 分离组织中的干细胞，并培养其扩增为足够量。
4. 诱导多能干细胞的获取诱导多能干细胞是通过重新编程成体细胞而获得的多能干细胞。
获取诱导多能干细胞时，需要注意以下事项：- 获得捐赠者的细胞样本，如皮肤细胞。
- 将细胞样本重新编程，使其转变为诱导多能干细胞。
二、干细胞应用流程1. 干细胞培养和扩增在应用干细胞前，需要将其培养和扩增到足够数量。
这一过程涉及到培养基的选择、培养条件的优化和细胞生长的监测。
2. 干细胞分化干细胞可以分化为多种不同的细胞类型，如神经细胞、心肌细胞等。
控制干细胞的分化过程需要考虑以下因素：- 合适的生长因子和信号分子的添加。
- 适当的培养条件，如温度、养分和氧气浓度。
- 分化过程的监测和控制。
3. 干细胞移植当干细胞已经分化成特定的细胞类型后，可以将其移植到患者体内进行治疗。
移植过程需要注意以下事项：- 医学团队的专业知识和技术要求。
脂肪间充质干细胞定义
脂肪间充质干细胞定义
脂肪间充质干细胞（Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells，ADSCs）是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞，它们来源于人体脂肪组织。
这些细胞在特定的诱导条件下，可以分化成多种细胞类型，如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经细胞和内皮细胞等。
因此，脂肪间充质干细胞在再生医学、组织工程和细胞治疗等领域具有广泛的应用前景。
脂肪间充质干细胞的主要特点包括：1）易于获取，来源丰富，可从人体脂肪组织中提取；2）具有较强的增殖能力和多向分化潜能；3）免疫原性低，不会引起明显的免疫排斥反应；4）具有抗炎、抗凋亡和促进组织修复的能力。
在医学应用方面，脂肪间充质干细胞已被用于治疗多种疾病，如心血管疾病、糖尿病、神经系统疾病、自身免疫性疾病和皮肤损伤等。
通过将这些细胞移植到患者体内，可以促进受损组织的修复和再生，从而改善疾病症状。
然而，脂肪间充质干细胞的应用仍面临一些挑战和限制，如细胞分化机制尚未完全阐明、细胞来源和质量的不稳定性、以及移植后的细胞存活和分化等问题。
因此，未来需要进一步深入研究脂肪间充质干细胞的生物学特性和分化机制，以优化细胞培养和移植技术，提高其在医学应用中的疗效和安全性。
总之，脂肪间充质干细胞作为一种具有广泛应用前景的细胞类型，在再生医学和细胞治疗等领域发挥着重要作用。
随着科学技术的不断进步和研究的深入，相信这些细胞将在未来为人类健康事业做出更大的贡献。
脂肪干细胞成脂诱导及鉴定程序
脂肪干细胞成脂诱导及鉴定程序一、试剂准备（一）成脂分化诱导液（Adipogenic Medium, AM）配方【1】：试剂名称浓度商品信息1.极限必须培养基(Dulbecco’S Modified Eagle Medium ，DMEM) 1.0 L(SH30021.01B, Hyclone)2.胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）10%(ES-009-B, Millipore)3.青霉素/链霉素（Penicillin/Streptomycin）1%（TMS-AB2C, CHEMICON）4.地塞米松(Dexamethasone,DM) 1µmo／L 分子量：392.46(D4902-25MG, Sigma)5.胰岛素(Insulin, IS) 10 µmol／L 分子量：5808(91077C—1g, Sigma)6.3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Isobutylmethylxanthine,IBMX) 0.5 mmol／L 分子量：222.24( I5879-100MG, Sigma)7.