第16章 维生素的分析【执业药师 药物分析】
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维生素类药物分析(SYSH)
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第一节 维生素A
维生素A包括有维生素A1（视黄醇）、去 氢维生素A（维生素A2 ）和去水维生素A（ 维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，
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一、结构和性质
R:
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-H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
11
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（2）波长的选择： ① 1
VitA的max（328nm） ② 2 3
分别在1的两侧各选一点
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第一法 等波长差法
32 8 31 6 34 0 328
A 3校 2 8 3 . 5 正 2 A 2 3 2 A 3 8 1 A 3 6 4
测定对象 VitA醋酸酯
结构分析
CH3
CH3
CH3 CH3
环己烯
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共轭多 烯侧链
CH3 CH2OR
多异构体 UV 易被氧化
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1、为一个具有共轭多烯侧链的环己烯 ❖ （1）具有UV吸收
❖ （2）存在多种立体异构化合物 ❖ （3）易发生脱氢、脱水、聚合反应
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2、不稳定性
VitA紫 外 线 、 O2 、 氧 化 剂 环氧化物 [ O]VViittAA酸 醛
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中国药典收载方法
第一法（维生素A醋酸酯的测定） 将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸
收度，计算吸收度比值（A/A328 ）
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数据处理
如果λmax在326-329nm之间，且A/A328比值未 超过规定值的±0.02，可直接按下式计算含 量：
药物分析-维生素类药物的分析28页PPT
谢谢！
36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
ห้องสมุดไป่ตู้
40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子
药物分析-维生素类药物的分析
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
维生素类药物的分析方法
（3）维生素A在光照下产生的无活性的聚合物：鲸醇。 （4）维生素A的异构体等： 以上这些杂质在 310nm~340nm 的波长范围内有吸收， 所以干扰维生素A的测定。
12
5. 合成的维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式
维生素A，如供试品中干扰测定的杂质较少，能符合下 列第一法测定的规定时，可用溶剂溶解供试品后直接 进行测定，否则应按第二法，经皂化提取除去干扰后 测定。
pH不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值
（ΔA）。以浓度C为横坐标，以差示吸收值ΔA为纵坐 标绘制标准曲线。
30
样品的测定 取本品20片，精密称定，研细。精密称取适量粉末，
