免疫胶体金层析法-hcg
——金标记免疫法测HCG
原理
• 采用胶体金标记抗体，以硝酸纤维 素膜为载体，使抗原抗体反应和洗 涤在同一渗滤膜上，反应后根据在 膜上的颜色判断结果。 • 以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔 膜毛细管作用，使膜一端的液体慢 慢向另一端渗移，犹如层析
← HCG分子
← 鼠抗人HCG单抗
← 胶体金颗粒
HCG 阴性标本
negative
MAX
尿中无HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体不结合而不显色 在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
试纸条失效
失效
MAX
方法学评价
• 该法为定性检测尿中HCG，不能确定其浓度 • 因为该法是用单抗来测定HCG，特异性较高， 黄 疸、蛋白、血细胞和浑浊度对结果观察都无影 响。、 • 晨尿中一般含有最高的HCG值，检出率较高。 • 检测时间：HCG一般在受精卵着床后几天才出现 在尿液中，而且要达到一定的量才能被检出，因 此，对于平时月经正常的妇女需在月经推迟后才 可能在尿中检出，二月经周期长或排卵异常的妇 女有可能在停经40-44天才能检出 • 尿液稀释：如果喝水过多使尿液稀释可能会导致 假阴性结果。
←胶体金标记鼠抗人HCG单抗
←羊抗鼠IgG
HCG 阳性标本
positive
MAX
尿中HCG与金标记的鼠抗人HCG单抗结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动,至检测线与鼠抗人HCG抗体结合而聚集显色 在检测线未结合的金标记鼠抗人HCG单抗(IgG)随着尿液上行,到达质控 线与羊抗鼠IgG(二抗)结合而显色，作为质控对照。
金标鼠抗人IgG单抗随层析作用向上移动，到达质控线，无羊抗鼠 IgG(二抗)或破坏失效，不结合而 不显色，作为质控对照。
大便有标志线的下端浸入尿液标本中， 深度不可超过标志线（若超过，可能会出 现假阳性） • 2. 约3秒后取出，平放，5分钟内观察结果 (时间不能小于5分钟)：两条红线为(+)，提 示尿中含HCG。一条红线为(一)，表示不含 HCG。（时间过短，可能有假阴性）
胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素_杨秀梅
第41卷第3期上海师范大学学报（自然科学版）Vol．41，No．3 2012年6月Journal of Shanghai Normal University（Natural Sciences）Jun．，2012胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素杨秀梅，邢国杰，徐宽，沈鹤柏，朱龙章*（上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234）摘要：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法，建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测，灵敏度可达25mIU/mL，线性范围25 10000mIU/mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应，所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法，能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素，在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．关键词：HCG；胶体金；免疫层析；定量检测中图分类号：O648文献标识码：A文章编号：1000-5137（2012）03-0274-060前言人绒毛膜促性腺激素（human chorionicgonadotropin，HCG）是由胎盘合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素［1］．HCG的产生与滋养细胞的生长状况和数量有直接关系［2］，正常发育的绒毛所分泌的HCG量很大，每天的滴度不断地快速上升，每48h上升66%以上．如果HCG每2d增加的量＞66%，可以诊断为宫内妊娠；而如果增加的量＜66%，则异位妊娠或宫内孕发育不良的可能性很大［3］．HCG是妊娠时所分泌的特异性激素，可用于协助异位妊娠早期未破裂的诊断．目前较为明确的诊断方法为B超，但是在怀孕5周内B超难以发现胚芽的影像，所以寻找早期诊断异位妊娠的方法显得尤为重要．因此，本文作者试图探讨血清人绒毛膜促性腺激素检测在异位妊娠早期诊断的价值．胶体金免疫层析方法对人绒毛膜促性腺激素的定量检测的研究目前只达到半定量的水平，而本研究则实现了对人绒毛膜促性腺激素的定量检测．这弥补了胶体金免疫层析方法中无法定量的缺陷，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．目前现有的胶体金免疫层析试条只能定性判断是否怀孕，而先兆流产、异位妊娠、药物引流、某些妇产科疾病、术后治疗过程等都需要对HCG指标变化进行跟踪及对HCG进行定量检测［4－5］．孕卵在子宫腔以外的任何部位着床发育，均称异位妊娠［6］．异位妊娠是妇产科常见急腹症之一，当输卵管妊娠流产或破裂时可引起腹腔内严重出血，如不能及时就诊、处理可危及生命［7］．HCG动态定量检测可作为异位妊娠随访监控指标，对早期异位妊娠的诊断具有重要意义［8］．本研究在常规早孕试纸定性检测的基础上，对原有胶体金免疫层析技术进行改进，实现了HCG的定量检测，对异位妊娠的早期诊断及过程监控具有重要的影响．