实验五 大鼠肝S9的制备和蛋白含量测定
小鼠肝核酸实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠肝组织中核酸的提取方法。
2. 了解DNA和RNA的组成差异及其鉴定方法。
3. 掌握防止核酸酶降解的措施。
4. 分析实验结果，验证实验方法的有效性。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA两种类型。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA则参与蛋白质的合成和调控等生物学过程。
本实验旨在从小鼠肝组织中提取核酸，并对其进行鉴定和分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠肝脏、小牛胸腺细胞、氯化钠、柠檬酸钠、盐酸、硫酸、3，5-二羟甲苯、二苯胺、无水乙醇、氯仿等。
2. 实验仪器：高速冷冻离心机、电子天平、研磨器、恒温水浴锅、移液器、离心管等。
四、实验方法1. 小鼠肝匀浆制备：（1）取新鲜小鼠肝脏，用生理盐水洗净，去脂。
（2）将肝脏剪成小块，加入适量的生理盐水，用研磨器进行研磨。
（3）将研磨好的肝匀浆转移至离心管中，离心去除细胞碎片。
（4）收集上清液，即为肝匀浆。
2. 核酸提取：（1）取适量的肝匀浆，加入适量的氯化钠溶液，混匀。
（2）加入柠檬酸钠溶液，混匀，置于冰浴中10分钟。
（3）加入等体积的氯仿，混匀，静置10分钟。
（4）将混合液转移至新的离心管中，离心，收集上层水相。
（5）加入等体积的无水乙醇，混匀，静置30分钟。
（6）将混合液转移至新的离心管中，离心，收集沉淀。
（7）用75%乙醇洗涤沉淀，离心，收集沉淀。
3. DNA和RNA的鉴定：（1）取适量的DNA沉淀，加入适量的盐酸和硫酸，共热，观察颜色变化。
（2）取适量的RNA沉淀，加入适量的3，5-二羟甲苯和二苯胺，共热，观察颜色变化。
4. 防止核酸酶降解：（1）选取核酸酶含量较低的材料，如小牛胸腺细胞等。
（2）在制备肝匀浆时，应尽量在冰冷条件下进行。
（3）尽快加入含0.01 mol/L柠檬酸钠的0.14 mol/L氯化钠溶液，以抑制脱氧核糖核酸酶。
五、实验结果与分析1. 肝匀浆制备成功，细胞破碎充分。
实验一 动物细胞蛋白质的提取和含量测定
实验一动物细胞蛋白质的提取和含量测定实验目的：学习动物细胞蛋白质的提取方法，并利用比色法测定蛋白质含量。
实验原理：蛋白质是生物体中丰富的一类生物大分子，广泛分布于细胞内和细胞外，并参与生物体内多种生命过程。
动物细胞蛋白质的提取是分离蛋白质与其他细胞成分的过程，主要包括以下步骤：细胞破碎、离心、过滤、沉淀、溶解等。
比色法是常用的蛋白质含量测定方法，其基本原理为：在一定条件下，吸收光谱的特定波长处与蛋白质浓度成正比关系，当分子光吸收强度与物质的摩尔吸光系数（ε）和浓度（c）成比例时，吸收光强度与摩尔浓度成正比。
实验材料：鼠肝组织（或其他动物细胞）、PBS缓冲液、离心管、低速离心机、高速离心机、比色皿、分光光度计、升酸钠（NaOH）、双氧水（H2O2）、标准蛋白溶液。
实验步骤：1.将肝组织切碎并加入PBS缓冲液中，用器皿以适量缓慢但均匀的方式搅拌，使细胞尽可能充分破碎，制成15%（w/v）的组织均浆。
2.将组织均浆经低速离心（1000×g，5分钟）离心去除大的组织碎片和细胞核，得到上清液。
3.取出上清液，经高速离心（12000×g，10分钟）离心，得到上清液中的细胞蛋白质沉淀。
将上清液去除，并将沉淀用PBS缓冲液洗涤2-3次。
4.将蛋白样品溶解在PBS溶液中，并将其含量测量。
用比色法测量蛋白质的含量。
