实验动物模型的建立

实验动物模型的建立

转载自中国科技信息网

斯氏狸殖吸虫引起的肺吸虫病，主要是由于童虫在体内游走、移行、串扰引起，表现为皮下游走性结节、包块，浆膜腔积液，颅内占位等病变。目前常用治疗斯氏狸殖吸虫病的药物是吡喹酮，吡喹酮对肺吸虫成虫疗效明显，但对童虫感染，需给较大剂量、多个疗程，常常出现不同程度的不良反应。吴玲娟等[1]发现青蒿琥酯具有杀体内尚未发育成熟的日本血吸虫童虫的作用，具有早期预防性治疗效果。青蒿素及其衍生物被用于卫氏并殖吸虫童虫和成虫[2]、曼氏血吸虫、阴道毛滴虫、弓形虫[3～6]、溶组织阿米巴、福氏耐格里阿米巴、皮肤利什曼原虫、华支睾吸虫的体内、体外杀虫研究，均证明有效。本实验探讨青蒿琥酯对斯氏狸殖吸虫童虫的杀灭效果，并与吡喹酮进行对比实验观察。

1 材料与方法

1.1 实验动物模型的建立

1.1.1 实验动物Wistar大鼠70只，体重200～250g，雌雄不分。由该校实验动物中心提供。

1.1.2 斯氏狸殖吸虫囊蚴从四川省兴文县仙峰镇采集的溪蟹中分离。

1.1.3 动物感染70只鼠全部腹腔注射接种斯氏狸殖吸虫囊蚴（25个/只），将感染后的大鼠随机分成实验治疗组和对照组。

1.2 治疗方案

1.2.1 药物青蒿琥酯片由桂林南药股份有限公司提供，批号070602。吡喹酮片系南京制药厂有限公司产品，批号20061206。两药均用5% NaHCO3溶液溶解。

1.2.2 剂量与疗程所有的大鼠于感染后30d开始治疗。青蒿琥酯治疗方案I，设50 mg/kg、100 mg/kg、150mg/kg 3个剂量组,按每周各剂量给药1次，连续灌服4次，总剂量分别为200 mg/kg、400 mg/kg、600 mg/kg；吡喹酮治疗1组，按150 mg/kg×2d，隔日灌服用药,总剂量300mg/kg。青蒿琥酯治疗方案II，设50㎎／㎏、100㎎／㎏、150㎎／㎏3个剂量组，按每天各剂量给药1次×7d，总剂量分别为350 mg/kg、700 mg/kg、1 050 mg/kg；吡喹酮治疗2组，按150㎎／㎏经口灌服，隔日给药1次，共3次，总剂量450mg/kg ；青蒿琥酯和吡喹酮均用5%的NaHC03稀释，再用生理盐水配成所需浓度溶液。对照组，灌服5% NaHCO3。

1.2.3 疗效评价青蒿琥酯治疗结束后30d，解剖大鼠,分别将大鼠全身肌肉、肝脏、肺等撕成小块后，浸泡于生理盐水中,37℃放置4～8h，收集虫体。采用SPSS11.5统计分析软件做统计学处理,用χ2检验评价组间差异的统计学意义。

2 结果

2.1 青蒿琥酯方案I的治疗效果大鼠感染斯氏狸殖吸虫囊蚴后30d，青蒿琥酯用药后30d 剖杀，解剖所得虫体大部分发育为成虫。青蒿琥酯50 mg/kg、100 mg/kg、150mg/kg组、吡喹酮治疗组、对照组的检虫率分别为35.5%、37.0%、37.5%、19.5%和40.5%。青蒿琥酯各用药组检虫率与对照组相比差异均无统计学意义（χ2=0.477，P均> 0.05）,而与吡喹酮治疗组相比差异有统计学意义（χ2=11.382，P < 0.05）（表1）。

