半夏组织培养体系的建立
半夏无菌组织培养体系建立中存在的问题和解决方法
半夏无菌组织培养体系建立中存在的问题和解决方法作者：张利霞孟彦斌来源：《安徽农业科学》2015年第17期摘要分析了建立半夏组培体系过程中存在的污染、次生代谢产物毒害、低成活率、再生方式多样化的问题，提出了切实可行的解决方法，为对高效建立半夏组织培养体系的实践提供依据。
关键词半夏；组织培养体系；建立；问题；解决方法中图分类号 S567.23+9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）17-082-02半夏组织培养技术主要用于大规模繁殖半夏优良品种和珍贵种质资源，茎尖脱毒和无毒苗扩繁以及人工半夏种子生产中，其首要环节是建立无菌组织培养体系。
建立半夏无菌组织培养体系，就要解决污染、次生代谢产物毒害、成活率低、再生方式多样化的问题，笔者在此就这几种问题的发生情况及解决方法进行了分析。
1 污染及其预防措施污染可导致组织培养体系建立工作失败，且引起污染的因素复杂多样，所以半夏组织培养无菌体系建立中最为关键和困难的问题是防止污染发生。
1.1 污染原因在组培半夏外植体建立中，引起污染的一类因素是外植体、消毒用容器、培养基、接种器械和接种室消毒不彻底，超净工作台过滤装置失效，操作人员未遵守操作规程等，使得培养材料外部或培养基上带有细菌、真菌等微生物，在培养最初的几天内培养材料和培养基上滋生菌丝或菌落，不及时处理会使所有材料和整个培养基表面均受到感染。
引起污染的另一因素是外植体携带内生菌，培养初期并不表现污染，培养5 d后或更长时间才出现，污染程度较轻，但最难控制。
在半夏外植体材料中，以块茎尤其是生长结束后采收的块茎引起的污染最为严重，珠芽的污染最轻。
1.2 污染的预防措施1.2.1 接种环境严格消毒。
接种室、培养室、超净工作台、消毒用容器、接种用器械、冲洗外植体材料所用的蒸馏水、工作人员的工作服和手都要严格消毒。
笔者将冲洗外植体材料用的瓶装蒸馏水、消毒外植体用的容器也用牛皮纸包扎好，用高压锅消毒，减少了污染。
半夏组织培养研究概况
半夏组织培养研究概况组织培养，又称离体培养，是在无菌的条件下将活器官、组织或细胞放置在适宜的培养基内，并放在适宜的环境中，进行培养而重新形成的细胞、组织或个体。
该技术已广泛应用于农业生产、医药开发等研究。
应用药用植物组织培养技术主要包括以下两个方面：一是利用组培快繁和脱毒技术大规模生产优质种苗满足种植的需要；二是通利用组织培养产生的愈伤组织或悬浮细胞中直接提取药物所需的有效成分或通过生物转化、酶促反应等手段间接获取药物所需药物。
3.1 半夏组培扩繁的研究为了解决某些药用植物天然野生资源过度采挖，人工栽培繁殖系数低，用种严重不足等问题，已经药用植物对植物组培快繁进行了广泛的研究和应用。
组培快繁技术具有成本低、效率高、等优点，可以有效解决某些有性繁殖系数低的药用植物的用种问题。
我国药用植物组织培养始于上世纪50年代，罗士韦(1964)首次报道了我国关于人参组织培养获得成功的研究成果。
1983年全国召开了第一届药用植物组织培养讨论会。
目前为止，我国药用植物已有100多种，其中大多数为珍贵的药用植物通过组培快繁技术繁殖获得了成功。
目前，通过组培快速繁殖已获得了半夏无菌苗苗。
张振媛（2008）报道了不不同激素对不同品系荆半夏的诱导作用是不同的。
黄海波等人比较不同激素对半夏植株再生的影响，结果发现较低浓度的6-BA和NAA对半夏植株再生有明显的促进作用。
张丽梅等（2003）以珠芽和块茎为外植体在添加1.0 mg/L BA的MS培养基中进行培养，发现不需要转移培养，就能在外植体上可长出多株根系粗壮，植株健壮小苗。
郝会军（2008）等报道了半夏组培苗炼苗技术的研究，发现对组培获得的无菌苗进行炼苗处理可以显著提高其无菌苗在大田的移栽成活率。
3.2 半夏的悬浮培养的研究贾永芳等人采用半夏细胞悬浮培养对植株再生进行了研究，发现将半夏幼嫩叶片在MS + 2.0 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BA培养基上一个月内可以诱导出较好的愈伤组织，取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮培养，经3-4次继代后得到分散性好的半夏细胞悬浮系，并将细胞悬浮液过滤获得到的小细胞团接种于MS + 0.2mg/L NAA + 1.0 mg/L BA分化培养基上，40 d后分化出小植株。
