桑叶多糖提取纯化工艺初探

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药桑叶多糖提取工艺优化及其降血糖活性研究

ｉｔ
ＨＡＮＡｉｚｈｉ，ＷＡＮＧＬｉｊｕｎ ’ ，ＪＩＡＱｉｎｇｈｕａ，ＷＡＮＧＺｉｋｕｎ，ＭＡＬｉｎｇ，ＹＡＮＧＬｉｎｇ。
ｍｉｚｅｄｗｉｔｈＢｏｘ — Ｂｅｈｎｋｅｎｅｘｐｅｉｍｅｒｎｔｓ．ＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｒｏｆｍＭ．ｎｉｇｒａｌｅａｖｅｓａｇａｉｎｓｔ一ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｐ－ＮＰＧ
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｅｘｔｒａｃｉｔｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｒｏｍＭｏｒｕｓｎｉｇｒａｌｅａｖｅｓａｎｄ
摘要：采用Ｂｏｘ，Ｂｅｈｎｋｅｎ试验设计对药桑叶多糖提取条件（液料比、提取温度、提取时间）进行优化，并用对硝基苯．Ｏ／．吡喃葡萄糖
苷（ｐ — ＮＰＧ）法对药桑叶多糖进行Ｏ／．葡萄糖苷酶抑制活性测定。结果显示，药桑叶粗多糖提取最佳工艺为：在液料￣Ｐ．２５：１（ｍＬ：ｇ），提取
ｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ９０℃，ｔｉｍｅ３ｈａｎｄｌｉｑｕｉｄ－ｓｏｌｉｄｒａｔｉｏ２５：１（ｍｌ：曲．Ｔｈｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｒｅｓｕｌｔｓｏｆｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｓｈｏｗｅｄｈａｔｔｔｈｅｃｒｕｄｅ

桑叶多糖降血糖实验作文

桑叶多糖降血糖实验作文桑叶多糖对糖尿病有明显的治疗作用，因此从桑叶中提取、纯化得到桑叶多糖并研究其药理学活性，对研制治疗糖尿病的新药具有重要的学术意义和实用价值。

利用热水浸提法从桑叶中提取多糖，进行纯化精制，以提高多糖含量，并用絮凝纯化后得到的桑叶多糖进行降血糖活性方面的研究。

首先，采用热水浸提法提取桑叶多糖，分别以不同的提取时间，提取温度，提取液pH、料液比（桑叶质量g：水体积mL）和提取次数为单因素，考察各因素对桑叶多糖得率的影响，并采用正交实验优化了桑叶多糖的水提取工艺，使总多糖的得率达2.89%；在醇沉工艺中，考察了乙醇浓度对醇沉效果的影响，确定最佳醇沉工艺条件，得到的醇沉物多糖含量为18.44%。

在除蛋白工艺中，考察了盐酸法和三氯乙酸法对多糖含量和保留率的影响，发现先用三氯乙酸调至pH5，再用盐酸调节pH至3时，多糖含量和保留率达到最高，分别为32.59%和85.42%。

其次，提取液采用单因素实验优化大孔树脂纯化桑叶多糖工艺，得出最佳工艺条件，多糖含量42.16%，多糖保留率为81.54%。

另外，利用壳聚糖絮凝剂纯化桑叶多糖，采用单因素实验和响应面实验优化得出了桑叶多糖的最佳絮凝工艺。

在此工艺下，多糖保留率达90%以上，多糖含量最高可达61.59%。

通过对壳聚糖絮凝纯化后多糖样品组分测定，发现样品中无机小分子含量很高，达到23.88%，其次是蛋白含量（7.83%）。

最后，通过建立四氧嘧啶糖尿病小鼠模型，对壳聚糖絮凝纯化后的桑叶多糖（纯度为59.22%）进行药理学活性实验，结果表明，桑叶多糖能够非常有效地降低糖尿病小鼠的血糖值，其中高剂量组的血糖抑制率达到81.14%，而且能够有效降低小鼠血清和肝脏中的MDA含量，效果优于二甲双胍阳性对照组，具有明显的降血糖和抗氧化协同作用。