（2）反应介质需无水 （3）温度对呈色强度的影响很大 （ 4）本反应并非维生素 A专属，在相同条件下，某些有关物质均与
三氯化锑显蓝色，干扰测定，常使测定结果偏高。
（ 5 ）三氯化锑试剂有强的腐蚀性，易损坏皮肤和仪器，使用时应 严加注意。
15
（三）高效液相色谱法
采用RP-HPLC法同时测定人血清中维生素 A和维生素E的含量。 根据不同病理生理状态下人血清中维生素A、E的浓度，寻求弄清 与某些疾病的关系，为临床治疗学、营养学等研究提供参考。 1. 仪器与色谱条件 色 谱 柱 为 C18 ； 流 动 相 为 甲 醇 - 水 （ 96:4 ） ； 流 速 为 1.2ml/min。内标物为维生素A醋酸酯。 2. 分析用样品液 对照品：维生素A，维生素E，维生素A醋酸酯
维生素类药物的分析方法：
生物法 微生物法 化学法 物理化学法
2
第一节
维生素A的分析
维生素A 包括
典型药物分析实例 维生素C及其制剂分析 (药物分析课件)
2. 与2，6 - 二氯靛酚反应
2，6 - 二氯靛酚
VitC 无色维生素C Nhomakorabea含量测定
碘量法
不仅适用于维生素C的原料药，也适用于维生素C各类制剂的含量
测定。碘量法是典型的氧化还原滴定法，具有简便快速、结果准
确的特点，常用于还原性药物的测定。
H+
VitC + I 2
去氢抗坏血酸
+ I
-
维生素C的含量测定
碘量法
碘与药物完全反应后过量的碘与
淀粉显蓝色而指示终点。含量测定要
保证测定结果的准确性。
维生素C测定含量时需要注意以下几点
1. 碘量法一般选择在
酸性条件下进行。只有在
酸性条件下，维生素C受
空气的氧化作用减慢。
2.以新沸过的冷水作为
溶剂，主要的目的是去除
水中溶解的氧。
3.本法测定维生素 C 片、
泡腾片、颗粒剂和注射剂含
量，滴定前需进行必要的处
理，以消除制剂中辅料对测
定的干扰。如片剂溶解后应
过滤；注射剂滴定前加入2ml
丙酮作掩蔽剂，以消除注射
液中抗氧剂焦亚硫酸钠或亚
硫酸氢钠对测定的影响。
烯二醇具有极强的还原性
C
C
C
C
OH
OH
O
O
烯二醇结构
二酮基结构
维生素C的鉴别反应
与氧化剂的反应：
[O]
VitC
去氢抗坏血酸
CH 2 OH
CH 2 OH
H C OH
O
HO
[]
O
OH
H C OH
O
O
O
O
维生素C的鉴别反应
2，6 - 二氯靛酚
VitC 无色维生素C Nhomakorabea含量测定
碘量法
不仅适用于维生素C的原料药，也适用于维生素C各类制剂的含量
测定。碘量法是典型的氧化还原滴定法，具有简便快速、结果准
确的特点，常用于还原性药物的测定。
H+
VitC + I 2
去氢抗坏血酸
+ I
-
维生素C的含量测定
碘量法
碘与药物完全反应后过量的碘与
淀粉显蓝色而指示终点。含量测定要
保证测定结果的准确性。
维生素C测定含量时需要注意以下几点
1. 碘量法一般选择在
酸性条件下进行。只有在
酸性条件下，维生素C受
空气的氧化作用减慢。
2.以新沸过的冷水作为
溶剂，主要的目的是去除
水中溶解的氧。
3.本法测定维生素 C 片、
泡腾片、颗粒剂和注射剂含
量，滴定前需进行必要的处
理，以消除制剂中辅料对测
定的干扰。如片剂溶解后应
过滤；注射剂滴定前加入2ml
丙酮作掩蔽剂，以消除注射
液中抗氧剂焦亚硫酸钠或亚
硫酸氢钠对测定的影响。
烯二醇具有极强的还原性
C
C
C
C
OH
OH
O
O
烯二醇结构
二酮基结构
维生素C的鉴别反应
与氧化剂的反应：
[O]
VitC
去氢抗坏血酸
CH 2 OH
CH 2 OH
H C OH
O
HO
[]
O
OH
H C OH
O
O
O
O
维生素C的鉴别反应
典型药物分析—维生素及制剂的质量分析(药物分析课件)
H 5 C﹡ OH
O
4﹡
1
O
内酯结构
共轭 酸性强
3 2
HO
OH
烯二醇结构
酸性弱
维生素C
主要性质
溶解性 酸性 旋光性 还原性
L-抗坏血酸
L-去氢抗坏血酸
(有生物活性)
L-二酮古罗 糖酸
无生物活性
VitC
鉴别
1.与AgNO3反应
AgNO VitC Ag 黑（银镜）
2.与2,6-二氯靛酚反应
2，6 二氯靛酚 VitC无色
Vit E
2.三氯化铁反应
H3C HO
CH3 O
CH3 C16H33
[Fe3+] H3C
O
CH3
CH3 O
OH
CH3 C16H33
CH3
Vit E
