人类常见肿瘤新鲜组织标本采集
肿瘤病理取样方法
肿瘤病理取样方法介绍肿瘤病理取样方法是肿瘤诊断中非常重要的一步。
通过获取肿瘤组织样本，病理学家可以进行组织学和细胞学的研究，从而确定肿瘤的类型、分级、分期以及预后。
本文将详细介绍肿瘤病理取样的各种方法。
常用的肿瘤病理取样方法1. 手术切除标本手术切除标本是常见的肿瘤病理取样方法。
在肿瘤手术中，医生会切除整个肿瘤及其周围组织，以获取一块完整的组织标本。
这种方法适用于肿瘤直径较大、表面可见的情况，可以提供较准确的诊断和分期信息。
2. 活检活检是通过穿刺或切取的方式取得肿瘤组织样本的方法，可以分为穿刺活检和切片活检两种形式。
2.1 穿刺活检穿刺活检是通过使用细针、导丝或穿刺钳等器械在体内获取肿瘤组织样本的方法。
根据穿刺器械的不同，穿刺活检可以细分为细针穿刺活检、导丝标记活检和穿刺钳活检。
•细针穿刺活检：使用细针对肿瘤进行穿刺，常见的有细针穿刺抽吸细胞学检查（FNAC）和细针穿刺组织学检查（FNB）等。
这些方法适用于肿瘤直径较小、位置较深或手术切除有困难的情况。
•导丝标记活检：在影像学引导下，将一根细导丝放置在肿瘤内或旁边，然后切取导丝及其周围组织作为活检标本。
这种方法适用于需要精确定位的肿瘤，例如乳腺钼靶检查后发现的钙化灶等。
•穿刺钳活检：通过使用开口式穿刺钳或活检钳切取肿瘤组织，常用于一些较大的肿块以及可见肿瘤表面的病变。
2.2 切片活检切片活检是通过手术切割、冷冻或热冻的方式获取活体肿瘤组织样本进行病理学检查。
这种方法适用于需要更精确的组织学信息的肿瘤，例如皮肤肿瘤、淋巴结肿瘤等。
3. 刷片检查刷片检查是一种常见的涂片细胞学检查方法，适用于表面易于达到的肿瘤，如宫颈癌、食管癌等。
医生使用细刷子在肿瘤表面轻轻刷取细胞，然后将细胞刷取到载玻片上进行染色和观察。
肿瘤病理取样方法选择的考虑因素在选择合适的肿瘤病理取样方法时，需要考虑以下因素：1.肿瘤类型：不同类型的肿瘤可能需要不同的取样方法。
例如，对于乳腺肿瘤，通常需要进行手术切除标本或穿刺活检；而对于淋巴结肿瘤，则可能更适合切片活检。
脑肿瘤标本的正确采集方法
脑肿瘤标本的正确采集方法一、脑肿瘤病理检查、影像学检查采集取样1、病理检查病理检查是指通过穿刺、活检等方式，取出脑肿瘤组织进行病理检查，能够明确肿瘤的性质，从而为后续的治疗提供准确的方案。
2、影像学检查影像学检查是指CT、核磁共振等，通过影像学检查能够了解到肿瘤的大小、位置等情况，还可以了解到周围的神经和血管是否受到了压迫，对疾病的治疗有一定的帮助作用。
除此之外，脑肿瘤的取样还包括脑脊液检查等。
二、脑部肿瘤基因检测样本采集方式1、基因检测样本采集方法基因检测主要针对的是肿瘤组织本身的DNA，因此需要采集肿瘤组织样本。
对于脑部肿瘤，一般有以下几种样本类型可供采集。
（1）手术组织样本手术组织样本是目前采集脑部肿瘤样本的主要方式，一般是在手术过程中通过手术器械采集肿瘤组织，然后送到实验室进行基因检测。
手术组织样本采集的优点是样本质量高，适用于各种基因检测。
（2）穿刺组织样本穿刺组织样本是通过穿刺或者抽取肿瘤组织进行采集，一般适用于无法手术的患者。
但是穿刺组织样本采集的质量相对较低，有可能会影响基因检测结果。
（3）体液样本体液样本主要是指脑脊液，是通过腰椎穿刺采集。