研究为天然桑叶多糖的提取与纯化工艺路线的选择提供了必要的基础，为桑叶多糖的降血糖活性提供了实验依据。

桑叶多糖提取工艺的研究

大的意义。
糖粗提液，加入活化过的粉末状活性炭除去色素。加入９乙醇放冰箱１ｈ沉淀，将醇沉液抽滤，干燥得５２
暗黄色的粗多糖制品。１．标准曲线的绘制．２２１．．标准溶液的制备．２１２精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品４ｍｇ置于０１０ｍｌ容量瓶中以蒸馏水定容至刻度，配制成００００ｍｇｍ．／ｌ的储备液，分别精密吸取０２．、０６４．、０４．、０８．、１ｍｌ于试管中，分别加水补至２ｍ，得．、１０．２．ｌ０系列对照品溶液。
桑叶多糖提取工艺的研究
刘树兴，王维，魏丽娜（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西成阳７２８）１０１
摘要：本试验利用水浸提法从桑叶中提取桑叶多糖。利用正交试验确定出多糖提取的最优化条件，用苯酚一酸法测定多糖的硫
含量，通过三氯乙酸法除去多糖中的蛋白质。研究结果表明，桑叶多糖的最佳提取条件为：水浴温度Ｉ０Ｃ、ｐｌＯ￣ＨＩ、料液比（桑叶：
１实验方法．２
１．．最大吸收峰的确定．２２２
取１．．．２１中的标准液，用苯酚硫酸显色，分别在２
Ａｂｓｒｃｓ：ＴｈｉａｅｔｄｅｈｂｔａｔｏｌｓｃｈｒｄｒｍｈｏｓａｂｅｖｓｂｔＴｈｅｐｙｓｃａｉｏｎｅｔｗａｔａｔｓｐｐｒｓｕｉｄｔｅａｓｒｃｉｏｆｐｙａｃａｉｅｆｏｔｅＭｍｌａｌａｅｙｗａｅｏｎｏｌａｃｈｒｄｅｃｔｎｓｄｅｅｍｉｅｂｅｍｅｈｄｏｆｐｅｏｌｓｌｕｒｃａｉ．Ｔｈｏｅｎｉｐｙｓｃｈｒｄｓｅｏｅｙｔｉｈｌｒａｅｉｃｄ．ｅｒｓｌｒｈｏｏｌｔｒｎｄｙｔｔｏｈｎ —ｕｆｉｃｄｈｅｐｒｔｉｎｏｌａｃａｉｅＷａｒｍｖｂｒｃｏｏｃｔａｉＴｅｕｔｏｆｏｔｇｎａｄｃｈ

桑叶中多糖提取分离工艺的研究

桑叶中多糖提取分离工艺的研究桑叶多糖提取分离。

目的：优选桑叶多糖提取分离最佳工艺。

方法：比较稀酸、稀碱、蒸馏水3种提取方法，采用L9（34）正交试验，比较了不同蛋白去除法对多糖提取分离的影响。

结果：桑叶多糖的最佳提取工艺为用10倍蒸馏水在70℃下提取2次，每次1.5h。

醇沉分离最佳工艺优于传统的Savage法。

结论：优选的桑叶多糖提取分离工艺稳定可行。

标签：多糖；提取；分离工艺1材料和仪器752型紫外外-可见分光光度计，R-201旋转蒸发器，pHS-3C精密pH计，ALPHA1-2真空冷冻干燥机，FA/IA型电子天平。

2方法和结果2.1原料预处理：将桑叶粉碎、过筛，加入一定体积95%乙醇，使溶液中乙醇的体积分数达到80%，回流4h，间隙搅拌。

回流完毕，离心分离取滤渣，滤渣风干，备用。

2.2桑叶多糖的测定[3]2.2.1对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖对照品（105℃干燥至恒重）100mg，置于100mL量瓶中，加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀。

精密吸取10mL置于100mL量瓶中，加水稀释至刻度，即得。

2.2.2标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖对照品溶0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，用蒸馏水补到1.00mL。

分别加入4.00 mL0.2%蒽酮-硫酸试剂，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。

自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，自来水冷却，室温放置10min左右。

以同样处理的重蒸水为空白，于620nm处测定。

2.2.3測定：精密称取桑叶多糖提取物50mg，加水适量使溶解，蒸馏水定容至50ml量瓶中，摇匀。

精密吸取1 mL，按2.2.2 项下操作，测定吸光度值，计算多糖的质量分数。

2.3浸膏得率的测定：采用重量法。

精密量取等量的提取液（m），置于已干燥至恒重的蒸发皿中（m0），水浴浓缩干，于105℃干燥3h，移至干燥器中，冷却至室温，迅速精密称定质量（mi），按公式（mi-mo）/m×100%计算浸膏得率。

一种桑叶粗多糖的纯化方法[发明专利]