药用植物半夏细胞悬浮培养和植株再生体系建立研究
药用植物半夏细胞悬浮培养和植株再生体系建立研究丁兰;欧巧明【期刊名称】《北方园艺》【年(卷),期】2007(000)009【摘要】为了建立甘肃产药用植物半夏的细胞悬浮培养和植株再生体系,通过对其不同外质体筛选、愈伤组织诱导和悬浮培养的愈伤组织类型、激素水平、起始密度、震荡速率等影响因素以及细胞生长状态、生长曲线和pH值变化等指标的研究.结果表明:以叶柄为外质体,选择"松散型"愈伤组织和2×105个/mL的起始培养密度,在附加2,4-D 2.0 mg/L+BA 0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L的1/2 MS培养基上培养,温度(23±2)℃,转速90 rpm,pH值6.0,黑暗培养为最适悬浮培养体系;经检测细胞生长曲线呈"S"型,培养液pH随着细胞的生长先上升后下降,18 d时细胞基数达到最大值;悬浮继代培养后,通过降低或停止震荡转速,在添加BA 0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L的MS液体和固体培养基上可诱导分化出芽和根,进一步形成完整的植株.【总页数】4页(P187-190)【作者】丁兰;欧巧明【作者单位】西北师范大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730070;西北师范大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730070;甘肃省农业科学院生物技术研究所,甘肃,兰州,730070【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9;S035.3【相关文献】1.草莓细胞悬浮培养条件优化及植株再生的研究 [J], 张洁;葛会波;张学英;郑丽锦;时翠平2.掌叶半夏细胞悬浮培养及单细胞培养再生植株 [J], 朱宝成;吴爱民3.苹果体细胞悬浮培养及植株再生研究 [J], 李玉生;吴永杰;赵艳华;吴雅琴;程和禾;陈龙4.枸杞髓部细胞悬浮培养及其高频率植株再生的研究 [J], 曹有龙;贾勇炯5.三叶半夏细胞悬浮培养和植株再生的研究 [J], 贾永芳;侯玉杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
半夏的组织培养研究进展
０科教前沿０
科技信息
半夏的组织培养研究进展
陶兴魁 冯 志敏 （ 淮北 师范大 学 生命科 学学 院 安徽 淮 北
２ ５０） ３ ０ ０
【 摘 要】 半夏是一种常用的传统 中药材 ， 具有重要 的药用价值。 本文叙述 了近年 来研 究人 员在半夏组织培 养上的研究进展 。 并对半夏进一 步 开 发 利 用所 涉及 到 的 一 些 问题 进 行 了初 步探 讨 。 【 关键词 】 半夏 ； 组织培养； 工种子 人 【 ｓｒｃ】／ｅｌ ｅｍｔ ｓａｃｍｍ ｎ ｔ ｄｔ ｎ Ｃ ｉｅｅ ｈｒａ ｄｃｎ。ｗｔ ｍｐｒ ｎ ｅ ｉｉａ ｖｌｅ ｈ ｈ ｓ ｕ ｍａｉ ｓｒｓａｃ ＡｂｔａｔＰｈ ｌａｔｒ ２ ｉ ｏ ｏ ｒ ｉｏ ｈｎｓ ｅｂｌｍｅｉｉｅ ｉ ｉ ｏｔ ｔｍ ｄｃｎｌ ａ ．Ｔ ｅｔｅｉ ｓｍ ｒ ｅ ｅｅｒｈ ｉ ａ ａ ｉ ｈ ａ ｕ ｓ ｚ
ｐ ｏ ｒｓ ｉ ｔｓｕｅ ｃ ｌ ｒ ｎ Ｐｔｒａａ ｉ ｅ ｅ ｔｙ ａｓ ｒｇｅ ｓＯｌ ｉｓ ｕｔ ｅ ｉ ． ｎ ｔ ｎ ｒｃ ｎ ｅ ｒ．Ａｎ ｏ ｅａｉｅ ｑ ｅｔｏ ｓ ａｅ ｄｓｕ ｓ ｄ ｐ ｅｉ ｎ ｒｌ ｓｏ ｉｔｄ ｗｉｈ Ｐｔｒａｅ’ ｕｔｅ ｕ ｅ ｄ ｓ ｍｅ ｒｌｔ ｕ ｓｉｎ ｌ ｉｃ ｓｅ ｒｌｍｉａｉｙ ａ ｓｃａｅ ｔ ．ｅｎ ｔ ｓ ｆ ｒ ｒ ｖ ｈ
生 出植 株 。
础
６ 结语 和 展 望