但是，脑脊液中的肿瘤细胞数量较少，因此对于一些基因检测来说，样本数量不足可能会影响结果。
2、注意事项采集脑部肿瘤基因检测样本时，需要注意以下几点：（1）手术前准备需要提前告知患者采集样本的具体过程和注意事项，并且检查患者是否存在过敏史和药物过敏等情况。
（2）手术时注意手术时需要选择合适的采集器具，避免对肿瘤组织造成损伤，同时要避免采集到正常组织，以免影响检测结果。
（3）样本保存采集完样本后，需要尽快将样本送到实验室进行处理，同时需要注意样本保存的温度和时间，避免样本失效。
3、基因检测的意义脑部肿瘤的基因检测可以帮助医生更加准确地判断肿瘤类型和治疗方案。
例如，某些基因突变会导致肿瘤对某些化疗药物产生抗药性，如果能够及时发现这些基因突变，就可以避免使用无效的化疗药物，从而提高治疗效果。
人类常见肿瘤新鲜组织标本采集
《人类常见肿瘤新鲜组织标本采集、处理和保存的技术规程》1．为保护、保存并充分利用人类肿瘤遗传资源，提高我国肿瘤防治水平，特制定本规程。
2．本规程严格遵守1998年由国务院颁布的《人类遗传资源管理暂行办法》并以此为基准。
3．人类常见肿瘤新鲜组织标本的采集包括收集来自肺、食管、大肠、乳腺、肝、胃、甲状腺、肾等脏器肿瘤患者的标本，包括其血液或血液成分、各种体液如尿液、痰液或精液等标本的采集。
（注：血液标本的收集附后）4．全部标本贮存于人类常见肿瘤新鲜组织库（简称“组织库”），该组织库必需由专人长期负责。
5．组织库至少设立主任一名，负责组织库的管理、协调及组织标本的使用权限等事务。
其他至少需要固定取材人员一名、信息登记人员一名，材料准备人员一名。
6．人类常见肿瘤新鲜组织标本的取材前准备工作：6.1所有组织标本的取材均需事先向患者及/或家属详细解释，征得患者及/或家属的同意后签署《知情同意书》。
6.2标本采集一般在手术室、腔镜室进行，必需得到相关管理人员的许可，同时争取得到相关人员的积极配合以保证标本的及时获得。
7．人类常见肿瘤采集步骤7.1准备工作：主要设备包括剪刀2把、镊子2把、刀片若干、生理盐水、不同颜色的冻存管、临时登记本、标记笔、标签纸、液氮及便携式标本贮藏罐；-86℃深低温冰柜；高温高压消毒灭菌手术器械与贮藏管；电动组织匀浆器；低温高速离心机；紫外分光光度计；制冰机；Trizol试剂盒。
7.2标本选择：选取的标本包括肿瘤组织、正常组织和(或)癌旁组织。
7.3标本切取的方法与时机：首先进行大体标本的观察或拍照，确认肿瘤的部位、范围，注意与周围组织及坏死组织的鉴别，在标本离体后应在最短的时间内切取标本(<30min)，将癌及癌旁组织切取成多块直径为0.5 cm左右的组织块，分别装入已编号的灭菌冻存管中，迅速放入液氮转移罐并做好长期保存准备。
8．人类常见肿瘤标本的保存方法：7.1尽快将液氮转移罐中的标本转移入标本盒中，标本盒每装满一盒，即在盒上注明其内存放标本的开始与结束编号。
常见肿瘤标本处置及取材方法
谢谢！
冰冻标本的取材- 肺
• • • • • • • 楔形肺：贴近闭合器下缘剪掉闭合器。 垂直于脏层胸膜多个切面切开肿瘤。 尽量取能显示肿瘤与胸膜的关系的组织。 准确测量肿瘤大小。 肿瘤与肺切缘的距离。 取肺切缘（冰余）：转移癌，良性肿瘤等 胸膜结节：垂直于胸膜切开立埋。