专利名称：一种桑叶粗多糖的纯化方法
专利类型：发明专利
发明人：张文清,夏玮,徐志珍,张玲帆,张姝,张黎伟,曾类文申请号：CN201510843673.8
申请日：20151126
公开号：CN105237651A
公开日：
20160113
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种桑叶粗多糖的纯化方法，其具体步骤为：(1)将桑叶粗多糖制品用水溶解，至粗制品的终浓度为20-30mg/ml，过离子交换柱，先用水洗脱，然后用盐溶液洗脱；(2)将步骤(1)的盐洗脱液超滤，至浓缩液中多糖质量浓度为15-20％，超滤膜截留分子量为5000，浓缩液中加入体积浓度为95～100％的乙醇水溶液至乙醇体积分数为70～80％，搅拌、静置12～18h后，离心，收集沉淀物。

(3)取步骤(2)所得的沉淀物，先以无水乙醇洗涤后经减压低温干燥、粉碎，得到桑叶多糖精制产品。

本发明制备得到高纯度桑叶多糖，产品中多糖含量在60％以上。

申请人：华东理工大学,云南林缘香料有限公司
地址：200237 上海市徐汇区梅陇路130号
国籍：CN
代理机构：上海三和万国知识产权代理事务所(普通合伙)
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桑叶多糖PMP12的分离纯化及结构初步分析

ＨＰＣ，ＩＨ－ＬＲ，ＮＭＲ，ＳｔｅｒｄｔｎａｄｕｏｉｃｄｒｄｃｉｎａｄＳｎｍｉｄｇａａｉｎｒｎｃａｉｅｕｔｎＯｏ．ＲｅｕｔＰｈｏｏｓｌｓ：ＭＰｉｍａｅｕ１ｓｄｐ２
ＰＭＰ１ｒｍｌｅｒｅｖｓＭｅｈｏ：ＭｕｂｅｒｅｖｓｗｅｅｅｔａｔｄｂｏｌｎｔｒｆｏＭｕｂｒｙｌａｅ．２ｔｄｓｌｒｙｌａｅｒｘｒｃｅｙｂｉｇｗａｅ．Ｔｈｅｐｌｓｃｈ－ｉｏｙａｃａｒｄｅｉｈｌａｅｗａｒｃｐｔｔｄｆａｔｏａｌｙａｃｈ１ｉｎｔｅｆｔｔｓｐｅｉｉａｅｒｃｉｎｌｂｌｏｏ．ＴｈｒｔｉｎｔｅｐｏｕｔｗａｅｖｄｂｉｒｙｅｐｏｅｎｉｈｒｄｃｓｒｍｏｅｙＴＣＡ
［ｓｒｃ］ＯｂｅｔｅｏｓｄｈｓｌｉｎｔｅｃｍｏｉｏｎｈｒｃｅｚｔｎｏｏｙａｃａｉｅＡｂｔａｔｊｃｉ：Ｔｔｙｔｅｉａｏ，ｈｏｐｓｉｎａｄｃａａｔａｏｆｐｌｃｈｒｖｕｏｔｔｉｒｉｓｄ
糖苷键连接的阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖醛酸。结论：定分析了桑叶多糖ＰＰ２的组成和初步结构，测Ｍ１为桑叶多糖
的进一步研究提供依据。［关键词］桑叶；多糖；分离纯化；结构分析［中图分类号］Ｒ８．１２２７［文献标志码］Ａ［文章编号］１７ — ７３２１）２— １３— ４６１７８（００００５０

桑叶多糖的分离纯化及其抗凝血活性的研究

糖、阿拉伯糖、木糖和甘露糖等组成．体外抗凝血活性检测显示５种桑叶多糖组分均能延长活化部分凝血活酶时间（ａｅｔｉｖａｔｅｄｐａｒｔｉａｌｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎｔｉｍｅ，ＡＰＴＴ）和凝血酶时间（ｔｈｒｏｍｂｉｎｔｉｍｅ，ＴＴ）、而对凝血酶原时间
（ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎｔｉｍｅ，ＰＴ）影响不显著，说明它们是通过影响内源性途径或共同途径而发挥抗凝血作用ｆ与对照
相比，ＭＰＳ－２ｂ在试验浓度范围内对ＡＰＴＴ和ＴＴ的效果达到极显著，表明ＭＰＳ－２ｂ有潜力开发成抗凝血活
瘤、抗氧化等多种功效，因此，开发利用桑叶多糖具有理论价值和实际意义．彭延古［６等发现桑叶提取物具
有抗凝血活性，其抗凝作用主要是通过抑制凝血酶水解纤维蛋白原转变为纤维蛋白而实现的．包立军［７］等
研究显示桑叶中的抗凝血活性主要集中在桑叶的水提液中，能够显著延长ＡＰＴＴ值，虽然证明其抗凝血
成分是一种多糖组分，但其并没有将桑叶多糖纯化和有针对性地进行抗凝血活性研究．到目前为止，国内外研究桑叶多糖的降血糖活性的报道较多，而对桑叶多糖的不同组分的抗凝血研究鲜有报道．本研究是从桑叶中分离纯化出不同的桑叶多糖组分，测定它们的分子量和单糖组成，研究它们在体外