三、杂质检查
1.酸度 CH3
2.生育酚
CH3COO
CH3 O
CH3
CH3 无水乙醇 CH3
C16H33
H2SO4 回流
HO
CH3 O
CH3
CH3 C16H33
流动相→A: buffer(0.05M KH2PO4,0.2% 三乙胺,pH6.0):ACN =(97:3) B: MeOH
梯度洗脱程序→(0min)A:B(90:10)→ (20min)A:B(60:40) →
(30min)A:B(90:10)
流速→1.0ml/min
检测波长→210nm 100
80
加盐酸溶液（ 9→1000）约 70ml，振摇15分 钟，使维生素B1 溶解，加盐酸（ 9→1000）稀释 至刻度，摇匀
用干燥滤纸滤过 ，精密量取续滤 液5ml，置另一 100ml量瓶中， 再加盐酸溶液（ 9→1000）稀释
药物分析第章维生素类药物的分析(ppt)
第三步 求效价
效 价 IU （ /g） (样 )E% 1c m (样 )换 算 因 数
换算因数由纯品计算而得： 换算因数 效＝ 价I（ U/g） E% 1cm(纯)
1IU 0.34g4维 生 A醋 素酸 酯 效价（IU / g） 1106g 2907000
0.344g
换 算 因效 数 E% 1价 c＝ m I(纯 U （ /)g）219503700001900
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
三、含量测定
（一） UV法
立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）
三点校正法 1. 条件： （1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直
线，且随波长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
1IU 0.30g0维生 A醇 素
效价（IU / g） 1106g 3330000 0.300g
换算因效 数 E% 1价 c＝ m I(纯 U （ /)g）313832000001830
第四步：求标示量％
标 示 量标 I％ U/丸 示 ＝ 1量 0％ 0＝IU/g标 平示均量丸 1重 0％ 0
A换 算 因 平数 均 丸 重
C
标示量 10％ 0
（2）第一法 维生素A醋酸酯
• 方法： S 环 己 9～ 烷 1I5U /m溶 l 液
分 别 30、 于 301、 362、 384、 306n0m 处A 测 i
• 判断 max是否在326～329nm之间
max在326～329n8
并与规定值比较
改用第二法
Ai/A328 规定值 差值
A 300 A 328 0 . 555 A 316 A 328 0 . 907 A 328 A 328 1 . 000 0 A 340 A 328 0 . 811 A 360 A 328 0 . 299
药物分析-维生素C的分析
VitC I2 H去氢抗坏血酸 I
T C M 0.1 176.13
n
2
8.80（6 mg / ml）
3、 讨论 （1）酸性环境 稀HAc 减慢VitC被O2氧化速度 （2）新沸冷H2O 赶走水中O2 （3）立即滴定 减少O2的干扰
（4）附加剂干扰的排除 片剂 —— 滑石粉 —— 过滤 注射剂 —— 抗氧剂 —— 丙酮 甲醛
四、含量测定
（一）碘量法
1、原理
VitC I2 H去氢抗坏血酸 I
指示剂 淀粉指示液
I 2 H+
+ 2 HI
2、 方法
取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6
（二） 糖类的反应 USP
VitC 或三盐氯醋酸酸戊糖 脱水 糠醛 50℃ 吡咯
蓝色
三、杂质检查
（一）溶液的澄清度与颜色检查 控制吸收度方法 1、原料： A≤0.03 2、注射液：A≤0.06 3、片剂： A≤0.07 （二）铁、铜离子的检查（原料） 原子吸收分光光度法
第三节 维生素C的分析
一、 结构与性质
C6H2OH
H C OH 5 O
4
1O
32
HO
OH
L－抗坏血酸
性质 溶解性 易溶于水；水溶液呈酸性 酸性 一元酸
C3－OH的 pKa = 4.17
C2－OH的 pKa = 11.57
强还原性
二烯醇结构
O
二烯醇结构
16-1 维生素B1
