饲料中沙门氏菌测定方法确认表
饲料产品及饲料添加剂中沙门氏菌的检测
化 乙锭 （ 使其终浓度达 到 ０ ． ５“ ｇ ／ ｍ１ ） 混匀 ， 倒 人 已插 上 梳 子
的胶 槽 内 。 待凝 固后 ， 转 入 电泳 槽 中 ， 在 每 个 泳 道 中加 入 ８“ １
・
１ Ｏ ・Leabharlann 《 上 海 畜 牧 兽 医通 讯 》 ２ ０ １ ３年 第 ２期
饲 料 产 品 及 饲 料 添 加 剂 中 沙 门 氏 菌 的 检 测
狄 元 冉 董 鹏 李金 磊 高延玲 邱 富 娜 刘 金 娥
（河 南 省 饲 料 产 品质 量 监 督 检 验 站 河南 郑 州
４ ５ ０ ０ ０ ８）
【 摘 要 １ 目的 ： 检 测 饲 料 及 饲 料 添 加 剂 中 沙 门 氏 茵 的 污 染情 况 。 方 法 ： 利用Ｐ Ｃ Ｒ技 术 对 动 物 源 性 饲 料 产 品 、 植 物
性 饲料 产 品 、 微 生 态制 剂 以及 酶 制 剂 等共 计 ２ ０ ７批 样 品 进 行 了沙 门氏 茵 的 检 测 。结 果 ： 共检 出沙 门氏 茵 ８ 株 ， 其 中动 物 源 性 饲 料 检 出率 为 １ １ ． ４ ， 微 生 态 制 剂 原料 检 出率 为 １ １ ． １ ， 微 生 态 制 剂检 出率 为 １ Ｏ ， 酶 制 剂 检 出率 为 ８ ． ３ ， 配 合 饲 料 检 出率 为 １ ． ２ ５ ， 植 物 源 性 饲 料 和 饲 料 粉 尘 检 出率 为 ０ 。结 论 ： 沙 门 氏 菌 在 饲 料 产 品 及 饲 料 添 加 剂 中 的 污
大肠杆菌 和梭菌 属 相 比， 沙 门 氏 菌 是 饲 料 中 的 主 要 危 害 菌 群 。 国 内 已有 多 次报 道 ， 因 沙 门 氏菌 污 染 的 饲 料 而 导 致 畜 禽
国家食品沙门氏菌检测(内含简图很有用)
国家食品沙门氏菌检验前言沙门氏菌是肠杆菌科中一种重要的人畜共患病原菌，革兰氏阴性，是细菌性食物中毒的重要致病菌。
血清型种类繁多，目前全世界已分离出2523 个血清型，我国已发现216个[1].。
与人类疾病有关的血清型主要集中于A~E 群，包括伤寒沙门氏菌、（甲、乙、丙型）副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等，其中以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及猪霍乱沙门氏菌最为常见。
它不仅能导致鸡白痢、鸡伤寒、副伤寒、仔猪副伤寒等动物疾病，还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒[2]。
根据国际惯例, 要求对易受沙门氏菌污染的食品进行分类管理, 以使大多数食物不含沙门氏菌, 从而有效预防沙门氏菌引发的各种疾病。
20 世纪50 年代以来,国内外学者进行了大量的研究, 从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法, 并在实践检验中不断取得新进展。
这些方法包括酶联免疫吸附试验法、免疫磁珠法、免疫荧光标记法、噬菌体裂解试验法、核酸探针法等[3]。
本实验采用的是传统标准检测方法，包括前增菌,选择性增菌,选择性平板分离,生化试验,血清学分型鉴定五个步骤。
1材料与方法1.1设备和材料1.1.1 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃1.1.2 拍击式均质器。
1.1.3 电子天平：感量0.1g。
1.1.4 无菌锥型瓶：容量500ml,250ml。
1.1.5 微量移液器及吸头。
1.1.6 无菌培养皿：直径90mm。
1.1.7 无菌试管：3mm×5mm、10mm×75mm。
1.1.8 无菌毛细管。