1材料1．1主要材料HCG单克隆抗体、羊抗鼠二抗（上海捷宁生物科技有限公司）；硝酸纤维素膜、吸水纸、玻璃纤维购收稿日期：2011-12-21作者简介：杨秀梅（1985－），女，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生；朱龙章（1956－），男，上海师范大学生命与环境科学学院教授．*通信作者第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素于美国Millipore公司；柠檬酸三钠（上海青析化工有限公司）；氯金酸（国药集团化学试剂有限公司）．1．2主要仪器HM3010单维往复划膜仪；AllegraTM64R台式高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）；金标分析仪（中国科学院上海光学精密机械研究所）．2试纸条的制备方法2．1胶体金的制备用柠檬酸三钠还原法［9］制备20nm胶体金．向洗净的锥形瓶中加入98mL的超纯水，再加入1%的氯金酸2mL．将锥形瓶放在恒温搅拌器上加热至沸腾，维持加热状态并加入1%柠檬酸三钠2mL．继续煮沸10min，观察颜色变化，冷却至室温后置于4ħ冰箱待用．2．2结合垫的制备取1mL的胶体金用0．1mol/L的K2CO3溶液调节pH值到8．0 9．0，加入36μgα－HCG抗体，混匀涡旋并静置10min，加入50μL BSA（10%）溶液反应10min后，用离心机在13000r/min下离心15min，弃去上清液，沉淀物用硼酸盐缓冲溶液重悬至原体积后，再次离心弃去上清液，浓缩至原体积的1/10，4ħ保存．选用玻璃纤维作为结合垫材料，将上述制备的胶体金α－HCG抗体复合物重新分散于0．01mol/L PBS（pH=7．4，含5%蔗糖，1%BSA）中，并喷于结合垫上，37ħ烘干2h．2．3样品垫的制备选用玻璃纤维素膜作为样品垫材料，将其放入样品垫处理液（0．01mol/L PBS（pH=7．4），含有1% BSA，0．1%Triton X－100）中浸泡后，37ħ烘干2h备用．2．4硝酸纤维素膜（NC膜）的制备用划膜仪在NC膜的不同位置喷点α－HCG单抗及羊抗鼠IgG抗体，自下至上依次为质控线（C 线）、检测线（T线），37ħ烘干2h备用．2．5试纸条的组装将吸水纸、NC膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC底板上，并切成4mm宽的试纸条装壳．3实验结果3．1胶体金的表征3．1．1胶体金的紫外扫描对2．1．1所制备的20nm的胶体金进行紫外扫描，测定结果见图1，从图1上可看出所制备的20nm的胶体金的最大吸收峰位于520nm处，这与文献［10］报道的一致，符合实验的要求．图120nm胶体金的紫外—可见扫描曲线572上海师范大学学报（自然科学版）2012年3．1．2用Zeta 电位分析仪对所制得的胶体金进行Zeta 电位、粒径测定对所制备的20nm 胶体金进行Zeta 电位、粒径的测定．测定结果见图2和图3．可以看出，所制备的胶体金的平均Zeta 电位是－25．0mV （图2），胶体金颗粒的平均粒径大约为20．01nm （图3）．图2胶体金的粒径分布曲线图3胶体金的Zeta 电位扫描曲线3．1．3用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描对所制备的20nm 的胶体金用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描，扫描结果见下图4，从图4中可以看出胶体金颗粒粒径在20nm 左右，而且粒径分布比较均一，形貌接近于球形，符合实验的要求．图420nm 胶体金的透射电镜图3．2胶体金免疫层析试纸条的构造图将吸水纸、NC 膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC 底板上，并切成4cm 宽的试纸条，胶体金免疫层析试纸条的构造见图5．图5胶体金免疫层析试纸条构造图3．3检测结果的判读3．3．1定性检测将待测样品滴加到检测卡的加样孔中，静置15min ，观察结果．质控线和检测线均出现红色为阳性，仅质控线出现红色为阴性，质控线不显色为无效．3．3．2定量检测判定将显色后的试纸条放入金标分析仪中进行扫描，读取T /C 比值，大于判定值为阳性［11］．672第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素3．3．3定量检测重复性检测6个浓度的HCG 样品，每个浓度检测10次，并用金标分析仪扫描读取信号T /C 值．每个浓度样品10次检测的T /C 值的标准差与平均值的比值即为变异系数．3．4直观检测灵敏度评价将HCG 样品用样品处理液稀释成10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL．如图1所示500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL 为强阳性反应；25、100mIU /mL 为弱阳性反应；10mIU /mL 无阳性反应；即肉眼可观察到的最低浓度是25mIU /mL （图6）．1阴性对照；2 10HCG 样品的浓度：10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL图6胶体金试免疫层析纸条检测HCG 结果3．5定量检测结果3．5．1HCG 标准曲线测定用金标分析仪检测不同浓度的HCG 样品，每个浓度检测3次，取3次T /C 比值的平均值．