• HPLC主成分自身稀释对照法
3.总氯量（20.6%~21.2%） • 方法：银量法 • 条件：稀醋酸酸性条件 • 指示液：溴酚蓝指示液（终点蓝紫色）。该指示 剂为吸附指示剂，终点后沉淀吸附指示剂显蓝紫 色。
三、含量测定
（一）原料药
1.非水溶液滴定法
B C l HC l HC lO Hg（Ac） B C lO HC lO
盐酸硫胺）是由氨基嘧啶环和噻唑环 ，通过亚甲基连接而形成的季按碱化合物。（也 有硝酸盐和氢溴酸盐）
二、检查
1.硝酸盐 • 来源：合成过程中未反应完全的硝酸盐。 • 方法：靛胭脂法 药物水溶液 +水4.0ml+10%氯化钠溶液0.5ml摇匀+ 硝酸钾标液 稀靛胭脂试液1.00ml，摇匀，沿管 壁缓缓加硫酸5.0ml，振摇1min，放 置10min→比色
后其红外光谱与对照光谱一致。
3.氯化物反应
AgC l白 HNO3 HNO
AgNO NH H O
Cl 蓝
H
MnO
KI 淀 粉 试 纸
2.有关物资（原料药、片剂、注射剂） • 方法：
指示剂：喹那啶红－亚甲蓝（紫红→天蓝） 电位法（药典用）
c M 0.1 337.27 T n 2 16.86mg / ml
V样 V空 T F 含 量% %
W
（二）制剂 1.维生素B1片 • 方法：UV-Vis（百分吸收系数法） • 溶剂：稀盐酸 • 最大吸收波长：246nm • 百分吸收系数421
一、鉴别
1.硫色素反应
VitB1 硫 色 素 [O ] 蓝色荧光 荧 光 消 失
维生素药物分析总结
维生素A
化学结构
9' 1 8' 6 5
R=H
2 3 4
7' 6'
5' 4'
3' 2'
CH2OR
1'
—COCH3 R= —COC15H31
R=
VA醇 VA1 VA醋酸酯 VA棕榈酸酯
药典方法
分光光度法
• 由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素 A原料药中混有其他杂质，所测得的吸收 度 不是维生素A独有的吸收。非维生素A物质 的无关吸收所引入的 误差可以用校正公式 校正，以便得到正确结果。 • 校正公式采用三点法 ，详见书本。
其他方法
铈量法
原理： 利用VE水解后生成游离生育酚，具有 还原性，可被硫酸铈定量氧化来测定VE的 含量。 特点： 简便易操作，对仪器要求不高，但终点 不明显，分析结果重现性差，误差较大。
二阶导数光谱法
原理： 在二阶导数光谱中，以维生素E波长288 nm和292 nm相邻谷峰处的振幅(峰-谷法)D值 作为定量分析信息。 特点 ： 采用二阶导数的方法能很好地消除干扰， 且方法简便，适合医院制剂快速检测。
紫外分光光度法
原理： VB1分子中具有共轭双键结构，在 紫外区有吸收，测定其最大吸收波长处 的吸收度即可计算含量。 特点： 用于VB1片剂和注射剂的含量测定。
其它方法
硅钨酸重量法
• 原理： 2VB1＋硅钨酸 → 白色沉淀＋4HCl VB1在酸性溶液中与硅钨酸作用产生沉 淀，根据沉淀的重量和供试品的重量即可 计算其含量。 • 特点：（1）比较准确、灵敏； （2）方法简便，不需要特殊仪器； （3）恒重比较费时间。
维生素B12
化学结构
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内标物：苯甲酸胆甾酯
含量测定
注射液 反相HPLC 流动相：无水乙醇-水 顺反异构体不能分离
2007
关于维生素C注射液的含量测定，叙述正确的有（ ）
A.以中性乙醇作溶剂
B.滴定前先加入丙酮 C.用碘滴定液滴定
答案：BCD
D.用淀粉作指示剂
E.维生素C的含量应为标示量的99.0%～l01.0%
A.炽灼残渣
方法一 鉴别 方法二 IR
供试品 HNO3 橙红色
方法三 GC（教材错误HPLC）
检查
生育酚
硫酸铈
生育酚
紫色
二苯胺
diphenyl amine
正己烷 残留溶剂GC
第二类
有关物质 GC
含量测定
简便快速、专属性强，适 GC 用于VE、VE制剂及多种维
生素制剂中VE的测定
内标法 内标物：正三十二烷
维生素K1的分析
B.酸度
C.生育酚 D.正已烷
答案：B；C
E.溶液的澄清度
以下维生素E检查方法所对应的检查项目是
1.取供试品1.0g，加乙醇和乙醚各l5ml，用氢氧化钠滴定液
(0.1mol/L)滴定，消耗氢氧化钠滴定液不得超过0.5ml