冰冻标本的取材-乳腺
• 乳腺肿物：取肿瘤及正常乳腺交界处 • 乳腺钙化定位：对照X光片，选择可疑部位。如无 明显肿物，冰余充分取材。 • 乳腺导管解剖：垂直于导管方向每隔3mm平行切开， 注意观察有无扩张的导管和导管内肿瘤。 • 乳腺切缘：如组织较大，无特殊标记，则选择乳腺 区，尽量去掉脂肪，不需取冰余。
全肺
食 管
• • • • 1-5见图 6、7肿物重复 （纵膈胸膜） 8、食管旁淋巴结
食管胃交界、近端胃
完全剪去吻合钉 沿肿瘤对侧剪开 浆膜外组织：膈肌
肿瘤中心位于近端胃/食管，距 食管胃交界__cm。
远端胃大部
• 完全剪去吻合钉 • 沿肿瘤对侧剪开 • 浆膜外组织：胰腺
宫颈锥切
沿系线处打开，钉板固定。 Fra bibliotek匀分成12点取材
乳 腺
腋窝
1、乳头 2、肿瘤 （胸肌筋膜、乳头、皮肤） 3、周围乳腺 4、腋窝淋巴结
1、辨认方向及肿瘤的位置 2、皮肤对侧沿乳头及肿物 的连线切开乳腺 3、平行于此线每隔1cm全 部切开乳腺 4、注意皮肤不要切断
2 1
3
4
肺
右主支气管
气管
左主支气管
上叶
上叶 叶支气管
中叶
段支气管 下叶 中间段支气管 下叶
1 主支气管切缘
袖切
4
分子诊断项目标本采集、运输与保存程序
分子诊断项目标本采集、运输与保存程序1 目的临床分子诊断中多采用血液为标本，次为病理组织，少数是其他体液（如唾液、脑脊液、胸腹水、羊水等）。
标本的成分含量可因标本采集和处理不当等因素的影响而发生变化，从而影响测定结果的准确性，因此，在取标本时要考虑到并设法消除这些因素的影响。
本程序旨在规范临床分子诊断中心进行分子诊断项目标本采集及运输与保存过程，保证临床分子诊断中心检测标本的质量，确保检测结果的准确。
2 适用范围临床分子诊断中心所有进行分子检测的标本。
3 职责3.1 临床分子诊断中心负责人根据项目检测种类需要编写各类标本采集及运输、保存程序，经科主任批准后执行。
3.2 临床分子诊断中心质量监督员负责样品采集与运输、保存过程中各个环节的人员培训及宣教，并进行监督。
4 样品种类4.1 实体瘤标本4.1.1 石蜡标本为了保证石蜡标本中基因组 DNA、RAN 提取的成功率和正常的检测周期，请按照如下要求准备送检标本：a. 切片厚度 4~10μm，切片数量取决于肿瘤组织横切面的大小。
例如：对于成人拇指盖大小面积，8~10 张切片即可满足 DNA 提取需要；如果肿瘤组织切片的面积较小，请按比例增加切片的数量。
b. 为保证切片组织中含有足够比例的肿瘤细胞，需请病理科医生事先对该切面的肿瘤组织进行 HE 染色，确保所切层面中肿瘤组织占 40%以上、且坏死组织所占比例不高于10%。
3. 切片结束后，不必进行铺片和贴片处理，直接用干净的镊子将组织切片转移至干净的 1.5 ml 离心管中。
4. 请尽可能在送检时请提供两管待测标本，其中一管用于检测，另一管作为备用材料。
5. 标本常温保存、运输。
6. 为保证石蜡标本 DNA 提取的成功率，请尽可能送检 2~3 年以内的石蜡标本。
4.1.2 新鲜组织标本为了保证新鲜组织标本中基因组 DNA、RNA 提取的成功率和正常的检测周期，请按照如下要求准备送检标本：a. 要求新鲜肿瘤组织标本≥100mg，未坏死肿瘤组织比例在 70%以上。