1.1.9 三角烧瓶。
1.2培养基和试剂1.2.1缓冲蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g，NaCl 5g，Na2HPO4`12H2O 9g，KH2PO41.5g,加蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三瓶，121℃，灭菌20min。
沙门氏菌方法验证报告
沙门氏菌方法验证报告一、引言沙门氏菌是一种常见的食物中毒病原菌，其感染会导致严重的胃肠道疾病，给人们的健康带来了威胁。
因此，对食品中的沙门氏菌进行快速、准确的检测非常重要。
本报告旨在介绍沙门氏菌方法验证的步骤和结果，以及验证的可靠性和适用性。
二、实验步骤2.1 样品准备1.收集食品样品，如鸡肉、鸡蛋等，确保样品来源真实可靠。
2.根据实验要求，将样品切割成适当大小的块状。
2.2 沙门氏菌培养1.取一定数量的样品，加入适量生理盐水中，进行均匀悬浮。
2.取适量悬浮液接种于沙门氏菌选择性富营养培养基上。
3.在37摄氏度下培养24小时，观察是否出现典型的沙门氏菌菌落。
2.3 DNA提取1.从培养基中取出沙门氏菌菌落，加入适量脱离剂，使细菌细胞破裂释放DNA。
2.使用离心机离心，将上清液转移到新的离心管中，加入适量蛋白酶K，进行蛋白酶消化。
3.加入适量异丙醇，沉淀DNA。
4.用去离子水洗涤沉淀，最终得到纯净的DNA样品。
三、实验结果3.1 沙门氏菌菌落观察在沙门氏菌选择性富营养培养基上进行培养后，观察到了典型的沙门氏菌菌落。
菌落呈灰白色，表面光滑，边缘整齐。
3.2 DNA提取结果经过DNA提取，成功获得了纯净的沙门氏菌DNA。
通过电泳检测，可见DNA条带清晰，无明显的降解或污染。
3.3 PCR扩增结果使用沙门氏菌特异性引物进行PCR扩增，得到了预期大小的DNA产物。
通过对PCR 产物进行测序，确认了其与沙门氏菌基因组序列完全匹配。
四、结果分析通过本实验的步骤，我们成功地从食品样品中分离出沙门氏菌，并获得了可靠的DNA提取和PCR扩增结果。
这表明所采用的方法能够准确、快速地检测沙门氏菌的存在。
五、验证的可靠性和适用性本实验使用的沙门氏菌方法验证步骤经过严格设计和实验，结果准确可靠。
该方法具有以下优点： 1. 简单易行：实验步骤简单，不需要复杂的设备和试剂。
2. 高效快速：从样品到结果的整个过程只需要24小时左右。
饲料中沙门氏菌的检测
增 菌 液 使 其 充 分 混 匀 ，混 匀 后 取 １ ０毫 升 前 增 菌 液 接 种 与 １ ０毫 升 四 硫 磺 酸 钠 煌 绿 增 菌 液 （ ０ ＴＴＢ） ， 中 ３￣ 温 培养 箱培养 ２ ７Ｃ恒 ４小 时 。 另 取 前 增 菌 液 １ ０毫
糖 葡 吲 甲 摘 要 ： 实验 通过 常规 分 离培 养 鉴 定技 术 ， 某 脂 ， 发 酵 管 ， 萄 糖 蛋 白 胨 水 ， 哚 试 剂 ， 基 红 本 对 饲料 厂 随机 抽取 的 ３ 鱼粉 样 品进行 了沙 试 剂 ， ０份 Ｖ－Ｐ试 剂 ， 沙 门 氏菌 因 子 血 清 等 。 ， 门氏 菌的分 离鉴定； 结果从 这 些份 样 品 中 １３ 实 验 方 法 １３ １ 前 增 菌 取 所 采 样 品 每 份 ２ ．． ５克 进 行 乳 分 离到 四株 沙 门氏茵菌株 ， 别为 鼠伤 寒 沙 分 加 ２ 置 ７Ｃ 门氏 菌 ２株 ， 沙 门 氏菌 １株 ， 炎 沙 门 氏 化 ， 入 ２ ５毫 升 缓 冲 蛋 白胨 水 增 菌 液 中 ， ３ ￣ 鸭 肠 培 养 ４小 时 。 茵１ 。 株 阳性 率 为 １３％。 ３ 关键词 ： 饲料 ；沙 门氏菌 ； 测 检 １３２ 选 择 性 增 菌 培 养 接 种 前 先 轻 轻 摇 动 前 ．．