桑叶、桑枝、桑椹多糖的提取及含量测定

桑叶、桑枝、桑椹多糖的提取及含量测定目的提取纯化桑叶、桑枝、桑椹多糖并测定其含量。

方法用水提醇沉法提取桑叶、桑枝、桑椹多糖。

苯酚-硫酸紫外分光光度法测定桑叶、桑枝、桑椹多糖的含量。

结果果实桑椹中多糖含量最多，其次为桑叶，桑枝中多糖含量较少。

结论通过测定比较桑树不同药用部位的多糖含量，以充分开发利用桑树这一药用资源，同时为深入开发桑叶、桑枝、桑椹新资源提供有利的实验数据。

标签：多糖；含量；提取多糖在自然界中分布十分广泛，大多数高等植物、微生物、地衣、海藻和动物体内均有丰富的多糖。

多糖作为初级代谢产物，不仅具有结构、支持与保护、能量来源和解毒作用等生物学功能，而且大多数具有明显的药理活性[1～3]。

桑叶、桑枝、桑椹为桑科Moraceae植物桑Morus alba L.的干燥叶，嫩枝和果实。

桑叶始载于《神农本草经》，味苦、甘，性寒，归肺、肝经，具有疏风清热、平肝明目的功效；历代中医药书籍中记载桑叶能够治疗消渴症，现代药理研究表明桑叶有效成分之一桑葉多糖具有显著的降血糖作用。