5.将一定量的标准蛋白质溶液（如蛋白质量为0.5mg/ml）放入比色皿中，取等体积的PBS作为对照。
将吸收光谱测试于580nm光波下。
6.将需要测定的试样溶液（不稀释或稀释到正常范围内）的吸光度值与标准曲线进行比较，并评估试样的蛋白质含量。
实验注意事项：1.组织均浆可以通过超声波等方式进行更好的细胞破碎。
2.在高速离心前，一定要充分清除离心管内假底残留的上清液及杂物。
3.比色法中，在标准曲线制备过程中，须注意所有物品洁净，不受污染。
标准品配制同样须严格控制。
实验结果：在蛋白质提取和测定后，实验者可计算并评估其蛋白质含量。
小鼠肝脏转氨酶实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在肝脏代谢过程中的作用。
2. 掌握小鼠肝脏转氨酶活性测定的原理和方法。
3. 分析肝脏转氨酶活性与肝脏疾病的关系。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
肝脏是人体最大的解毒器官，肝脏中的转氨酶活性可以反映肝脏功能状况。
当肝脏受到损伤时，转氨酶活性会升高，从而可以通过测定转氨酶活性来判断肝脏功能。
本实验采用比色法测定小鼠肝脏中的谷丙转氨酶（ALT）活性。
ALT主要存在于肝细胞中，当肝细胞受损时，ALT会释放到血液中，从而引起血液中ALT活性升高。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 小鼠肝脏样本- 丙氨酸、α-酮戊二酸、NADH、NAD+、2,4-二硝基苯肼、氢氧化钠等试剂- 生理盐水2. 实验仪器：- 分光光度计- 低温高速离心机- 电子天平- 移液器- 试管- 烧杯- 玻璃棒四、实验方法1. 小鼠肝脏样本制备- 处死小鼠，取出肝脏，称重，剪碎，加入生理盐水制成匀浆。
- 将匀浆以3000 r/min离心10分钟，取上清液备用。
2. 谷丙转氨酶活性测定- 取3支试管，分别加入不同体积的肝匀浆、底物溶液和NADH溶液。
- 将试管置于分光光度计中，于特定波长下测定吸光度。
- 根据标准曲线计算ALT活性。
3. 数据处理- 对实验数据进行统计分析，得出ALT活性平均值。
五、实验结果1. 标准曲线绘制- 以不同浓度的α-酮戊二酸为标准品，绘制标准曲线。
2. 小鼠肝脏ALT活性测定结果- 实验组ALT活性为（X±Y）单位/g肝脏，对照组ALT活性为（A±B）单位/g 肝脏。
六、讨论与分析1. 通过本实验，我们了解了转氨酶在肝脏代谢过程中的作用，掌握了小鼠肝脏转氨酶活性测定的原理和方法。
2. 实验结果表明，实验组小鼠肝脏ALT活性显著高于对照组，说明肝脏受到损伤时，ALT活性会升高。
3. 肝脏ALT活性升高可能是由于以下原因：- 肝细胞受损，导致ALT释放到血液中；- 肝细胞内ALT合成增加；- 肝细胞内ALT活性增强。
动物肝dna提取实验报告
动物肝dna提取实验报告动物肝DNA提取实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内的遗传物质，对于研究生物进化、基因表达和遗传变异等方面具有重要意义。
DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，它可以用于进一步的PCR扩增、测序以及其他分子生物学实验。
本实验旨在通过提取动物肝脏中的DNA，了解DNA提取的基本原理和方法。
材料与方法：1. 实验材料：- 动物肝脏样本（例如小鼠、大鼠、猪等）- 细胞裂解缓冲液（含有蛋白酶K）- 乙酸酚/氯仿提取液- 乙醇- TE缓冲液（含有Tris-HCl和EDTA）2. 实验仪器：- 离心机- 恒温水浴- 紫外可见分光光度计- 电泳仪实验步骤：1. 取动物肝脏样本，将其置于细胞裂解缓冲液中，用块状器械将其均匀研磨。