Ａｂ ｔ ｃ： Ｉ ｈｓ ｔｓ ｂ ａ ｓ ｏ ｈ ｕｅ ｄ ｐ ｒｓ ｓｒ ｔ ｎ ｔｉ ｅｔ ｙ ｍｅ ｎ ｆｔ ｅ ｒ ｌ ｅ ａｔ ａ
ｆ ｓｅ ｓ ｈ ａ ｐ ￣ｓ ｔｃ ｉ ｕｅ ， ｏ ｔ ｒ ｔ ｅ ｐ ｒ ａ ｅ ｈｎ ｑ ｌ ３ ｆ ｈ ０ ｉ ｓ ｍｅ ｓ ｅ ｉ ｎ ｃ ｌｃ ｅ ｒ ｎ ｏｍｌ ｈ ｖｅ ｌ ａ ｐ ｃｍｅ ｓ ｏｌ ｔｄ ｅ ａｄ ｙ ａ
DB34T 816-2008 饲料中沙门氏菌的测定 免疫色谱反应法.pdf
ICSDB34备案号：安徽省质量技术监督局发布前 言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。
本标准由安徽省质量技术监督局批准。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所。
本标准主要起草人：刘红云、张莉、丁在亮、陶小平。
本标准自2008年8月1日首次发布。
饲料中沙门氏菌的测定免疫色谱反应法1 范围本标准规定了用免疫色谱法对饲料中沙门氏菌的测定。
本标准适用于配合饲料、单一饲料中沙门氏菌的测定，检出限为25g饲料中1个沙门氏菌。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1-1993 饲料采样方法3 原理沙门氏菌特异性抗体是快速定性检测的基础，沙门氏菌检测卡/条是专门用来检测饲料中沙门氏菌抗原，经过增菌和选择性增菌的的阳性样品会与沙门氏菌检测卡/条上染色剂标记的抗体结合形成抗原-抗体复合物，其沿着膜移动，在沙门氏菌检测卡/条上被固定的抗体将使复合物着色，在样品区（S区）形成一条色带，以判定试验结果，内置质控色带（C区）用于确认进行的实验是否正确。
4 材料与设备4.1 小型粉碎机。
4.2 电子天平(0.01g)。
4.3 无菌试管或无菌袋。
4.4 沙门氏菌检测卡或检测条。
4.5 沙门氏菌增菌培养基 （BP）。
4.6 沙门氏菌选择性增菌培养基（RV）。
4.7 细菌培养箱。
4.8 超纯水器。
4.9 200µL的移液器。
4.10 200µL的吸头。
4.11 高压灭菌锅。
4.12 水浴锅。
4.13 量筒 ，1000mL。
5 试样的制备按 GB/T 14699.1-1993 饲料采样方法采样，选取有代表性的饲料样品，至少500g，四分法缩减至200g，粉碎，使全部通过40目筛，在密闭瓶中4℃保存。
欧盟沙门氏菌检验标准
沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的食源性病原菌，可以导致食物中毒。
为了确保食品安全，许多国家和地区都有相关的食品和饲料中沙门氏菌的检验标准。
欧盟是全球食品安全监管最为严格的地区之一，其对于沙门氏菌的检验标准非常严格。
以下是欧盟对于食品和饲料中沙门氏菌的一般检验标准：
1. 检测方法:欧盟推荐使用ISO 6579:2002、ISO 6579:2007或ISO 6579:2017等国际标准进行沙门氏菌的检测。
2. 样品数量:每个食品或饲料样品的检测数量至少为25克。
3. 检测频率:对于某些高风险食品，如生肉、家禽、蛋类和蛋制品，欧盟推荐在生产、加工、储存和销售过程中进行定期检测。
4. 阳性判定:如果在一个样品中检测到沙门氏菌，那么这个样品必须被视为阳性。
5. 报告:如果在一个食品或饲料样品中检测到沙门氏菌，那么必须立即报告给相关的监管机构。
6. 处理:如果在一个食品或饲料样品中检测到沙门氏菌，那么这个样品必须被销毁，并且相关的生产或加工设备必须进行清洁和消毒。
需要注意的是，具体的欧盟沙门氏菌检验标准可能会根据食品的种类、来源、加工方法等因素有所不同。
饲料中沙门氏菌的监测概况及常规检测技术应用
TSI-时，进行 ONPG试验， ONPG阴性时 进行血清学鉴 定
H2S+、靛基质- 、尿素-、KCN-、赖氨酸+后进行血清学鉴定