植 物 组 织 培 养 作 为 一项 重 要 的 生 物 技 术 存 在 无 限 的 潜 力 和 市 场 开 发 价值 。半 夏 的 组 织 培 养 也 还有 不 少 问题 需 要 更 进 一 步探 讨 研 究 。 ６１ 半 夏 组 织 培 养 条 件 的 完 善 ． 对 于半 夏 最 佳 外 植 体 的选 择 ，不 同 的学 者 研 究 的结 果 有 所 差 异 ， 甚 至 差异 很 大 ， 生 的原 因 可能 跟 不 同 学 者 研 究 的半 夏 品 种 、 选 培 产 所 养 基 、 添 加 的 生 长 调 节 物 质 以 及 当 时 培 养 的外 界 条 件 等 不 同 可 能 有 关。 植 物 的 生 长 调 节 物 质 特 别 是 生 长 素 类 和 细 胞 分 裂 素类 已 证 实 对
半夏的组织培养研究
半夏的组织培养研究马宗新（安徽省阜阳市农科所，安徽阜阳236065）摘 要：本文以半夏茎尖,叶片为材料进行组织培养研究,结果表明茎尖培养基为MS+BA1.0+NAA0.05mg/L,增殖培养基为BA1-1.5mg/L+NAA0.5-1.0mg/L,半夏的不同器官均能够进行培养出芽,本文还探讨了试管小球的形成条件,BA对试管小球的形成起关键作用,糖浓度在30-160g/L范围均有试管小球形成而以80g/L形成小球较多,在MS+BA1.0+NAA0.8mg/L+糖45g/L,无光照条件下形成小球较大。
关键词：半夏;组织培养;试管小球中图分类号Q949.99 文献标识码B 文章编号1007-7731(2009)08-040-02Study on The tissue culture of Pinellia ternate(Thunb) BreitMa ZongXin（FuYang Agriculture Institute of AnHui Province, FuYang 236065, China）Abstract: The blade and shoot tip of Pinellia ternate(Thunb) Breit as a material in vitro culture are studeid , the result indicate that the shoot tip culture medium is MS+BA 1.0+ NAA0.05 mg/l, the multipropagation culture medium is MS +BA1-1.5 mg/l+ NAA0.5-1.0 mg/l, the different organ of Pinellia ternate(Thunb) Breit all produced adverilitious buds earsily, the formulating condition of the tube bulb was studied in this article ,the result showed that the BA is the key to the tube bulb formulation. when the sugar oncentration was 30-160 g/l, the tube bulb occurred ,and the concertration was 80 g/l, the bulb grow smaller, and with MS+ BA 1.0+ NAA0.8mg/l+sugar 45 g/l as media, the bulb grow biggest.Key words: Pinellia ternate(Thunb) Breit; tissue culture; tube bulb半夏[Pinellia ternate（Thunb） Breit]，天南星科草本植物，有狗爪半夏[Pinella ternate（Thunb）Breit]，三叶半夏（Pinella，ternate），掌叶半夏（Picria，Pedatisecta）3个种。
半夏组织培养体系的建立
该试验 以野生半夏为试材 ， 采 自湖南农 业大学校 园 内， 以半夏顶芽及块茎为外植体 。
收稿 日期 ： ２ ０ １ ２ —１ Ｏ 一２ ３
Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｐ ｒ ｏ ｐ ａ ｇ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｏ ｆ Ａｃ ｔ ｉ ｎ ｉ ｄ ｉ ａ ｅ ｒ ｉ ａ ｎ ｔ ｈ ａ Ｂ ｅ ｎ ｔ ｈ Ｓ ｅ ｅ ｄ ｌ ｉ ｎ ｇ ｓ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ
ＹＵ Ｈａ ｉ － ｙ ａ ｎ 。 ＣＨＥ Ｎ Ｇａ ｎ ｇ 。 Ｊ Ｉ ＡＮ Ｄｅ － ｆ ｅ ｎ ｇ （ Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ １ ３ ２ １ ０ １ ）
要进一 步探讨 如何高 效和最 大 限度 地利 用优 良单株有
由于长期过度 采挖 ， 半 夏野 生资源 已近枯 竭 ， 远 不 能满足市场需 求 ， 现 已进行 人工种植 。半 夏 的人工 栽培 历史较短 ， 始于 ２ Ｏ 世纪 ７ ０年代 的山东和江苏等 地 。半 夏人工 种植 中通 常以块茎作 生产用种 ， 产 量品质逐 年下 降， 而且种源退化严重 。而 由于半夏是一种 长期野 生的
中图分类号 ： Ｓ ５ ６ ７ ． ２ ３ ９ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ １ －０ ０ ０ ９ （ ２ ０ １ ３ ） Ｏ ４ —０ １ １ ３ 一Ｏ ５
半 夏［ Ｐ ｉ ｎ ｅ ｌ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｔ ａ （ Ｔ ｈ ｕ ｎ ｂ ． ） Ｂ ｒ ｅ ｉ ｔ ． ］ 属 天南 星科
利用组培技术构建半夏杂交体系
利用组培技术构建半夏杂交体系
舒福兴;王嘉亮;陈国广;王馨瑶;姚朝旭;金磊磊;汪鑫;王栋栋;陈集双
【期刊名称】《种子》
【年(卷),期】2024(43)4
【摘要】本研究通过构建半夏品系的杂交体系并研究杂交种苗的扩繁周期,以解决半夏自然杂交成功率低、杂交种苗繁育效率低的问题。
对消毒过的半夏花粉和雌蕊以TTC法测定其活力,并通过对比实验确定雌蕊的最佳培养基,对3种新的半夏品系持续培养出F_(1)代杂交苗,通过杂交苗继代探究转接周期和成苗周期。
结果表明,半夏雌蕊和花粉的最佳消毒时间为6 min;雌蕊的最佳培养基配方是半糖无琼脂MS 培养基20.00 g/L+蔗糖15.00 g/L+琼脂5.00 g/L+6-BA 1.00 mg/L+NAA 0.01 mg/L,pH=5.8。
以此为基础,培育出F_(1)代苗;4种半夏品系的F_(1)代杂交苗与亲本组培苗叶型有明显区别,经过扩繁发现了两个杂交种苗的扩繁周期。
本研究建立了基于植物组织培养技术的半夏杂交体系并获得杂交苗,并探明杂交种苗的繁育周期。
【总页数】7页(P81-87)
【作者】舒福兴;王嘉亮;陈国广;王馨瑶;姚朝旭;金磊磊;汪鑫;王栋栋;陈集双
【作者单位】南京工业大学生物与制药工程学院;遵义医科大学生物资源健康利用研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】S567.239
【相关文献】
1.杂交兰组培苗与内生真菌共生培养体系的构建
2.圆珠半夏带顶芽块茎组培快繁体系的构建
3.半夏叶片开放式组培体系初步建立
4.利用间歇浸没植物生物反应器进行半夏组培快繁的研究
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半夏组织培养研究
半夏组织培养研究
余春香
【期刊名称】《贵州科学》
【年(卷),期】2008(026)004
【摘要】半夏采用块茎、叶片卅柄为外植体进行组织培养均可诱导成苗.块茎在培养基1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA中诱导率高为96.7%,在培养基2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA中增殖倍数高为8.5倍.叶片卅柄在培养基3.mg/L 6-
BA+0.5mg/L NAA中小块茎的诱导率较高达86.7%,在培养基2.0mg/L 6-
BA+0.1mg/L NAA中增殖倍数较高为5.4倍.半夏试管苗在增殖培养中同时分化出根,可免去诱根环节.