表1 青蒿琥酯每周1次给药对斯氏狸殖吸虫病大鼠的治疗效果

组别

鼠数/只

感染总数/个

检出数/条

检出率/﹪

Art50㎎／㎏×4 8 200 71(8.86±2.27) 35.5

Art100㎎／㎏×4 8 200 74(9.25±1.98) 37.0

Art150㎎／㎏×4 8 200 75(9.43±3.74) 37.5

PQT 150㎎／㎏×2 8 200 39(4.86±2.41) 19.5

对照组8 200 81(10.13±2.05) 40.5

2.2 青蒿琥酯方案II的治疗效果大鼠感染斯氏狸殖吸虫囊蚴后30d，青蒿琥酯用药后30d 剖杀，解剖所得虫体大部分发育为成虫。青蒿琥酯50㎎/㎏、100㎎／㎏、150㎎／㎏组、吡喹酮治疗组、对照组的检虫率分别为26.0%、2

3.3% 、70.0%、22.7%、83.3%。青蒿琥酯50㎎/㎏组、100㎎／㎏组与对照组相比差异均有统计学意义（χ2=37,P < 0.05），与吡喹酮治疗组相比差异无统计学意义（χ2=0.012,P > 0.05），而青蒿琥酯150㎎／㎏与对照组相比差异无统计学意义（χ2=1.105,P > 0.05）。

表2 青蒿琥酯每天1次给药对斯氏狸殖吸虫病大鼠的治疗效果

组别

鼠数/只

感染总数/个

检出数/条

检出率/﹪

Art50㎎／㎏×7 6 150 39(6.42±2.21) 26.0

Art100㎎／㎏×7 6 150 35(5.86±2.32) 23.3

Art150㎎／㎏×7 6 150 105(15.83±3.26) 70.0

PQT 150㎎／㎏×3 6 150 34(5.56±2.16) 22.7

对照组 6 150 125(20.86±3.07) 83.3

3 讨论

青蒿琥酯除具有抗疟作用外，尚有抗血吸虫、弓形虫、包虫等作用。有报道青蒿琥酯对小鼠体内不同发育阶段的日本血吸虫有杀灭作用，特别是对7～35d龄的虫体的杀灭效果更明显[7]。邢文鸾[8]等用卫氏并殖吸虫囊蚴腹腔注射法感染大鼠,10d后按不同剂量服用青蒿琥酯,首次剂量加倍,连用6d。30d后剖解大鼠,观察青蒿琥酯减虫率，并与吡喹酮比较；观察童虫在药液中的活动情况。结果服药后,青蒿琥酯低、中、高3个剂量组、吡喹酮组及对照组童虫检出率分别为26.1%、16.9%、15.9%、2.25%、83.6%；用药组童虫重量减轻,体形减小，童虫体棘有改变，证明青蒿琥酯对卫氏并殖吸虫童虫有一定的杀灭效果。该学者[2]用实验犬常规感染卫氏并殖吸虫囊蚴,76 d后用青蒿琥酯50和80mg/kg灌胃治疗,103 d解剖犬,作常规病理检查,取出的虫体作电镜观察，青蒿琥酯对卫氏并殖吸虫有损伤作用。本实验中，大鼠感染肺吸虫囊蚴后30d用药，治疗方案I，青蒿琥酯每周1次给药，连用4次，对大鼠内斯氏狸殖吸虫无明显杀虫效果；治疗方案II，采用青蒿琥酯50㎎/㎏?d×7 d、100㎎／㎏?d×7d，对大鼠内斯氏狸殖吸虫有明显杀虫效果，检虫率分别为26.0%、23.3%，明显低于对照组，杀虫效果与吡喹酮相当。但青蒿琥酯150㎎／㎏?d×7d组对大鼠内斯氏狸殖吸虫无明显杀虫效果，可能与大剂量青蒿琥酯抑制免疫功能有关。青蒿琥酯对斯氏狸殖吸虫的作

用还有待进一步研究。