在最优实验条件下，依据检测体系中待测物浓度与金标分析仪读值T /C 比值在一定条件下呈线性关系的原理，以HCG 样品的浓度为横坐标，金标分析仪读值T /C 比值为纵坐标作图，建立胶体金检测标准曲线．当HCG 样品浓度为25 10000mIU /mL 时，HCG 的浓度与其金标分析仪读值T /C 比值之间呈良好的线性关系（图7），线性回归方程为y =0．0014x +0．6901，相关系数R 2=0．9977，线性良好．图7胶体金免疫层析试纸条检测HCG 标准品系统拟合工作曲线3．5．2试纸条检测卡重复性结果通过实验发现，同一批次的该试纸的重复性良好，可达到98%；不同批次的试纸条的重复性也可达到97%，假阳性率和假阴性率均为0．3．5．3试纸条检测卡稳定性结果经实验验证表明，该试纸条检测卡在4ħ和20ħ条件下，可保存6个月，在37ħ条件下可保存3个星期，检测结果均没有发生变化．3．6试纸条的特异性配制人促黄体生成素（hLH ）、人促甲状腺激素（hTSH ）、人卵泡刺激素（hFSH ）的抗原溶液，以处理液作为空白对照，用HCG 免疫层析试纸检测．结果显示，金标分析仪对其他常见的干扰物均未检出，说明此试纸无交叉反应现象（图8）．772上海师范大学学报（自然科学版）2012年1．空白；2．hLH；3．hTSH；4．hFSH；5．HCG图8检测结果3．7试纸的精密性取3种浓度的HCG标准品（1000、50000、80000mIU/mL）按检测方法平行测定10次，所得结果计算变异系数（CV值），分别为9．79%、8．75%、9．62%．3．8临床检测结果用试纸条检测HCG临床血清样本20份．每个浓度检测3次，取其平均值作标准曲线．定量检测结果如图9所示，得到的相关性曲线方程为y=0．0009x+1．6188，R2=0．9689，线性良好．图920例HCG血清样本检测结果4结论（1）定量检测HCG的金标免疫层析方法的建立．本研究建立了一种快速的定量检测HCG的金标免疫层析方法，此方法具有法操作简单，快速，灵敏度高等特点，克服了传统方法的很多缺点，本方法最具创新的地方就是弥补了纸层析的方法中无法定量的缺陷，利用免疫层析方法定量检测HCG的动态变化从而达到检测和用于术后复查的目的，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．（2）HCG定量检测试纸条的灵敏度和线性范围．研制出的HCG定量检测试纸条的检测灵敏度为25mIU/mL，线性范围：25 10000mIU/mL；与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激（hTSH）、人卵泡刺激素（hFSH）没有交叉反应，特异性较好；精密度符合临床应用要求，具有实际应用价值．（3）HCG定量检测试纸条的优势．本研究建立了HCG的标准工作曲线，在线性范围内可以对HCG 样品进行定量检测，经检测发现HCG的浓度与T/C比值具有良好的线性关系．相比ELISA进行定量检测时存在检测时间较长的缺点，本方法可以在15min内完成一定范围内的定量检测，时间缩短3 4h，同时在准确性、重复性、稳定性等方面均比ELISA方法更具优势．872972第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素参考文献：［1］王蜜霞，刘军涛，刘儒平，等．基于化学发光磁酶免疫的HCG检测系统研究［J］．仪器仪表学报，2010，31（2）：312－316．［2］阮雅文．血清β－HCG和P联检在异位妊娠辅助诊断的价值［J］．放射免疫学杂志，2011，24（4）：466－467．［3］CONDOUS G，KIRK E，VAN C B，et al．Failing pregnancies of un-known location：a prospective evaluation of the human chorionic gonadotrophin ratio［J］．BJOG，2006，113：521－527．［4］刘军涛，郭宗慧，刘春秀，等．免疫层析试条量化检测系统研究［J］．微纳电子技术，2007，7（8）：379－382．［5］康浴霞．异位妊娠的早期实验室诊断现状［J］．内蒙古民族大学学报，2009，15（2）：123－124．［6］张平花．浅谈异位妊娠的病因及护理对策［J］．价值工程，2011，17（3）：306－308．［7］STEPHAN L，MPSTAFA A．Laparoscopic treatment of ectopic pregnancies：a one hundred cases study European Journal of Obstetrics＆Gynecology and Reproductive Biology［J］．Clinica Chimica Acta，1991，41（3）：187－190．［8］FERRIGNO D，BACCHEN G．Surgical treatment of ectopic prehnancy Best Practice＆Research Clinical Obstetrics＆Gy-naecology［J］．Clinica Biochemistry，2009，23（4）：519－527．［9］贺昕，熊晓东，梁敬博，等．免疫检测用纳米胶体金的制备及粒径控制［J］．稀有金属，2005，29（4）：471－474．［10］STEPHAN L，MOSTAFA A E．Size and temperature dependence of the plasmon absorption of colloidal gold nanoparticles ［J］．Phys Chem B，1999，103（21）：4212－4217．［11］聂聪，王静，孙肖红，等．胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素［J］．