2. 将研磨后的样本转移到离心管中，离心10分钟，以去除细胞碎片和蛋白质。
3. 将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的乙酸酚/氯仿提取液，轻轻摇匀，离心10分钟。
4. 分离上清液和有机相，将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，缓慢倾倒，使DNA沉淀。
5. 用离心机离心10分钟，将上清液倒掉，加入70%乙醇洗涤沉淀3次，每次离心5分钟。
6. 倒掉乙醇，将离心管倒置在吸水纸上，待DNA沉淀干燥。
7. 加入适量的TE缓冲液溶解DNA，使其充分溶解。
8. 使用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
9. 可以将提取得到的DNA用于后续的PCR扩增、测序等实验。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地从动物肝脏样本中提取到了DNA。
通过紫外可见分光光度计检测，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，以确保提取到的DNA质量良好。
此外，我们还可以使用电泳仪对提取得到的DNA进行质量检测，观察DNA的大小和完整性。
DNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它为后续实验提供了可靠的DNA样本。
在实际应用中，我们可以利用提取得到的DNA进行PCR扩增，以研究特定基因的表达情况；也可以进行测序，以了解DNA序列的变异情况。
肝实验报告
一、实验目的1. 了解肝脏的基本结构和功能。
2. 掌握肝脏的生理和生化特点。
3. 通过实验操作，观察肝脏的形态学变化，验证肝脏的功能。
二、实验材料1. 实验动物：小白鼠（雌性，体重约20g）。
2. 实验试剂：生理盐水、10%甲醛溶液、苏木精、伊红染液、氯化钠溶液、葡萄糖溶液、肾上腺素溶液等。
3. 实验仪器：解剖显微镜、手术器械、离心机、离心管、移液器、玻璃片、载玻片等。
三、实验方法1. 肝脏形态学观察（1）取小白鼠，用颈椎脱臼法处死，迅速打开腹腔，取出肝脏。
（2）观察肝脏的形态、大小、颜色等。
（3）将肝脏固定于10%甲醛溶液中，制成肝组织切片。
（4）用苏木精-伊红染色法染色，显微镜下观察肝细胞、肝小叶、肝窦等结构。
2. 肝脏功能实验（1）取新鲜肝脏，用生理盐水冲洗干净。
（2）将肝脏置于离心管中，加入适量的生理盐水，用组织匀浆器匀浆。
（3）离心，取上清液，测定ALT、AST、ALP等肝功能指标。
（4）将肝脏制成肝匀浆，测定肝糖原含量。
（5）将肾上腺素溶液注入小白鼠腹腔，观察肝脏的变化。
四、实验结果1. 肝脏形态学观察（1）肝脏呈红褐色，质地柔软，表面光滑。
（2）显微镜下可见肝小叶结构，肝细胞呈多角形，排列整齐。
（3）肝窦内可见红细胞。
2. 肝脏功能实验（1）ALT、AST、ALP等肝功能指标均正常。
（2）肝糖原含量为（0.5±0.1）g/g肝组织。
（3）肾上腺素注入后，肝脏体积增大，颜色加深，质地变硬。
五、实验结论1. 肝脏是人体重要的代谢器官，具有多种生理功能。
2. 肝脏具有调节血糖、代谢蛋白质、解毒等功能。
3. 肝脏的结构和功能与人体健康密切相关。
六、实验讨论1. 本实验通过观察肝脏的形态学变化，验证了肝脏的结构特点。
2. 通过肝脏功能实验，了解了肝脏的生理功能。
3. 实验过程中，应注意操作规范，避免污染和损伤。
七、实验注意事项1. 实验操作过程中，应严格遵守实验规程，确保实验结果的准确性。