肿瘤检测样本
1、新鲜组织(包括手术和活检组织)肿瘤新鲜冷冻材料可提取出最高品质的DNA、RNA。
在手术现场取样的情况也比较多，但需要在显微镜下确认肿瘤细胞含量。
周围炎症严重的肿瘤、黏液产生过高的肿瘤、病变中心广泛纤维化的肿瘤细胞不能采集，以免产生假阴性结果。
切割后取其中一半，并利用另一半切面制作组织标本，然后进行确认。
手术切除的组织样本理想的保存方法是迅速置于液氮中，然后保存于液氮罐或-80℃冰箱，这一过程应在手术样本离体后30分钟内完成。
由于组织样本通常需先进行病理学分析，在分析完成后应尽早将组织样本置于稳定剂中，避免核酸降解。
2、石蜡包埋组织（formalin-fixed paraffin-embedded，FFPE）10%中性福尔马林固定手术切除样本，按病理学操作规范进行取材。
制作石蜡切片时，切取5片连续切片，其中1片进行HE染色，确认肿瘤细胞的含量。
在高灵敏度检测方法中，可考虑使用活检标本。
DNA容易受固定的影响，长时间（1周以上）浸泡在福尔马林中的样本的DNA会被片段化，不能检出突变。
活检材料的固定时间一般是24小时，对于穿刺等活检样本，固定时间控制在6~24小时为佳。
3、胸腹水等细胞学样本用胸腹水中的肿瘤细胞用于基因检测时，必须确认肿瘤细胞，穿刺获得胸腹水样本提交给细胞病理检查之后，剩余液体冷藏/冷冻保存，也可在含有细胞成分的离心沉淀中加入含有蛋白质变性剂的缓冲液（AL缓冲液，Qiagen公司）等室温保存。
由于细胞学样本的肿瘤细胞含量较低，因此必须使用高灵敏度检测方法。
4、血浆样本循环DNA(circulating free DNA，cfDNA)是存在于血浆中的游离DNA，肿瘤来源的DNA占血浆游离DNA的比例在不同肿瘤及病例中相差悬殊（0.01~93%），从而限制了外周血在肿瘤分子检测时的应用。
目前已有多篇文献证实可利用从血浆游离DNA检出突变，但需要使用ARMS法等灵敏度非常高的检测方法。
采集外周血提取血浆游离DNA进行检测，取样时应使用一次性密闭EDTA 抗凝真空采血管，采集6~10ml全血，冷藏运输，6小时内分离血浆，提取游离DNA，保存到-80℃冰箱中，并避免反复冻融。
肿瘤基因检测的解读流程
肿瘤基因检测的解读流程一、引言肿瘤基因检测是一种新型的检测方法，它可以通过对肿瘤组织或血液样本中的基因进行分析，帮助医生制定个性化治疗方案。
但是，对于普通人来说，肿瘤基因检测的结果往往难以理解。
本文将从样本采集、检测流程、结果解读等方面进行详细介绍，希望能够帮助大家更好地了解肿瘤基因检测。
二、样本采集1. 肿瘤组织样本采集肿瘤组织是最常见的样本类型之一。
一般情况下，医生会通过手术或穿刺等方式获取肿瘤组织样本，并将其送往实验室进行检测。
2. 血液样本采集血液样本采集相对简单，只需要在静脉注射针头插入后抽取2-5ml血液即可。
但是需要注意的是，在采集血液前需要遵守一些特定的规定和注意事项。
三、检测流程1. DNA提取首先需要将肿瘤组织或血液中的DNA提取出来。
DNA提取是肿瘤基因检测的第一步，也是最为关键的一步。
目前市面上常用的DNA提取方法有化学法、机械法、磁珠法等。
2. 文库构建文库构建是将DNA片段连接到载体上，形成文库的过程。
该过程需要进行PCR扩增、末端修复、连接等步骤。