【总页数】4页(P81-84)
【作者】余春香
【作者单位】黔东南民族职业技术学院,贵州,凯里,556000
【正文语种】中文
【中图分类】R282.2
【相关文献】
1.旱半夏组织培养技术的优化研究 [J], 王艺霖;屈文国;李昆志
2.半夏的分生组织培养与快速繁殖技术研究 [J], 彭向前;张文会
3.半夏组织培养及其生物碱代谢调控的研究 [J], 刘永红;杨渊华;梁宗锁
4.荆半夏组织培养及快速繁殖研究 [J], 饶茜茜;段思;叶子荣;王玉杰;刘秀秀;张建;赵
振军
5.半夏组织培养研究进展 [J], 胡文斌;张少飞;王一峰;孙娜
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第一作者简介：陶米林（１９９０－），女，湖南长沙人，本科，研究方向为植物细胞工程与遗传。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａｏｍｉ１９９００５０６＠１６３．ｃｏｍ．责任作者：黄红梅（１９７８－），女，湖南长沙人，博士，讲师，研究方向为植物细胞工程与遗传。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｈｍ７４１８＠１６３．ｃｏｍ．收稿日期：２０１２－１０－２３半夏组织培养体系的建立陶米林，刘清波，黄红梅（湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙４１０１２８） 摘 要：以半夏块茎和顶芽为试材，对顶芽愈伤组织诱导、顶芽愈伤组织不定芽分化、块茎不定芽分化和不定芽诱导生根的最佳条件进行了研究。
结果表明：半夏最佳顶芽愈伤组织诱导培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ；最佳顶芽愈伤组织不定芽分化培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ；最佳半夏块茎不定芽分化培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ；最佳不定芽诱导生根培养基为ＭＳ＋２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ １．０ｍｇ／Ｌ。
关键词：半夏；组织培养；顶芽；块茎中图分类号：Ｓ ５６７．２３＋９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１３）０４－０１１３－０５ 半夏［Ｐｉｎｅｌｌｉａ ｔｅｒｎａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｂｒｅｉｔ．］属天南星科半夏属多年生草本植物，主产于四川、湖北、河南、贵州、安徽等省。
半夏是中国中药宝库中一种重要及常用的药材，其入药首载于《神农本草经》，距今已有２ ０００多年的历史。
据统计，在５５８种中药处方中，半夏的使用频率居第２２位。
半夏药用部分主要为块茎，含半夏蛋白、生物碱、半夏淀粉、甾醇类、氨基酸、挥发油、芳香族成分、有机酸类、黄酮类、鞣质以及多种微量元素等化学成分，具燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功能［１－３］。
由于长期过度采挖，半夏野生资源已近枯竭，远不能满足市场需求，现已进行人工种植。
半夏的人工栽培历史较短，始于２０世纪７０年代的山东和江苏等地。
半夏人工种植中通常以块茎作生产用种，产量品质逐年下降，而且种源退化严重。
而由于半夏是一种长期野生的中药材，单株间差异很大。
为了选育优良的半夏品种（系），可以先从野生植株中选择性状优良的单株，通过半夏组织培养来快速、大规模繁殖优良品种和珍贵种质资源。
国内对半夏组织培养的研究，以叶片、叶柄作为外植体的居多。
有的研究了植物生长物质种类和浓度等因素对形成小块茎的影响，并分别筛选出合适的培养基配方；有的则比较了叶片、叶柄、顶芽、块茎等不同外植体，诱导愈伤组织的效果［４］。
因此，在前人基础上，需要进一步探讨如何高效和最大限度地利用优良单株有限的组织器官进行大规模繁殖、遗传改良和次生代谢物开发利用问题。