其所含化学成分种类较多，主要有多糖、黄酮类化合物，现代药理学研究表明桑枝具有抗真菌活性、抗炎、降血糖等作用。

桑椹子为桑的果穗，又名桑果、桑实、桑枣等。

质油滑，气微，味微酸而甜。

我国许多地区都有分布，中医用于治疗肝肾阴亏、消渴、耳鸣、关节不利等症。

桑叶、桑枝、桑椹作为中医常用药有如此多的功效，目前有关桑树单个药用部位的多糖提取和含量测定略见报道。

本实验采用水提醇沉法提取桑叶、桑枝、桑椹多糖。

苯酚-硫酸比色法对其三者多糖的含量进行测定。

通过测定比较桑树不同药用部位的多糖含量，以期充分开发利用桑树这一药用资源，同时为深入开发桑叶、桑枝、桑椹新资源提供有利的实验数据。

1材料、仪器及试剂1.1原料桑叶、桑枝、桑椹的干燥叶，嫩枝和果实。

购于杭州市老百姓大药房。

1.2仪器SPC22型紫外分光光度计，HH-S型电热恒温水浴锅，超导热风干燥箱，循环水式多用真空泵，分析天平，旋转蒸发仪。

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桑叶为桑科植物桑的叶。历代中医药书籍中有桑叶能治疗消渴症的记载。近代医家也常将桑叶用于治疗糖尿病，且得到满意疗效。现代药理试验证
１材料、仪器和试剂
材料：桑叶：采于遵义地区虾子镇的蚕桑，试
明，其多糖部分对四氧嘧啶糖尿病小鼠有显著的降
血糖作用 … 。因此提取其多糖成分制成各种中成药
剂：葡聚糖（Ｓｍ公司）ｉａｇ，苯酚、硫酸及其它试
剂均为ＡＲ级。
的前景十分广阔．。赵俊等采用水提法提取桑叶中的多糖物质，产量为２６／０ｇ桑叶。但是目前．ｇ１０桑叶多糖纯化工艺研究较少，产品纯度太低成为进步研究其药理活性的瓶颈。因此我们对桑叶多糖提取纯化工艺优选进行了研究。
ＬｕＬｎｉａＸｉｅ２ＪｎａＷｉｉＮｉｇ
（．ｉＯｃｄｍｆＦｒｓｙｕｙｎ，ＧｉＵ５００；．ＥｓＣｉｎｖｒｔｏＳｉｃｎｅｈｏｏｙｈｎｈｉ０２７）１ＧｕｚＵＡａｅｙｏｏｅｔ，Ｇｉｇｕ出Ｏ５０５２ａｔｈｎＵｉｓｙｆｃｅｅａｄＴｃｎｌ，Ｓａｇａ２０３ｈｒａａｅｉｎｇ
上海２０３０２７）
（．贵州省林业科学研究院１
贵阳５００；２华东理工大学５０５．
摘
要
本文对桑叶多糖提取工艺进行了优化。水提工艺研究采用正交实验，对提取时间、提取次数和溶
媒倍数等因素进行考察，确定多糖水提工艺法的最佳条件为：加水倍数２：ｌ５、提取时间为６ｒｎ０ｉ、提取次数为ａ
一
仪器：Ｉ５０台式离心机（．Ｌ一．上海市离心机械研究所）Ｚ一００型真空干燥箱（；ＤＦ６２上海精宏实验设备有限公司）；Ｒ一２１型旋转蒸发仪（海０上申科机械研究所）５；７２型分光光度仪（上海分析仪器厂）ＥＨＥ０电子天平（；ＭＴ￣ＲＡ２Ａ梅特勒一托
ｏｔｍｃｎｉｏｓａｅＶＭ＝２：ｌａｄ６％ｏｌｏｏｏｔｎｐｍｕｏｄｔｎｒ／ｉｉｎ０ｆａｃｈｌｃｎｅＬ
Ｋｅｒｙｗｏｄｓ：Ｐｏｙａｃａｉｅ；Ｍｕｂｒｙｌａｅｌｓｃｈｒｄｌｅｒｅｖｓ；Ｅｘｒｃｉｎｔｃｎｌｇｔａｔｅｈｏｏｙ；Ｏｒｈｇｎｌｔｓｏｔｏｏａｅｔ
ｆｌａｅ，６ｍｉｕｅｆｘｒｃｏｕａｏｎｄ３ｔｓｏｘｒｃｉｎＦｒｔｅａｃｈｌｘｒｃｎｔｏｓｈｅｏｄｗｔｒ０ｎｔｓｏｔｔｎｄｒｔｎ，ａｍｅｆｅｔｔ．ｏｌｏｏ —ｅｔａｔｇｍｅｄ，ｔｅａｉｉｉａｏｈｉｈ
收稿日期：２１０２００— ６— ７
－
ｋ本文属贵州省科技厅社发项目黔科合２０ＮＧ０８号中的部分研究内容。０４Ｙ５
作者简介：刘兰（９０。女．研实员，籍贯贵州金沙，０４１８一）２０年毕业于贵州大学林学院林学专业。同年１月分配到贵州省林业科学研Ｏ究院工作。．贵州林 Nhomakorabea业
科
技
３８卷
利多仪器上海有限公司）。
备 ” 项下操作，测定吸光度并计算多糖含量。２２桑叶多糖提取工艺优选．
２２１水提条件的确定．．
２实验方法
２１多糖含量测定．２１１多糖标准曲线制作．．
Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ｍｅｈｄｏａｈｇｎｌｅｔａｍｐｏｅｔｄｎｐｉｚｅｅ￣ｃｏｒｃｓｆｏｙａｃａｉｅｔｏｆｏｏｏａｓｓｅｌｙｄｔｓｙａｄｏｔｔｗｏｕｍｉｅｔｘａｔｎｐｏｅｓｏｌｓｃｈｒｈｉｐｄ
３次。醇沉工艺通过正交实验考察浓缩比例和乙醇含量两个因素，确定醇沉工艺条件为Ｖ浓缩液／桑叶ｍ＝２：１、乙醇含量为６％。ｏ
关键词桑叶多糖；正交试验；提取工艺文献标识码：Ｂ中图分类号：Ｔ３１ＯＱ５．１
ＳｕｙｏｈｘｒｃｉｎＴｅｈｏｏｙｏｏｙａｃａｉｅｆｏＭｕｂｒｙＬｅｖｓｔｄｎｔｅＥｔａｔｃｎｌｇｆＰｌｓｃｈｒｄｒｍｌｅｒａｅｏ
第３８卷
第３期
贵州林业科技
ＧｕｚｏｏｅｔｙＳｉｎｅａｄＴｅｈｏｏｙｉｈｕＦｒｓｒｃｅｃｎｃｎｌｇ
Ｖ０８，Ｎｏ３Ｌ３．
Ａｕ．，２１ｇ００
２１８月００年
桑叶多糖提取纯化工艺初探
刘兰夏玮２姬宁
ｆｍｌｅｒａｅ．ｒｍｕｂｒｌｖｓｏｙｅ
一
ｅｒｓｌｓｏｅａｅｏｔｍｘｒｃｉｎｃｎｉｏｓｆｒｗａｅｅｕｔｈｗｄｔｔｈｐｉｈｔｍｕｅｔｔｏｄｔｎｔｒ—ｅｔｃｎｔｏｓ８ｅ２ａｏｉｏｘｒｔｇｍｅｈａｉｄｒ５