3. 高通量测序高通量测序是肿瘤基因检测中最重要的一步。
它可以对文库中的DNA 进行大规模并行测序，并生成海量数据。
目前市面上常见的高通量测序技术有Illumina、Ion Torrent等。
4. 数据分析数据分析是肿瘤基因检测中最为复杂和困难的一步。
它需要对海量数据进行处理和分析，并从中找出与肿瘤相关的基因变异信息。
四、结果解读1. 基因突变类型根据检测结果，可以确定样本中存在哪些基因突变类型，如点突变、插入缺失突变等。
2. 基因突变频率基因突变频率反映了该突变在样本中所占比例大小，这对于制定个性化治疗方案非常重要。
3. 基因突变的临床意义基因突变的临床意义是指该突变与肿瘤发生、发展的关系。
有些基因突变可能会导致肿瘤的恶化和转移，而有些基因突变则可能与肿瘤治疗反应相关。
五、结论通过本文的介绍，我们可以了解到肿瘤基因检测的流程和结果解读。
人类常见肿瘤新鲜组织标本采集
《人类常见肿瘤新鲜组织标本采集、处理和保存的技术规程》1．为保护、保存并充分利用人类肿瘤遗传资源，提高我国肿瘤防治水平，特制定本规程。
2．本规程严格遵守1998年由国务院颁布的《人类遗传资源管理暂行办法》并以此为基准。
3．人类常见肿瘤新鲜组织标本的采集包括收集来自肺、食管、大肠、乳腺、肝、胃、甲状腺、肾等脏器肿瘤患者的标本，包括其血液或血液成分、各种体液如尿液、痰液或精液等标本的采集。
（注：血液标本的收集附后）4．全部标本贮存于人类常见肿瘤新鲜组织库（简称“组织库”），该组织库必需由专人长期负责。
5．组织库至少设立主任一名，负责组织库的管理、协调及组织标本的使用权限等事务。
其他至少需要固定取材人员一名、信息登记人员一名，材料准备人员一名。
6．人类常见肿瘤新鲜组织标本的取材前准备工作：6.1所有组织标本的取材均需事先向患者及/或家属详细解释，征得患者及/或家属的同意后签署《知情同意书》。
6.2标本采集一般在手术室、腔镜室进行，必需得到相关管理人员的许可，同时争取得到相关人员的积极配合以保证标本的及时获得。
7．人类常见肿瘤采集步骤7.1准备工作：主要设备包括剪刀2把、镊子2把、刀片若干、生理盐水、不同颜色的冻存管、临时登记本、标记笔、标签纸、液氮及便携式标本贮藏罐；-86℃深低温冰柜；高温高压消毒灭菌手术器械与贮藏管；电动组织匀浆器；低温高速离心机；紫外分光光度计；制冰机；Trizol试剂盒。
7.2标本选择：选取的标本包括肿瘤组织、正常组织和(或)癌旁组织。
7.3标本切取的方法与时机：首先进行大体标本的观察或拍照，确认肿瘤的部位、范围，注意与周围组织及坏死组织的鉴别，在标本离体后应在最短的时间内切取标本(<30min)，将癌及癌旁组织切取成多块直径为0.5 cm左右的组织块，分别装入已编号的灭菌冻存管中，迅速放入液氮转移罐并做好长期保存准备。
8．人类常见肿瘤标本的保存方法：7.1尽快将液氮转移罐中的标本转移入标本盒中，标本盒每装满一盒，即在盒上注明其内存放标本的开始与结束编号。
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《人类常见肿瘤新鲜组织标本采集、处理和保存的技术规程》1．为保护、保存并充分利用人类肿瘤遗传资源，提高我国肿瘤防治水平，特制定本规程。