军事医学科学院院刊，2009，33（6）：546－549．Quantitative detection of human chorionicgonadotrophin using colloid gold immunochromatographic assay YANG Xiu-mei，XING Guo-jie，XU Kuan，SHEN He-bai，ZHU Long-zhang*（College of Life and Environment Sciences，Shanghai Normal University，Shanghai200234，China）Abstract：Colloidal gold was prepared through reducing reaction of gold ions by sodium citrate．The rapid detection method was established with double-antibody sandwich assay．A rapid and quantitative detection method for human chorionic gonadotrophin u-sing colloid gold immunochromatographic assay was developed，which could accomplish qualitative detection in15min．The sensi-tivity was up to25mIU/mL．HCG sample with concentration of25mIU/mL to10000mIU/mL was measured．There were no cross-reactions with other hormones，such as hLH，hTSH，Hfsh．The colloidal gold immunochromatographic assay is rapid，specif-ic，sensitive，accurate and suitable for HCG，showing good potential in the early diagnosis of ectopic pregnancy and process moni-toring．Key words：HCG；colloid gold；immunochromatographic assay；quantitative detection（责任编辑：郁慧）。
早早孕说明书
使用前请仔细阅读说明书早早孕(hcg)检测试纸(胶体金法)使用说明【产品名称】通用名称：早早孕(hcg)检测试纸(胶体金法) 商品名称：早早孕(hcg)检测试纸英文名称：david pregnancy test 【包装规格】1人份/铝箔袋【预期用途】人绒毛膜促性腺激素(hcg)是妇女妊娠期由胎盘产生的一种糖蛋白激素，hcg可在受孕后的孕妇尿液中检验到。
在妇女受孕后一周左右hcg能增加到5至50毫国际单位/毫升(miu/ml)，10周就会增加到100,000至200,000毫国际单位(miu/ml)的高点，12周后迅速下降，维持在5,000-20,000毫国际单位/毫升(miu/ml)。
hcg的出现是在怀孕后的孕期随着胚胎的生长而变化的，这种现象是早期检测怀孕的最好标志。
早早孕检测试条是利用胶体金标记免疫层析一步法原理，可以快速、准确、简便地检测育龄妇女尿液中hcg的含量和变化，用于确定早期妇女妊娠（妇女怀孕后3-7天），从而达到优孕或早期药物终止妊娠的目的。
【检验原理】本品系用人绒毛膜促性腺激素(hcg)抗体和抗鼠igg分别固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗hcg单克隆抗体及其它试剂依次粘帖制成，应用免疫层析双抗体夹心法的原理。
测试时，尿液标本滴入试纸条加样处上，在毛细管效应下向上层析。
如是阳性，标本中的hcg 在层析过程中先与胶体金hcg 抗体结合，然后继续往上层析，随后结合物会被固定在膜上的hcg 抗体结合，在测试区（t）内会出现一条紫红色条带。
这条带是hcg抗体金标粒子的复合物与膜上hcg 抗体结合形成的。
如是阴性，则检测线区（t）内将没有紫红色条带。
无论hcg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在对照线区（c）内。
对照线区（c）内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
【主要组成成分】1早早孕(hcg)检测试纸(胶体金法) 1人份2干燥剂 1包3使用说明书4滴管(如果适用) 1个【储存条件及有效期】本试剂于密封的铝箔袋中4－30℃保存，不得冷冻。
hcg胶体金免疫层析法
hcg胶体金免疫层析法英文回答：Human Chorionic Gonadotropin (hCG) Colloidal Gold Immunochromatographic Assay.Principle:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a rapid, qualitative membrane-based immunoassay for the detection of hCG in urine or serum specimens. The test is based on the principle of competitive immunochromatography.A monoclonal antibody specific to hCG is conjugated to colloidal gold