肝组织蛋白提取
1肝组织蛋白的提取准备物品：PBS （提前消毒，4℃过夜备用），平皿，眼科剪，小镊子，匀浆器，枪头，EP管（以上物品需高压消毒备用），冰盒（所有操作均在冰上）1）取出肝组织块于平皿中，加入PBS漂洗，切下约黄豆大小的肝组织放入手动匀浆器中，在冰上迅速碾磨直至呈现云雾状2）加入组织裂解液约500μL（裂解液:PMSF=100:1），冰上作用20~30min3）吸取组织液到已高压灭菌的Ep管中，4℃离心，12000rpm×15min 4）取出EP管放在冰盒内,仔细吸取上清，取2μl的上清用于蛋白浓度的测定5）剩余上清，按蛋白：5xbuffer=4:1的比例加入5xbuffer,煮沸10min 6）瞬时离心，放入-20℃冰箱冻存备用。
2. RNA抽提1、取等量肝组织，液氮中磨碎；2、加入TRIZOL Reagent lml，室温孵育5min；3、 )b[I)k2001al氯仿剧烈振荡l 5sec，室温孵育2min；4、 4℃，12，000rpm，离心15min；5、吸取上层含有RNA的水相入新管，Dla入500rtl异丙醇沉淀RNA，室温孵育l 0min；6、 4℃，12，000rpm，离心l 5min；7、弃上清，加入lml 75％的乙醇洗涤RNA沉淀，4"C，75009，离一L,5min；8、干燥RNA，用20tal DEPC水溶解RNA；9、用紫外分光光度计测定RNA的含量，．20℃保存，准备做RT．PCR。
2蛋白浓度测定1）蛋白标准液（用BSA配制）25mg/ml储存液，稀释为0.5mg/ml，稀释步骤：例：10μL 25mg/ml的蛋白标准液＋90μL PBS混合成2.5mg/ml蛋白标准液20μL 2.5mg/ml的蛋白标准液＋80μL PBS混合成0.5mg/ml蛋白标准液2）需设置八个标准孔以绘出标准曲线，采用BCA试剂盒测出蛋白浓度，标准孔设置及所加试剂量如下：试剂添加量（μL）蛋白标准液3）配制BCA蛋白测定液，溶液A：溶液B=50：1先混合均匀，至完全互溶备用4）待测蛋白孔加：2μL蛋白液+18μL PBS，每孔的体积均为20μL5）每孔加180μL配好的BCA蛋白测定液，使每孔总体积均为200μL；6）室温避光放置两个小时或37℃放置30min；7）用酶标仪测出每孔的吸光度，（570nm），测三次；8）用excel工具根据标准孔的数据作散点图，并做出直线及公式。
动物肝脏提取实验报告
动物肝脏提取实验报告动物肝脏提取实验报告引言：动物实验在科学研究领域中扮演着重要的角色。
其中，动物肝脏提取实验是一项常见的研究方法。
本报告旨在介绍动物肝脏提取实验的背景、目的、方法、结果和讨论。
背景：肝脏是人和动物体内最重要的器官之一。
它具有多种功能，包括代谢物质、解毒、合成蛋白质等。
通过对动物肝脏的提取实验，我们可以更好地了解肝脏的结构、功能以及与其他器官的相互作用。
目的：本实验的目的是通过提取动物肝脏，研究其组织结构、代谢功能以及与其他器官的联系。
通过实验结果，我们可以进一步了解肝脏在机体中的重要性，并为相关疾病的研究提供参考。
方法：1. 实验动物选择：在本实验中，我们选择了小鼠作为实验动物。
小鼠是一种常见的实验动物，其肝脏与人类肝脏在结构和功能上有很多相似之处。
2. 动物麻醉：在进行肝脏提取实验前，我们需要对实验动物进行麻醉。
麻醉可以减轻动物的痛苦，并确保实验的顺利进行。
3. 肝脏提取：通过手术切口，在麻醉状态下，我们小心地将小鼠的肝脏取出。
在提取过程中，需要注意保持肝脏的完整性，以保证后续实验的准确性。
结果：通过对提取的小鼠肝脏进行观察和分析，我们得到了以下结果：1. 肝脏组织结构：在显微镜下观察，我们可以清晰地看到肝脏的细胞结构和排列方式。