吲哚美辛(Indomethacin,ID) 200 µmol／L 分子量：357.79(I7378—5G, Sigma)（二）成脂分化诱导液浓储液配制试剂名称质量浓缩倍数配制方法1.Stock A胎牛血清1ml/管1X( liquid）分装1ml/管X100 保存：-20℃2.Stock B青霉素/链霉素0.1ml/管100X( liquid）分装0.1ml/管X100 保存：-20℃3.Stock C地塞米松0.0117738 g 1000X 溶于30ml 无水乙醇(0.1%) 分装0.1ml/管X300保存：-20℃4.Stock D胰岛素0.05808 g100X 溶于10ml Hcl(0.1 mol/L，PH2.0) 分装0.1ml/管X100保存：4℃5.Stock E3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.05556 g 200X 溶于2.5ml DMSO(0. 5%) 分装0.05ml/EP管X50 保存：-20℃6.Stock F吲哚美辛0.07155 g 500X 溶于2ml 无水乙醇(0.2%) 分装0.02ml/管X100保存：-20℃（三）成脂分化诱导液工作液配制（10ml）1.取DMEM(L)8.72ml加入15ml离心管（BD）;2.加1管Stock A（1ml）；3.加1管Stock B（0.1ml）；4.取1管Stock C（0.1ml）溶解，加入0.01ml；5.加1管Stock E（0.05ml）；6.加1管Stock F（0.02ml）；7.加1管Stock D（0.1ml）；8.测渗透压，调pH7.2-7.4;9.0.22µm微孔过滤，4℃贮存，一周内使用。
人骨髓MSC分离培养及诱导分化为脂肪细胞的实验研究
Ａ ｓ ａｔＯｂｅｔ ｅ Ｔ ｅａ ｏｔｉｓ ｄ ｓｏｒ ｅｒ ｉｈｍａ ｏｅ ｌ ＷＭ Ｃ ｉ ｌ ｎ 、ｕｉ ｄ ａ ｐｉ ｄｍ ｔｏ ｄ ｂｔ ｃ： ｊｃｖ ｈ ｉ ｆｈ ｕｙｉｔ ｅ ａ ｈＯ ｕ ｎｂｎ ｍａＯ Ｓ ｓｓ ａ ｇｐｒｉ 、ｍ ｌ ｅ ｅ ｄａ ｒ ｉ ｍ ｓ ｔ ｓ ｃ ｌ ｌ ｏｔ ｉ ｆ ｅ ｉ ｆ ｈ ｎ
中 国实 验 诊 断学
２Ｏ Ｏ９年 １月
第 １ ３卷
第 １ 期
一
２ 一 ７
文章编号 ：０７— ２７ ２１ ）１ ０７ ３ １０ ４ ８ （￣ ９０ —０２ —０ ０
人 骨 髓 ＭＳ Ｃ分 离 培 养 及 诱 导 分 化 为 脂 肪 细胞 的实 验研 究
王 莹 ， 罗 速
（ 北华 大学基础医学部 ， 吉林 吉林 １２ １） ３０３
Ｐ ｓａ ｅ ３ ｄｆ ｒｎ ａｅ ｄｐ ｃ ｔ ｎ Ｌ ＤＭＥ ｃ ｎａｎ ｎ ０％ ｈ ｒｅ￣ｒ ｌ 。 ｅ ｔｉ ｎ ｓ ｔ ａ ｏｉ ｖ ． ｎ ｈ ｓ ｎ Ａ ａｓ ｇ ｉ ｅｅ ｔ ｔ ｔ ａ ｉｏ ｙｅ ｉ － ｉ ｄ ｏ Ｍ ｏ ｔｉ ｉｇ ２ ｏｓ ｔｎ Ｒ ｌ ｄ Ｏ ｓａ ａ ｒ ｕ ｓｐ ｓ ｅ Ｃｏ ｅ ｔ ｏ ，ｇ ｅ ｌ ｗ ｉ ｔ ｌ
ａ ｌ ｅ ｔ ． ｍｐｉ ｄ ｉ ｖ ｒ ｉ ｆ ｎｉ ｏ
Ｋｅ ｒ ｓ ｂ ｎ ｌ ｗ ｍｅ ｅ ｃ ｙ ｌ ｔｍ ｌ ；ｅ ａ ａ ｏ ； ｕｔｒ ； ｐ ｉｃ ｔ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ： ｅ ｍａ ｏ ｓ ｎ ｈ ｍａ ｅ ｃ ｌ ｓ ｐ ｒｔ ｎ ｃ ｕ ｅ ａ ｌ ａ ｏ ｏ Ｔ ｓ ｅ ｓ ｉ ｌ ｍ ｉ ｆ ｉ
发生形 态学改变 ， 无衰老征象 ； 传代培养 Ｍ Ｃ（３在 ２％马血 清的 ＬＤ Ｅ ＳｓＰ） ｏ －Ｍ Ｍ培养液 中分 化为 脂肪细胞 。结论
脂肪来源的间充质干细胞及外囊泡促成骨分化的研究进展
1672V ol.40 No.12 Dec. 2020上海交通大学学报（医学版）JOURNAL OF SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE )综述近年来，我国骨质疏松症患病率逐渐攀升。
一项最新研究[1]显示，我国骨质疏松症的总患病率为13%，总人数已超过1.78亿。
老年人是骨质疏松症的重点人群，自1982年起，我国65岁以上老年人占人口比重不断升高，2019年我国65岁以上老年人占人口比重已达到12.6%[2]。
预计到2050年，我国骨质疏松症或骨密度低的患者将达到2.12亿[1]。
骨质疏松症使得骨质脆性增加、易于骨折，导致患者的生活水平急剧下降。
利用脂肪来源的间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells ，ADMSCs ）诱导成为成骨细胞治疗骨质疏松症是医学研究的新方向[1]。