结果判定
其他商品化生化鉴定系统
VITEK GNI+ 应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测 试，卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制 备一定浓度的欲鉴定菌株的菌悬液，然后将菌悬 液接种到各种细菌的小卡上，将其放入具有读数 功能的孵箱内，每隔一定时间，仪器会自动检测 培养基的发酵情况，并换算成能被计算机所接受 的生物编码。最后由计算机判定，打印出鉴定结 果。
禽沙门氏菌病的症状
（1）雏鸡感染：引起败血症，可造成大批死忙 ；病鸡 表现虚弱，口渴，食欲不振，腹泻，发育迟滞等。 （2）成年鸡：最常见产蛋量降低或停止。另外可引起 卵巢炎，可在卵黄内带菌而传给幼雏。
牛沙门氏菌病的症状
（1）犊牛：体温升高，呼吸困难；排出血丝粪便；病 期延长时，腕和跗关节可能肿大，有时伴有支气管炎和 肺炎症状。
意义26牙3844个饲料样品检测发现沙门氏菌的检出率为48美国对12个牛场的295份饲料样品进行沙门氏菌检测检出率为98国外沙门氏菌污染情况27传统检测方法分子生物学方法免疫学方法常规沙门氏菌检测技术29国内现行标准分子生物学方法免疫学方法传统检测方法gbt130912002培养法gbt478942010培养法gbt296422012pcr法snt105972010实时荧光pcr法gbt224292008酶联免疫法db34t8162008免疫色谱反应法30传统检测方法31传统检测方法原理沙门氏菌生化特性修复受损伤的沙门氏菌饲料中含大量杂菌32主要培养基试剂血清缓冲蛋白胨水bpw氯化镁孔雀绿增菌液rv亚硒酸盐胱氨酸增菌液sc赖氨酸脱羧酶肉汤高压灭菌锅干热灭菌箱培养箱水浴锅接种环培养瓶或三角25g样品225mlbpw361620h1mlbpw增菌液10mlscmm增菌液在42sc增菌液在36各培养24h01mlbpw增菌液10mlmm分别从mm和sc增菌液中取1环接种到酚红黄绿和dhl琼脂上培养在36培养2024hdhl琼脂在36培养24h分别选择性培养基上挑选可以菌落进行tsi等生化鉴定35tsi生化试验底层产h2s底层产酸斜面产碱斜面底层底层产酸斜面产碱底层产h2s情况下可判定无沙门氏菌其余任何情况均需进行生化鉴定36第一步第二步第三步37生化鉴定试剂套装色氨酸肉汤经361824h培养后滴加靛基质试剂片刻观察结果阳性为玫瑰红色氨酸脱羧酶及对照和氰化钾及对照转种结束后需滴加液体石蜡覆盖试验管方可进行培养靛基质试验露醇山梨醇试验试验阳性后进行血清学鉴定tsi时进行onpg试验onpg阴性时进行血清学鉴h2s靛基质尿素kcn赖氨酸后进行血清学鉴定38结果判定39其他商品化生化鉴定系统vitekgni应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质
动物性饲料中沙门氏菌的检测
选择 性增 菌培 养 ： 预增 菌 培 养物 ｌ 升接 种 取 ０毫 于 装 有 １０毫 升 四硫 磺 酸 钠 煌 绿 增 菌 液 的 培 养瓶 ０
维普资讯
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２ ８・ ５
广西农业科学
２０ 年 第 ５ ０２ 期
动物 性饲 料中沙 门氏菌 的检 测
余 莲 磨 龙春
（ 西 区 兽 药监 察 所 南 宁 ５ ０ ０ ） （ 西 区 兽 医 防 疫 检 疫 站 ） 广 ３ ０ ０市市 场随机抽取 动物性饲料检样 ３ 份 （ 中鱼粉 ２ 份 、 ３ 其 ９ 蚕蛹 ２份 、 骨粉 ２份） 行实验 进
１ 材料和方法
被检样 品，Ｏ２年 ３ ２Ｏ 月从 广西 贺 市 、 宁市 、 南 Ｈ 市场 分别 随机 抽 样 １ 份 和 ２ 份 ， ３ １ ２ 共 ３份 。样 品采