particles. When hCG is present in the specimen, it binds to the colloidal gold-labeled antibodies, forming antigen-antibody complexes. These complexes then migrate along the nitrocellulose membrane by capillary action.As the complexes pass through the membrane, theyencounter a second monoclonal antibody specific to hCG immobilized on the test line. The second antibody binds to the antigen-antibody complexes, forming a sandwich complex. The presence of hCG in the specimen is indicated by the appearance of a colored band at the test line.Materials:hCG colloidal gold immunochromatographic test device.Urine or serum specimen.Sample diluent.Test tube or cup.Procedure:1. Remove the test device from its packaging and place it on a flat surface.2. Collect a urine or serum specimen.3. Add 2 drops of the specimen to the sample well on the test device.4. Add 2 drops of sample diluent to the sample well.5. Read the results within 5-10 minutes.Interpretation of Results:Positive Result:Two colored bands appear: one at the control line (C) and one at the test line (T). This indicates that hCG is present in the specimen.Negative Result:Only one colored band appears at the control line (C). This indicates that hCG is not present in the specimen.Invalid Result:No colored bands appear, or a colored band appears only at the test line (T). This indicates that the test is invalid and should be repeated.Limitations:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a qualitative test and cannot be used to determine the concentration of hCG in a specimen.The test may not detect all cases of pregnancy. A negative result does not rule out pregnancy. If pregnancyis suspected, a quantitative hCG blood test should be performed.The test may be affected by certain medications or medical conditions.中文回答：人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 胶体金免疫层析法。
胶体金免疫层析技术实验
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
质检线
吸收垫
背衬
测
定
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测定时将试纸条下端浸入液体标 本中，下端吸水材料即吸取液体 向上端移动，流经C处时使干片 上的免疫金复合物复溶，并带动 其向膜条渗移。
测
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定
若标本中有待测特异抗原，即可 与免疫金复合物中的抗体结合， 此抗原抗体复合物流至测试区即 被固相抗体捕获，在膜上显出红 色反应线条（T）。
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实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
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简介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性 腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表 面抗原（HBsAg）等检测。