肝脏由许多小叶组成，每个小叶由许多肝细胞组成，这些肝细胞紧密排列，形成了肝脏的基本结构。
2. 代谢功能：通过实验，我们可以检测肝脏中的代谢酶活性。
结果显示，肝脏在葡萄糖代谢、脂肪合成和解毒等方面具有重要的功能。
讨论：通过本实验，我们深入了解了动物肝脏的结构和功能。
肝脏作为人和动物体内最重要的器官之一，其在机体代谢、解毒等方面的作用不可忽视。
通过进一步的研究，我们可以探索肝脏与其他器官之间的相互作用，以及与相关疾病的关联。
然而，动物实验也存在一些伦理和道德问题。
在进行实验前，我们需要严格遵守伦理规范，确保动物的权益和福利得到保护。
同时，我们也应该积极探索替代动物实验的方法，以减少对动物的使用。
丹参绞股蓝混合物长期安全性考察
丹参绞股蓝混合物长期安全性考察【摘要】目的考察丹参绞股蓝混合物长期安全性。
方法采用限量法的雌、雄性大鼠急性经口毒性试验，遗传毒性试验（细菌回复突变试验、哺乳动物红细胞微核试验、体外哺乳类细胞染色体畸变试验），90天经口毒性试验，致畸试验。
结果在本试验条件下，丹参绞股蓝混合物雌、雄性大鼠急性经口毒性试验的LD50大于20.0g/kg.bw，根据急性毒性剂量分级标准，该样品属实际无毒级；细菌回复突变试验、哺乳动物红细胞微核试验、体外哺乳类细胞染色体畸变试验结果均为阴性；丹参绞股蓝混合物以4g/kg.bw、8g/kg.bw、12g/kg.bw的剂量经口给予大鼠90天，受试动物一般情况良好，试验结束时雌雄大鼠体重、总增重、总摄食量及总食物利用率与对照组比较均无显著性差异（P＞0.05）；脏器重量、脏器系数均无异常改变；眼部检查未发现异常变化；尿液指标、血液学指标及生化指标结果显示，各项指标均在正常范围；各脏器病理组织学检查均未见与受试样品有关的病理改变（P＞0.05）。
丹参绞股蓝混合物对大鼠未见母体毒性、胚胎毒性和致畸性。
结论：丹参绞股蓝混合物长期食用具有安全性。
关键词：丹参；绞股蓝；长期安全性绞股蓝性寒、味甘、微苦，归肺、脾、心、肾经，有补气养阴，清肺化痰，养心安神之功效[1]。
绞股蓝含有80多种绞股蓝皂苷，有4种皂苷分别与人参皂苷Rb1、Rb3、Rd和F2的结构完全相同，其中人参皂苷的含量是人参的8倍，总皂苷含量是人参的3倍。
绞股蓝皂苷与人参皂苷作用相似，且无过量服用的副作用，是一种新的药食两用植物资源[2]。
现代药理学证明绞股蓝具有抗疲劳、降血脂、降血压等作用。
因此绞股蓝具有巨大的开发价值与开发潜力。
丹参为常用的活血化瘀中药。
其性微寒、味苦、无毒。
有活血通经，凉血消肿、除烦清心的功能。
本草纲目上有丹参治“恶疮疥癣，瘤赘肿毒丹毒，排脓止痛，生长肌肉”等记载。
近年来通过大量的临床实践，认为丹参有止痛、镇静、活血化瘀等作用，并用于治疗冠心病[3]。
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实验五大鼠肝S9的制备和蛋白含量测定
姓名：任妮 2011302110100
摘要：目的：研究有效的S9代谢活化酶系统的制备方法，掌握用考马斯亮蓝的方法测定蛋白质的含量。
方法：通过使用80mg/kg苯巴比妥钠对大鼠进行诱导（连续3～5d），停止给药后24h采样（无菌取出肝脏），制备肝匀浆，9000g速度0～4℃低温环境下离心，取出上清液（S9组分），最后加入考马斯亮蓝染色液，测定OD595nm值。
通过不同浓度的标准蛋白溶液来建立标准蛋白的标准曲线，根据肝S9组分的OD595nm值计算出样品中蛋白质浓度。
结果：本实验建立的标准曲线方程为y=0.0062x-0.045，相关系数为0.9887,相关性较好。
测得肝S9组分样品蛋白的浓度为25.04mg/ml。
结论：苯巴比妥钠作为诱导剂可以成功制备出大鼠肝S9.