集按 Ｇ １ ６９ １ ｌ９ 操作 。 Ｂ ４ ９ ．一 ９ ３ 检测中所使用的各种 培 养 基 均 按 ＧＢ ３ ９－ ９ （ 料 中 沙 门 氏菌 的 检验 １０ １ １饲 （ 方 法 》 定 配 制 。沙 门 氏 菌 检 验 程 序 （ 据 规 根 ＧＢ ３ ９ － ９ １ ０ １ １规 定 ） 下 ： 如
的大批死亡 ， 造成巨大的经济损失 ， 从此次随机抽样 检查 中， ６份 样 品沙 门 氏检 出 阳性 ， 有 阳性 率 达 １． 。 目前 ， ８ １／ ９ ５ 国际标 准 、 国家标 准均 明确规 定饲 料 中不得检出沙 门氏菌 ， 可见在我 区市场上销售的动
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一．实验记录(实验中现象、情况、技术关键、注意事项)
1、增菌培养：25g样品+225mlBPW，36℃培养24h后，取1ml转钟于10mlTTB、10mlSC、
10mlRV内，TTB和RV于42℃培养24h，SC于36℃培养24h。
观察生长情况：在氯化镁-孔雀绿增菌液、TTB增菌液和SC增菌液中，饲料的颜色既不是阴性也不是阳性；继续做分离培养。
2、分离培养：分别挑取增菌液接种在BS、HE、XLD、沙门显色培养基和酚红煌绿培养基上上，36℃培养24h（BS培养48h）,观察各平板上菌落生长情况。
1）BS：如右图所示典型菌落为黑色金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。
左图为饲料样品，在BS培养基上长出疑似沙门氏菌的菌落，需往下继续做鉴定实验。
2）HE：如右图所示典型菌落为蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。
左图为饲料样品，在HE培养基上长出大量菌落，但与沙门氏菌的
菌落形态不符合。
3）XLD：如右图菌落所示典型菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。
左图为饲料样品，在XLD培养基上长出疑似沙门氏菌的菌落，需往下继续做鉴定实验。
4）沙门显色培养基：如右图菌落所示典型菌落呈品红色或紫红色。
左图为饲料样品，在沙门显色培养基上长出绿-蓝绿色的菌落，根据沙门显色培养基说明书可知，该菌落很有可能是大肠菌群。
5）酚红煌绿培养基：如右图菌落所示典型菌落为是粉红培养基颜色由酚红变红。
左图为饲料样品，在酚红煌绿培养基上长出黄色的菌落，使培养基颜色由酚红变黄，说明该菌落很有可能不是沙门氏菌。
3、鉴定实验：
1）生化鉴定
标准菌株：TSI琼脂上培养24h后，斜面红色产碱，琼脂变黑，产生硫化氢；
尿素琼脂上培养24h后，琼脂不变色，表现为阴性；
赖氨酸脱羧酶实验培养后实验管为蓝绿色，表现为阳性；
靛基质实验加入靛基质后颜色未变色，变现为阴性；
ONPG实验培养后试剂为变色，表现为阴性；
KCN实验培养后，对照管和生长管均为生长，表现为阴性；
V-P实验加入V-P试剂后颜色未变色，表现为阴性。
饲料在TSI琼脂上培养24h后，斜面和底部都为黄色产酸；接种在尿素琼脂上，培养24h后，琼脂稍微变为粉红色，表现为弱阳性。
2）血清学鉴定：标准菌株在生理盐水中无法自凝，在血清中出现自凝现象，表现为阳性。
二．技术说明
本实验采用GB/T 4789.4-2010食品安全国家标准中的微生物生物学检验中的沙门氏菌检验，通过增菌、前增菌、分离培养以及生化试验和血清学鉴定，最后综合生化试验和血清学鉴定的结果，报告25g样品中检出或未检出沙门氏菌。
三．结论
标准菌株生化鉴定结果
饲料数据分析与结果
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