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胶体金快速诊断技术的特点
简捷快速：操作简单，一般只要5-10min 就 会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h， PCR 需要时间更长。
结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼 很容易判断。
特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标 记，这决定了它具有很好的特异性。
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简介
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠） 的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带 负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳 定的胶体状态，故称胶体金。
简 介 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
人绒毛膜促性腺激素测试条_胶体金免疫层析法_的性能评价_张新梅
文章编号：1006-6586(2008)04-0019-04 中图分类号：R446 文献标识码：A 收稿日期：2007-12-21作者简介：张新梅，工程师；张宏，工程师，体外诊断室主任；章兆园，国家食品药品监督管理局北京医疗器械质量监督检验中心主任人绒毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonado-tropin, HCG)是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，由α链和β链以非共价键结合形成。
在正常人体内含量非常少，但在受孕后第4d 便可开始分泌,并逐渐升高。
目前通过检测HCG 以辅助诊断早期妊娠的检验方法有多种，其中胶体金免疫层析法(Colloidal Gold Immunochromatographic Assay ，GICA)因具有快速，简便，易于贮存，不需特殊设备，便于家庭使用等特点而应用最广泛。
国外研究机构已有对市场上销售的人绒毛膜促性腺激素测试条(胶体金法)进行性能评价的报道1，美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration, FDA)也发布了相关的指导性文件2，根据产品的分析性能及使用说明对制造商提出了相应的技术要求，而DOI:10.15971/ki.cmdi.2008.04.005标准检测Standard and T esting厂家之间缺乏统一的尺度和衡量标准，由此我们分别从灵敏度，特异性，阴性符合率，阳性符合率，HOOK 效应和稳定性等几个重要技术指标来综合分析国内7个厂家生产的HCG测试条。
1 材料和方法(1) 材料：人绒毛膜促性腺激素标准品(22.8 IU/mL)：批号为150555-9003；人黄体生成激素标准品(530 mIU/mL)：批号为150531-0211；人促卵泡生成激素标准品(450 mIU/mL)：批号为150533-0212；人促甲状腺激素标准品(600 µIU/mL)：批号为150530-0312，以上标准品均为冻干粉，均购自中国生物制品检定所。
实验一 免疫层析快速诊断技术(医学免疫学)
人类医学 各 级 医 院 , 血 传染病（乙肝五项,HIV, SARS等）
站,CDC,防疫站,诊 标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋
断中心；家庭自检；白等）
商检系统；边检口 岸；公安系统.
女性妊娠
HCG(早孕)
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）
农牧业
畜牧兽医站, 商检 传染病（禽流感,链球菌等） 系统,边检口岸,农 病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等） 牧类院系和研究所
阳性 阳性
阴性
临床意义：
1、孕妇妊娠1周后，尿中可出现较多HCG，均可 呈阳性（+）反应，达到妊娠早期诊断的目的
2、绒毛膜上皮癌、水泡状胎块和睾丸畸胎瘤患者 的尿中HCG可明显增高，故也可呈阳性（+）反应， 但结合临床可予以鉴别。
注意事项
1. 强阳性尿液中 HCG 含量较多 , 因此质控线可能不出现 或极浅淡 , 而仅在反应区显示淡紫色条带。 2. 应避免试纸条一端插入尿液过深或过浅 , 插入时间过长 或过短也会影响试验结果。
胶体金（Colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4） 的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合
成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为
一种稳定的胶体状态。
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique） 是 以 胶 体 金 作 为 示 踪 标 记 物 应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
实验一
胶体金试纸条检测技术
胶体金试纸条检测技术
【实验目的】
掌握双抗体夹心法测定尿 HCG 的原理、操作方法及结果判定方法。
免疫层析法检测原理分类介绍.