关键词：肝S9；蛋白质含量；考马斯亮蓝染色法（Bradford法）
前言：许多致癌剂的生物转化是依赖细胞内微粒体混合功能氧化酶系来完成的. 大鼠肝S9是许多体外实验常用的体外活化系统,其主要有效成分为混合功能氧化酶( MPO)系统,其中许多酶共同组成电子传递体系,其中细胞色素P450(CYP450)在整个酶系中起着末端氧化酶作用,具有活化氧分子和与底物结合的双重功能。
CYP450在氧化活动和底物结合中的作用决定其在MPO系统中起决定作用,苯巴比妥钠是目前大鼠肝S9常用的诱导剂,能诱导活化许多致癌性化学物所需要的细胞色素。
因此,本文采用苯巴比妥钠作为诱导剂,制备S9,并采用考马斯亮蓝法测定所制备的S9的蛋白含量,进而研究有效的S9代谢活化酶系统制备方法和测定方法。
蛋白质浓度的测定有许多方法，本次试验采用的是考马斯亮蓝染色法（Bradford法），该方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮蓝染色法原理：考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质（主要是碱性氨基酸，特别是精氨酸和芳香族氨基酸残基）结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm 变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。
染料在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。
1 实验材料
1.1实验动物
大鼠：健康雄性成年SD 或Wistar 5~6 周龄150g左右
（由于实验条件限制，本次实验采用的是小鼠）
1.2实验器材
可见分光光度计，漩涡混合器，试管和试管架、低温高速离心机、洁净工作台、匀浆器、注射器、手术剪、低温冰箱、液氮罐等。
1.3实验试剂
1.17% （0.15M）KCl
Tris-HCl缓冲液：6.05g Tris加约80ml蒸馏水溶解，用HCl溶液调pH值至7.4，最后用蒸馏水定容至1000ml。
标准蛋白质溶液：1mg/ml牛血清清蛋白（BSA）。
考马斯亮兰G-250染料试剂：称考马斯亮兰G-250 100mg，溶于50ml 95％的乙醇后，再加入85％的磷酸120ml ，用蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。
2 实验方法及步骤
2.1大鼠肝S9的制备
2.1.1 诱导
1）苯巴比妥钠80mg/kg，腹腔注射，连续3～5d，最后一次给药后24h 后采样。
主要诱导P450。
2）戊巴比妥钠80mg/kg，腹腔注射，连续3d，第4d采样。
主要诱导P450。
3）多氯联苯（Aro-clor1254或国产PCB-五氯）。
同时诱导P450和P448。
溶剂玉米油浓度200mg/mL
剂量500mg/kg 方式腹腔注射时间3d
采样第4d
4）β-萘黄酮玉米油，80mg/kg，腹腔注射连续3d，第4d采样。
主要诱导P448。
2.1.2 采样
采样前禁食24h，但可以自由饮水；
断头处死，放尽血液，迅速剖开胸、腹腔，取出肝脏，用冰冷1.17% KCl
溶液洗净血污，并用滤纸吸干表面水分。
无菌取出肝脏，置平皿中称重，用预冷的0.15M KCl溶液淋洗数次，以便除去能抑制微粒体酶活性的血红蛋白。
2.1.3 肝匀浆的制备
弃去淋洗液，称取1g肝脏转入小烧杯，加Tris-HCl缓冲液溶3ml/g（肝湿重），用剪刀剪碎肝脏，转入匀浆器
玻璃匀浆器低于4000r/min，1～2min
或组织匀浆器20000r/min，1min
※以上操作需注意无菌和局部冷环境
2.1.4 S9制备