该试验通过研究不同激素种类和浓度配比对半夏组织培养的影响，以期进一步完善半夏组织培养体系，更好地为后续相关研究奠定材料和技术基础。
１ 材料与方法１．１ 试验材料该试验以野生半夏为试材，采自湖南农业大学校园内，以半夏顶芽及块茎为外植体。
３１１１．２ 试验方法１．２．１ 试验材料的灭菌与外植体制备 接种前先用刀片将半夏块茎外皮去掉，清水洗净。
然后转入超净工作台，用体积分数为０．１％的ＨｇＣｌ２溶液浸泡２０ｍｉｎ，再用无菌水冲洗３～４次。
发芽的块茎，将顶芽完整切下后用清水洗净，转入超净工作台后用体积分数为０．１％的ＨｇＣｌ２溶液浸泡１５ｍｉｎ，再用无菌水冲洗３～４次。
在无菌滤纸上将块茎切成０．５～１ｃｍ２左右的小块，顶芽切成１～２ｃｍ左右的小段，备用。
１．２．２ 愈伤组织诱导 无菌条件下，将上述顶芽外植体分别接种到含有不同植物生长调节剂配比的培养基上（表１）。
每个处理４瓶，每瓶接种４个顶芽外植体。
置于组织培养室中培养，定期观察愈伤组织生长情况，并对试验现象进行记录，２８ｄ后统计出愈率及出愈量。
１．２．３ 愈伤组织的增殖与不定芽分化培养 将愈伤组织于增殖培养基中继代培养使其增殖。
待愈伤组织增殖到一定数量，以不同浓度植物生长调节剂组合（表２），诱导愈伤组织分化出不定芽以及对不定芽进行增殖，每个处理４瓶，每瓶２块愈伤组织，置于组织培养室中培养。
定期观察不定芽分化及不定芽生长情况，２１ｄ后统计不定芽增殖系数。
１．２．４ 块茎的不定芽诱导 将块茎外植体接种至含有不同浓度植物生长调节剂组合的培养基（表３），诱导不定芽分化及对不定芽进行增殖，每个处理４瓶，每瓶４块，置于组织培养室中培养。
定期观察不定芽分化及不定芽生长情况，２１ｄ后统计不定芽增殖系数。
１．２．５ 不定芽的生根培养 当不定芽生长至２～５ｃｍ高时，将其转移到添加不同植物生长调节剂的生根培养基中（表４），观察并记录不同的植物生长调节剂对植株生根的影响。
每个处理４瓶，每瓶１棵试管苗。
置于组织培养室中培养。
定期观察不定芽生根情况，１４ｄ后统计不定芽生根率。
１．２．６ 练苗与移栽 待试管苗长至４～６ｃｍ高时，打开瓶口，于培养室中放置３～５ｄ。
用镊子将试管苗轻轻取出，放入清水盆中，小心洗去根部培养基，然后涝出，放入干净的小盆中。
将小苗移栽入花盆中，轻轻覆盖、压实，置于阴凉、干燥、通风的培养环境中，常浇水，保持土壤湿润。
１．２．７ 培养条件 以上培养基均为ＭＳ基本培养基，琼脂浓度均为７ｇ／Ｌ，蔗糖浓度均为３０ｇ／Ｌ。
培养基的ｐＨ均为５．６，配制好的培养基经１２１℃，２２ｍｉｎ的高温高压灭菌后使用。
培养条件：培养室温度（２６±２）℃，光照强度２ ０００～２ ５００μｍｏｌ·ｍ－２·ｓ－１，光照时间１２ｈ／ｄ。
１．３ 数据分析试验数据用Ｅｘｃｅｌ ２００３软件工具栏中的数据分析进行差异显著性分析。
其中，出愈率＝产生愈伤组织的外植体数／外植体数×１００％；不定芽增殖系数＝出芽数／外植体数×１００％；生根率＝生根瓶数／接种不定芽数×１００％；平均生根条数＝总生根条数／接种不定芽数。
２ 结果与分析２．１ 激素浓度配比对半夏顶芽愈伤组织诱导的影响以半夏顶芽为外植体诱导愈伤组织，在接种３～５ｄ后，顶芽两端向上跷起，随后有切口的一端膨大（图１－１）。
接种１０～１２ｄ后，可见顶芽有所增长，其切口端出现白色绒毛状物。
第１５天后，渐渐出现淡黄或透明的松散型愈伤组织（图１－２）。
将愈伤组织切下于同样的培养基中进行增殖培养。
由表１可知，处理８顶芽出愈率最高，且出愈量较大。
从处理５～１２的出愈率可以看出，当ＮＡＡ浓度相同时，６－ＢＡ浓度越大，愈伤组织出愈率越高；当６－ＢＡ浓度相同时，ＮＡＡ为０．２ｍｇ／Ｌ时，出愈率普遍较高，且试验中观察到６－ＢＡ与ＮＡＡ组合较２，４－Ｄ与ＫＴ组合的愈伤组织更接近胚性愈伤组织。
经过差异显著性分析表明，各处理间的出愈率差异显著，其中出愈率最高的为处理８，即６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ为半夏顶芽愈伤组织诱导的最适宜激素浓度。