ADMSCs 可以通过旁分泌功能，分泌一些生物活性分子，为组织修复建立良好的微环境，促进新生血管的形成和伤口愈合，并且减少组织的炎症反应。
ADMSCs 也可分泌促进血管生成和抗凋亡潜能的生长因子，如转化生长因子（transforming growth factor ，TGF ）、胰岛素样生长因子（insulin growth factor ，IGF ）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF ）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF ）[3]和骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein ，BMP ）家族BMP-2、BMP-7等[4]。
ADMSCs 来源丰富，通过脂肪抽吸术易于获得，无免疫排斥。
平均每300 mL 脂肪组织可获得108个 细胞，每克动物脂肪可获得5 000个成纤维集落形成单位（colony forming unit-fibroblast ，CFU-F ）[5]。
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人来源脂肪干细胞的培养
1． 脂肪干细胞原代培养
1) 取约500mg脂肪组织（自外科手术患者的皮下获取），再将脂肪组织一次挤压
进入准备好的15ml离心管中，每个离心管中的组织不超过5ml。
2) 吸取缓冲液PBS 7ml加入到上述装有组织的离心管中，用吸管吹打10~20次，然
后静置1min左右，用吸管将组织下层的液体吸出。如此反复直到所吸出的液体
呈透明状，不带有血细胞为止；
3) 向有脂肪组织的试管中加入与组织量相同大约5ml左右的消化液（胰酶0.25%，I
型胶原酶0.1%，以1：1比例混合配制而成），将试管密封，放入37°C恒温摇床
中，190r/min，震荡消化30min。此时液面分为3层，上层为黄色油状脂肪细胞
层，中层为脂肪组织层，下层为含单个核细胞的液体；
4) 吸出离心管中的下层液体移入含完全培养基（含10%胎牛血清的高糖DMEM）
的新离心管中终止消化，然后将离心管封闭，1500rpm离心10min；
5) 用吸管吸取上清后去掉，加入1ml 培养基，轻轻吹打10~20次制成细胞悬液，将
各个离心管中的细胞悬液收集起来，接种待用；
6) 在剩余脂肪中加入新的胰酶和胶原酶，重复以上步骤继续消化，重复2-3次，将
收集到的有核细胞按照一定的密度接种到培养瓶中，放入37°C、5% CO2培养箱
培养；
7) 第一次换液：大约12-24小时后，观察细胞贴壁即可进行第一次换液，此后每隔
3天换液，待细胞生长至融合后进行传代。
2. 脂肪干细胞传代培养
1) 在超净工作台内吸去培养瓶内的旧培养基，加PBS冲洗2-3次，之后加入1-
2mL消化液（0.25%胰酶和0.04% EDTA(v/v 1:1)）；
2) 培养箱内进行消化（3-5min），倒置显微镜下观察贴壁细胞形态变化，当贴壁
的脂肪干细胞胞质回缩，细胞间隙不断增大，细胞呈近球形同时有少量圆形细
胞脱壁时，加入等体积的培养基终止消化；
3) 用吸管反复有序轻轻吹打瓶壁上的细胞（动作要轻柔，注意不要产生气泡），
使细胞脱离瓶壁后呈单细胞悬液；
4) 将单细胞悬液移至离心管中，离心，(1000rpm,5min)，弃上清，加入完全培养
基，轻吹使之松散，按1:2传代培养；
5) 显微镜下逐日观察传代培养的细胞，待贴壁细胞达到90% 以上融合时，再进行
传代，如此反复。
3. 脂肪干细胞的冻存
将传代培养的细胞悬液以1×106cells/ml的比例加入预冷冻存液（含5% DMSO，
30%胎牛血清的DMEM），充分混匀后置预冷的冻存管中。将冻存管置于-80°C低温
冰箱中过夜后，投入液氮中保存。
4. 脂肪干细胞的复苏
1) 取出液氮中的冻存管，迅速投入37°C水浴中快速晃动，直至冻存液完全溶
解，复温在1-2分钟内完成；
2) 用酒精棉球擦洗存有细胞的冻存管以减少污染；
3) 无菌条件下吸出细胞悬液至离心管中，补加4ml培养基后离心(1000r/min,
5min)，弃上清；
4) 收集细胞，用培养基吹打成细胞悬液接种在培养瓶中，于37°C, 5%CO2培养箱
中培养。