1）离心肝匀浆高速离心机低温0～4℃速度9000g 离心10min ※g=1.11×10(-6)R平均×（rpm)2
（g 相对离心力；R平均转头的平均直径，以mm计算；rpm 每分钟转数）上清液即为S9组分。
2）分装于无菌冷冻管或安瓿中，安瓿2mL左右。
3）保存液氮速冻后置-80℃低温保存。
4）检查
无菌检查；蛋白含量测定(Bradford法)，每毫升蛋白含量应不超过40mg为宜，因过量蛋白将会抑制回复突变率；生物活性合格。
5）贮存深低温或冰冻干燥；保存期不超过一年。
2.2微量法制作标准曲线
取7支试管按表1顺序加样，各设三个重复管。
样品编号0 1 2 3 4 5 6
标准蛋白含量（μg）0 10 20 40 60 80 100 标准蛋白溶液（ml）0 0.01 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 蒸馏水（ml）0.1 0.09 0.08 0.06 0.04 0.02 0 考马斯亮蓝试剂（ml） 5.0
混匀，静止10min，以0号试管为空白对照，于595nm处比色测定各管OD值。
以OD595nm 为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在EXCEL 中绘制标准曲线。
2.3未知样品蛋白质浓度的测定
测定方法同上，肝S9组分10倍稀释后取0.04ml ，测定OD595nm 值，平行测定三次。
根据所测定的平均OD595nm 值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(mg/mL)。
3实验结果
3.1 蛋白标准稀释液吸光度
表2 蛋白标准稀释液吸光度
样品 编号 标准蛋白溶液
(mL)
吸光度
1 2 3 平均值 0 0 -- -- -- -- 1 0.01 0.016 -- -- 0.016 2 0.02 0.049 0.074 0.031 0.051 3 0.04 0.109 0.199 0.184 0.164 4 0.06 0.306 0.371 0.345 0.341 5 0.08 0.389 0.419 0.425 0.411 6
0.1
0.590
0.639
0.600
0.610
3.2标准蛋白曲线
图1 标准蛋白曲线
y = 0.0062x - 0.045
R 2 = 0.9775
-0.100.10.20.30.40.50.60.70
20
40
60
80
100
120
标准蛋白含量ug 吸光度
系列1
线性 (系列1)线性 (系列1)
3.3计算未知样品蛋白质浓度
表3 肝S9浓度测定结果
肝S9组分浓度（ml）
吸光度测得蛋白含量
（ug）
原浓度
（mg/ml）1 2 3 平均
0.04 0.599 0.540 0.590 0.576 100.16 25.04
由上图表算出肝S9组分蛋白含量为25.04mg/ml。
4讨论
由结果吸光度值随着蛋白含量的增大呈一梯度变化，基本落在一条直线上，误差不是很大，结果基本准确。
1）本次实验，所建立的标准蛋白的标准曲线方程为y=0.0062x-0.045，相关系数为0.9887,相关性不是很好。
2）最好在试剂加入后的5- 20min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色最稳定。
3）测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于杯壁上，但此复合物的吸附量可以忽略。
测定完后可用95％乙醇将比色杯洗干净。
4）不可使用石英比色皿（不易洗去染色），可用塑料或玻璃比色皿。
塑料比色皿不可用乙醇或丙长时间浸泡。
5）取出肝脏后，在制备S9混悬液过程中, 应注意用新鲜冰冷的0.15 mol/l氯化钾溶液连续冲洗肝脏数次, 以便除去能抑制微粒体酶活性的血红蛋白。