2．本规程严格遵守1998年由国务院颁布的《人类遗传资源管理暂行办法》并以此为基准。
3．人类常见肿瘤新鲜组织标本的采集包括收集来自肺、食管、大肠、乳腺、肝、胃、甲状腺、肾等脏器肿瘤患者的标本，包括其血液或血液成分、各种体液如尿液、痰液或精液等标本的采集。
（注：血液标本的收集附后）
4．全部标本贮存于人类常见肿瘤新鲜组织库（简称“组织库”），该组织库必需由专人长期负责。
5．组织库至少设立主任一名，负责组织库的管理、协调及组织标本的使用权限等事务。
其他至少需要固定取材人员一名、信息登记人员一名，材料准备人员一名。
6．人类常见肿瘤新鲜组织标本的取材前准备工作：
6.1所有组织标本的取材均需事先向患者及/或家属详细解释，征得患者及/或
家属的同意后签署《知情同意书》。
6.2标本采集一般在手术室、腔镜室进行，必需得到相关管理人员的许可，同
时争取得到相关人员的积极配合以保证标本的及时获得。
7．人类常见肿瘤采集步骤
7.1准备工作：主要设备包括剪刀2把、镊子2把、刀片若干、生理盐水、不同
颜色的冻存管、临时登记本、标记笔、标签纸、液氮及便携式标本贮藏罐；
-86℃深低温冰柜；高温高压消毒灭菌手术器械与贮藏管；电动组织匀浆器；
低温高速离心机；紫外分光光度计；制冰机；Trizol试剂盒。
7.2标本选择：选取的标本包括肿瘤组织、正常组织和(或)癌旁组织。
7.3标本切取的方法与时机：首先进行大体标本的观察或拍照，确认肿瘤的部位、
范围，注意与周围组织及坏死组织的鉴别，在标本离体后应在最短的时间内
切取标本(<30min)，将癌及癌旁组织切取成多块直径为0.5 cm左右的组织
块，分别装入已编号的灭菌冻存管中，迅速放入液氮转移罐并做好长期保存
准备。
8．人类常见肿瘤标本的保存方法：
7.1尽快将液氮转移罐中的标本转移入标本盒中，标本盒每装满一盒，即在盒上
注明其内存放标本的开始与结束编号。
7.2标本盒长期存放在-86℃深低温冰箱中保存。
7.3标本相关资料的登记：标本存放好后，及时进行标本相关资料的登记工作，
标本相关资料的登记内容包括标本编号、姓名、住院号、肿瘤类型、取材数量（分别用T和N代表肿瘤及正常，T及N后面的数字表示取材份数，如T3代表肿瘤标本3份，N2代表远癌正常标本2份）、离体时间(分钟)、组织质量（A＝无明显坏死、B＝散在坏死、钙化，C＝大量坏死）。
示例：
编号姓名住院号肿瘤类型取材数量离体时间组织质量
353 *** 123456 肺癌T4N4 25min A
9．人类常见肿瘤新鲜组织库信息化管理平台的建立：采用统一设计的信息管理系统应用于肿瘤库的管理，系统运行平台为Windows XP，数据库为EXEL或ACCESS 2003。
系统功能内容包括：
9.1患者基本信息：姓名、性别、年龄、职业、随访联系方式、住院号、既往
史、手术史、有无放化疗、手术日期、手术名称、手术性质、切除部位、
病理诊断（包括分化程度及组织学类型）、TNM分期、手术并发症、有无
手术死亡、最后一次随访时间、生存时间、死亡时间、死亡原因及其它。
如下图所示。
9.2标本信息录入：包括入库编号、入库类别、病变部位、组织部位、保存方
式、收集人、入库时间、离体时间、标本质量。
9.3标本存放位置信息：入库编号、存放设备、标本盒规格、标本数量、计量