表１激素浓度配比对半夏顶芽愈伤组织诱导的影响 Ｔａｂｌｅ １Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｂｕｄ ｏｆ Ｐｉｎｅｌｌｉａ ｔｕｂｅｒ处理ＮＡＡ／ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ／ｍｇ·Ｌ－１２，４－Ｄ／ｍｇ·Ｌ－１ＫＴ／ｍｇ·Ｌ－１接种数／个出愈率／％出愈量１２３４５６７８９１０１１１２１３１４１５１６０００００．２０．２０．２０．２０．５０．５０．５０．５０００００．５１．０１．５２．００．５１．０１．５２．００．５１．０１．５２．００００００００００００００００００．２０．２０．５０．５００００００００００００１．０２．０１．０２．０４８４８４８４８４８４８４８４８４８４８４８４８３２３２３２３２０．０ｓ０．０ｓ０．０ｓ０．０ｓ１２．５ｑｒ４３．８ｈｉｊ６８．８ｃｄ８７．５ａ２８．１ｏｐ４０．６ｉｊｋ６２．５ｅ７１．９ｂｃ３１．３ｌｍｎ５６．３ｆ４６．９ｇｈ７５．０ｂ无无无无＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ 注：同列不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。
“＋”表示愈伤组织发生量；“＋”越多，表示愈伤组织发生量越多。
下同。
２．２ 激素浓度配比对顶芽愈伤组织不定芽分化的影响将愈伤组织接种于培养基上，７ｄ后发现，半透明的松散型愈伤组织上出现淡绿色芽点（图１－３）；１５ｄ后淡绿色芽点渐渐密集；２１ｄ后愈伤组织长出大量嫩绿色的４１１不定芽，且愈伤组织不断增大，呈浅绿色（图１－４）。
由表２可知，处理２愈伤组织出芽数最多，且不定芽增殖系数最高。
当ＮＡＡ浓度为０．２ｍｇ／Ｌ时，处理２的出芽数较多，且不定芽增殖系数最大。
当ＮＡＡ为０．５ｍｇ／Ｌ，处理６的出芽数较多，且不定芽增殖系数较大。
比较处理２和处理６可以看出，处理２愈伤组织出芽数较多，且不定芽增殖系数较大，与处理６具有显著差异，同时颜色更为翠绿。
因而ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ与６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ为半夏顶芽愈伤组织不定芽分化的最适宜激素浓度。
图１ 半夏愈伤组织诱导与不定芽分化（器官发生型途径）注：１．切口处膨大；２．愈伤组织；３．愈伤组织上形成淡绿色芽点；４．愈伤长出不定芽。
Ｆｉｇ．１ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｓ ｆｒｏｍＰｉｎｅｌｌｉａ ｔｕｂｅｒ（Ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｙｐｅ）Ｎｏｔｅ：１．Ｉｎｃｉｓｉｏｎ ｅｎｌａｒｇｅｄ；２．Ｃａｌｌｕｓ；３．Ｌｉｇｈｔ ｇｒｅｅｎ ｂｕｄｓ ｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ｔｈｅｃａｌｌｕｓ；４．Ｃａｌｌｕｓ ｇｒｅｗ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ．表２ 激素浓度配比对愈伤组织不定芽分化的影响 Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ处理ＮＡＡ／ｍｇ·Ｌ－１６－ＢＡ／ｍｇ·Ｌ－１接种数出芽数／个不定芽增殖系数１２３４５６７８０．２０．２０．２０．２０．５０．５０．５０．５０．５１．０１．５２．００．５１．０１．５２．０８８８８８８８８５６１２０７８４５３７７２２８０１４．００ｃ３０．００ａ１９．５０ｂ１１．２５ｃｄ９．２５ｃｄ１８．００ｂ７．００ｄｅ０．００ｅ２．３ 激素浓度配比对半夏块茎不定芽分化的影响半夏块茎接种在培养基上７ｄ后，块茎略微膨大，表面渐黄，并呈现裂纹；第１０天后，块茎由白色渐渐转变成淡绿色，并出现嫩绿色的芽点，块茎体积有所增大（图２－１）；接种１５ｄ左右，块茎明显增大很多，出现大量芽点，且芽点逐渐长大伸长；继代培养后，块茎不断长大，形成大量不规则的绿色团块状组织，并长出大量新芽（图２－２）。