免疫层析法检测原理分类介绍作者：佚名文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司点击数：88 更新时间：2005-10-16双抗体夹心·以 hCG试剂为例金标为鼠源性抗β-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。
妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。
当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位置hCG的β链和单抗β-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的α链和多抗α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。
当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。
当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。
该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG。
测HbsAg的HbsAg产品的检测原理是双抗体夹心。
竞争反应原理·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白）金标为鼠源性抗体Morphine单抗和胶体金的复合物，T线（为取得较强的免疫应答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA。
C 线包被羊抗鼠抗体。
当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。
当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试纸(胶体金免疫层析法)产品技术要求jinwofu
人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试纸（胶体金免疫层析法）适用范围：用于体外定性检测人尿液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）的含量。
1.1 产品型号/规格：笔型/卡型/条型。
完整最小包装规格1人份。
1.2 主要组成成分：本品系由包被有抗HCG单克隆抗体及抗鼠IgG的固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗HCG单克隆抗体包被的玻璃纤维膜、样本垫及吸水纸组成。
2.1 物理性状2.1.1 外观：检测HCG试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。
2.1.2 宽度：检测HCG试纸的宽度应≥2.5mm。
2.1.3 移行速度：液体移动速度应不低于10 mm/min。
2.2 最低检测限用HCG国家标准品进行检测，应不高于25 mIU/ml。
2.3 特异性：2.3.1 阴性特异性：分别用含500 mIU/ml人促黄体生成素（hLH）、1000 mIU/ml 人卵泡刺激素（hFSH）和1000 μIU/ml人促甲状腺素（hTSH）的0 mIU/ml人绒毛促性腺激素（HCG）液进行检测，结果应均为阴性。
2.3.2 阳性特异性：分别用含500 mIU/ml hLH、1000 mIU/ml hFSH 和1000 μIU/ml hTSH的25 mIU/ml HCG液中进行检测，结果应均为阳性。
2.4 重复性取同一批号的HCG试纸10支，以浓度为25 mIU/ml的HCG液测定，反应结果一致，显色度均一。
2.5 批间差取3个批号的HCG试纸，对重复性进行检测，3个批号HCG试纸的检测结果都应符合2.4项的要求。
2.6 稳定性试剂盒4～30℃避光保存，有效期为24个月，对到效期后的试剂盒，分别检测2.1～2.4项，结果应符合各项的要求。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试剂(胶体金免疫层析法)产品技术要求dekangrun
人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试剂（胶体金免疫层析法）
适用范围：适用于体外定性检测人尿液中的人绒毛膜促性腺激素。
1.1 型号/规格：检测卡1人份/袋。
1.2 主要组成成分：①检测试剂：由胶体金垫（胶体金标记鼠源β-HCG单克隆抗体）、硝酸纤维素膜（C线包被羊抗鼠IgG多克隆抗体，T线包被鼠源α-HCG 单克隆抗体）、样品垫、吸样垫和PVC板组成；②干燥剂；③滴管。
2.1 外观
检测试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。
2.2 膜条宽度
膜条宽度应不小于2.5mm。
2.3 液体移行速度
液体移行速度应不低于10mm/min。
2.4 最低检测限
应不高于25mIU/ml。
2.5 特异性
2.5.1 阴性特异性：分别用含500mIU/ml hLH、1000mIU/ml hFSH和1000μIU/ml hTSH的0mIU/ml HCG液进行检测，结果应均为阴性。
2.5.2 阳性特异性：分别用含500mIU/ml hLH、1000mIU/ml hFSH和1000μIU/ml hTSH的25mIU/ml HCG液进行检测，结果应均为阳性。
2.6 重复性
取同一批号的HCG试纸10支，以浓度为25mIU/ml的HCG液测定，反应结果应一致，显色度均一。
2.7 批间差
取三个批号的HCG试纸，对重复性进行检测，三个批号测试条的结果都应符合2.6的要求。
2.8 稳定性
4℃～30℃放置12个月后，分别检测2.1～2.6项，结果应符合2.1～2.6各项的要求。
胶体金免疫层析试验.ppt
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同