2.取供试品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液l滴，
用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，不得超过1.0ml
答案：B；A；D；E
2012年
A.碘量法 B.非水溶液滴定法 C.旋光度法 答案：E；A；D D.气相色谱法 E.高效液相色谱法 在《中国药典》中，下列药物的含量测定方法是 1.维生素K1 2.维生素C 3.维生素E
2013年
碘量法测定Vc含量选用的指示剂为（ ） 答案：B A.甲基橙光光度法
加速Vc氧化
Fe：248.3nm
波长
Cu：324.8nm
含量测定
原料药、片剂
方法 直接碘量法
新沸放冷的水
Vc H2O
减少水中溶
解氧的I2 影响 蓝色
稀 HAc 淀 粉
使VC在空气中 氧化速度减慢
持续30秒 不褪
1∶1
丙酮
注 射
Vc H2O
I2 蓝色
稀 HAc 淀粉
A.盐酸利多卡因（2010：HPLC） B.盐酸氯丙嗪 C.VB1 D.黄体酮 E.VA
A.有关物质 B.其他甾体 C.硒 D.Fe和Cu
以下药物需检查的特殊杂质是
1.VC
2.VE
答案：D；E
E.生育酚
2011
A.碘量法 B.非水溶液滴定法 C.旋光度法 D.气相色谱法 E.高效液相色谱法 在《中国药典》中，下列药物的含量测定方法是 1.维生素B1 2.维生素C 3.维生素E 4.维生素K1
A.GC B.碘量法 C.微生物法 D.UV-Vis E.非水碱量法
VB1含量测定选用的方法为（ ） VB1片含量测定选用的方法为（ ）
答案：E；D
A.地西泮 B.黄体酮 C.VB1 可用硫色素鉴别的是（ ）
D.Vc E.盐酸麻黄碱
C；D
可用2,6-二氯靛酚反应鉴别的是（ ）
蓝色荧光 H+
荧光消失
OH
2.氯化物
荧光出现
3.IR
硫色素反应原理
检查
硝酸盐 靛胭脂法
供试品 KNO3
靛胭脂
比较
总氯量 银量法
有关物质 HPLC
含量测定
原料药
非水碱量法
电位法判断终点 溶剂：冰醋酸+醋酐
片剂、注射液 UV-Vis
VC的分析
H
6 HO 5
OH O1
4
L-抗坏血酸
O
32
HO OH
消除注射液中抗氧
液 剂NaHSO3的干扰
δ NaHSO3 + O
δ+ C
CH3
CH3
HO
CH3
C
NaO3S
CH3
苯并二氢吡喃 维生素E的分析
H3C O
O H3C
CH3
O CH3
生育酚
合成的消旋体
天然的右旋体
微黄色至黄色或黄绿色
结构特征
•1.苯并二氢吡喃的衍生物 •2.酯基，水解后具有较强的还原 性，比Vc还原性强
第16章 维生素类药物的分析
太原星红程讲义
VB1的分析
N N
NH2 S
N
+
盐酸硫胺
OH Cl ·HCl
结构特征
• 1.嘧啶环
• 1.又名盐酸硫胺
• 2.噻唑环（有一 • 2.水溶性维生素
个季铵）
• 3.有紫外吸收
• 3.盐酸盐
（λmax＝246nm）
鉴别
1.硫色素反应
NaOH VB1
铁氰化钾 正丁醇
O CH3
O
CH3
萘醌类
H CH3 H CH3
CH3 CH3
黄色至橙色
鉴别
1.碱性条件下分解显色
供试品 KOH 绿色
2.HPLC 3.UV-Vis 4.IR
深紫色 红棕色
检查
甲萘醌 来源：原料
氰基乙酸乙酯
甲萘醌
蓝色
顺式异构体 HPLC 峰面积归一化法
有关物质
HPLC
含量测定
HPLC 吸附色谱（正相） 流动相：石油醚-正戊醇 硅胶色谱柱
2006
取供试品，加NaOH试液溶解后，加铁氰化钾试液和正丁醇，振摇，放置
分层后，醇层显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光消失，再加碱使
成碱性，荧光又出现。此反应可鉴别的药物是（ ）
A.VA B.VB1 C.VC D.青霉素钠 E.硫酸链霉素
答案：B
可用非水溶液滴定法测定含量的药物有（ ）
答案：BC
结构特征
1.弱酸性、强还
1.连二烯醇 原性（3位酸性
强）
2.内酯
2.不水解
3.手性碳 3.旋光性：L－构
型右旋体活性
最强
鉴别 3. IR
1. 银镜反应
酸性条件：玫瑰红色
2. 2，6-二氯靛酚钠
碱性条件：蓝色
鉴别
片剂 1、2同原料药
3.TLC
注射液
1.供试品 亚甲蓝 浅蓝或消失
深蓝
2.TLC
检查