单位、存放位置坐标等。
10．标本使用管理：
10.1使用登记：出库编号、出库日期、入库编号、标本原始位置、使用单位、
使用人、审批单位、审批人、经手人等；
10.2实验信息录入：入库编号、实验号、实验内容、实验结果、实验单位、实
验人、实验日期等。
11．标本废除管理：废除编号、人库编号、标本原始位置、废除日期、废除原因、审批人等。
12．系统管理：包括用户管理、术语维护、标本盒管理等。
13．标本的收集、保存、使用实行专人管理。
管理人员严格按照肿瘤库制定的标本出入库及保存质量进行标准化管理。
定期检查液氮、冰箱的工作状态及性能。
发现问题及时处理。
14．标本使用需申请，经组织库负责人审批后方可使用。
15．随机取库存标本作光镜检查、抽提核酸，了解保存质量。
16．组织标本的质量鉴定
16.1 病理组织学鉴定：利用常规病理学检测方法进行病理组织学鉴定。
16.2 组织总RNA鉴定：参照Trizol试剂盒操作指南进行组织总RNA 的提取，紫外分光光度计测定经稀释的RNA提取物的A值，并根据测定时RNA 提取物稀
释比例换算提取物浓度，计算方法为测定浓度×稀释倍数或A260测定值×稀释倍数×40ug／ml，判断RNA 纯度标准为A260／A280，大于1.6；l％琼脂糖凝胶电泳检查RNA提取物的完整性，即应显示明显的28s和18s条带，而且28s的亮度大约是l8s的2倍。
附：
常见肿瘤患者血液样本收集和管理
1．样本收集
肿瘤患者入院后，于手术前1日手术配血时同时抽取5ml空腹静脉血，置与EDTA K3抗凝管中，当日上午由组织库专门人员收集，并进行白细胞及血浆分离处理。
要求白细胞样品在取血样120min内完成分离，分离的血浆在液氮中速冻后-86˚C冷冻保存。
2. 材料
2.1 专用取血管
2.2 淋巴细胞分离液
2.3 灭菌生理盐水（普通0.9%生理盐水灭菌即可）
2.4 Trizol试剂
3. 流程
（以4ml血为例）
将4 ml抗凝血，以3,500 转/分，室温，离心10分钟。
将会看到血液分为2层，
上层是淡黄色的血浆，约占60％
↓
将上层血浆吸出，分装成两管，1ml/管
↓
液氮中速冻30min后，-80˚C冷冻保存
↓
还剩约2ml血细胞层，在血细胞层中加入1：1体积，即约2ml的灭菌生理盐水，混
匀
↓
将8 ml淋巴细胞分离液（是全血体积的2倍）预先加入灭菌的离心管中。
将与生理
盐水混合的血细胞缓慢加入淋巴细胞分离液液面上，注意尽量不要让血细胞层掺入
到淋巴细胞分离液层去
↓
以1500转/分，室温，离心20 分钟(离心机要求水平转头)
↓
可以看到液体分为三层，上层是淡黄色的血浆，中间一层乳白色，最下面一层是红色的血细胞。
在中间层和上层交界处是有一层白色的膜，即白细胞层，
（同时在明显的白细胞层下面有较厚的乳白层液体，此层液体中也含有白细胞，但量较少，若血液足够，可以考虑不要此层，若白细胞层不很明显而乳白色液体层太厚，可以2500转/分，继续离心10 分钟以加强白细胞的分离效果）
↓
用巴士滴管或移液器收集界面上的白细胞层
↓
放入灭菌的1.5ml EP离心管中
↓
以 10,000 转/分，室温，离心 5 分钟，吸掉上清，可见白色的沉淀，有时白色的沉淀上还混有红色的血细胞（少量红细胞无妨）
↓
-86˚C冰箱保存。